微小RNA-486靶向TRIM10抑制帕金森病细胞模型损伤

目的 探讨微小RNA（miR）-486对1-甲基-4-苯基吡啶离子(MPP+)诱导的体外帕金森病（PD）PC12细胞模型凋亡的影响和机制。 方法 实验分成对照（control）组、PD组（MPP+诱导PC12细胞）、miR-NC组［MPP+诱导PC12细胞转染模拟（mimics）对照（mimics control）］、miR-486组（MPP+诱导PC12细胞转染miR-486 mimics）、miR-486+载体（vector）组（共转染miR-486 mimics和pcDNA3.1）、miR-486+TRIM10组（共转染miR-486 mimics和pcDNA3.1-TRIM10）,每组n=9。CCK-8法分析细胞增殖变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平变化,Western blotting分析Bax和Bcl-2蛋白表达变化,硫代巴比妥酸法检测细胞中丙二醛（MDA）含量,荧光探针法检测细胞中活性氧簇（ROS）水平,二硝基苯肼分析培养液上清中乳酸脱氢酶（LDH）水平。用生物信息学软件预测miR-486的靶基因,双荧光素酶报告基因实验检测miR-486、TRIM10靶向关系。 结果 与control组比较,PD组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA、ROS和LDH水平升高。与miR-NC组比,miR-486组细胞存活率、Bcl-2蛋白表达升高,细胞凋亡率、Bax蛋白表达、MDA、ROS和LDH水平降低。MiR-486靶向下调TRIM10表达。与miR-486+vector组比较,miR-486+TRIM10组细胞存活率、Bcl-2蛋白水平降低,细胞凋亡率、Bax蛋白水平、MDA、ROS和LDH水平升高。 结论 上调miR-486可通过靶向抑制TRIM10减少MPP+诱导的体外帕金森病PC12细胞模型的凋亡。     

miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用北大核心CSCD

目的:探究miR-125b对过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子的作用和机制。方法:支气管上皮细胞分为Control组、Model组(尘螨抗原提取物处理)、miR-NC组(转染mimics control,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物处理)、miR-125b+PMA组(转染miR-125b mimics,尘螨抗原提取物和NF-κB信号激活剂PMA处理)。qRT-PCR分析miR-125b表达,流式细胞术分析细胞凋亡,ELISA分析细胞培养液上清中IL-6、IL-29水平,Western blot分析Bax、Bcl-2、p65蛋白表达。结果:与Control组相比,Model组支气管上皮细胞中miR-125b水平降低,细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。与miR-NC组相比,miR-125b组支气管上皮细胞中miR-125b水平升高,细胞凋亡率降低,细胞分泌IL-6、IL-29减少,细胞中Bax、p65蛋白表达水平降低,Bcl-2蛋白表达水平升高。与miR-125b组相比,miR-125b+PMA组支气管上皮细胞凋亡率升高,细胞分泌IL-6、IL-29增多,细胞中Bax、p65蛋白表达水平升高,Bcl-2蛋白表达水平降低。结论:miR-125b抑制过敏原刺激后支气管上皮细胞凋亡和分泌炎症因子,其机制可能与抑制NF-κB信号通路有关。     

miR-221 靶向AdipoR1 基因对LPS 诱导的肺泡上皮细胞A549 炎症分泌及凋亡影响

目的:探讨miR-221是否靶向脂联素受体1 AdipoR1基因影响脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌和凋亡。方法:随机将人肺泡上皮细胞A549分为对照组、LPS组和LPS+转染组,RT-qPCR法检测miR-221和AdipoR1 mRNA表达,Western blot法检测AdipoR1蛋白及凋亡相关因子Bax、Bcl-2蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率,ELISA法检测细胞培养上清液中炎性因子IL-1β、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度,双荧光素酶报告基因检测miR-221是否靶向AdipoR1。结果:与对照组比较,LPS组细胞中miR-221及Bax蛋白表达升高(P0.05),AdipoR1 miRNA和蛋白及Bcl-2蛋白表达降低(P0.05),细胞培养上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α浓度升高(P0.05),细胞凋亡率升高(P0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-221靶向负调控AdipoR1的表达;抑制miR-221和过表达AdipoR1均能抑制LPS诱导肺泡上皮细胞分泌炎症因子,抑制细胞凋亡;抑制AdipoR1逆转了抑制miR-221对LPS诱导的肺泡上皮细胞炎症分泌和凋亡的影响。结论:miR-221靶向AdipoR1影响LPS诱导的肺泡上皮细胞A549炎症分泌及凋亡。     

miR-142-3p通过调控Hmgb1抑制雨蛙素诱导的大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡

