miR-203a-3p抑制人肝癌细胞系增殖

目的 探索miR-203a-3p对人肝癌细胞系增殖和凋亡的分子调节机制。方法 RT-qPCR检测临床肝癌(HCC)组织及肝癌细胞系中miR-203a-3p的表达;建立miR-203a-3p过表达的HepG2细胞模型;MTT法检测细胞增殖;流式细胞测量术检测细胞凋亡;平板集落形成实验检测集落形成;细胞划痕实验检测细胞迁移;表达谱芯片检测mRNA水平;ELISA检测转化生长因子-β1(TGF-β1)的分泌;Western blot检测TGF-β1表达。结果 miR-203a-3p在HCC组织中低表达(P<0.05),与肿瘤分期呈负相关(P<0.05);HepG2细胞中过表达miR-203a-3p可显著降低细胞增殖速率(P<0.05)、迁移能力(P<0.05)、克隆形成能力(P<0.05),促进细胞凋亡(P<0.05);TGF-β1表达降低(P<0.05),而TGFβR1表达升高(P<0.05);细胞培养上清中TGF-β1含量降低(P<0.05);细胞内TGF-β1的蛋白降低(P<0.05);加入TGF-β1重组蛋白可减轻miR-2...     

血管紧张素Ⅱ1型受体自身抗体可上调TXNIP导致大鼠胰岛β细胞系INS-1凋亡

目的血管紧张素Ⅱ1型受体(AngⅡ-1R)自身抗体能否通过影响硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)诱导大鼠胰岛β细胞凋亡。方法体外培养大鼠胰岛β细胞系INS-1,用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,选用10-6mol/L作为最适浓度,24 h作为最佳时间;在上述条件下,用流式细胞计量术及Western blot检测细胞凋亡及凋亡蛋白的表达; Real-time PCR和Western blot检测AngⅡ-1R自身抗体对TXNIP mRNA和蛋白表达的影响。结果AngⅡ-1R自身抗体呈浓度及时间依赖性降低INS-1细胞的活力(P0. 05);促进INS-1细胞凋亡(P0. 01);AngⅡ-1R自身抗体还可以促进TXNIP的mRNA和蛋白表达(P0. 01)。RNA干扰沉默TXNIP表达后,AngⅡ-1R自身抗体诱导的细胞凋亡减少(P0. 05);使用AngⅡ1R拮抗剂替米沙坦(TM)后,AngⅡ-1R自身抗体诱导的TXNIP上调及细胞凋亡均被抑制(P0. 05)。结论 AngⅡ-1R自身抗体可以通过AT1R上调TXNIP导致胰岛β细胞凋亡,有望为AngⅡ-1R自身抗体阳性的糖尿病患者的防治提供新靶点。     

利拉鲁肽通过调节microRNA-375对胰岛细胞凋亡的影响

目的:观察利拉鲁肽通过微小RNA-375(microRNA-375,miR-375)对db/db小鼠胰岛细胞凋亡的影响,探讨其可能作用机制,为临床应用提供药效学依据。方法:20只8周龄雄性db/m小鼠为正常对照组,皮下注射等量的生理盐水。40只8周龄雄性db/db小鼠随机分为2组,每组20只:糖尿病对照组的db/db小鼠皮下注射等量生理盐水;利拉鲁肽组的db/db小鼠皮下注射利拉鲁肽300μg·kg~(-1)·d~(-1)。给药8周后,检测各组小鼠体重(BW)、空腹血糖(FBG)、空腹胰岛素(FINS)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)及低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量,并进行腹腔注射葡萄糖耐量实验(IPGTT)和胰岛素耐量实验(ITT);苏木精-伊红(HE)染色检测胰岛组织病理学变化;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)检测胰岛凋亡情况;Western blot法检测胰岛凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平;实时荧光定量PCR检测胰岛miR-375的表达水平。小鼠胰岛β细胞系MIN-6分为对照组(等量溶媒孵育)、miRNA-375 mimic组和miRNA-375 mimic+利拉鲁肽组,MTT实验检测细胞活力,Western blot法检测各组细胞caspase-3、Bcl-2及Bax的蛋白水平。结果:整体实验中,与对照组相比,利拉鲁肽组BW、FBG、FINS、TC、TG及LDL-C含量明显降低(P0.05);胰岛数量较模型组增多,体积较大,细胞结构明显改善;胰岛细胞凋亡减少;利拉鲁肽组的Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的表达显著下降(P0.05);胰岛组织miR-375的水平显著降低(P0.01)。细胞实验中,经miRNA-375 mimic处理24 h后,MIN-6细胞活力显著降低,Bcl-2表达减少,而caspase-3和Bax的蛋白水平显著增加(P0.05),给予利拉鲁肽组治疗后,MIN-6细胞活力明显上升,Bcl-2表达明显增高,caspase-3和Bax的蛋白水平显著下降(P0.05)。结论:利拉鲁肽可以抑制糖尿病胰岛β细胞的凋亡,其机制可能与调控胰岛组织中miR-375的表达有关。     

