7- 二氟甲氧基-5, 4′- 二- 正辛烷氧基金雀异黄素诱导肺癌A549 细胞凋亡

目的研究7二氟甲氧基-5,4＇二正辛烷氧基金雀异黄素（7-difluorom＋hoxyl-5,4＇-di-n-octylgenistein,DFOG）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用。方法体外培养A549细胞。二氟甲基化或烷基化得到一系列金雀异黄素衍生物。MTT法测定细胞活力;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察DNA梯形条带;Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达。结果 9个金雀异黄素衍生物较先导化合物GEN具有更强的抗肿瘤活性。其中DFOG对A549细胞活性显示最强的抑制作用,IC50为3.9μmol·L^-1。DFOG（2.0、4.0和8.0μmol·L^-1）作用48h的细胞凋亡率依次增高。8.0μmol·L^-1DFOG处理A549细胞48h导致典型DNA梯形条带形成。8.0μmol·L1DFOG处理A549细胞6h、12h和24h,Bcl-2蛋白表达水平下降,而Bax蛋白表达上升。结论 DFOG诱导A549细胞凋亡作用与其增高Bax/Bcl-2比值有关。     

miR-519d/Twist1轴介导BrMC抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞体外致癌能力北大核心CSCD

目的探讨8-溴-7-甲氧基白杨素(8-bromo-7-methoxychrysin,BrMC)是否通过上调miR-519d,下调Twist1表达,进而抑制SMMC-7721源性肝癌干样细胞(liver cancer stem cell-like cells,LCSLCs)体外致癌能力。方法用球培养法从SMMC-7721细胞系得到第2代球细胞,命名为LCSLCs。不同浓度BrMC(1.0、3.0、10.0μmol·L^(-1))处理LCSLCs,实时定量PCR检测miR-519d表达水平;球形成和琼脂集落形成实验评价体外致癌能力;荧光素酶报告基因实验和Western blot分析Twist1转录活性和蛋白表达;miR-519d模拟物或Twist1基因转导探讨BrMC作用的分子机制。结果与SMMC-7721细胞比较,LCSLCs的miR-519d低表达,而Twist1蛋白高表达。BrMC(1.0、3.0、10.0μmol·L^(-1))浓度依赖性降低LCSLCs球形成和琼脂集落形成率;并上调miR-519d表达、下调Twist1蛋白表达。荧光素酶报告基因实验证实,miR-519d可以直接靶向Twist1 mRNA 3'非翻译区,并调节蛋白表达。miR-519d模拟物增强BrMC(3.0μmol·L^(-1))的作用,然而,Twist1基因转导有效逆转BrMC(3.0μmol·L^(-1))的效应。结论 BrMC通过调节miR-519d/Twist1信号轴,抑制SMMC-7721源性LCSLCs体外致癌能力。     

三氧化二砷对人肺腺癌细胞凋亡及LRP、MRP基因表达的影响

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对人肺腺癌细胞凋亡和LRP、MRP基因表达的影响。方法选用人肺腺癌A549细胞株,运用体外细胞培养法,MTT法,流式细胞术检测As2O3对人肺腺癌的抑制和诱导凋亡作用;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测LRP、MRP mRNA的表达。结果As2O3对人肺腺癌A594细胞具有抑制作用．其抑制率呈时间-剂量依赖关系。不同浓度的As2O3均可诱导凋亡。1．0μmol·L^-1、2．0μmol·L^-1。浓度的As2O3可下调LRP、MRP mRNA的表达。结论As2O3具有诱导人肺腺癌细胞凋亡的作用,其机制与其下调LRP、MRP mRNA的表达密切相关。     

OSTP-DDP靶向抑制卵巢癌A2780细胞生长作用的研究

目的研究卵巢癌特异性结合肽(ovarian cancer specific targeting peptide,OSTP)与顺铂(cis-dichlorodiamineplatinum,DDP)偶联物(OSTP-DDP)对卵巢癌A2780细胞的靶向抑制作用。方法化学合成OSTP-DDP,体外培养卵巢癌A2780细胞,采用CCK-8法分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的生长抑制作用;通过Annexin V-FITC凋亡试剂盒分别检测OSTP-DDP和DDP对卵巢癌A2780细胞的周期和凋亡作用。结果通过质谱分析和高效液相色谱(HPLC)分析,提示成功合成OSTP-DDP。CCK-8法检测显示,OSTP-DDP与DDP分别以不同浓度(10、20、40、80、160、320μmol·L~(-1))处理卵巢癌A2780细胞24、48、72 h后,均可对该细胞的生长起到抑制作用,且呈时间、浓度依赖性。且OSTP-DDP的作用强于DDP(P<0.05),提示OSTP-DDP具有靶向抑制细胞生长作用。流式细胞术检测结果显示,经OSTP-DDP和DDP处理后,细胞周期均被阻滞于G_1期,作用72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的周期抑制作用强于DDP,差异具有统计学意义(P<0.05)。作用24、48、72 h后,OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞凋亡的作用强于DDP(P<0.01)差异具有统计学意义,提示OSTP-DDP具有较强的靶向诱导细胞凋亡作用。结论 OSTP-DDP对卵巢癌A2780细胞的生长具有靶向抑制作用,OSTP作为化疗药物靶向载体治疗卵巢癌有良好的应用前景。     

