细胞凋亡与卵巢癌研究进展

细胞凋亡作为一种主要发生在生理条件下的细胞死亡方式，日益受到学者们的重视。对于多细胞生物而言，具备对细胞凋亡的调控能力是非常重要的。膜功能的完整性是细胞凋亡和坏死的根本区别。核小体间DNA断裂结构至今仍是唯一可以定性检测细胞凋亡的生化指标、TUNEL方法和流式细胞仪为检测细胞凋亡提供了新的手段。细胞凋亡诱导基因的过度表达或细胞凋亡抑制基因的过度表达在卵巢癌的发生中有重要意义，对于这些某因的调控研究将产生新的肿瘤疗法。     

卵巢癌细胞凋亡的基因调控

自1972年美国病理学家Kerr等首先提出细胞凋亡的概念以来，20世纪90年代后，随着分子生物学技术的发展，科学家们通过对细胞凋亡控制的研究，认识到可以通过基因调控实现细胞凋亡的可能性，由此掀起了对细胞凋亡的研究热潮。     

米非司酮诱导卵巢癌细胞株3AO细胞凋亡的研究

目的　观测米非司酮对卵巢癌细胞株 3AO和SKOV3细胞体外增殖和凋亡活性 ,雌激素受体 (ER)、孕激素受体 (PR)蛋白表达和细胞形态学的影响。方法　应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法测定 3AO和SKOV3细胞体外增殖活性。应用流式细胞仪 (FCM )检测米非司酮在不同浓度和培养时间下 ,3AO细胞的ER、PR、p5 3和bcl 2蛋白表达率、增殖率和凋亡率。应用光学和电子显微镜观察3AO细胞的形态学变化。结果　 3AO细胞在不同浓度米非司酮 (5、10、2 0、4 0、80 μmol/L)和不同时间培养 (2 4、4 8、72h)下 ,其生长抑制率由 1 7%增加至 75 0 % ,与剂量和时间呈明显正相关 (P <0 0 1) ,但SKOV3细胞增殖无明显变化 (P >0 0 5 )。 3AO细胞凋亡率与米非司酮剂量和培养时间呈正相关 (P <0 0 1)。米非司酮阻断 3AO细胞周期 ,使其停滞于G0 、G1期 ,降低S期细胞比率。米非司酮诱导 3AO细胞凋亡 ,光学和电子显微镜观察发现 ,经米非司酮培养的 3AO细胞呈现典型的细胞凋亡的特征性变化 ,包括染色体皱缩、细胞核碎裂和凋亡小体的形成。米非司酮显著升调p5 3蛋白表达 ,而降调bcl 2蛋白表达 (P <0 0 1)。米非司酮浓度为 10 μmol/L ,培养 2 4h时 ,3AO细胞 p5 3和bcl 2蛋白表达率分别为(5 4 8± 4 0 ) %和 (10 1± 1 2 ) % ,与对照的 (2     

αvβ6整合素对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响

目的　探讨αvβ6整合素介导的细胞与细胞外基质的黏附 ,及其对顺铂诱导的卵巢癌细胞凋亡的影响。方法　采用流式细胞仪测定卵巢癌细胞株SKOV3、AO、3AO细胞表面αvβ6整合素的表达 ,并利用酶联免疫吸附实验、吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法分析顺铂诱导的细胞凋亡及αvβ6整合素对细胞凋亡的影响。结果　SKOV3、AO、3AO细胞均表达αvβ6整合素 ,其相对荧光指数 (FI)均为 1 0 3± 0 0 1。顺铂可以诱导SKOV3、AO、3AO细胞凋亡 ,经顺铂 (10 μg/ml)作用 4 8h后 ,酶联免疫吸附实验结果显示 ,生长于αvβ6整合素配体———纤维粘连蛋白 (FN)上的细胞的富集系数 (EF)分别为 2 11± 0 0 4、2 15± 0 0 6、2 11± 0 0 4 ,明显低于生长于非整合素配体———多聚赖氨酸 (polylisin)上的细胞 (分别为 3 5 1± 0 0 3、3 5 5± 0 0 4、3 6 6± 0 0 4 ,P <0 0 1) ;吖啶橙 溴化乙锭双荧光染色法结果显示 ,生长于FN上的细胞凋亡率分别为 (5 0± 0 7) %、(5 0± 0 7) %、(6 0± 0 7) % ,明显低于生长于polylisin上的细胞凋亡率[分别为 (2 8 0± 0 7) %、(2 8 0± 0 7) %、(2 9 0± 0 7) % ,P <0 0 0 1],用αvβ6整合素的特异性阻断抗体封闭过的细胞再次生长于FN上时 ,细胞凋亡率 [分别为 (15 0± 0     