血清外泌体中mi R-642a-3p下调HK1对胰岛素分泌和儿童1型糖尿病进展的影响北大核心CSCD

目的:探讨血清外泌体中miR-642a-3p靶向HK1对1型糖尿病(T1DM)患儿胰岛β细胞增殖、凋亡及胰岛素分泌的影响。方法:GEO数据库筛选T1DM患儿血清中的差异表达miRNAs,Targetscan预测miRNAs的靶基因,双荧光素酶报告实验验证靶向关系。收集68例T1DM患儿外周血标本,分离并鉴定血清外泌体。高糖培养基处理胰岛β细胞。将转染后的外泌体与胰岛β细胞共培养并分组。采用qRT-PCR分别检测miR-642a-3p在外周血、血清外泌体中的表达水平。流式细胞术、CCK-8试验检测胰岛β细胞的凋亡和增殖情况。ELISA检测胰高血糖素样肽-1(GLP-1)和胰岛素分泌浓度。结果:相对于健康志愿者,T1DM患儿血清及血清外泌体中miR-642a-3p表达明显升高(均P<0.05)。HK1被证实为miR-642a-3p的靶点。相对于NC组,抑制血清外泌体中miR-642a-3p的表达后胰岛β细胞凋亡率降低,增殖活性增加,胰岛素分泌增多,GLP-1浓度上调(均P<0.05)。过表达miR-642a-3p能够提高胰岛β细胞凋亡率,减弱其增殖活性,使胰岛素分泌减少,抑制GLP-1表达(均P<0.05),从而进一步促进T1DM,但该作用被HK1部分挽救(均P<0.05)。结论:血清外泌体源性miR-642a-3p能够通过调控HK1抑制胰岛β细胞增殖,并促进其凋亡,从而促进儿童T1DM进展。血清外泌体源性miR-642a-3p有望在儿童T1DM的靶向治疗中发挥作用。     

RNA结合蛋白对大鼠胰岛β细胞株RINm凋亡的保护作用

目的:探讨RNA结合蛋白Tristetraprolin(TTP)对大鼠胰岛β细胞RINm凋亡的影响。方法:取培养增殖期的NR8383巨噬细胞,分别转染不同载体,设为空载体组(pcDNA 3.1组)、TTP过表达载体组(pcDNA 3.1-TTP组)、TTP抑制载体组(si-TTP组)、阴性对照组(si-NC组)和空白对照组(NC组),于转染后12h,更换新鲜培养基,继续培养至36h,取各组巨噬细胞和部分上清,采用RT-qPCR和Western bloting检测其TTP和白细胞介素-6(IL-6)mRNA及其蛋白表达水平。取各组剩余上清液加入体外培养大鼠胰岛β细胞株,形成与前述对应的pcDNA 3.1+RINm组、pcDNA 3.1-TTP+RINm组、si-TTP+RINm组、si-NC+RINm组和NC+RINm组,再培养24h,采用流式细胞术检测各组胰岛RINm细胞凋亡率。结果:(1)pcDNA 3.1-TTP组TTP mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组明显升高(P<0.01),IL-6 mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组明显降低(P<0.01);si-TTP组TTP mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组显著降低(P<0.01),IL-6 mRNA和蛋白水平较pcDNA 3.1组显著升高(P<0.01)。pcDNA 3.1组、si-NC组和NC组间TTP、IL-6 mRNA和蛋白水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。(2)pcDNA 3.1-TTP+RINm组胰岛RINm细胞凋亡率较pcDNA 3.1+RINm组明显降低(P<0.01);si-TTP+RINm组胰岛RINm细胞凋亡率较pcDNA 3.1+RINm组明显升高(P<0.01)。pcDNA 3.1+RINm组、si-NC+RINm组和NC+RINm组间胰岛RINm细胞凋亡率比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。结论:过表达TTP可能通过抑制巨噬细胞分泌炎性因子,进而抑制胰岛β细胞凋亡。     

