RNA结合蛋白HuR对外泌体生成机制的调控

外泌体是一类直径为30～150 nm的膜囊泡,几乎所有的细胞都能够分泌外泌体,它含有许多来源于细胞的成分.近年来,越来越多的证据表明外泌体介导的信号蛋白、RNA、核酸等多种分子的传递有助于肿瘤的发生发展,包括重塑细胞外基质、促进血管生成、干扰免疫反应、促进肿瘤细胞的增殖迁移以及塑造肿瘤转移前微环境等[1].     

DHRS4反义RNA结合蛋白的高通量检测与分析

目的 DHRS4是细胞内NADP(H)依赖性视黄醇脱氢/还原酶家族成员4的编码基因。与人类DHRS4基因以头对头形式存在的反义转录本AS1DHRS4,可以调控DHRS4基因的转录。本研究高通量检测分析DHRS4反义RNA结合的蛋白以探讨DHRS4反义转录本调控正义基因表达的作用机制。方法采用甲醛交联细胞内的核酸-蛋白复合物,然后通过生物素标记的奇数组和偶数组寡核苷酸作为探针pull-down AS1DHRS4结合的蛋白,LCMS/MS鉴定后数据库比对分析DHRS4反义RNA结合的蛋白。结果奇数组和偶数组探针pull-down后分别鉴定得到650种和508种蛋白,两组探针检测的共同蛋白434种。大部分蛋白为结合蛋白并与RNA的加工和修饰相关。结论 DHRS4反义RNA结合的蛋白的检测和分析为今后进一步研究反义RNA功能和机制提供了线索和基础。     

丙型肝炎病毒N′-核心蛋白RNA结合区的定位

目的 对丙型肝炎病毒核心蛋白的RNA结合区进行详细定位，为制备缺失RNA结合活性突变体做准备。方法 构建GST融合丙型肝炎病毒核心蛋白不同区域片段表达质粒，在大肠杆菌中表达相应蛋白并用glutathione sepharose 4B进行纯化，利用二次电泳法检测RNA的结合活性，利用时相差电泳法比较不同区域RNA结合活性的强弱。结果 核心蛋白第1－132位氨基酸（AA）之间的片段得到了良好的表达和纯化，表达的蛋白经Western blot得到确认。二次电泳后的放射自显影结果显示，第1－10AA、19－45AA、80－132AA片段无RNA结合活性，而含有10－16AA，45－80AA的片段可结合单链和双链RNA。1－29AA与38－90AA2个片段对RNA的结合强度基本相同。结论 丙型肝炎核心蛋白中存在2个RNA结合区，分别定位于10－16AA及45－80AA。2个结合区都具有较强的RNA结合活性。制备RNA结合活性缺陷突变体须同时对2个结合区进行突变。     

RNA结合蛋白HuR的研究进展及其在肝细胞癌发生发展中的作用

<正>转录后事件,特别是 RNA翻转和翻译的改变,是哺乳动物细胞在应激反应中控制基因表达的主要机制。mRNA稳定性和翻译的变化主要是通过特定mRNA序列(顺式元件)与两种主要的反式作用因子——RNA结合蛋白(RNA-binding protein,RBP)和微小RNA(microRNA,miRNA)相互作用而启动的过程来控制的^[1]。RBP参与RNA代谢的各个环节,包括RNA剪接、多聚腺苷酸序列编辑、RNA转移、维持RNA的稳定和降解、细胞内定位和翻译调控等。     

CircRNA锌指RNA结合蛋白在恶性肿瘤中作用研究进展

环状RNA是一类具有特殊共价闭合环状结构的RNA分子,环状RNA锌指核糖核酸结合蛋白(circRNA-ZFR)在诸多恶性肿瘤中呈异常表达,并且其表达水平与肿瘤临床分期、癌细胞转移及患者预后密切相关;circRNA-ZFR可通过内源竞争性吸附miRNA、调节细胞周期、激活多种信号通路等机制参与调控肿瘤的发生发展。深入研究circRNA-ZFR在恶性肿瘤中的表达及作用机制有助于相关肿瘤的早期诊断、靶向治疗和患者预后评估。     

