蛇菰提取物对人PTP1B酶活性的抑制作用

目的：胰岛素信号传导系统中的蛋白酪氨酸磷酸酶1B（protein tyrosine phosphatase 1B，PTP1B）是胰岛素增敏剂的新靶点之一。本文旨在制备人PTPlB蛋白，并观察多蕊蛇菰（Balaophora polyandra Griff．）提取物对PTP1B的抑制作用。方法：采用分子生物学方法，以IPTG诱导基因重组的hGST-PTPlB BL21 E．Coli工程菌过表达人类PTP1B蛋白，经GST亲和层析柱纯化得到hGST-PTPlB蛋白质。以Bio-Rad蛋白分析试剂测定蛋白含量。采用体外酶学方法，以多肽para-NitroPhenyl Phosphate（pNPP）为底物，观察药物对hGST-PTPIB酶活性的影响。多蕊蛇菰全草用石油醚加热回流，再经不同浓度的水、乙醇等溶剂提取，减压浓缩后得蛇菰提取物。结果：经hGST-PTPlB-BL2 1E．Coli工程菌扩增、诱导表达、并经GST亲和层析柱纯化，可得到人类hGST-PTPIB蛋白质，平均得率为9．2土2．7mg／L。将该蛋白质产物用7．5％SDS-PAGE电泳，紫外扫描分析在分子量40KD附近有明显的单一条带，为hGST-PTPIB蛋白质。分离多蕊蛇菰全草共得到61个提取物。其中，在体外对PTPlB酶的抑制率〉50％的有21个提取物。对抑制率〉80％的7个活性部位，进一步分析量效关系，其50％抑制率的浓度（IC50）分别为0．566、0．588、0．596、0．616、0．667、0．970、和1．23ug／ml。结论：诱导基因重组的hGST-PTPP1B-BL21 EColi工程菌可得到hGST-PTPP1B蛋白质，不同提取部位的蛇菰提取物对PTP1B酶有显著的抑制作用。     

芒果苷衍生物的合成及其PTP1B酶抑制活性研究

目的设计合成一系列芒果苷衍生物并进行体外蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）抑制活性实验。方法利用亲核取代反应在芒果苷上引入疏水苄基,设计合成8个新化合物4~11,采用比色法对化合物进行PTP1B抑制活性研究。结果设计合成的8个化合物对PTP1B酶都有一定的抑制作用。结论芒果苷衍生物的活性明显好于芒果苷本身的活性,苄基的对位取代活性要优于邻位和间位取代,且苄基上氯原子取代的衍生物要高于其它原子取代的化合物活性。     

饮食诱导肥胖大鼠蛋白酪氨酸磷酸酶1B表达的变化

目的 观察饮食诱导肥胖大鼠骨骼肌、肝脏、胰腺蛋白酪氨酸磷酸酶1B表达变化,探讨蛋白酪氨酸磷酸酶1B在肥胖胰岛素抵抗发生巾的作用.方法 雄性SD大鼠20只,随机均分为正常饲养(NC)组和高脂饲养(HF)组,喂养8周,比较两组大鼠体重、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及骨骼肌、肝脏、胰腺蛋白酪氨酸磷酸酶1B的表达.结果 HF组大鼠体重比NC纰显著增加,并出现胰岛素抵抗(HOMA-IR 8.58±3.37 vs.3.46±2.21)(P＜0.01).HF组大鼠骨骼肌、肝脏、胰腺蛋白酪氨酸磷酸酶1R表达量较NC组显著增加(P＜0.01).结论 高脂饮食可诱导大鼠肥胖伴胰岛素抵抗,其胰岛素抵抗的形成可能与蛋白酪氨酸磷酸酶1B表达水平的升高有关.     

合成类蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂专利现状分析

蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）是治疗2型糖尿病的潜在的重要靶点,与肥胖、肿瘤也具有密切关系,本文从专利分布和布局的角度出发,选择以PTP1B抑制剂作为主题,使用关键词对全球专利数据库中的全球发明专利申请进行了检索,得到相关的发明专利申请,对上述数据进行人工筛选分类,重点对合成类PTP1B抑制剂专利态势作了研究分析,以期能够为该领域药物的开发与仿制提供有益的借鉴与参考。     

人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂的高通量筛选

本研究拟建立体外人源蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP1B)抑制剂高通量筛选模型,用于PTP1B抑制剂的发现。利用大肠杆菌重组表达PTP1B,以对硝基苯磷酸二钠(PNPP)为特异性的底物,建立了基于酶反应速率的384孔微板为载体的PTP1B抑制剂高通量筛选模型(Z'=0.78)。选择24 240个样品进行筛选,对抑制率大于70%的80个样品作为活性样品进行复筛,最终确定6个具有较强的抑制活性的化合物J5753、J10550、J10551、J10583、J10585和J11101,其IC50值分别为21.58、18.39、15.37、11.92、37.27和36.61μg·mL-1。结果表明,所建立的PTP1B抑制剂高通量筛选模型具有快速、灵敏、稳定、重复性好的特点。     