紫花牡荆素诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制的探讨

目的探讨紫花牡荆素（CAS）诱导人肺腺癌A549细胞凋亡及其机制。方法平皿集落法测定CAS对A549细胞生长的抑制作用;碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率;丫啶橙／溴乙啶（AO／EB）荧光染色观察细胞凋亡形态;Westernblot检测FoxMl（forkhead box protein M1）表达水平。结果CAS能抑制人肺腺癌A549细胞生长,呈浓度依赖性,半数抑制浓度（IC50）值为7．26p．mol·L^-1;CAS处理后A549细胞呈典型凋亡细胞形态学改变,诱导细胞凋亡呈浓度依赖性;CAS诱导A549细胞FoxM1蛋白表达下调,呈浓度和时间依赖性。结论CAS抑制人肺腺癌A549细胞的生长并诱导其凋亡,其作用机制可能与FoxM1表达下调有关。     

小檗碱调节PI3K/AKT/FOXO1/Bim信号通路改善高糖诱导的足细胞损伤

目的探讨小檗碱通过调节PI3K/AKT/FOXO1/Bim信号通路改善高糖诱导的足细胞损伤。方法用指数生长期的足细胞进行实验,实验分为正常对照组、高糖模型组、小檗碱作用组:浓度分别为30、60、90μmol·L^-1。CCK-8法检测细胞的存活率;Annexin V FITC/PI双色标记检测细胞的凋亡率;Transwell小室法考察细胞的迁移能力;Western blot法分析细胞上PI3K、p-AKT、p-FOXO1、Bim和足细胞标志蛋白nephrin、WT-1的表达情况。结果CCK-8检测结果显示,不同浓度的小檗碱对足细胞增殖能力的促进程度不同;An-nexin V FITC/PI双色标记细胞凋亡结果显示,小檗碱对高糖诱导的足细胞凋亡具有抑制作用;Transwell小室实验结果显示,小檗碱对高糖诱导的足细胞迁移具有抑制作用;Western blot的结果得出,小檗碱能明显升高nephrin、WT-1蛋白的表达,降低PI3K、p-AKT、Bim蛋白的表达,明显升高p-FOXO1蛋白的表达。结论小檗碱能缓解高糖诱导足细胞的损伤,其可能的机制与保护足细胞PI3K/AKT/FOXO1/Bim的信号通路有关。     

白藜芦醇对U937泡沫细胞清道夫受体CD36表达的影响

目的 研究白藜芦醇对U937泡沫细胞B类清道夫受体CD36mRNA、蛋白表达的影响.方法 U937细胞与佛波酯100μg·L^-1、ox-LDL 80 mg·L^-1孵育48 h,建立U937泡沫细胞模型;以不同浓度的白藜芦醇（1、10、20μmol·L^-1）预处理U937细胞24 h再加入佛波酯100μg·L^-1、ox-LDL 80 mg·L^-1共同孵育48 h后通过RT-PCR和Western印迹检测分别检测U937细胞CD36mRNA和蛋白的表达情况.结果 U937泡沫细胞组CD36mRNA和蛋白的表达较U937细胞对照组明显增加（2.389±0.249）vs（0.953±0.242）,P〈0.01;（2.562±0.218）vs（1.000±0.052）,P〈0.01,白藜芦醇干预后,随着浓度的增加,U937泡沫细胞的CD36mRNA和蛋白表达水平呈浓度依赖性下降（P〈0.05）.结论 白藜芦醇能浓度依赖性地下调ox-LDL诱导的U937泡沫细胞CD36mRNA和蛋白的表达.     