TNF-α促进大鼠胰岛β细胞系凋亡

目的观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)对胰岛细胞凋亡及TXNIP表达的影响。方法体外培养大鼠胰岛细胞系INS-1细胞,用CCK-8检测TNF-α(0、1、5、10和20 mg/L)的细胞存活率;确定TNF-α作用的最佳浓度和时间后,给予TNF-α(5 mg/L,24 h)处理INS-1细胞;用CCK-8与流式细胞术检测胰岛细胞的存活和凋亡;real-time PCR检测TXNIP和ChREBP mRNA表达;Western blot法检测TXNIP、ChREBP和FOXO1蛋白的表达。结果TNF-α呈浓度依赖性降低INS-1细胞存活率(P0.05),并诱导细胞凋亡;与对照组相比,TXNIP和ChREBP mRNA及蛋白表达水平均上调(P0.05);FOXO1蛋白表达水平下调(P0.05)。结论 TNF-α诱导INS-1胰岛细胞凋亡,加重细胞损伤。     

右美托咪定通过调控TXNIP/NLRP3炎症小体途径减轻脂多糖诱导的小鼠肠道屏障损伤

目的:探讨右美托咪定(DEX)调控硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体途径减轻脂多糖(LPS)诱导的小鼠肠道屏障损伤的机制。方法:实验小鼠分为对照组、模型组、DEX组、DEX+pcDNA3.1组和DEX+TXNIP组,每组12只。除对照组外,其余各组小鼠腹腔注射15mg/kg LPS,对照组小鼠腹腔注射等体积生理盐水。在LPS诱导肠道屏障损伤前30 min,DEX组小鼠腹腔注射30μg/kg DEX,DEX+pcDNA3.1组和DEX+TXNIP组在DEX组基础上分别皮下注射5 nmol pcDNA3.1空载体及5 nmol pcDNA3.1-TXNIP过表达载体,对照组和模型组小鼠则皮下注射等体积生理盐水。收集小鼠血清及肠道组织样本,采用ELISA检测血清中白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平,苏木精-伊红(HE)染色观察肠道组织形态,采用相应试剂盒检测肠道组织中氧化应激指标丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽(GSH)水平,采用RT-qPCR和Western blot分别检测肠道组织中TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平。结果:模型组肠道组织完整性被破坏,出现明显的细胞脱落现象,炎症浸润明显,病理评分升高(P0.05);DEX组和DEX+pcDNA3.1组肠道组织完整,但出现明显的炎症浸润现象,与模型组相比病理评分降低(P0.05);DEX+TXNIP组肠道完整性被破坏,出现细胞脱落现象,炎症浸润明显,与DEX+pcDNA3.1组相比病理评分升高(P0.05)。与对照组相比,模型组血清中IL-1β和TNF-α水平升高,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性降低(P0.05);与模型组相比,DEX组和DEX+pcDNA3.1组血清中IL-1β和TNF-α水平降低,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平降低(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性升高(P0.05);分别与DEX组和DEX+pcDNA3.1组相比,DEX+TXNIP组血清中IL-1β和TNF-α水平升高,肠道组织中MDA含量、ROS水平及TXNIP、NLRP3、caspase-1和IL-1β的mRNA和蛋白水平升高(P0.05),肠道组织中SOD和GSH活性降低(P0.05)。结论:DEX通过抑制TXNIP/NLRP3炎症小体途径减轻LPS诱导的小鼠肠道屏障损伤。     

