Pitx2基因在斑马鱼牙齿发育过程中早期表达的研究

目的研究Pitx2基因在斑马鱼牙齿早期发育阶段的表达。方法利用RT-PCR技术直接克隆Pitx2特异性基因片段,制作针对Pitx2的基因探针,选取斑马鱼发育早期多个时段的胚胎进行整胚原位杂交。结果成功克隆Pitx2基因,合成针对Pitx2的基因探针,获得Pitx2基因在斑马鱼早期发育阶段的表达情况。结论了解Pitx2基因在斑马鱼早期发育阶段中的表达情况。     

pitx2基因早期过量表达对斑马鱼牙齿生长发育相关基因的影响

目的:研究pitx2基因早期过量表达对斑马鱼牙齿发育相关基因的影响。方法:利用RT-PCR技术克隆pitx2特异性基因片段;插入特异性酶切位点后以之为模板体外合成pitx2 mRNA。选取正常交配获得的斑马鱼胚胎,随机分为4组采用显微注射技术构建pitx2过表达模型:实验1组注射pitx2 mRNA200 pg/nL;实验2组注射pitx2 mRNA 100 pg/nL;实验3组注射YFP mRNA 100 pg/nL作为对照;实验4组为不注射任何基因作为野生型。分别于注射后24、48、72 h观察胚胎发育情况;利用RT-PCR检测5个与斑马鱼牙齿发育相关基因的表达情况。结果:成功克隆含有pitx2基因CDS的片段并体外合成mRNA。显微镜下观察发现:pitx2早期过量表达可造成胚胎发育停止、心包水肿、脊索变形和眼部发育畸形等形态学改变。相关基因检测显示,与对照组和野生型组相比,注射100 pg/nL pitx2 mRNA组bmp4表达明显下调(P<0.05);fgf8、lef1、runx2a表达均明显上调(P<0.05);dlx2b表达各组之间未见明显差异(P<0.05)。结论:pitx2早期过量表达对斑马鱼牙齿发育相关基因的表达有影响。     

细胞间隙连接蛋白43基因在斑马鱼牙齿早期发育中的表达#br#

目的 探讨细胞间隙连接蛋白43（cx43）基因在斑马鱼早期胚胎中的表达模式,为进一步研究其在牙齿发育过程中的功能奠定基础。方法 提取受精后72 h的斑马鱼胚胎总RNA,逆转录合成cDNA,特异性扩增cx43基因片段,连接到PGEMT载体并判断连接方向,选择相应的RNA聚合酶体外转录,合成地高辛标记的cx43基因反义mRNA探针。运用全时相胚胎原位杂交技术检测斑马鱼胚胎发育早期cx43基因在牙齿发育部位的表达分布,茜素红染色法比较cx43原位杂交表达区域与咽齿解剖部位的关系。结果 获得了cx43基因的反义mRNA探针。cx43基因在斑马鱼受精后各个时期咽弓牙齿相应部位均可见到强棕褐色阳性信号。受精后9 d时cx43原位杂交表达部位与咽齿解剖部位基本重叠一致。结论 cx43基因参与牙胚发育和矿化过程,且主要在矿化晚期发挥关键调控作用。     

外胚叶发育不全基因及其受体在斑马鱼牙齿早期发育中的表达

目的 探讨外胚叶发育不全（EDA）基因及其受体（EDAR）基因在斑马鱼早期咽齿发育过程中的表达模式,为进一步研究其在牙齿发育过程中的功能奠定基础。方法 提取受精后48 h（48 hpf）的斑马鱼胚胎总RNA,之后逆转录合成cDNA,以该cDNA为模板,特异性扩增斑马鱼咽齿特异性标记基因dlx2b、Eda信号通路相关基因eda及edar基因片段,用TA克隆试剂盒将这3个基因片段分别连接到pGEMT载体上,将对应质粒用聚合酶链反应（PCR）线性化,以PCR线性化做模板,选择相应的RNA聚合酶体外转录,合成dlx2b、eda及edar基因的反义mRNA探针。收集36、48、56、60、72、84 hpf的斑马鱼胚胎,运用全胚原位杂交技术检测eda及edar基因在斑马鱼咽齿发育部位的表达分布。比较原位杂交结果eda及edar表达区域与斑马鱼咽齿特异性标记基因dlx2b所指示咽齿部位的关系。结果 获得了dlx2b、eda及edar基因的反义mRNA探针。原位杂交结果显示,48~72 hpf时eda及edar在鳃弓牙齿相应部位可见强棕褐色阳性信号,与dlx2b所指示咽齿部位吻合。结论 Eda信号通路配体与受体在斑马鱼咽齿早期发育过程中即牙齿发生至形态发生阶段于咽齿部位特异性强表达,这一结果显示该信号通路可能参与斑马鱼咽齿早期发育的调控。     