HCMV编码的dsRNA结合蛋白在抗机体RNA干扰中的作用

人巨细胞病毒（HCMV）是一种感染广泛的疱疹病毒家族中的一员，它对人群中的易感者尤其对免疫能力下降患者的危害已引起社会的广泛重视。RNA干扰（RNAi）是近年来发现存在于体内抵御病毒感染和基因损伤的一种重要的保护机制。而HCMV则可通过编码dsRNA结合蛋白（DRBPs），特异性结合dsRNA，阻断宿主细胞抗病毒的RNAi途径，保护病毒mRNA的表达，最终达到逃避宿主细胞的抑制病毒转录的作用。     

神经系统RNA结合蛋白Musashi1 RRM1的初步结晶

目的 对Musashi1发挥功能的 RRM1结构域进行结晶,得到可用来衍射的蛋白晶体,为之后的结构解析打基础。方法 通过构建Musashi1RRM1的原核表达载体,并在BL21中表达、纯化高纯度的蛋白质,通过筛选结晶体条件得到蛋白晶体。结果 通过系统筛选和优化晶体生长条件得到了蛋白晶体。结论 Musashi1 RRM1的蛋白晶体质量较好,满足蛋白晶体衍射和数据收集的要求。     

RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及细胞中的表达及意义

目的探讨RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织及Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中的表达变化。方法应用real-time PCR和Western blot检测MOV10的表达变化。结果 RNA结合蛋白MOV10在阿尔茨海默病人脑组织中,在Aβ处理的人脑微血管内皮细胞和神经元中高表达。结论 RNA结合蛋白MOV10可能参与调控阿尔茨海默病的病理过程。     

HCMV编码的dsRNA结合蛋白在抗机体RNA干扰中的作用

人巨细胞病毒(HCMV)是一种感染广泛的疱疹病毒家族中的一员,它对人群中的易感者尤其对免疫能力下降患者的危害已引起社会的广泛重视.RNA干扰(RNAi)是近年来发现存在于体内抵御病毒感染和基因损伤的一种重要的保护机制.而HCMV则可通过编码dsRNA结合蛋白(DRBPs),特异性结合dsRNA,阻断宿主细胞抗病毒的RNAi途径,保护病毒mRNA的表达,最终达到逃避宿主细胞的抑制病毒转录的作用.     

RNA 结合蛋白 QKI 吸附海绵载体的构建及其对肝癌细胞增殖的影响

目的：构建针对 RNA 结合蛋白 quaking (QKI)的特异性吸附海绵载体(QRE-sponge),验证其对肝癌细胞系 HepG2中内源性 QKI 分子的抑制作用。方法利用人源 QKI 的特异性识别效应原件(qua-king responsive element, QRE)序列,重复13个拷贝,串联克隆至 pEGFP-C2真核表达载体中,转染 HepG2肝癌细胞及293 T 细胞。通过 Real time PCR,双荧光素酶报告基因检测及 MTT 实验进一步验证该吸附海绵的效果及其对肝癌细胞系 HepG2增殖的影响。结果 pEGFP-C2-QRE-SP 载体经测序证实构建成功,可以成功的在 HepG2细胞中表达,其绿色荧光呈阳性,且转染24 h 后显著影响 HepG2细胞中 QKI 下游靶基因的表达(P ﹤0.05)。双荧光素酶报告基因系统显示, pGL3-QRE-SP 载体可以显著抑制外源性 QKI 的活性(P﹤0.05)。 MTT 结果显示 pEGFP-C2-QRE-SP 载体促进 HepG2细胞的增殖。结论 QKI 吸附海绵载体策略构建的 pEGFP-C2-QRE-SP 载体可以成功的诱骗吸附 QKI,并促进肝癌细胞系 HepG2增殖,为进一步研究 QKI的功能研究提供了良好工具。     