目的 探讨miR-142-3p调控Hmgb1对大鼠胰腺外分泌细胞系AR42J凋亡的影响。方法 将AR42J细胞分为空白组(blank)、急性胰腺炎模型组(AP,100 nmol/L雨蛙素作用24 h),再分别用miR-142-3p mimics、 mimics NC、miR-142-3p inhibitor和inhibitor NC转染模型组细胞,记为miR-142-3p mimics组、 mimics NC组、miR-142-3p inhibitor组和inhibitor NC组。用RT-qPCR检测细胞中miR-142-3p表达;Western blot检测HMGB1、caspase-3、Bax、Bcl-2蛋白表达;Hoechst染色测定细胞凋亡;流式细胞测量术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验明确miR-142-3p和Hmgb1的靶向关系。结果 与空白组相比,AP组中miR-142-3p表达水平显著下调(P<0.01),HMGB1、caspase-3蛋白表达量上调(P<0.05),Bax蛋白表达量显著上调(P<0.01),Bcl-2蛋白表达量显著降低(P&l...     

miR-24对肺癌A549细胞化疗敏感性的影响

目的:探究微小RNA(miR)-24对肺癌细胞A549化疗敏感性的影响及可能的作用机制。方法:Real-time PCR实验检测肺腺癌细胞系A549及肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达情况。转染miR-24抑制序列(miR-24 inhibitor)下调A549/DDP细胞中的miR-24后,采用CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测Bcl-2、Bax、cleaved caspase-3、cleaved caspase-9、细胞色素C(Cyt C)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)和P53的蛋白水平。双荧光素酶报告基因实验预测及验证miR-24可能的靶基因。结果:耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达水平明显高于A549细胞(P0.05)。miR-24 inhibitor可诱导肺腺癌耐药细胞株A549/DDP的凋亡,增加细胞对顺铂的敏感性;此外还可下调Bcl-2/Bax比值,同时上调P53、p-ERK、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及Cyt C的蛋白水平。而应用ERK特异性抑制剂U0126可部分恢复miR-24 inhibitor转染的细胞活力。生物信息学分析显示p53是miR-24的可能作用靶点基因,在A549/DDP细胞中共转染miR-24 inhibitor和P53 siRNA可部分逆转miR-24 inhibitor对细胞活力的影响。结论:下调肺腺癌耐药细胞株A549/DDP中miR-24的表达可增加细胞对顺铂的敏感性,其机制可能与靶向p53基因同时激活ERK/P53信号通路后促进细胞经线粒体途径的凋亡有关。     

LncRNA MINCR靶向miR-223抑制LPS诱导的人肺泡上皮细胞系A549损伤和炎性反应

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)MINCR靶向调节微小RNA(miR)-223对脂多糖(LPS)诱导的肺泡上皮细胞系损伤和炎性反应的影响。方法 将人肺泡上皮细胞系A549随机分为对照组、LPS组、LPS+转染组(Si NC组、Si MINCR组、miR-223 NC组、miR-223 mimic组、Si NC+miR-223 NC组、Si NC+miR-223 antagomir组、Si MINCR+miR-223 NC组、Si MINCR+miR-223 antagomir组)。RT-qPCR检测MINCR、miR-223表达水平；流式细胞仪检测细胞凋亡率；ELISA测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平；生物信息学预测和双荧光素酶报告基因验证MINCR与miR-223的靶向关系；Western blot检测细胞中活化的半胱天冬氨酸蛋白酶-3(cleaved caspase-3)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)蛋白表达水平。结果 MINCR和miR-223存在靶向关系。LPS组与对照组比较，细胞凋亡率、TNF-α、IL-6水平、MINCR、...     