外胚叶发育不全基因及其受体在斑马鱼牙齿早期发育中的表达

目的 探讨外胚叶发育不全（EDA）基因及其受体（EDAR）基因在斑马鱼早期咽齿发育过程中的表达模式,为进一步研究其在牙齿发育过程中的功能奠定基础。方法 提取受精后48 h（48 hpf）的斑马鱼胚胎总RNA,之后逆转录合成cDNA,以该cDNA为模板,特异性扩增斑马鱼咽齿特异性标记基因dlx2b、Eda信号通路相关基因eda及edar基因片段,用TA克隆试剂盒将这3个基因片段分别连接到pGEMT载体上,将对应质粒用聚合酶链反应（PCR）线性化,以PCR线性化做模板,选择相应的RNA聚合酶体外转录,合成dlx2b、eda及edar基因的反义mRNA探针。收集36、48、56、60、72、84 hpf的斑马鱼胚胎,运用全胚原位杂交技术检测eda及edar基因在斑马鱼咽齿发育部位的表达分布。比较原位杂交结果eda及edar表达区域与斑马鱼咽齿特异性标记基因dlx2b所指示咽齿部位的关系。结果 获得了dlx2b、eda及edar基因的反义mRNA探针。原位杂交结果显示,48~72 hpf时eda及edar在鳃弓牙齿相应部位可见强棕褐色阳性信号,与dlx2b所指示咽齿部位吻合。结论 Eda信号通路配体与受体在斑马鱼咽齿早期发育过程中即牙齿发生至形态发生阶段于咽齿部位特异性强表达,这一结果显示该信号通路可能参与斑马鱼咽齿早期发育的调控。     

Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段腮弓中的表达

目的：研究Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段腮弓中的表达。方法：利用RT-PCR技术直接克隆Pax9特异性基因片段,制作针对Pax9的基因探针,选取斑马鱼发育早期多个时段的胚胎进行整胚原位杂交。结果：成功克隆Pax9基因,合成针对Pax9的基因探针,发现Pax9基因在受精16h的斑马鱼胚胎中开始有特异性信号出现,还可以明显地看到腮弓上的Pax9基因特异性信号在24～72h发育过程中的迁徙过程。结论：初步了解了Pax9基因在斑马鱼早期发育阶段的表达情况。     

斑马鱼在牙齿发育研究中的应用

斑马鱼作为一种新的模式动物,在发育研究中有广泛使用.近年来,在牙齿发育研究中也有许多报告.本文对斑马鱼牙齿形态及斑马鱼发育的分子机制研究资料作一回顾.     

成年斑马鱼牙齿的扫描电镜观察

目的用扫描电镜观察研究成年斑马鱼牙齿的形态和超微结构并和人类的牙齿进行比较。方法以成年斑马鱼(鱼龄>3个月)为研究对象,在体视显微镜下,解剖成年斑马鱼腮弓,分离第五腮弓,去净软组织,常规扫描电镜标本制备,日立S-3000n扫描电子显微镜下观察。结果成年斑马鱼牙齿位于第五腮弓上,约11颗功能牙,外形呈锥形,没有牙根,类似人类牙齿的牙尖,也由类似人牙釉质和牙本质样的硬组织包绕其内的牙髓腔构成。斑马鱼牙齿的牙本质层结构疏松,其内有很多贯穿牙面至牙髓腔的孔道,类似人牙齿的牙本质小管,牙本质小管内可见牙本质细胞突,牙髓腔内也有牙髓样软组织结构。结论扫描电镜下,成年斑马鱼牙齿与人类牙齿具有高度相似性,能够模拟人类牙齿的形态和组织特征。斑马鱼作为研究牙发育的模式动物在组织形态上是具有有利条件的。     

视黄酸信号通路调控咽弓神经嵴影响斑马鱼牙齿发育的研究

目的研究视黄酸（RA）信号通路在斑马鱼颅神经嵴迁移至咽弓神经嵴对牙齿发育的影响。方法将野生型斑马鱼胚胎与转基因斑马鱼胚胎各分为3组,分别采用1×10^-7~6×10^-7 mol·L^-1梯度浓度的RA（RA处理组）、1×10^-7 mol·L^-1的4-二乙氨基苯甲醛（DEAB）（DEAB处理组）、与RA处理组相应浓度的二甲基亚砜（DMSO对照组）处理24 hpf胚胎9 h。制备dlx2a、barx1、dlx2b基因的反义探针,运用整胚原位杂交技术检测野生型斑马鱼48~72 hpf胚胎的dlx2a、dlx2b、barx1基因表达,荧光显微镜观察转基因斑马鱼4 dpf胚胎。结果获得3个基因的反义mRNA探针。与DMSO对照组相比,1×10^-7 mol·L^-1RA处理组barx1、dlx2a在咽弓神经嵴的表达明显增强,并有由咽弓神经嵴向后段咽弓牙齿萌出位点迁移的趋势,绿色荧光向周边咽弓扩散;4×10^-7 mol·L^-1 RA处理组胚胎致畸率和死亡率极高,3×10^-7 mol·L^-1 RA处理组1/3胚胎发育迟缓。DEAB处理组神经嵴发育不良,barx1、dlx2a表达降低,dlx2b在牙齿位点的表达有所延迟。结论 RA能够通过调控咽弓神经嵴发育过程,进而调控牙齿发育前体细胞,最终达到调控牙齿发育的过程。     