胎儿性RNA结合蛋白p62在肝细胞癌中表达的意义

目的　探讨表达p6 2的肝癌组织的病理形态学特点 ,以及 p6 2与癌细胞增殖和转移等生物学特性的关系。方法　用免疫组织化学方法检测 4 0例原发性肝细胞肝癌 p6 2和Ki 6 7的表达。结果　p6 2阳性率是 6 7.5 % (2 7/ 4 0 ) ,其中 p6 2强阳性表达的 12例中 9例为肝癌病理学分级为Ⅲ级的病例。p6 2表达强阳性的癌组织往往间质有大量的纤维组织或有大片坏死癌细胞 ,其增殖活性也高 ,Ki 6 7标记指数为 2 8 3%± 15 1% ,与 p6 2表达阴性组 (7 5 %± 9 8% )比较 ,差异具有显著性意义 (t=3 0 87,P =0 0 0 5 ) ;5例有肺转移或腹腔淋巴结转移的病例 ,其中 3例p6 2表达强阳性。结论　p6 2的表达与癌细胞的增殖和转移有一定的关系 ,和间质纤维组织较多的微环境有关     

A membrane-associated movement protein of Pelargonium flower break virus shows RNA-binding activity and contains a biologically relevant leucine zipper-like motif

Two small viral proteins (DGBp1 and DGBp2) have been proposed to act in a concerted manner to aid intra- and intercellular trafficking of carmoviruses though the distribution of functions and mode of action of each protein partner are not yet clear. Here we have confirmed the requirement of the DGBps of Pelargonium flower break virus (PFBV), p7 and p12, for pathogen movement. Studies focused on p12 have shown that it associates to cellular membranes, which is in accordance to its hydrophobic profile and to that reported for several homologs. However, peculiarities that distinguish p12 from other DGBps2 have been found. Firstly, it contains a leucine zipper-like motif which is essential for virus infectivity in plants. Secondly, it has an unusually long and basic N-terminal region that confers RNA binding activity. The results suggest that PFBV p12 may differ mechanistically from related proteins and possible roles of PFBV DGBps are discussed.     

High expression of the RNA-binding protein RBPMS2 in gastrointestinal stromal tumors

Gastrointestinal stromal tumors (GISTs) are the most common mesenchymal neoplasms of the gastrointestinal tract and are often associated with KIT or PDGFRA gene mutations. GIST cells might arise from the interstitial cells of Cajal (ICCs) or from a mesenchymal precursor that is common to ICCs and smooth muscle cells (SMCs). Here, we analyzed the mRNA and protein expression of RNA-Binding Protein with Multiple Splicing-2 (RBPMS2), an early marker of gastrointestinal SMC precursors, in human GISTs (n = 23) by in situ hybridization, quantitative RT-PCR analysis and immunohistochemistry. The mean RBPMS2 mRNA level in GISTs was 42-fold higher than in control gastrointestinal samples (p < 0.001). RBPMS2 expression was not correlated with KIT and PDGFRA expression levels, but was higher in GISTs harboring KIT mutations than in tumors with wild type KIT and PDGFRA or in GISTs with PDGFRA mutations that were characterized by the lowest RBPMS2 levels. Moreover, RBPMS2 levels were 64-fold higher in GIST samples with high risk of aggressive behavior than in adult control gastrointestinal samples and 6.2-fold higher in high risk than in low risk GIST specimens. RBPMS2 protein level was high in 87% of the studied GISTs independently of their histological classification. Finally, by inhibiting the KIT signaling pathway in GIST882 cells, we show that RBPMS2 expression is independent of KIT activation. In conclusion, RBPMS2 is up-regulated in GISTs compared to normal adult gastrointestinal tissues, indicating that RBPMS2 might represent a new diagnostic marker for GISTs and a potential target for cancer therapy.     