miR-29b抑制LPS诱导的人支气管上皮细胞系16HBE的凋亡

目的研究miR-29b对脂多糖(LPS)诱导的人支气管上皮细胞系16HBE凋亡的影响。方法将16HBE细胞分为对照组、LPS组(含50μg/mL LPS的细胞培养液培养)、转染mimics control组和转染miR-29b mimics组。MTT法检测增殖;流式细胞测量术检测凋亡;Western blot检测c-caspase-3、c-caspase-12、糖调节蛋白78(GRP78)和CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)蛋白表达。在16HBE细胞中共转染miR-29b mimics、pcDNA-CHOP,同样利用上述方法检测增殖、凋亡。结果与对照组比较,LPS组细胞增殖活性降低、凋亡率升高(P0.05),细胞中c-caspase-3、c-caspase-12、GRP78和CHOP蛋白表达水平升高(P0.05)。与转染mimics control组比较,转染miR-29b mimics组细胞增殖活性升高、凋亡率降低(P0.05),细胞中c-caspase-3、c-caspase-12、GRP78和CHOP蛋白表达水平降低(P0.05)。pcDNA-CHOP可以逆转miR-29b mimics对LPS条件下支气管上皮细胞增殖和凋亡的影响。结论 miR-29b抑制LPS诱导的16HBE细胞的凋亡,其作用机制与抑制内质网应激有关。     

Ghrelin 通过AKT/ ERK 信号通路对LPS 诱导的肺泡上皮细胞凋亡的影响

目的:研究Ghrelin 对内毒素(Lipopolysaccharide,LPS)所致的肺泡域型上皮细胞(A549)凋亡的影响及其机制。方法:CCK-8(Cell Counting Kit-8)法检测LPS 刺激对A549 的细胞毒性;原位末端标记法(TUNEL)检测细胞凋亡率;流式细胞术检测细胞内一氧化氮(NO)的产生;Western blot 检测诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)、AKT、ERK、p-AKT、p鄄ERK 信号通路蛋白以及cleaved caspase-3、Bax、Bcl-2 凋亡相关蛋白的表达。结果:CCK-8 检测结果显示LPS 可显著抑制A549 细胞的增殖,降低细胞活力;TUNEL 检测发现Ghrelin 可显著抑制LPS 导致的A549 细胞的凋亡(P<0.05);LPS 可以促进iNOS 的表达,增加细胞内NO 的产生,并同时抑制AKT、ERK 通路的活性,上调下游促凋亡蛋白Bax 以及终末凋亡蛋白cleaved caspase-3 的表达,下调抗凋亡蛋白Bcl-2 的表达,而应用Ghrelin 预处理后可以逆转LPS 对AKT、ERK 通路活性的抑制,继而下调Bax 以及cleaved caspase-3 的表达,上调Bcl-2 的表达,差异均具有统计学意义(P<0.05),但Ghrelin 对细胞内NO 的产生无明显影响。结论:Ghrelin 可以通过上调AKT 及ERK 通路的活性抑制LPS 诱导的肺泡上皮细胞凋亡,但不能降低iNOS 诱导产生NO 的水平。     

miR-144靶向Bcl-2抑制儿童急性淋巴细胞白血病细胞增殖并促进凋亡的分子机制研究

目的:观察miR-144对儿童急性淋巴细胞白血病(ALL)CEM/C1细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:运用qRT-PCR法和Western blot法检测非恶性血液病患儿脊髓组织(Normal组)、ALL患儿脊髓组织(ALL组)、CEM/C1细胞(CEM/C1组)、ALL癌细胞珠MOLT-4(MOLT-4组)和CCRF-CEM(CCRF-CEM组)中miR-144、Bcl-2mRNA和Bcl-2蛋白表达水平并比较组间差异;将不同质粒以脂质体法转染至CEM/C1细胞,分为miR-NC组(转染miR-NC)、miR-144组(转染miR-144mimics)、inhibitor NC组(转染inhibitor NC)、miR-144inhibitor组(转染miR-144inhibitor)、si-NC组(转染si-NC)、si-Bcl-2组(转染si-Bcl-2)、miR-144+Vector组(miR-144mimics和pcDNA 3.1共转染)、miR-144+Bcl-2组(miR-144mimics和pcDNA 3.1-Bcl-2共转染),Western blot检测各组细胞中Bcl-2蛋白表达;MTT法检测各组细胞增殖;流式细胞术检测各组细胞凋亡;双荧光素酶报告基因实验检测各组细胞的荧光素酶活性。结果:与Normal组相比,ALL组miR-144表达显著降低,Bcl-2mRNA和蛋白表达均显著升高(P0.01)。与CEM/C1组比较,MOLT-4组和CCRF-CEM组miR-144表达显著升高,Bcl-2mRNA和蛋白表达均显著降低(P0.01)。与miR-NC组相比,miR-144组细胞增殖率降低,凋亡率升高,Bcl-2(WT)细胞的荧光活性降低(P0.01)。与si-NC组相比,si-Bcl-2组细胞增殖率降低,凋亡率升高(P0.01)。与miR-144+Vector组相比,miR-144+Bcl-2组细胞增殖率降低,凋亡率升高(P0.01)。结论:miR-144可抑制儿童ALL癌细胞增殖,促进其凋亡,可能与其能靶向Bcl-2有关,或可为儿童ALL治疗提供新的靶点。     

