伴放线放线杆菌诱导人外周血淋巴细胞活化及凋亡的体外研究

目的研究伴放线放线杆菌诱导人外周血淋巴细胞活化及凋亡的作用。方法选取10名全身及牙周组织健康受试者,分离外周血淋巴细胞,在有／无伴放线放线杆菌情况下培养0—96h,用荧光探针（AnnexinV—FITC、PI、CD69-TC7）进行标记,并进行流式细胞仪检测。结果全淋巴细胞加伴放线放线杆菌组AnnexinV＋／PI-细胞百分数在48h、72h、96h分别为13．42±2．88、22．74±2．18、46．92±4．28,全淋巴细胞组AnnexinV＋／PI-细胞百分数在48h、72h、96h分别为8．46±2．53、6．36±2．36、9．36±2．67,2组间存在明显差异（P〈0．01）。CD69加淋巴细胞加伴放线放线杆菌组和CD69＋淋巴细胞组AnnexinV＋／PI-细胞百分数除48h外的4个时间点上都无明显差异（P〉0．05）。CD69＋淋巴细胞加伴放线放线杆菌组AnnexinV＋／PI-细胞百分数在各个时间点上都明显高于全淋巴细胞加伴放线放线杆菌组（P〈0．01）。结论伴放线放线杆菌能够诱导人外周血淋巴细胞活化,并且能够通过活化促进其凋亡。     

伴放线共生放线杆菌表面相关物质的骨吸收活性研究

目的：通过对伴放线共生放线杆菌（Aa)表面相关物质（SAM）的提取，纯化，研究其潜在的骨吸收活性，以揭示SAM在牙周病变过程中的作用。方法：Aa国际标准菌株培养，SAM提取，过Sepharyl-S200层析柱和DEAE－Sephacel层析柱，所有的管用酚硫法测其碳水化合物含量，纯化后鉴定其骨吸收活性.结果：冻干的Aa(1.0g)产生0．1375g粗提物，通过Sepharyl-S200时出现单峰，通过DEAE－Sephacel出现两个峰，骨吸收实验证明SAM有骨吸收活性。结论：Aa的SAM在骨吸收方面具有极大潜能，提示SAM在牙周病骨损害上起到重要作用。     

不同组织来源单核/巨噬细胞对伴放线放线杆菌吞噬能力的比较研究

目的:比较血液单核细胞(monocytes,Mo)、肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)、腹腔巨噬细胞(peritoneal macrophage,PM)和肝脏枯否细胞(kuffer cells,KC)对伴放线放线杆菌(Actinobacillus actinomycetemcomitans,Aa)吞噬能力的差别。方法:3只健康新西兰兔,分离培养Mo、AM、PM和KC;荧光素标记Aa,以感染复数25∶1的比例感染细胞;流式细胞术检测0.5、1.0、1.5h时吞噬细菌的阳性细胞率和平均荧光强度,计算吞噬指数。结果:1.5h内,随着孵育时间增加,AM和PM对Aa吞噬能力逐渐升高,Mo和KC的吞噬能力在1h达到高峰;Mo、AM、PM和KC吞噬功能存在明显差异,孵育0.5h吞噬指数AM、PM>Mo、KC,1.0h时AM>PM>Mo、KC,1.5h时AM>PM>KC>Mo。结论:不同部位单核/巨噬细胞对Aa的吞噬能力不同,可能是造成牙周病对不同部位影响不同的重要原因。     

口腔粘膜异常增生上皮和鳞癌组织凋亡相关蛋白的表达研究

目的：探讨凋亡相关基因p53,Bcl-2和Bax在口腔鳞状细胞癌发展各阶段的表达及意义。方法：采用免疫组织化学SP法检测10例正常口腔粘膜上皮，48例异常增生上皮和42例鳞癌组织中p53,Bcl-2和Bax的表达。结果：正常粘膜上皮中p53,Bcl-2,Bax影响表达率分别为0％，20％和60％，异常增生上皮组中，相对于正常组，p53阳性率明显提高（P＜0．05），Bcl-2表达无明显改变（P＞0．05），Bax阳性率亦无改变（P＞0．05），但染色强度随异常增生程度增加而增加；鳞癌组p53阳性率进一步提高，Bcl-2表达明显增强，Bax表达随组织学分级增加而下降，相关性分析显示，在异常组p53和Bax表达呈负相关，鳞癌组p53和Bcl-2表达显示正相关。结论：癌前病变中，P53突变导致异常增生上皮积累，鳞癌组织中，p53和抑凋亡基因Bcl-2作用加强，促凋亡因子Bax作用减弱，癌细胞凋亡受限，侵袭性增强，凋亡基因发挥作用有阶段性，它们既相互独立又相互协同，相互制约。     