D-半乳糖致小鼠胰腺损伤

目的探讨D-半乳糖(D-gal)对小鼠胰腺的损伤及其机制。方法 C57BL/6J小鼠随机分为对照组和D-gal组(D-gal 120 mg/kg,qd×42 d)。注射完成第2天,采外周血测定空腹血糖(FBG)与空腹胰岛素(FINS)水平;称小鼠体质量(g)与胰腺湿重(mg)计算胰腺脏器指数;HE染色观察胰腺组织形态学;透射电镜观察胰腺细胞超微结构;制备冷冻切片,衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)染色检测胰岛内染色阳性细胞的相对吸光度(RA)值;免疫组织化学法观察胰腺组织晚期糖基化终产物(AGEs)的RA值;制备胰腺组织匀浆检测超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)和丙二醛(MDA)含量。结果 D-gal组小鼠FBG显著升高(P0.05),FINS水平降低;胰腺湿重和胰腺脏器指数明显升高(P0.01);胰腺光镜结构无显著损伤,但胰岛内单个有核细胞所占面积增加(P0.05);胰腺内外分泌部显示细胞超微结构损伤,脂褐素明显沉积;胰腺SA-β-gal染色阳性细胞的RA值增加(P0.05);AGEs阳性表达区域RA值升高(P0.01);SOD与T-AOC含量降低(P0.05),MDA含量升高(P0.01)。结论 D-gal复制衰老小鼠模型可致胰腺损伤,发生机制可能与D-gal致胰腺细胞氧化应激损伤有关。     

β-连环蛋白、细胞周期蛋白D1和c-myc表达与胰腺癌发生及生物学行为的关系

目的 研究β-连环蛋白(β-cat)的异常表达、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和 c-myc的高表达与胰腺癌发生、增殖、浸润、转移和预后的关系。方法 应用免疫组织化学PicTure~(TM)二步法,检测47例胰腺癌组织、12例胰腺导管上皮内肿瘤(上皮中度不典型增生)和10例正常胰腺组织中β-cat、cyclin D1和c-myc的表达。同时检测胰腺癌增殖细胞核抗原(PCNA),作为胰腺癌增殖状态的指标。结果 β-cat在10例正常胰腺组织均呈正常表达,而cyclin D1和c-myc均呈阴性。三者在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中的表达率差异无显著性[分别为6/12和68.1％(3/47)、6/12和74.5％(35/47)、5/12和70.2％(33/47),均P>0.05]。β-cat异常表达率与胰腺癌的转移和1年生存率显著相关(均P<0.05),而与胰腺癌大小、分化程度、增殖活性及浸润无关(均P>0.05)。cyclin D1的表达率与胰腺癌的增殖和分化程度有关(均P0.05)。c-myc的表达率与胰腺癌的大小、分化程度、浸润、转移和1年生存率无关(均P>0.05),而与胰腺癌组织的增殖活性密切有关(P<0.05)。β-cat异常表达与cyclin D1和c-myc的高表达在胰腺导管上皮内肿瘤和胰腺癌中均有显著的正相关性(均P<0.05,r=1.000、0.845、0.437、0.452)。结论 β-cat     

1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞超微结构受损

目的:探讨1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞的超微结构改变。方法:BALB/c小鼠随机分为糖尿病组和对照组,每组6只。应用免疫组化染色检测胰岛素及胰岛微血管血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)表达水平;应用透射电镜观察糖尿病小鼠胰岛β细胞及胰岛微血管超微结构变化。结果:糖尿病组小鼠胰岛β细胞数量、β细胞/α细胞数量比、β细胞分泌颗粒数量及胰岛素阳性染色面积百分比显著降低(P0.01)。糖尿病组小鼠胰岛微血管数量,CD31表达水平显著降低(P0.01);微血管内皮细胞及胰岛周细胞线粒体肿胀变性;微血管基膜厚度显著升高(P0.01)。结论:1型糖尿病小鼠胰岛微血管内皮细胞超微结构受损。     

EPAS1 siRNA抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC的增殖、迁移及侵袭

目的 探讨沉默内皮PAS区域蛋白1(EPAS1)对抑制人肾透明细胞癌细胞系HiMet-ccRCC增殖、迁移和侵袭的影响及可能机制。方法 将HiMet-ccRCC细胞分为对照(Con)组、阴性对照(NC)组、沉默EPAS1表达组(EPAS1 siRNA组)。用RT-qPCR检测HiMet-ccRCC细胞EPAS1 mRNA水平;MTT法检测HiMet-ccRCC细胞增殖;Transwell小室法检测HiMet-ccRCC细胞迁移、侵袭能力;蛋白质印迹法检测E-cadherin、N-cadherin、MMP-9、PCNA表达。结果 与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞中EPAS1表达水平显著降低(P<0.05),HiMet-ccRCC细胞增殖抑制率明显升高、侵袭及迁移细胞数明显减少(P<0.05);与对照组、阴性对照组比较,EPAS1 siRNA组HiMet-ccRCC细胞E-cadherin蛋白表达上调(P<0.05),N-cadherin、MMP-9、PCNA蛋白表达下调(P<0.05)。结论 沉默EPAS1可抑制HiMe...     