维生素E琥珀酸酯诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨维生素E琥珀酸酯(Vitamin E Succinate,VES)对人卵巢腺癌细胞系SKOV3的生物学效应及机制.方法依培养基中有无加VES,将培养的SKOV3细胞分为对照组和实验组,通过MTT比色法检测VES对该细胞系杀伤率的影响;通过光学显微镜、透射电镜观察及流式细胞仪分析检测凋亡;利用caspase-3荧光检测探讨VES作用、SKOV3细胞的作用机制.结果VES处理SKOV3细胞后,细胞存活率明显降低,光镜下见明显形态学改变,电镜下见各个时期的凋亡细胞,流式细胞仪测定发现典型的凋亡峰,活性caspase-3荧光强度增加.结论VES能诱导卵巢腺癌SKOV3凋亡并可能通过激活caspase家族实现.     

卵巢癌细胞凋亡及相关基因的检测

探讨Ｂｃｌ－２、ｐ５３、Ｆａｓ基因与卵巢癌细胞凋亡的关系。方法４４例卵巢癌术后石蜡包埋组织切片后,应用原位末端标记法及免疫组化法进行相关检测。结论Ｂｃｌ－２、ｐ５３、Ｆａｓ基因可能过调控细胞凋亡而参与卵巢癌的发生与发展。     

黄芩素诱导人子宫颈癌HeLa细胞凋亡

目的:探讨黄芩素对人子宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响及其可能的机制。方法:MTT法测定黄芩素作用后人子宫颈癌HeLa细胞的生长抑制率;Hoechst 33258荧光染色法和Annexin-V/PI双染流式细胞术检测黄芩素诱导HeLa细胞凋亡的作用;Westernblot观察黄芩素对HeLa细胞bcl-2、Bax、caspase 3及p53表达的影响。结果:(1)不同浓度黄芩素作用24h后均可抑制HeLa细胞生长(P<0.05);(2)黄芩素作用24h后,HeLa细胞呈典型的凋亡形态学改变,凋亡率亦显著增加(P<0.01);(3)细胞内Bax、p53和caspase 3表达显著上调,bcl-2表达明显下调(P<0.05)。结论:黄芩素通过调控凋亡相关基因的表达,诱导HeLa细胞凋亡。     

野生型p53基因对卵巢癌细胞株生长及凋亡的影响

目的 探讨野生型p53基因对卵巢癌细胞生长抑制及凋亡的作用，为卵巢癌的基因治疗提供实验依据。方法 构建野生型p53基因重组腺病毒载体、体外转染卵巢癌细胞株CaOV3；应用生化染色、免疫组化、聚合酶链技术，检测外源基因的转染率及表达效果；应用细胞计数、MTT法（四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法）、流式细胞术和TUNEL技术（TDL-mediated dUTP-hiotin end labeling)，检测细胞生长及凋亡的情况。结果 野生型p53基因重组腺病毒载体可以有效地转染卵巢癌细胞株CaOV3，转染后的CaOV3细胞内可以检测到p53基因的cDNA及p53蛋白的表达；转染后的CaOV3细胞生长受到明显抑制，63％的细胞生长停滞于G0／G1期，40％－50％的细胞TUNEL呈阳性。结论 野生型p53基因的导入，可抑制卵巢癌细胞的生长并诱导细胞凋亡。野生型p53基因导入可能成为今后临床基因治疗卵巢癌的可行性方法之一。     

阿霉素诱导人卵巢癌细胞凋亡和周期特异性的实验研究

目的 :探讨阿霉素诱导卵巢癌细胞凋亡的规律。方法 :以不同浓度的阿霉素作用于人卵巢癌细胞株SKOV3,用光镜、电镜、TUNEL法和DNA凝胶电泳法检测确定细胞凋亡 ,以流式细胞仪定量分析凋亡和细胞周期特异性。结果 :大剂量 ( 2 5～10 0 μg/ml)长时间 ( 3～ 72h)的阿霉素作用可引起卵巢癌细胞坏死和凋亡 ,较小剂量( 0 .5μg/ml)的阿霉素连续作用 2 4、4 8、72h ,诱导细胞凋亡发生率分别为 4 0 .0 1%、65.38%和 77.65% ,并使细胞发生G1期阻滞。结论 :阿霉素能导致卵巢癌细胞DNA损伤 ,发生G1期阻滞并诱导凋亡是其抗肿瘤的机制之一。     