醉茄素A通过JAK/STAT通路对人肝癌耐药细胞HepG2/ADM凋亡的影响

目的研究醉茄素A通过Janus激酶(JAK)/信号转导与转录激活子(STAT)通路对人肝癌耐药细胞HepG2/阿霉素(ADM)凋亡的影响,并探讨JAK/STAT通路在其中可能的作用机制。方法体外培养HepG2/ADM细胞,分为对照组、醉茄素A 2.5、5.0、10.0μmol/L组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Hoechst33342染色法观察细胞形态学变化;Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞凋亡情况;Western blotting法检测凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、cleaved caspase-3以及JAK/STAT通路中磷酸化JAK2(p-JAK2)、STAT3(p-STAT3)蛋白表达情况。结果醉茄素A 2.5、5.0、10.0μmol/L组HepG2/ADM细胞增殖受到明显抑制,并呈时间和剂量相关性(P<0.05)。与对照组相比,醉茄素A 2.5、5.0、10.0μmol/L组HepG2/ADM细胞部分细胞核发生碎片化、固缩,荧光强度增大,细胞凋亡指数及凋亡率显著升高(P<0.05),cleavedcaspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.05),Bcl-2、p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论醉茄素A可促进人肝癌耐药细胞Hep G2/ADM凋亡,其机制可能与抑制JAK/STAT通路活化,下调抑凋亡蛋白表达及上调促凋亡蛋白表达有关。     

RITA通过ROS/Src/Stat3通路诱导肺鳞癌H226细胞凋亡

目的 探究肿瘤凋亡和P53再生化合物（RITA）对肺鳞癌细胞凋亡的影响及作用机制。方法 采用MTT 细胞活力检测法检测不同浓度RITA对肺鳞癌细胞H226和正常肺上皮细胞BEAS-2B增殖的影响,筛选合适的干预 浓度。经0、0.05、0.1和0.2 μmol/L RITA处理后,采用流式细胞术分析H226细胞内活性氧（ROS）产生和细胞凋亡水 平变化。Western blot 检测 P-Src、Src、转录信号转换器和激活因子 3（Stat3）、P-Stat3、Bim、Mcl-1、存活蛋白 （Survivin）、Bax及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）的蛋白表达水平。H226细胞经0.2 μmol/L RITA 和5.0 mmol/L 抗氧化剂 N-乙酰半胱氨酸（NAC）同时处理后,观察NAC能否逆转RITA对H226细胞的生物学效应。结果 0.05~0.2 μmol/L 范围内,随着RITA浓度的升高,H226细胞增殖活性下降,半抑制浓度（IC50）为（0.130±0.008）μmol/L,而相同给药浓 度下对 BEAS-2B 细胞增殖无明显影响。0~0.2 μmol/L RITA 可增加 H226 细胞内 ROS 水平并诱导细胞凋亡,下调 P-Src、P-Stat3、Mcl-1、Survivin、Bcl-2蛋白表达,上调Bim、Bax蛋白表达。经NAC处理后,RITA抑制Src/Stat3通路活 性及诱导H226细胞凋亡的效应被逆转。结论 RITA通过提高肺鳞癌H226细胞内ROS的水平,从而抑制Src/Stat3 通路活性,最终诱导细胞凋亡。     

GSH 耗竭介导5, 7- 二甲氧基黄酮诱导肺癌A 549 细胞凋亡

目的探讨5,7-二甲氧基黄酮（5,7-dimethoxyflavone,DMF）诱导人肺癌A549细胞凋亡作用是否涉及细胞内谷胱甘肽（glutathione,GSH）耗竭。方法体外培养A549细胞,分光光度法测定细胞内GSH含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA断裂。结果 DMF以浓度依赖方式诱导A549细胞凋亡率增高（P〈0.05）,并导致细胞DNA断裂。DMF显著降低A549细胞内GSH水平（P〈0.05）,呈浓度依赖性。500μmol·L-1GSH预孵育1h,能有效阻断DMF诱导细胞内GSH耗竭,并减弱DMF触发细胞凋亡作用（P〈0.05）。结论细胞内GSH耗竭是DMF诱导人肺癌A549细胞凋亡作用机制之一。     

依地福新对Hela细胞生长的抑制作用及其机制研究

目的:观察依地福新对人宫颈癌Hela细胞的体外生长抑制作用,并进一步探讨其作用机制。方法:细胞中分别加入不同浓度的依地福新(0.5、1.0、5.0、10.0μmol.L-1)处理96h,并设立未加依地福新的对照组。应用MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪检测细胞周期分布;染色法检测细胞凋亡率。结果:与对照组比较,不同浓度依地福新处理Hela细胞24～96h后,细胞增殖显著受到抑制,并呈浓度及时间依赖性;1.0、5.0、10.0μmol.L-1浓度依地福新处理72h后,Hela细胞G0/G1期细胞数量显著增加,S期细胞数量显著降低(P<0.01);各浓度组细胞凋亡率均显著增加(P<0.01)。结论:依地福新对Hela细胞具有生长抑制作用,其机制可能与阻滞细胞周期及诱导凋亡有关。     