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B抑制剂的研究进展

目的：介绍近年来研究的各种蛋白酪氨酸磷酸酶-1B(protein tyrosine phosphatase 1B，PTP-1B)抑制剂的作用机制和特性。方法：查阅关于PTP-1B抑制剂的国外文献，探讨产生抑制作用的机制。结果：PTP-1B是瘦素和胰岛素信号转导的主要负性调节者，目前所研究的PTP-1B抑制剂能有效抑制PTP-1B；某些还具有良好的脂溶性，可渗透人细胞发挥作用。结论：PTP-1B抑制剂用于治疗糖尿病和肥胖具有重要价值。     

蛋白酪氨酸磷酸酶1B及其小分子抑制剂的研究进展

蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP-1B）是胰岛素和瘦素信号传导通路的负调节因子。目前,作为糖尿病和肥胖症治疗的新靶点,PTP-1B抑制剂的研究引起了广泛的关注。现从PTP-1B简介、生理功能以及抑制剂的结构性质等方面进行综述。     

榅桲果实及种子不同提取部位的蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性筛选

目的探讨榅桲果实和种子的甲醇提取物及其不同溶剂提取部位对蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制作用,筛选抗糖尿病活性部位。方法利用PTP1B体外筛选系统,对榅桲果实和种子不同提取部位进行细致筛选,确定其降糖活性部位。结果榅桲果实和种子各部位均有不同程度抑制PTP1B活性的作用,其中榅桲种子乙酸乙酯部位、榅桲果实二氯甲烷部位和榅桲果实水部位的体积分数为50%的乙醇溶液洗脱部位对PTP1B抑制作用强,其半数抑制质量浓度(IC50)分别为0.844,0.423和0.395mg·L-1,初步推测榅桲果实及种子提取物具有抗2型糖尿病的潜力。结论榅桲种子乙酸乙酯部位、榅桲果实二氯甲烷部位和榅桲果实水部位的体积分数为50%的乙醇溶液洗脱部位是主要的抗糖尿病活性部位。     

人TIMP-2基因的克隆及其原核表达

目的 构建人TIMP-2重组表达载体,并在大肠杆菌BL21 (DE3)中表达.方法 提取人肝癌细胞(Hep G2)总RNA后,经RT-PCR扩增获得目的片段,插入克隆载体pMD18-T;酶切鉴定和测序后将TIMP-2导入原核表达载体pGEX-4T-1中,构建重组质粒pGEX-TIMP-2.将重组质粒转化至大肠杆菌菌株BL21 (DE3)中,IPTG诱导融合蛋白表达后用SDS-PAGE电泳检测并用western blot验证(蛋白质印迹法).结果 成功构建原核重组表达载体pGEX-TIMP-2,并在原核宿主BL21中大量表达融合蛋白GST-TIMP-2.结论 克隆人TIMP-2基因并在原核生物中大量表达.     

A comprehensive review on the research progress of PTP1B inhibitors as antidiabetics

Diabetes mellitus (DM) is a serious global health concern affecting over 500 million people. To put it simply, it is one of the most dangerous metabolic illnesses. Insulin resistance is the root cause of 90% of all instances of diabetes, all of which are classified as Type 2 DM. Untreated, it poses a hazard to civilization since it can lead to terrifying consequences and even death. Oral hypoglycemic medicines presently available act in a variety of ways, targeting various organs and pathways. The use of protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitors, on the contrary, is a novel and effective method of controlling type 2 diabetes. PTP1B is a negative insulin signaling pathway regulator; hence, inhibiting PTP1B increases insulin sensitivity, glucose absorption, and energy expenditure. PTP1B inhibitors also restore leptin signaling and are considered a potential obesity target. In this review, we have compiled a summary of the most recent advances in synthetic PTP1B inhibitors from 2015 to 2022 which have scope to be developed as clinical antidiabetic drugs.     