卵巢癌细胞诱导T淋巴细胞凋亡的实验研究

目的　探讨卵巢癌细胞诱导T淋巴细胞凋亡及一氧化氮与细胞内游离钙离子在T淋巴细胞凋亡过程中的作用。方法　分别采用电子显微镜、流式细胞仪观察 3个卵巢癌细胞株 (OVCAR3、CAOV3和SKOV3 )的培养上清液诱导的CD+ 8T淋巴细胞的凋亡 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)技术检测诱导型一氧化氮合成酶 (iNOS)mRNA的表达 ;Fura 2荧光负荷技术和酶联免疫 (EIA)法分别检测细胞内游离钙离子浓度 ( [Ca2 + ]i)和环鸟苷酸 (cGMP)浓度。结果　 ( 1)分别经卵巢癌细胞株OVCAR3、CAOV3和SKOV3细胞培养的上清液作用后 ,CD+ 8T淋巴细胞出现典型的凋亡改变 ,即染色质固缩和片段化 ;流式细胞仪上见凋亡峰 ;细胞凋亡率 [分别为 ( 2 3 8± 3 5) % ,( 2 3 1± 2 9) %、( 2 4 2± 4 9) % ]较对照 [( 4 6± 0 5) % ]明显增高 (P <0 0 1) ;( 2 )CD+ 8T淋巴细胞凋亡过程中iNOSmRNA的表达 (分别为 1 14± 0 0 3 ,1 0 5± 0 0 4,1 16± 0 0 2 )较对照 ( 0 60± 0 0 3 )显著增高 (P <0 0 1) ;细胞内游离 [Ca2 + ]i[分别为 ( 3 80± 3 8)、( 3 66± 13 )、( 3 56± 2 0 )nmol L]和cGMP浓度 [分别为 ( 0 65± 0 0 9)、( 0 62± 0 16)、( 0 57± 0 12 )pmol ml]均较对照 [分别为 ( 184± 11)nmol L、( 0 2 9± 0 0 4     

放射线诱导人宫颈癌细胞凋亡的研究

目的 为了探明放射线治疗宫颈癌的作用机理。方法 采用＾６０Ｃｏ照射体外培养的宫颈癌细胞株,用不同剂量,在照射后不同的时间观察细胞形态学改变及ＤＮＡ断裂情况。结果 发现受照细胞在小吸收剂量（４００ｃＧｙ）照射后出现异常增生,随着剂量增大时间延长,出现细胞凋亡,并逐渐增多。结论 表明放射线是通过诱导细胞凋亡而发挥抑制宫颈癌细胞生长的。     

Rab25 siRNA诱导人卵巢癌细胞凋亡及其机制的研究

目的:通过RNA干涉抑制Rab25在人卵巢上皮性癌的过表达,探讨Rab25siRNA对肿瘤细胞凋亡的生物学效应及作用机制.方法:构建针对Rab25的siRNA重组质粒,稳定转染A2780细胞,通过RT-PCR检测Rab25的表达,用Hoechst 33258染色和TUNEL法研究Rab25 siRNA诱导细胞的凋亡;用免疫组化法分析抑制Rab25的表达对凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响.结果:Rab25 siRNA可诱导肿瘤细胞凋亡;蛋白水平检测表明抑制Rab25表达使Bcl-2表达下降,Bax表达增强.结论:Rab25 siRNA可诱导细胞凋亡,Rab25影响卵巢癌细胞生存途径是通过调节Bcl-2/Bax表达含量发挥作用.     

卵巢癌相关基因筛选的初步研究

目的 通过研究人卵巢癌组织和正常卵巢组织中差异表达的基因，筛选出卵巢癌相关基因以用于早期诊断和治疗。方法 以cDNA基因表达谱芯片分析研究卵巢组织样本和正常卵巢组织的基因表达谱，计算机分析后比较两种组织中差异表达的基因。结果 共筛选出差异表达的基因1785条，表达上调基因有40条，下调基因138条，有显著表达差异的基因54条，涉及到11大类基因。结论 卵巢癌同其它恶性肿瘤一样，是多种基因结构和功能改变的结果，有关卵巢癌特异性相关基因及其作用尚有待进一步研究。     

妊娠高血压综合征胎盘细胞凋亡现象及凋亡相关基因表达的研究

妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )的病因和发病机理至今未完全阐明。国外学者认为细胞凋亡在胎盘发生、发育、老化过程中起重要作用 ,并介导许多病理妊娠的发生 [1 ]。本实验旨在研究妊高征患者胎盘细胞凋亡发生率以及凋亡相关基因在胎盘部位的表达 ,从而探讨细胞凋亡在妊高征发     