软脂酸对INS-1胰岛细胞TXNIP表达的影响

目的:2型糖尿病患者体内持续高水平的游离脂肪酸会损伤胰岛β细胞。硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP)是内源性的硫氧还蛋白(Trx)抑制蛋白。已知高糖刺激可引起TXNIP表达上调,促进胰岛β细胞凋亡,而游离脂肪酸对TXNIP的影响尚不明确。本实验旨在研究软脂酸对TXNIP表达的影响及机制。方法:在使用不同浓度和不同作用时间的软脂酸充分预实验的基础上,确定使用添加0.5 mmol/L软脂酸的RPMI-1640培养基培养INS-1胰岛细胞24 h,测定细胞TXNIP的表达变化、细胞凋亡情况及可能的调控因子变化。结果:与对照组相比,软脂酸组TXNIP的mRNA水平和蛋白表达量均明显增高(P0.01),软脂酸组凋亡明显高于对照组(P0.01)。软脂酸组的核因子κB(NF-κB)蛋白磷酸化水平升高(P0.01),使用不同的NF-κB抑制剂PDTC和SN50均可阻断软脂酸诱导的TXNIP表达上调。结论:饱和脂肪酸软脂酸可通过增加NF-κB磷酸化而上调TXNIP的表达,从而诱导INS-1胰岛细胞凋亡。     

STC-1通过Bcl-2介导胃癌细胞的增殖和凋亡

目的:研究斯钙素1(STC-1)是否通过Bcl-2介导胃癌AGS细胞的增殖和凋亡。方法:将STC-1敲减或过表达质粒转染AGS细胞,用MTT法和集落形成实验检测细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞的迁移能力,Hoechst 33342染色和annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡水平,Western blot法检测Bcl-2、survivin、caspase-3及cleared caspase-3蛋白表达水平。RT-PCR法检测20例临床胃癌组织和癌旁组织中STC-1和Bcl-2的mRNA表达水平,Pearson法分析二者的相关性。结果:过表达STC-1后,AGS细胞的增殖和迁移能力提高,且Bcl-2和survivin的表达水平升高,而caspase-3及cleared caspase-3的表达水平降低(P<0.05);敲减STC-1表达后,AGS细胞的增殖和迁移能力降低,且Bcl-2和survivin的表达水平降低,而caspase-3及cleared caspase-3的表达水平升高(P<0.05)。胃癌组织中STC-1和Bcl-2的mRNA相对表达量均高于癌旁...     

间歇低氧小鼠胰腺β细胞凋亡及其机制的实验研究

目的: 探讨间歇低氧对小鼠胰腺β细胞凋亡的影响及其可能机制。方法: 将30只雄性C57BL/6J小鼠随机分为间歇低氧组、持续低氧组和正常对照组,每组10只。实验结束后测定各组小鼠的胰岛素耐量;采用化学比色法测定胰腺组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;用real-time PCR检测小鼠胰腺组织中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)和谷胱甘肽过氧化酶(GPx1) mRNA的表达水平;并用TUNEL染色检测胰腺β细胞凋亡。结果: 间歇低氧组小鼠胰岛素抵抗水平及胰腺组织中MDA水平显著高于正常对照组和持续低氧组 (P<0.01);胰腺组织SOD活性显著低于正常对照组和持续低氧组(P<0.01);抗氧化酶MnSOD和GPx1 mRNA的表达水平显著低于正常对照组和持续低氧组 (P<0.01);而胰腺β细胞凋亡率显著高于正常对照组和持续低氧组(P<0.01)。持续低氧组与正常对照组上述各种指标的比较均无显著差异(均P＞0.05)。结论: 间歇低氧可导致胰腺组织氧化应激状态和胰腺β细胞凋亡,这可能是阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者胰岛素抵抗及2型糖尿病的病理生理基础之一。     