circSERPINE2靶向miR-34a-5p调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的 探讨circSERPINE2对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞炎症反应、细胞凋亡的影响及其对miR-34a-5p的调控作用。方法 体外培养肺泡上皮细胞A549,随机分为对照组、感染组、感染+pcDNA组、感染+pcDNA-circSERPINE2组、感染+anti-miR-NC组、感染+anti-miR-34a-5p组、感染+pcDNA-circSERPINE2+miR-NC组、感染+pcDNA-circSERPINE2+miR-34a-5p组;采用qRT-PCR法检测circSERPINE2与miR-34a-5p的表达量;采用ELISA法检测IL-10、IL-6的水平;采用流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶报告基因实验检测circSERPINE2与miR-34a-5p的靶向关系。采用Western blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达量。结果 与对照组比较,感染组circSERPINE2的表达水平降低（P<0.05）,miR-34a-5p的表达水平升高（P<0.05）,IL-10的水平和Bcl-2蛋白水平降低（P<0.05）,IL-6的水平、细胞凋亡率和Ba...     

LncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p调控人肺腺癌细胞系A549增殖和凋亡

目的 旨在研究lncRNA UNC5B-AS1靶向miR-339-5p对肺癌细胞增殖和凋亡的影响及分子机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞系A549;将si-NC、si-UNC5B-AS1、miR-NC、miR-339-5p mimics、si-UNC5B-AS1与anti-miR-NC、si-UNC5B-AS1与anti...     

miR-671-5p通过靶向肿瘤坏死因子α诱导蛋白8调控胰腺癌细胞增殖和凋亡

目的：探讨miR-671-5p 靶向肿瘤坏死因子α 诱导蛋白8（ TNFAIP8）对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。 方法：实时荧光定量PCR（ qRT-PCR）和免疫印迹检测20 例胰腺癌组织和与其配对的癌旁正常组织miR-617-5p、 TNFAIP8 mRNA和TNFAIP8表达水平,验证miR-671-5p 和TNFAIP8的靶向调控关系。将体外培养胰腺癌细胞 capan-1分为miR-NC组、miR-671-5p 组、si-NC 组、si-TNFAIP8 组、miR-671-5p+pcDNA组和miR-671-5p+pcDNATNFAIP8 组。采用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）实验检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹检测细胞周 期蛋白D1（ cyclin D1）、p21、B细胞淋巴瘤/ 白血病-2（ Bcl-2）和Bcl-2 相关蛋白（ Bax）的表达水平。结果：与 癌旁正常组织比较,胰腺癌组织miR-617-5p 表达量显著降低,TNFAIP8 的表达量显著升高。miR-671-5p 靶向负向 调控TNFAIP8 表达。与miR-NC组比较,miR-671-5p 组capan-1 细胞活力显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2 的表达量显著降低,p21 和Bax 的表达量显著升高;与si-NC 组比较,si-TNFAIP8 组capan-1 细胞活力 显著降低,细胞凋亡率显著升高,cyclin D1和Bcl-2 表达量显著降低,p21 和Bax 表达量显著升高;与miR-671- 5p+pcDNA 组比较,miR-671-5p+pcDNA-TNFAIP8 组capan-1 细胞活力显著升高,细胞凋亡率显著降低,cyclin D1和Bcl-2 的表达量显著升高,p21 和Bax 的表达量显著降低。结论：miR-671-5p 通过靶向下调TNFAIP8 抑制胰 腺癌细胞增殖并促进其凋亡。上调miR-671-5p 是胰腺癌潜在治疗靶点。     

