miR-29b抑制LPS诱导的人支气管上皮细胞系16HBE的凋亡

目的 研究miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮细胞系16HBE凋亡的影响.方法 将16HBE细胞分为对照组、LPS组(含50μg/mL LPS的细胞培养液培养)、转染mimics control组和转染miR-29b mimics组.MTT法检测增殖;流式细胞测量术检测凋亡;Western blot检测c...     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平;流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平;生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系;Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

miR-221靶向AdipoR1基因对LPS诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌及凋亡影响

目的:探讨miR-221是否靶向脂联素受体1 AdipoR1基因影响脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌和凋亡。方法:随机将人肺泡上皮细胞A549分为对照组、LPS组和LPS+转染组,RT-qPCR法检测miR-221和AdipoR1 mRNA表达,Western blot法检测AdipoR1蛋白及凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,双荧光素酶报告基因检测miR-221是否靶向AdipoR1。结果:与对照组比较,LPS组细胞中miR-221及Bax蛋白表达升高(P<0.05),AdipoR1 miRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度升高(P<0.05),细胞凋亡率升高(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-221靶向负调控AdipoR1的表达;抑制miR-221和过表达AdipoR1均能抑制LPS诱导肺泡上皮细胞分泌炎症因子,抑制细胞凋亡;抑...     

过表达PGRN抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡及炎症的影响。方法:实验分为4组:对照(control)组为正常培养的细胞;LPS组用LPS(10 mg/L)处理;PGRN+LPS组在转染pc DNA3.1-PGRN质粒后加入LPS处理;pc DNA3.1+LPS组在转染pc DNA3.1-EGFP质粒后加入LPS处理。MTT试剂盒检测细胞活力;Brd U掺入实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-q PCR和Western blot分别检测PGRN的mRNA和蛋白表达;Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、p65和p-IκB-α的蛋白水平。结果:与对照组相比,LPS组的细胞增殖率下降(P0.05),凋亡率上升(P0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达上调(P0.05),Bcl-2的蛋白表达下调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达上调(P0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平增加(P0.05),与LPS组相比,PGRN+LPS组的细胞增殖率上升(P0.05),凋亡率下降(P0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达下调(P0.05),Bcl-2的蛋白表达上调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达下调(P0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平降低(P0.05)。结论:PGRN过表达可以减轻LPS诱导的A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡异常及炎症因子产生等损伤,这可能与PGRN参与调控NF-κB信号通路有关。     

miR-24通过SIRT1调控晶状体上皮细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激情况下miR-24对晶状体细胞凋亡的调控。方法采用实时定量PCR检测40例白内障患者晶状体上皮组织及临近晶状体上皮组织中miR-24的表达水平,并在氧化应激情况下检测miR-24的表达变化。通过miR-24 mimics、miR-24 inhibitor转染晶状体上皮细胞SAR01/04以过表达和敲低miR-24,利用pcDNA3.1-SIRT1转染SAR01/04以过表达SIRT1,FITC/PI流式细胞术检测晶状体细胞凋亡情况,Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达情况,CCK-8检测细胞活性状态。结果miR-24在白内障晶状体上皮组织中的表达高于临近组织,氧化应激情况下促进miR-24表达增高,差异有统计学意义(P<0.05);氧化应激情况下,敲低miR-24抑制晶状体上皮细胞的凋亡;过表达或敲低miR-24可以分别降低或促进SIRT1的表达;过表达miR-24和过表达SIRT1后抑制了晶状体细胞的凋亡。结论氧化应激促进晶状体上皮细胞miR-24表达上调,miR-24通过下调SIRT1促进晶状体上皮细胞的凋亡,为白内障的靶向治疗提供一定的策略。     

茶黄素通过调控miR-190表达对LPS诱导的结肠上皮细胞炎症损伤的影响

目的:研究茶黄素是否通过调控miR-190表达影响脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞炎症损伤.方法:采用LPS诱导结肠上皮细胞NCM460损伤,并给予16、32、64μmol/L浓度的茶黄素.ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达,流式细胞术评估细胞凋亡,Western blot分析Bcl-2和Ba...     