小热休克蛋白家族和自噬相关蛋白 在自发性2型糖尿病db/db小鼠海马组织中的表达

目的观察自发性2型糖尿病db/db小鼠海马组织中小热休克蛋白家族(sHSPs)及自噬相关蛋白表达情况。方法正常db/m小鼠作为对照组,糖尿病db/db小鼠作为模型组,各10只。观察其体质量,空腹血糖(FBG);real-time PCR检测海马组织中小热休克蛋白家族、自噬相关基因mRNA的表达;Western blot检测HSPB8、BAG3、LC3、P62蛋白表达。结果 1)db/db小鼠体质量、空腹血糖均明显高于db/m小鼠(P0.01)。2)小热休克蛋白1-10(heat shock protein family B [small] member 1-10,HSPB 1-10)基因mRNA在小鼠海马组织中均有表达;其中HSPB1、HSPB3、HSPB5、HSPB6和HSPB8 db/db组明显低于db/m组(P0.05);HSPB2、HSPB9和HSPB10 db/db组高于db/m组(P0.05);而在db/db小鼠中LC3表达高于db/m组(P0.01),而P62反之(P0.01)。3)较db/m组,db/db组HSPB8、BAG3、LC3-Ⅱ蛋白表达均增高(P0.01),相反P62蛋白表达减低(P0.05)。结论 1)10种sHSPs均在小鼠海马组织中表达,但表达特点有所不同。2)8周龄糖尿病小鼠海马组织中存在HSPB8蛋白表达增强,且自噬激活。     

甘草酸铵对带状疱疹后遗神经痛大鼠GLP-1R/IL-10/β-内啡肽通路及脊髓背角小胶质细胞活化的影响

目的探究甘草酸铵对带状疱疹后遗神经痛(PHN)大鼠脊髓背角小胶质细胞活化,及胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)/白细胞介素-10(IL-10)/β-内啡肽(β-endorphin)通路的影响。方法将60只大鼠随机分成5组:对照组、模型组、甘草酸铵低剂量组(50 mg/kg)、甘草酸铵中剂量组(100 mg/kg)和甘草酸铵高剂量组(200 mg/kg),每组12只。除对照组外,其余各组均用树脂毒素(RTX)诱导,构建PHN大鼠模型,并进行相应的药物处理。检测各组大鼠对机械刺激和热刺激的敏感性;免疫荧光检测大鼠脊髓背角组织小胶质细胞的活化;ELISA法检测脊髓背角中炎症因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)水平;Western blot法检测大鼠脊髓背角中GLP-1R、IL-10、β-endorphin蛋白表达水平。结果与对照组相比,模型组大鼠缩爪热潜伏期(PWTL)值、小胶质细胞活化数量、IL-1β、TNF-α含量、及GLP-1R、IL-10、β-endorphin蛋白水平显著升高(P<0.05),缩爪机械阈值(PWMT)值显著降低(P<0.05...     

RASA1在胰腺癌中的异常表达及其临床意义

目的: 探讨Ras p21蛋白活化子1(Ras p21 protein activator 1,RASA1)在胰腺癌中的表达状况及可能作用。方法: 以qRT-PCR检测胰腺癌细胞(Capan-2、CFPAC-1、BxPC-3)和胰腺导管上皮细胞(H6C7)中RASA1 mRNA表达水平的差异,以Western blotting检测上述细胞之间RASA1蛋白表达水平的差异;以免疫组化检测RASA1蛋白在胰腺癌及胰腺良性病变(慢性胰腺炎、胰腺囊肿)中的表达差异,并观察其表达水平与胰腺癌各临床病理因素之间的联系。结果: 各胰腺癌细胞株中RASA1 mRNA和蛋白表达水平均低于胰腺导管上皮细胞(P<0.05)。肿瘤组织RASA1蛋白表达水平显著低于良性病变组织(P<0.05);侵犯周边器官的肿瘤组织中RASA1表达显著低于局限于胰腺内的组织(P<0.05);Ⅰ期胰腺癌组织RASA1的表达则显著高于Ⅱ、Ⅲ期的癌组织(P<0.05);但RASA1表达与胰腺癌的远处转移关系尚不明确。结论: RASA1作为抑癌蛋白可能在胰腺癌的发生发展中发挥重要作用。     