MG132诱导人血管平滑肌细胞凋亡及对caspase3表达的影响

目的观察蛋白酶体抑制剂MG132对人脐静脉血管平滑肌细胞(VSMC)的致凋亡作用及其对凋亡相关的天冬氨酸特异的半胱氨酸蛋白酶3(caspase3)表达的影响。方法采用多个浓度(2.5,5,10μmol/L)的蛋白酶体抑制剂MG132处理人脐静脉VSMC48h;DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡;流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡率;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测caspase3基因转录水平;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达。结果蛋白酶体抑制剂MG132处理48h后细胞凋亡率增加;RT-PCR检测发现细胞内凋亡相关基因caspase3mRNA表达上调;免疫细胞化学检测细胞caspase3蛋白表达水平升高。结论蛋白酶体抑制剂MG132能够诱导人脐静脉VSMC凋亡,其作用呈量-效关系;MG132诱导VSMC凋亡的机制可能与MG132抑制泛素-蛋白酶体途径(UPP)活性,促进caspase3基因转录,使细胞内caspase3增加而促进细胞凋亡。     

地西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化的影响

目的探讨地西他滨（DCA）和丙戊酸钠（VPA）联用对白血病细胞株HL-60促凋亡和分化诱导的协同作用。方法白血病细胞株HL-60分别与以下药物终浓度组作用48 h:对照组,DCA单药A组(1.0μmol·L^-1),DCA单药B组(4.0μmol·L^-1),VPA单药组(2.0 mmol·L^-1),联合用药A组(IDCA 1.0μmol·L^-1+VPA 2.0 mmol·L^-1),联合用药B组(DCA 4.0μmol·L^-1+VPA2.0 mmol·L^-1)。应用Annexin V-FTTC/PI标记法检测早期凋亡率,流式细胞术检测CD34、CD117平均荧光强度（MFI）以及CD11b、CD14表达率。结果联合用药A、B组的凋亡率高于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义（P<0.01）;联合用药A、B组的CD117和CD34 MFI低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义（P<0.01）;联合用药A组的CD11b和CD14表达率以及联合用药B组的CD11b表达率均低于其各自的单药组,差异具有高度统计学意义（P<0.01）。结论白血病细胞株HL-60中VPA能显著增强DCA的促凋亡分化作用。     

紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7增殖的抑制作用研究

目的:研究紫苏醇亚微乳剂对人乳腺癌细胞MCF-7的增殖抑制作用。方法:以紫苏醇溶液为对照,采用MTT比色法检测不同浓度(0、50、100、200、400、800μmol·L-1)紫苏醇亚微乳剂处理不同时间(24、48、72h)后对人乳腺癌细胞MCF-7的抑制率及半数抑制量(IC50)值,并设立空白组进行比较。结果:与空白组比较,试验组与对照组在作用24h、浓度高于400μmol·L-1,48h、浓度高于100μmol·L-1,72h、浓度高于50μmol·L-1时均表现出明显抑制作用(P<0.05);后2组抑制作用比较无显著性差异;试验组与对照组对MCF-7细胞株的IC50值分别为353.9、377.9μmol·L-1。结论:紫苏醇制成亚微乳剂后与其溶液比较,对人乳腺癌细胞MCF-7具有相同的抑制作用。     

8-溴-7-甲氧基白杨素体外抗肝癌作用及首过糖苷化速率的测定

目的观察白杨素(ChR)衍生物8-溴-7-甲氧基白杨素(Br MC)对体外培养肝癌HepG2细胞生长的抑制作用;用人结肠腺癌(Caco-2)细胞模型比较白杨素及其衍生物Br MC的首过糖苷化速率,从药动学角度阐明Br MC比ChR抗肿瘤活性强的可能原因,为寻找既具有较强抗肿瘤活性又具有良好的药动学特性的活性新化学实体提供实验依据。方法①MTT比色法测定Br MC对体外培养肝癌Hep-G2细胞和人胚肝L-02细胞增殖的影响,评价其对肝癌细胞作用选择性;②体外培养Caco-2细胞,用Transwell建立单层细胞模型;③评价时间对Br MC和ChR葡萄糖醛酸化产物形成的影响,用β-葡萄糖醛酸苷酶水解葡萄糖醛酸结合物,高效液相色谱(HPLC)检测,计算葡萄糖苷化速率。结果①MTT比色法结果显示,Br MC(3.0、10.0、30.0μmol.L-1)及其先导化合物ChR(30.0μmol.L-1)与阳性对照药物5-氟尿嘧啶(5-FU30.0μmol.L-1)分别处理肝癌HepG2细胞48 h,其增殖相对抑制率分别为31.5%、52.3%、61.2%、51.1%和60.8%;Br MC的效价强度高于其先导化合物ChR,与5-FU相当。Br MC对正常人胚肝L-02细胞的毒性作用(IC50为446.5μmol.L-1)远小于对肝癌HepG2细胞的毒性(IC50为10.3μmol.L-1),对人肝癌HepG2细胞的药物选择指数达43.3;②Caco-2细胞培养21 d后,成功建立细胞单层模型;③Br MC和ChR的葡萄糖苷化产物均随时间延长而增加,但Br MC比ChR的糖苷化速率显著降低。结论以ChR为先导物,选择性引进溴和甲氧基的衍生物Br MC对肝癌的生长抑制作用较ChR明显增强,可能与其葡萄糖醛酸化程度显著降低,药物在肝癌细胞中的蓄积增加有关。     