淫羊藿苷对斑马鱼牙齿钙磷沉积的影响

目的 研究淫羊藿苷在斑马鱼牙齿发育期间对其钙磷沉积的影响。方法 1月龄斑马鱼随机分为对照组和实验组,对照组常规饲养,实验组于饲养的水中加入淫羊藿苷液。45d后取斑马鱼的第五鳃弓,对其上的牙齿进行扫描电镜观察和微量元素能谱分析。结果 与对照组相比,实验组中牙齿冠1/3和中1/3的Ca含量显著升高,P含量显著降低,Ca/P比值显著升高。结论 淫羊藿苷对牙齿发育中的钙磷沉积有一定的影响。     

PITX2在牙齿早期发育中的作用

PITX2作为转录因子,在生物的早期发育中有很重要的作用.它与多个器官的发生发育都有着密切的联系,如心脏、血管、脑、肌肉、骨骼、眼睛等.而Pitx2对牙齿的影响则是通过Axenfeld-Rieger综合征发现的.本文就Pitx2与牙齿早期发育的某些相关基因之间相互作用进行综述.     

麦考酚酸对斑马鱼胚胎颅面部发育的影响

目的　研究麦考酚酸对斑马鱼胚胎的颅面部发育毒性。方法：对斑马鱼胚胎进行麦考酚酸加药,观察不同时期麦考酚酸对胚胎造成的颅面部发育畸形。胚胎发育至72小时,软骨染色观察颅面部软骨的发育状况。Q-PCR方法检测次黄嘌呤核苷酸脱氢酶（IMPDH）基因的表达水平。同时鸟苷酸加药,从表型和基因层面考察鸟苷酸对麦考酚酸造成畸形的挽救情况。结果：麦考酚酸可以造成斑马鱼胚胎严重的颅面部畸形,染色结果显示颅面部软骨发育延迟,形态异常。基因检测发现麦考酚酸能够明显下调impdh1b和impdh2的表达水平。鸟苷酸可以挽救麦考酚酸造成的胚胎畸形。结论：麦考酚酸通过下调IMPDH基因,抑制了IMPDH活性,从而造成了斑马鱼胚胎的颅面部发育畸形。     

细胞凋亡与bcl-2基因在颞颌关节发育中的作用

目的;本研究通过检测胎鼠及出血后早期颞颌关节发育中的细胞凋亡与ｂｃｌ－２基因表达的变化,探讨细胞凋亡与ｂｃｌ－２基因在颞颌关节发发育中的作用。方法：利用原位末端标记法及原位杂交检测ｍＲＮＡ技术,对胚胎及生后１周ＳＤ大鼠颞颌关节发育不同时期细胞凋亡及ｂｃｌ－２基因的表达情况进行观察。     

Oral wart associated with human papillomavirus type 2

More than 100 human papillomavirus (HPV) types have been identified to date. Of these, 24 types have been described as being associated with oral lesions. HPV-2 has been frequently associated with skin lesions, but the reports of oral lesions as features of mucosal infection are limited. A biopsy specimen of an oral wart on the right palate was taken from a 48-year-old man and examined for the presence of HPV The sections showed papillary growth of the epithelium with hyperkeratosis and parakeratosis, and koilocytotic changes of the cells located in the upper layers of the oral squamous cell epithelium. These histological features corresponded well to those of verruca vulgaris on the skin. Immunohistochemically, papillomavirus genus-specific capsid antigen was detected in most of the koilocytotic cells. In addition, Southern blot hybridization analysis revealed that the lesion harbored HPV-2 DNA. In situ hybridization with a biotinylated HPV-2 DNA probe clearly demonstrated viral DNA in the nuclei of squamous cells, which were located in a deeper layer of the epithelium than viral antigen-positive cells.     

大鼠磨牙被钻磨后牙髓中诱导型热休克蛋白70 mRNA的表达

目的：探讨热休克蛋白70（HSP70）下牙髓自我保护的关系,以及HSP70表达是否存在的阈值。方法：将SD大鼠分为浅磨组、深磨组和对照组,采用原位杂交方法观察大鼠磨牙受到钻磨刺激后4h,HSP70mRNA是否表达以及在大鼠牙髓中的杂交定位。结果：HSP70在浅磨组与正常对照组牙髓中呈阴性,在深磨组牙髓中呈阳性。分布于成牙本质细胞、牙髓成纤维细胞和血管平滑肌细胞及内皮细胞。结论：牙髓组织受外界刺激时,可诱导HSP70表达。诱导型HSP70的表达可能存在阈值。进一步研究制洞深度与HSP70表达的相关性,将对临床操作有重要指导意义。