胰腺衍生因子（PANDER）在糖尿病小鼠胰腺中的表达变化

 目的 探讨PANDER蛋白在1型和2型糖尿病小鼠胰岛中的表达变化及其与胰岛素抵抗和高血糖的相关性。方法 以STZ诱导和自发性Akita 1型糖尿病小鼠及2型糖尿病db/db小鼠为动物模型,用实时定量PCR,免疫组化和Western Blot的方法检测胰腺中PANDER mRNA和蛋白指标。结果 相较于正常C57BL/6小鼠,STZ诱导和Akita 1型糖尿病小鼠胰腺组织中PANDER mRNA（STZ：1.00±0.17 vs. 0.25±0.06,P<0.01;Akita：1.00±0.19 vs.0.17±0.04,P<0.001）和蛋白（免疫组化灰度扫描STZ：1.00±0.18 vs. 0.16±0.11）水平均明显降低;相较于db/m小鼠,db/db小鼠胰腺组织中PANDER mRNA（1.00±0.05 vs. 2.13±0.46,P<0.05）和蛋白（1.00±0.28 vs. 3.58±0.36,P<0.01）水平均明显升高;罗格列酮灌胃db/db小鼠一个月后,胰岛肥大、胰岛素抵抗及高血糖症状得以缓解,同时胰腺中PANDER mRNA（1.00±0.13 vs. 0.28±0.06,P<0.01）和蛋白水平明显降低。结论 1型糖尿病小鼠胰腺组织中PANDER表达显著减少;2型糖尿病小鼠胰腺组织中PANDER明显升高。     

A20重组蛋白通过NF-κB/TGF-β1/CTGF信号通路抑制哮喘小鼠气道重构的初步实验研究

目的探讨A20重组蛋白对支气管哮喘小鼠气道重构及NF-κB信号通路的影响。方法 40只雄性清洁级Balb/c小鼠,随机数字表法分为4组,每组10只,分别为:生理盐水对照组;卵蛋白(OVA)哮喘组;A20重组蛋白治疗3 d组;A20重组蛋白治疗7 d组。在末次激发24 h后所有小鼠取左肺组织行苏木精-伊红(HE)染色及PAS染色。取右肺组织分别用酶联免疫吸附法(ELISA),RT-PCR和Western blote检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中IL-4、IL-5、TNF-α及IFN-γ含量以及肺组织中结缔组织生长因子(Connective tissue growth factor,CTGF)、转化生长因子-β1(trailsforming growth factor-β1,TGF-β1)的mRNA表达和核转录因子(nuclear factor kappa B,NF-κB)的表达。结果哮喘模型组小鼠与对照组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、TNF-α水平增高,而IFN-γ水平降低;肺组织CTGF、TGF-β1的转录和表达水平以及NF-κB表达水平均显著高于对照组(P<0.01)。A20重组蛋白3 d和7 d干预组小鼠与哮喘模型组相比较BALF中炎症细胞计数、IL-4、IL-5、TNF-α水平,CTGF、TGF-β1的转录和表达水平,NF-κB表达水平均显著降低,而BALF中IFN-γ水平明显上升,具有显著差异(P<0.05),但2个不同治疗组之间上述各指标间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 A20重组蛋白可抑制哮喘小鼠气道重构的发生,其机制有可能是通过抑制NF-κB/TGF-β1/CTGF信号通路而实现的。     

内质网应激激活STING信号通路并降低胰岛β细胞活力

目的：鉴定胰岛β细胞中干扰素基因刺激因子（STING）信号通路相关基因的表达及其与内质网应激的相互作用,研究2个通路间的相互作用对胰岛β细胞活力的影响。方法：通过生物信息学分析来源于人的胰岛单细胞RNA测序数据集,得到STING信号通路相关基因在胰岛β细胞中的表达变化;用免疫荧光法检测并比较野生型小鼠和db/db糖尿病小鼠胰岛β细胞中STING蛋白的表达差异;用STING特异性激动剂5,6-二甲基呫吨酮-4-乙酸（DMXAA）处理3种常用的小鼠胰岛β细胞系（NIT-1、Min6及beta-TC-6）,并通过RT-qPCR和Western blot分别检测其STING信号通路相关蛋白的mRNA和蛋白表达水平变化;用毒胡萝卜素（TG）诱导上述β细胞系内质网应激,通过Western blot检测STING信号通路相关蛋白的表达及磷酸化水平,并通过CCK-8法检测胰岛β细胞活力。结果：人胰岛β细胞中存在STING信号通路主要基因mRNA的表达,但在健康人群和糖尿病患者的表达水平无显著差异。免疫荧光结果表明,野生型小鼠和db/db小鼠胰岛β细胞的STING蛋白均在细胞核周边富集,且在db/db小...