高效液相色谱法测定人血浆中丁螺环酮浓度

目的目的建立测定人血浆中丁螺环酮浓度的高效液相色谱法。方法以Diamonsil^TM C18反相柱（150mm×4．6mm。5μm）,为色谱柱,流动相为0．03mol·L^-1;醋酸铵．甲醇（22：78）;流速：0．8mol·L^-1;柱温40℃;检测波长：238nm。以乙酸乙酯与二氛甲烷（80：20）为提取剂。结果丁螺环酮的高、中、低（400．0,80．0,10．0ng·L^-1）3种浓度平均回收率分别为99．28％．97．63％,102．41％,日内、日间差RSD均低于7％（n=5）;分析方法的最低检测限为5．0ng·L^-1;线性范围为10．0～400．0ng·L^-1。曲线方程：Y=65．69X＋1．87,r=0．9993（n=9）。结论该方法灵敏、准确、简单、快速。可用于临床血药浓度监测和药动学研究。     

西他滨联合丙戊酸钠对白血病细胞株的促分化效应研究

目的探讨地西他滨(decitabine,DCA)和丙戊酸钠(valproic acid,VPA)联用对白血病细胞株HL-60的促分化影响。方法设立分组如下:对照组,DCAA组(1.0 mol.L 1),DCA B组(4.0 mol.L 1),VPA组(2.0 mmol.L 1),联合用药A组(DCA1.0 mol.L 1+VPA 2.0 mmol.L 1),联合用药B组(DCA 4.0 mol.L 1+VPA 2.0 mmol.L 1),作用48 h。流式细胞术检测CD34、CD117 MFI以及CD11b、CD14表达率。结果联合用药A、B组的CD117和CD34 MFI显著低于其各自的单药组(P<0.01);联合用药A组的CD11b和CD14表达率和联合用药B组CD11b表达率显著低于其各自的单药组(P<0.01)。结论 VPA与DCA联用对HL 60细胞具促分化作用。     

海蓬子皂苷甲调控SHP/STAT信号通路抗肝癌的研究

目的研究海蓬子皂苷甲(bigelovii A,BA)诱导细胞凋亡的作用及其机制。方法使用MTT实验检测BA对肿瘤细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析BA对细胞凋亡的影响;Western blot分析p-STAT3、STAT3、p-STAT5、STAT5、SHP-1、SHP-2的表达。结果20和40μmol·L^-1 BA可诱导HepG2细胞发生凋亡,具有剂量依赖性。10、20和40μmol·L^-1 BA可抑制IL6诱导的STAT3和STAT5磷酸化,但酪氨酸磷酸酶抑制剂过钒酸钠可逆转该抑制作用,且20μmol·L^-1 BA能激活蛋白酪氨酸磷酸酶SHP-1和SHP-2。结论BA可能通过SHP-1/SHP-2和STAT3/STAT5通路诱导HepG2细胞凋亡。     

紫花牡荆素对卵巢癌CoC1 细胞凋亡和Mcl-1 表达的影响

目的研究紫花牡荆素（casticin）诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用。方法用不同浓度的casticin处理体外培养的CoC1细胞,碘化丙啶（PI）染色流式细胞术（FCM）分析细胞凋亡率,比色法测定细胞caspase-3活性,Western Blot分析Mcl-1蛋白表达水平。结果紫花牡荆素以浓度依赖方式增高CoC1细胞凋亡率和激活caspase-3（P〈0.05）。1.0μmoL·L-1casticin以时间依赖方式降低Mcl-1蛋白表达水平（P〈0.05）。结论 casticin诱导CoC1细胞凋亡与其抑制Mcl-1蛋白表达相关。