以抑制肿瘤新生血管为靶点的抗肿瘤药物研究进展

恶性肿瘤的生长和转移与肿瘤区域的血管密切相关,肿瘤区域的新生毛细血管是肿瘤赖以生长和生存的物质基础,肿瘤细胞需要新生血管为迅速生长的肿瘤提供营养物质和排出废物。早在七十年代初就有人提出把抑制肿瘤血管形成作为肿瘤治疗的一种途径,以后这种以肿瘤血管为靶标的治疗策     

Identification of amino acids in auxiliary replicase protein p27 critical for its RNA-binding activity and the assembly of the replicase complex in Red clover necrotic mosaic virus

The specific recognition of genomic RNAs by viral replicase proteins is a key regulatory step during the early replication process in positive-strand RNA viruses. In this study, we characterized the RNA-binding activity of the auxiliary replicase protein p27 of Red clover necrotic mosaic virus (RCNMV), which has a bipartite genome consisting of RNA1 and RNA2. Aptamer pull-down assays identified the amino acid residues of p27 involved in its specific interaction with RNA2. The RNA-binding activity of p27 correlated with its activity in recruiting RNA2 to membranes. We also identified the amino acids required for the formation of the 480-kDa replicase complex, a key player of RCNMV RNA replication. These amino acids are not involved in the functions of p27 that bind viral RNA or replicase proteins, suggesting an additional role for p27 in the assembly of the replicase complex. Our results demonstrate that p27 has multiple functions in RCNMV replication.     

实验性脑脓肿组织中G蛋白信号系统相关基因的克隆

目的 筛选和克隆实验性脑脓肿的早期相关基因，研究脑组织对病原菌的免疫反应过程中所涉及的分子机制。方法通过脑组织内直接注射金黄色葡萄球菌获得大鼠脑脓肿，利用mRNA荧光差异显示PCR技术比较脑脓肿组脑组织中mRNA的表达与正常对照组、手术对照组之间的差异，获得的差异表达cDNA片段经克隆、测序及BLAST软件进行同源性比较分析，并采用Noahem杂交和RT-PCR进行鉴定。结果共获得25条差异表达的cDNA条带，经Noahem杂交和RT-PCR鉴定其中17条为阳性（阳性率为68％）。克隆和测序结果显示其中3个差异表达片段与G蛋白相关的细胞信号传导系统有关：片段G18-1代表的鸟苷二磷酸解离抑制因子3（GD13）、片段G20-1代表的交集素（ITSN）以及片段C2-1代表的Ras相关蛋白（Rap1）。结论在实验性脑脓肿早期GD13、ITSN和Rap1差异表达，推导G蛋白信号系统的激活可能与脑脓肿的发病相关。     

Bostrycin作为肺癌分子靶向药物的体外研究

目的 观察海洋真菌新结构先导化合物Bostrycin对A549细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制.方法 A549细胞完全随机分为实验组和对照组,实验组用不同浓度不同作用时间的Bostrycin进行处理,而对照组未经Bostrycin处理.用MTT法检测A549细胞增殖率的变化;电镜、流式细胞术检测凋亡;实时定量PCR和免疫印迹法探讨其作用机制.结果 Boatrycin浓度≥10μmol/L时对A549细胞增殖有明显的抑制作用,其24、48和72 h的半数抑制浓度(IC_(50))分别为20.20、14.36和9.42μmol/L.Bostrycin干预后,电镜观察到A549细胞典型的凋亡形态;流式细胞术结果显示其G_0/G_1期比例升高、S期和G_2/M期比例下降,凋亡率增加.实时定量PCR检测到微小RNA(miRNA)一638和miRNA.923的表达较对照组上调.免疫印迹结果显示p110α、p-Akt蛋白表达量下降,p27蛋白表达量升高.结论 Bostrycin对A549细胞增殖有显著抑制作用,该作用可能通过miRNA抑制磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(P13K/Akt)通路进行.