树突状细胞体外诱导抗卵巢癌免疫的实验研究

目的 观察人外周血树突状细胞(Dendritic cells,DC),体外能否诱导抗卵巢癌免疫应答。方法 用粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、白介素-4(IL-4)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)从健康女性外周血分化诱导DC,以源于人卵巢癌细胞系HO-8910的肿瘤抗原粗提物冲击致敏DC,将致敏DC、同源淋巴细胞和卵巢癌细胞共育,观察负载抗原DC体外诱导淋巴细胞对HO-8910细胞的杀伤作用,同时设不同类型肿瘤细胞(Eca-109和PC-12)作为对照。MTT法测定细胞杀伤活性。结果 经卵巢癌细胞HO-8910肿瘤抗原脉冲致敏的DC能诱导淋巴细胞特异性地杀伤卵巢癌细胞。结论 用GM-CSF、IL-4和TNF-α从人外周血诱生的DC能从卵巢癌细胞HO-8910冻融物有效递呈抗原并诱导出高效而特异的抗卵巢癌免疫反应。     

紫花牡荆素体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的研究

目的:探讨紫花牡荆素(casticin)体外抑制人卵巢癌HO-8910细胞增殖和诱导凋亡的效应及其机制。方法:MTT法检测casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制;Hoechest33258染色观察细胞凋亡形态学改变;流式细胞术(FCM)检测casticin处理HO-8910细胞的凋亡率;Western blotting分析caspase-3、CyclinB1、p21蛋白表达变化。结果:casticin对人卵巢癌HO-8910细胞增殖有较强的抑制作用,呈剂量和时间依赖性。经casticin作用48h后HO-8910细胞表现出典型的凋亡形态特征,并剂量依赖性地增加亚二倍峰,降低CyclinB1蛋白表达,增高caspase-3和p21表达。结论:casticin通过降低CyclinB1表达、活化p21和caspase-3抑制HO-8910细胞增殖并诱导凋亡。     

激活素A对早孕胎盘细胞滋养细胞凋亡的作用

激活素A是转换生长因子13家族中的一员。研究表明，激活素A在细胞增殖、凋亡以及癌变过程中都有重要的调节作用；其中激活素A对具有增殖功能的细胞可诱导其发生凋亡。人的细胞滋养细胞是具有增殖能力的正常细胞，细胞膜上有激活素A受体表达，在妊娠期与激活素A结合，继而影响细胞滋养细胞增殖与凋亡。本研究旨在探讨激活素A对细胞滋养细胞凋亡的调节作用，报道如下。     

肿瘤坏死因子相关诱导配体与化疗药物联合诱导抗化疗卵巢癌细胞凋亡的研究

目的探讨肿瘤坏死因子（TNF）相关诱导配体（TNF-related apoptosis inducinglig and，TRAIL）和（或）化疗药物联合使用对人卵巢癌细胞系耐药株A2780与SKOV3细胞凋亡的影响。方法2005-01日本国岐阜大学免疫病理3种化疗药物（顺铂、紫杉醇、阿霉素）和TRAIL分别加入培养的A2780与SKOV3细胞，通过hoechst 33342染色在荧光显微镜下确定细胞凋亡效应；蛋白印记杂交法分析bax，bcl-2，及caspase-3，8蛋白表达量的变化。应用四甲基偶氮唑蓝（MTr）法测定A2780与SKOV3细胞体外增殖活性。结果3种化疗药物与TRAIL对A2780和SKOV3细胞的生长都表现抑制作用，3种化疗药物与TRAIL联合用药组A2780与SKOV3的生长抑制率明显高于单独用药组。结论3种化疗药物与TRAIL联合作用所产生的正效应对卵巢癌临床治疗有潜在的意义。     

抗凋亡基因NF-κB和Survivin对卵巢癌细胞株耐药性的诊断价值

目的:探讨凋亡抑制基因NF-κB、Survivin对卵巢癌细胞株耐药性的诊断价值。方法:采用卵巢上皮性癌细胞株A2780和由此细胞株诱导的耐顺铂细胞株AD4,分别加入顺铂(DDP)和紫杉醇(Taxol),并设空白对照,测定两组细胞中凋亡抑制基因核因子(NF-κB)、Survivin和多耐药基因(Mdr1)mRNA的表达;同时检测各组细胞的凋亡率。结果:经DDP处理后,Mdr1在两株细胞中均无明显表达,与G3PDH的比值均低于0.1;而Taxol作用后,Mdr1在两株细胞中表达均增加,与G3PDH的比值分别为1.98和1.86,但差异无显著性。NF-κB在各组细胞中均有表达,各组之间差异无显著性。Survivin有较强表达,与G3PDH的比值为4.5,耐药细胞株的比值为6.9。在两细胞株的不同实验中,Mdr1的表达与凋亡率无明显相关性,而Survivin则是负相关(P<0.05,r=-0.89)。结论:在卵巢癌及卵巢癌耐顺铂细胞株中,紫杉醇可诱导Mdr1高表达,而DDP对Mdr1表达无影响;NF-κB主要是通过活性增加,促进Mdr1表达来诱发卵巢癌细胞耐药;Survivin的表达与细胞凋亡率呈负相关,提示Survivin可作为肿瘤细胞耐药检测指标之一。