伴放线放线杆菌形态变化对菌体表面疏水性影响的研究

目的研究伴放线放线杆菌形态变化对菌体表面疏水性的影响。方法采用碳氢化合物法检测伴放线放线杆菌粗糙型和光滑型的菌体表面疏水性,观察同一菌株不同表型疏水性的变化。结果伴放线放线杆菌粗糙型和光滑型菌体表面具有疏水性。14株粗糙型伴放线放线杆菌菌体表面疏水率高于4株光滑型,差异有统计学意义（P〈0．05）。4株同源的粗糙型与其光滑型转变株比较得出除1株外,其余3株菌两种表型的菌体表面疏水率差异无统计学意义（P〉0．05）。结论伴放线放线杆菌形态变化可引起菌体表面疏水性的改变,粗糙型转变为光滑型后菌体表面疏水性减弱。     

放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙周膜成纤维细胞在牙根片上附着的影响

目的：观察放线共生放线杆菌表面相关物质对人牙周膜成纤维细胞在牙根片上附着的影响。方法：应用细胞计数法和扫描电镜观察法。结果：100mg/L组对人牙周膜成纤维细胞在根面附着有明显抑制作用,表现为正常牙根片上附着细胞数明显少于对照组（P＜0．05）;扫描电镜显示细胞生长数量减少,细胞突起伸展不充分。结论：此物质可抑制人牙周膜成纤维细胞在牙根面上的附着。     

IL-10对Pg-LPS刺激下兔枯否氏细胞凋亡的影响

目的:探讨IL-10对Pg-LPS刺激下兔枯否氏细胞凋亡的影响。方法:新西兰兔3只,收集枯否氏细胞(Kupffer cell,KC),分为空白对照组:RPMI1640+KC,Pg-LPS组:1mg/LPg-LPS+KC,IL-10+Pg-LPS组:0.1mg/L IL-10+1mg/L Pg-LPS+KC,刺激24h后,荧光定量PCR法检测凋亡相关基因Caspase-3、Fas、p53的表达量。结果:1mg/L Pg-LPS可促进兔KC的凋亡,Caspase-3、Fas、p53表达量增多(P<0.05);IL-10干预处理可减少兔KC的凋亡,抑制Caspase-3、Fas的表达(P<0.05),但对p53的表达无明显作用。结论:Pg-LPS可通过外源性/内源性凋亡途径导致兔KC凋亡,而IL-10可能主要通过抑制外源性死亡受体途径从而达到抑制KC凋亡的作用。     

免疫低下豚鼠伴放线放线杆菌和牙龈卟啉单胞菌感染特征

目的　研究免疫低下对青少年牙周炎(JP)特异性病原菌感染的影响。方法　二次60Co全身照射制备免疫低下豚鼠及正常豚鼠各36只,随机分组,下前牙龈沟接种伴放线放线杆菌(Aa)和/或牙龈卟啉单胞菌(Pg),于2、3、 6周分批处死,进行组织病理学及破骨细胞计数对比研究。结果　免疫低下Aa、Pg、Aa+Pg组2、3周时牙周破坏明显,重于免疫正常组,破骨细胞计数高于免疫正常组,有统计学差异(P<0·05)。结论　免疫低下加重Aa、Pg对牙周组织破坏,机体免疫状态是JP发生发展的重要环节。     

伴放线放线杆菌刺激淋巴细胞分化效应T细胞的研究

目的：探讨Aa刺激淋巴细胞活化后效应T细胞的表达及意义。方法：选取10名全身及牙周组织健康受试者，抽取外周血，分离外周血单核细胞(PBMC)，体外刺激PBMC：实验组加入Aa冻干产物(浓度为25μg／mL)；阳性对照组加入刺激抗原PMA(25μg／mL) ionomycin(1μg／mL)；阴性对照组不加任何刺激抗原。流式细胞仪检测T细胞内细胞因子IL-2、IFN-γ、IL-4、IL-10的表达。结果：Aa刺激淋巴细胞后上述四种细胞因子呈低水平表达；仅有2％左右的T细胞可分化出效应T细胞；Aa诱导IL-4、IL-10表达的能力相对较强。结论：Aa刺激可造成T淋巴细胞免疫缺陷，导致IL-2、IFN-γ等功能障碍，激发TH2细胞活性，进而使机体免疫功能严重受损，导致牙周组织的继发性损伤。     

牙髓卟啉单胞菌脂多糖诱导小鼠成骨细胞表达白细胞介素-23

目的：探讨牙髓卟啉单胞菌（P．e）脂多糖（LPS）对小鼠成骨细胞 IL-23mRNA 和蛋白表达的影响,以及磷脂酰肌醇-3激酶（PI3K）信号通路是否参与了该过程。方法：采用 real-time PCR 和 Western blot 法检测 P．e LPS 诱导 MC3T3-E1细胞表达IL-23mRNA 和蛋白的情况,以及用 PI3K 信号通路抑制剂 LY294002预处理细胞后,IL-23mRNA 和蛋白表达的变化。结果：P．e LPS 刺激 MC3T3-E1细胞后,IL-23mRNA 的表达增加具有浓度依赖性和时间依赖性（P ＜0．05）,IL-23蛋白的表达增加具有时间依赖性（P ＜0．05）;LY294002预处理细胞后,P．e LPS 诱导的 IL-23mRNA 和蛋白的表达均显著降低（P ＜0．05）。结论：P．e LPS 能诱导小鼠成骨细胞表达 IL-23mRNA 和蛋白,PI3K 信号通路可能参与了此过程。     