过表达miR-21对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用

目的探讨过表达miR-21对人晶状体上皮细胞凋亡的调控作用。方法将miR-21过表达慢病毒载体及空载体慢病毒转染至人晶状体上皮细胞系——LEC B3细胞,并将实验分为Control组(未转染)、miR-21-NC组(转染空载体慢病毒)和miR-21组(转染miR-21过表达慢病毒载体)。荧光显微镜观察慢病毒载体的标签蛋白GFP的表达,RT-qPCR方法检测miR-21的表达情况,流式细胞术检测细胞凋亡,荧光素酶报告基因分析验证miR-21与FasL的靶向关系,Western-blot检测细胞中凋亡相关蛋白FADD、caspase-3、Bcl-2及Bax的表达,试剂盒检测细胞线粒体膜电势的变化情况。结果在荧光显微镜下观察,经慢病毒感染的过表达细胞系和空载体细胞系均出现绿色荧光,而空白细胞组未见绿色荧光。与Control组相比,miR-21组中miR-21的表达水平、Bcl-2表达水平和线粒体膜电位明显升高,而细胞凋亡率、FADD、caspase-3和Bax的表达水平均明显下降,差异均具有统计学意义(P0.05);miR-21-NC组与Control组相比差异无统计学意义(P0.05)。荧光素酶报告基因分析证实miR-21与FasL存在靶向关系。结论 miR-21可以抑制晶状体上皮细胞发生凋亡,既可通过靶向性调控外源性FasL/Fas通路参与caspase-3和FADD介导的细胞凋亡,也可通过线粒体途径对细胞凋亡发挥作用。     

Lnc-MALAT1减轻miR-217抑制 LPS诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎性反应

目的 探究长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录本1(lnc-MALAT1)在脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞系(AMOs)炎性反应中的调控机制.方法 LPS处理AMOs建立细胞损伤模型,用脂质体法分别将pcDNA、pcDNA-MALAT1、miR-NC、miR-217 mimics、pcDNA-MALAT1与miR...     

沉默葡萄糖调节蛋白78基因增强高氧诱导的肺泡上皮细胞凋亡

目的探讨小干扰RNA(siRNA)干扰内质网应激相关因子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)基因表达对高氧诱导肺泡上皮细胞凋亡的影响及作用机制。方法培养人肺腺癌A549细胞,用构建的siRNA片段通过脂质体LipofectamineTM2000转染A549细胞,将细胞分为高氧空白组、阴性对照(阴性siRNA)组和实验(GRP78-siRNA)组3组,利用950 mL/L O2建立高氧细胞损伤模型。48 h后通过实时定量PCR检测C/EBP同源蛋白(CHOP)mRNA的表达,Western blot技术检测CHOP蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果应用siRNA抑制GRP78表达后,GRP78 mRNA和蛋白表达下调、CHOP mRNA和蛋白表达上调、A549细胞凋亡增加。结论下调GRP78基因可增强高氧活化的CHOP凋亡途径,诱导肺泡上皮细胞凋亡。     

miR-29c促进前列腺癌PC3细胞凋亡

目的研究miR-29c对前列腺癌PC3细胞凋亡的影响及其机制。方法以人正常前列腺上皮细胞系(RWPE-1)为对照,检测前列腺癌PC3细胞系中miR-29c、血管内皮生长因子(VEGF)及血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的表达;免疫荧光(IF)检测p-VEGFR2在细胞中的定位;miR-29c过表达腺病毒感染PC3,real-time PCR检测miR-29c及VEGF的表达;Western blot检测VEGF、t-VEGFR2、p-VEGFR2、BAX和Bcl-2的表达;hoechst 33258染色法检测PC3细胞凋亡;流式细胞计量术(FCM)检测PC3细胞早期凋亡率。结果与RWPE-1相比,PC3细胞miR-29c表达降低,VEGF及VEGFR2表达升高(P0.001);与对照组相比,miR-29c过表达组VEGF、p-VEGFR2及Bcl-2的表达显著降低(P0.001),BAX的表达显著升高(P0.001),细胞凋亡与早期凋亡率显著增加(P0.001)。结论重新表达miR-29c可以显著抑制VEGF/VEGFR2信号通路并促进PC3细胞凋亡。     

miR-543靶向HDAC3调控LPS诱导的气道上皮细胞损伤

目的:探讨miR-543靶向组蛋白脱乙酰酶3(HDAC3)对脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞损伤的影响.方法:用50μg/ml的LPS诱导气道上皮细胞BEAS-2B,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测miR-543和HDAC3表达.流式细胞术检测细胞凋亡.ELISA试剂盒检测细胞培养液...     