甲基莲心碱通过调控miR-29a-3p/AQP4表达抑制Aβ1-42致PC12细胞的损伤

目的探讨甲基莲心碱(Nef)在β淀粉样蛋白(Aβ1-42)损伤大鼠肾上腺髓质嗜铬细胞瘤细胞PC12的作用及其分子机制。方法将PC12细胞分为对照组、模型组(4μg/mL Aβ1-42培养24 h)和干预组(低、中、高剂量甲基莲心碱)。MTT法检测PC12细胞存活;流式细胞计量术检测细胞凋亡;Western blot检测水通道蛋白4(AQP4)、Bcl-2和Bax表达量;qPCR检测细胞中miR-29a-3p和AQP4 mRNA表达。生物学信息预测和双荧光素酶基因报告分析miR-29a-3p和AQP4的靶向关系。在模型组转染miR-29a-3p、si-AQP4,或转染anti-miR-29a-3p并进行高剂量Nef干预,考察其对Aβ1-42损伤PC12细胞存活和凋亡的影响。结果与模型组相比,甲基莲心碱组细胞存活率和Bcl-2、miR-29a-3p表达明显升高,细胞凋亡率和Bax、AQP4 mRNA和蛋白表达明显降低(P<0.05)。AQP4是miR-29a-3p的靶基因。miR-29a-3p过表达和抑制AQP4表达均显著提高PC12细胞存活率和Bcl-2表达量(P<0.05),降低细胞凋亡率和Bax蛋白水平(P<0.05)。抑制miR-29a-3p表达逆转甲基莲心碱对Aβ1-42损伤PC12细胞存活、Bcl-2蛋白水平的促进作用,以及逆转甲基莲心碱对细胞凋亡率、Bax蛋白表达的抑制作用。结论甲基莲心碱通过miR-29a-3p/AQP4抑制Aβ1-42所致PC12细胞损伤,促进细胞存活,并抑制细胞凋亡。     

过表达PGRN抑制LPS诱导的肺泡上皮细胞损伤

目的:探讨颗粒体蛋白前体(progranulin,PGRN)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的人肺泡上皮A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡及炎症的影响。方法:实验分为4组:对照(control)组为正常培养的细胞;LPS组用LPS(10 mg/L)处理;PGRN+LPS组在转染pc DNA3.1-PGRN质粒后加入LPS处理;pc DNA3.1+LPS组在转染pc DNA3.1-EGFP质粒后加入LPS处理。MTT试剂盒检测细胞活力;Brd U掺入实验检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-q PCR和Western blot分别检测PGRN的mRNA和蛋白表达;Western blot检测caspase-3、Bcl-2、Bax、IL-1β、IL-6、TNF-α、p65和p-IκB-α的蛋白水平。结果:与对照组相比,LPS组的细胞增殖率下降(P0.05),凋亡率上升(P0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达上调(P0.05),Bcl-2的蛋白表达下调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达上调(P0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平增加(P0.05),与LPS组相比,PGRN+LPS组的细胞增殖率上升(P0.05),凋亡率下降(P0.05),caspase-3和Bax的蛋白表达下调(P0.05),Bcl-2的蛋白表达上调(P0.05),IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达下调(P0.05),p65和p-IκB-α的蛋白水平降低(P0.05)。结论:PGRN过表达可以减轻LPS诱导的A549细胞和HPAEpi C细胞增殖、凋亡异常及炎症因子产生等损伤,这可能与PGRN参与调控NF-κB信号通路有关。     