人胰岛素样生长因子-1基因的克隆及其表达

目的获得大量高纯度、具有生物学活性的人胰岛素样生长因子 1(hIGF 1) ,构建hIGF 1原核表达载体 ,并进行表达与纯化。方法以pUCIGF质粒为模板 ,PCR扩增了hIGF 1基因。经适当酶切后 ,构建表达载体pRSET IGF ,转入大肠杆菌BL2 1(DE3)进行表达 ,并经阴离子交换色谱、疏水色谱和凝胶过滤纯化。结果带有重组质粒pRSET IGF的大肠杆菌经IPTG诱导后 ,以可溶性形式表达 7.8kD大小的蛋白 ,其表达量占菌体总蛋白量的10 %～ 2 0 % ,纯化后目的蛋白纯度达 95 %以上 ,Western印迹表明重组蛋白具有hIGF 1抗原活性。结论构建了pRSET IGF重组质粒 ,并成功地在大肠杆菌中获得可溶性表达 ,为获得大量基因工程产品奠定了基础     

Natural products possessing protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B) inhibitory activity found in the last decades

This article provides an overview of approximately 300 secondary metabolites with inhibitory activity against protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B), which were isolated from various natural sources or derived from synthetic process in the last decades. The structure-activity relationship and the selectivity of some compounds against other protein phosphatases were also discussed. Potential pharmaceutical applications of several PTP1B inhibitors were presented.     

人过氧化氢酶基因的克隆与表达

目的利用基因重组技术在大肠杆菌中高效表达人过氧化氢酶(catalase,CAT)。方法从人cDNA文库中获得CAT编码基因,并利用pMAL-c2x、pBV221质粒分别构建了融合和非融合表达载体并进行了表达和活性检测。结果融合表达与非融合表达均可获得可溶性蛋白质,非融合的表达产物具有CAT活性,而融合表达产物在切除融合蛋白质(MBP)部分后表现出明显的CAT活性。结论从大肠杆菌表达体系能表达具有生物活性的CAT,此项研究为后续重组酶性质的研究和开发利用奠定了基础。     

PTP-1B及其抑制剂与2型糖尿病的研究现状

蛋白酪氨酸磷酸酶-1B (PTP-1B)是蛋白酪氨酸磷酸酶(PTP)家族中的一员,在胰岛素信号转导途径中发挥重要作用.经研究发现,PTP-1B与2型糖尿病的发生、发展有密切关系. 本文按PTP-1B 小分子抑制剂的结构类别对近年来文献报道的代表性小分子PTP-1B 抑制剂进行综述.表明深入研究PTP-1B及其有效的抑制剂对于2型糖尿病治疗具有良好的发展前景.     

血清蛋白质酪氨酸磷酸酶 1B、雌二醇水平与青少年脾虚肝郁型闭经病人肥胖的关系

目的 检测青少年脾虚肝郁型闭经病人血清蛋白质酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)、雌二醇(E2)水平,并探讨其与肥胖的关系.方法 选取2019年1―8月于张家口市中医院妇科门诊确诊的青少年脾虚肝郁型闭经病人110例作为研究对象,按照青少年肥胖诊断标准分为青少年脾虚肝郁型闭经发生肥胖60例(闭经肥胖组)和青少年脾虚肝郁型闭经未发生肥胖50例(闭经未肥胖组).另选取同期健康体检者60例作为对照组.收集研究对象的体质量、肥胖度、体质量指数(BMI)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)等资料.酶联免疫吸附法(ELISA)检测受试者外周血血清中PTP1B、E2水平.logistic回归分析青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的影响因素.受试者工作特征曲线(ROC)分析二者对青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的诊断效能.结果 与对照组、闭经未肥胖组相比,闭经肥胖组体质量[(77.25±12.43)kg比(49.65±7.13)kg、(51.89±8.27)kg]、肥胖度[(41.64±13.26)％比(16.75±2.85)％、(17.75±3.26)％]、BMI[(29.75±5.36)kg/m2比(20.86±4.13)kg/m2、(21.26±4.35)kg/m2]、TC[(4.62±0.93)mmol/L比(3.25±0.65)mmol/L、(3.34±0.81)mmol/L]、TG[(1.94±0.26)mmol/L比(0.86±0.12)mmol/L、(0.88±0.18)mmol/L]、LDL[(2.75±0.53)mmol/L比(1.87±0.35)mmol/L、(1.95±0.42)mmol/L]水平明显升高(P<0.05);对照组、闭经未肥胖组、闭经肥胖组PTP1B[(53.63±12.56)ng/mL、(72.16±16.42)ng/mL、(85.24±21.35)ng/mL]、E2水平[(283.76±73.15)ng/mL、(357.46±83.81)ng/mL、(426.63±95.52)ng/mL]均依次升高(P<0.05).TC、LDL、PTP1B、E2水平均是青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的独立危险因素(P<0.05),PTP1B、E2联合检测对青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖的ROC曲线下面积为0.750.结论 PTP1B、E2水平在青少年脾虚肝郁型闭经发生肥胖病人体内均升高,二者均是致病的独立危险因素,有一定的诊断效能,可能为临床诊断青少年脾虚肝郁型闭经病人发生肥胖提供一定参考.