过表达miR-10b促进肺癌细胞系A549增殖

目的探讨非小细胞肺癌(NSCLC)患者肺癌及癌旁组织中miR-10b(miR-10b)表达水平及miR-10b是否通过调控锌指转录蛋白基因(KLF4)对肺癌细胞系A549恶性化的影响。方法 40例NSCLC患者病理切片,原位杂交检测肺癌及癌旁组织中miR-10b的表达量;对肺癌细胞系A549转染miR-10b mimics后,CCK-8法检测肺癌细胞增殖;real-time PCR及Western blot检测KLF4 mRNA及蛋白水平;软琼脂克隆形成实验检测过表达miR-10b对A549细胞的肿瘤恶性化程度的影响。结果肺癌细胞A549及肺癌组织中miR-10b的表达量分别高于正常肺上皮细胞16HBE及癌旁组织;过表达miR-10b模拟物的A549细胞中,KLF4蛋白水平显著下降(P0.05);过表达的miR-10b可显著增加A549细胞的增殖速度及在软琼脂内的成瘤性。结论 miR-10b在不同类型细胞及组织中具有分布差异性、可能是通过抑制KLF4的表达促进肺癌细胞增殖及恶性化。     

联合靶向阻断miR-29b/92b/106b抑制胃癌细胞生长及迁移

目的:本研究旨在寻找胃癌转移相关微小RNA(microRNA,miRNA,miR),揭示其对胃癌细胞生物学功能的影响,并探讨联合阻断候选miRNA在胃癌治疗中的临床应用价值。方法:收集发生淋巴结转移及无转移患者的胃癌标本各3例,采用miRNA表达芯片筛选转移相关的候选miRNA;将锁核酸修饰的候选miRNA的反义寡核苷酸转染BGC-823胃癌细胞株,运用CCK-8法、流式细胞术、划痕实验及Transwell迁移实验分析候选miRNA抑制前后胃癌细胞生物学功能的变化;构建多西环素诱导多重靶向候选miRNA的裸鼠移植瘤模型,观察联合靶向阻断候选miRNA后,肿瘤细胞体内生长情况。结果:miRNA表达芯片发现miR-29b、miR-92b及miR-106b在发生淋巴结转移患者的胃癌组织最高,并将它们确定为胃癌转移相关候选miRNA;分别在BGC-823细胞中抑制上述miRNA,可导致细胞活力减弱,凋亡诱导增加,迁移能力显著下降(P 0. 05);同时,体内联合阻断miR-29b/92b/106b,裸鼠移植瘤的形成较对照组显著减少。结论:miR-29b、miR-92b及miR-106b与胃癌细胞的迁移有关,联合阻断上述miRNA可明显抑制胃癌细胞体内外生长。这3个miRNA可能作为潜在的治疗靶点。     

miR-125靶向SMAD4抑制脂多糖诱导的人结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化

目的 观察脂多糖(LPS)对正常结肠上皮细胞向肿瘤细胞转化的影响,探索miR-125和SMAD4在细胞转化过程中的作用和机制.方法 以人正常结肠上皮细胞系HCoEpiCs为研究对象,用CCK-8法探索LPS的最佳刺激浓度;用LPS连续刺激HCoEpiCs细胞40代并检测细胞周期相关基因cyclinD1、癌基因c-myc...     

Bax基因过表达与A549细胞凋亡的关系

目的 研究bcl-2基因家族促凋亡蛋白Bax在细胞凋亡中的作用，同时评价它作为肿瘤治疗潜在靶基因的可能性。方法 采用一种可诱导性表达的MT-Ⅱ调节系统，在外加锌离子(ZnSO4，100μmol／L)的条件下诱导目的基因表达。快速生长的A549细胞系作为靶细胞，获得表达Bax基因的稳定转染子。结果 Bax基因过表达的细胞显示广泛的细胞死亡。TUNEL实验证实细胞核的碎片化，从而提示这种细胞死亡是凋亡。流式细胞仪显示在诱导后24h，有14．68％的细胞发生凋亡。结论 结果表明这个表达系统能够在体外评价Bax基因的抗肿瘤效果；Bax基因能够诱导A549细胞发生凋亡。因此，Bax基因可能成为肿瘤基因治疗的靶基因。