动脉粥样硬化中CARHSP1基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力凋亡及免疫因子的影响

目的:探讨动脉粥样硬化斑块中钙调节热稳定蛋白1(CARHSP1)基因的表达对缺氧诱导的血管内皮细胞活力、凋亡及白细胞介素6(IL-6)和C-反应蛋白(CRP)表达的影响。方法:用Western blot检测动脉粥样硬化斑块中CARHSP1的蛋白表达;缺氧处理人脐静脉内皮细胞(HUVECs),将细胞分为正常培养组、缺氧组、缺氧+CARHSP1-siRNA组和缺氧+pc DNA3. 1-CARHSP1组,用CCK-8法及流式细胞术分别检测各组细胞活力及凋亡率; RT-PCR检测IL-6和CRP的表达; Western blot检测凋亡蛋白caspase-3、cleaved caspase-3、Bcl-2和Bax的蛋白水平。结果:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中的蛋白表达显著高于对照组(P 0. 05);缺氧可明显增加CARHSP1的表达。缺氧组HUVECs活力及Bcl-2表达显著低于正常培养组,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著高于正常培养组(P 0. 05);与缺氧组比较,缺氧+CARHSP1-siRNA组的活力及Bcl-2表达显著升高,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax的蛋白水平显著降低(P 0. 05),pc DNA3. 1-CARHSP1组的细胞活力及Bcl-2表达显著降低,细胞凋亡率及IL-6、CRP、cleaved caspase-3和Bax表达显著升高(P 0. 05)。结论:CARHSP1在动脉粥样硬化斑块中表达升高,抑制CARHSP1表达可提高HUVECs的活力,降低细胞凋亡,下调免疫因子IL-6和CRP的表达,而过表达CARHSP1则反之。     

异氟醚对膀胱癌 5637 细胞恶性生物学行为及化疗敏感性的影响

目的 探究异氟醚对膀胱癌 5637 细胞恶性生物学行为及化疗敏感性的影响。 方法 单独或联合 给予异氟醚及顺铂处理膀胱癌 5637 细胞, 将细胞随机分为 4 组: 对照组、 异氟醚组、 顺铂组和异氟醚 + 顺 铂联合处理组。 BrdU 染色检测 BrdU 阳性细胞数; 流式细胞仪检测细胞凋亡率和细胞周期分布; Transwell 检测侵袭细胞数; 划痕愈合实验检测划痕愈合率; Western 印迹检测 Ki67、 PCNA、 Bax、 Bcl-2、 cleaved caspase-3 和 caspase-3 蛋白表达; 结果 与顺铂组相比较, 异氟醚 + 顺铂联合处理组 BrdU 阳性细胞数和 Ki67、 PCNA 蛋白表达降低, G0 / G1期比率和 S 期细胞数降低, G2 / M 期比率升高, 细胞凋亡率和 Bax / Bcl-2、 cleaved caspase-3 / caspase-3 比值升高, 侵袭细胞数、 划痕愈合率降低, 均有显著性差异 (P< 0. 05)。 结论 异氟醚可通过抑制细胞增殖、 侵袭、 迁移, 诱导细胞凋亡, 提高 5637 细胞对顺铂的敏感性。     

抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性

目的:研究抑制miR-421表达增强宫颈癌细胞放疗敏感性的分子机制。方法:运用脂质体2000将miR-421 inhibitor转染4株宫颈癌细胞系HeLa、SiHa、C33A和CaSki,以转染阴性核苷酸为对照,real-time PCR检测子宫内膜上皮细胞ESC细胞和4株宫颈癌细胞中miR-421的表达水平;转染的细胞经不同剂量电离辐射(0、2、4、6和8 Gy)处理48 h后运用MTT法、ELISA和Annexin V-FITC/PI染色法联合流式细胞术分别测定细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)漏出率和细胞凋亡率;运用Western blot检测细胞中cleaved caspase-9、caspase-9、cleaved PARP、PARP、Bcl-2和Bax蛋白的水平。结果:miR421在ESC细胞中低表达,而在4株宫颈癌细胞中高表达,转染miR-421 inhibitor后miR-421显著低于阴性对照组(P0.05)。相同条件下,辐照后低表达miR-421的宫颈癌细胞活力和LDH漏出率显著低于阴性对照组,72 h的细胞凋亡率明显增加(P0.05)。Western blot结果显示,电离辐射后与阴性对照组比较,低表达miR-421的宫颈癌细胞中cleaved caspase-9、cleaved PARP和Bcl-2的蛋白水平明显增高,而Bax蛋白水平显著降低(P0.05)。结论:miR-421在正常子宫内膜上皮ESC细胞中低表达,而在宫颈癌细胞系中高表达;下调miR-421表达能抑制宫颈癌细胞的活力,显著增强宫颈癌细胞的辐射敏感性,其机制至少部分通过激活caspase-9细胞凋亡通路进而促进抗凋亡蛋白Bcl-2表达和抑制促凋亡蛋白Bax表达而实现。