核因子-κB/p65 siRNA介导的舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡及相关分子机制

目的：研究下调核因子κB（nuclear factor-kappa B,NF-κB）/p65基因的表达对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞凋亡的影响,并探讨Tca8113细胞凋亡可能的分子机制。方法：利用脂质体2000将终浓度为100nmol/L的p65 siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,通过RT-PCR检测0、24、48和72hp65 mRNA的表达,并通过流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化,通过Caspase-Glo○R-3/7,-8和-9检测试剂盒分析caspase-3/9活性,用Western blotting技术检测p65、bcl-2和bax蛋白表达。结果：Tca8113细胞转染p65siRNA后,在48hp65 mRNA的相对表达量为0.181±0.028,显著低于未处理组0.595±0.038和对照siRNA组0.613±0.067（P〈0.05）。流式细胞术结果显示,p65 siRNA能促使Tca8113细胞凋亡,其早期凋亡比率为（23.16±1.72）%,显著高于未处理组和对照siRNA组（P〈0.01）。转染48h后,p65和bcl-2蛋白的相对表达水平明显下调,而促凋亡蛋白bax的表达显著上升,并伴随着caspase-3/9活性的显著上升。结论：NF-κB信号途径中的p65亚基可能在舌鳞状细胞癌凋亡中发挥重要作用,该研究有望为舌鳞状细胞癌的分子靶向治疗提供理论依据。     

Livin、caspase-3在唾液腺腺样囊性癌中的表达及意义

目的：探讨凋亡蛋白抑制因子livin和半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶caspase-3在人唾液腺腺样囊性癌组织中的表达和意义,并分析livin与caspase-3介导的细胞凋亡的关系。方法：利用免疫组织化学SP法检测livin与caspase-3在35例唾液腺腺样囊性癌组织和10例正常唾液腺组织中的表达情况。采用HMIAS-2000高清晰度彩色医学图文分析系统测定其平均光密度值。应用SPSS11.5软件包对结果进行统计学分析。结果：Livin在腺样囊性癌中的表达显著高于正常唾液腺组织,而caspase-3在正常唾液腺组织的表达显著高于腺样囊性癌（P〈0.01）;其表达与肿瘤的病理学类型、临床分期和转移显著相关（P〈0.05）,与患者的性别、发病年龄、肿瘤的部位和大小无关（P〈0.05）;Livin和caspase-3在腺样囊性癌中的表达呈显著负相关。结论：Livin和caspase-3的异常表达,可能在唾液腺腺样囊性癌的发生、发展及转移中发挥重要作用。     

束缚应激对Pg-LPS诱导的大鼠腹腔 巨噬细胞释放细胞因子的影响

目的：检测束缚应激对牙龈卟啉菌内毒素（路LPS）诱导的大鼠腹腔巨噬细胞释放IL-IB、IL-2、IL-6、IL-10等细胞因子的影响，初步探讨应激影响牙周疾病的机制。方法：采用束缚应激方式，将大鼠随机分为正常对照组、应激组，于应激结束时处死，常规收集腹腔液。巨噬细胞于贴壁纯化后用RPMI-1640培养液，RPMI-1640培养液＋1μg／mLPg-LPS继续培养。于24h后分别收集上清，用Luminexl00检测仪测定上清液中IL-IB、IL-2、IL-6、IL-10等的水平。结果：①12d应激组大鼠腹腔巨噬细胞数量较无应激组及1d应激组显著下降。②1天应激组各细胞因子水平与无应激组比较均无显著差异。12d应激组的IL-18水平比无应激组显著增加（P〈0．05）、IL-6水平比无应激组显著降低（P〈0．05）；IL-2水平比1天应激组显著降低（P〈0．05）。IL-10在各组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：慢性束缚应激可引起大鼠腹腔巨噬细胞总量减少；慢性束缚应激可改变应激宿主对牙龈卟啉单胞菌感染的反应，这可能是慢性应激引起牙周疾病的机制之一。     

牙本质非胶原蛋白对人牙髓干细胞增殖活性及矿化能力的影响

目的：明确牙本质非胶原蛋白（dentin non—collagenous proteins,dNCPs）对人牙髓干细胞（human dental pulp stemcells,hDPSCs）增殖及矿化能力的影响。方法：通过细胞活性噻唑蓝（MTT）比色法、碱性磷酸酶（ALP）活性检测、茜素红钙化结节染色和氯代十六烷基吡啶定量分析钙离子浓度,检测10¨g／mLdNCPs对hDPSCs增殖和矿化能力的影响。结果：dNCPs分别诱导1、3、5、7、9d,人牙髓干细胞增殖活性与对照组相比无显著性差异（P〉0．05）;诱导3、5、7d时,人牙髓干细胞ALP活性明显上调,与对照组相比有统计学差异（P〈0．01）;诱导2周后,茜素红染色显示10μg／mLdNCPs组出现较大钙化结节,定量分析显示,其形成钙化结节的能力明显高于对照组（P〈0．001）。结论：10μ∥mLdNCPs可明显促进人牙髓干细胞的矿化能力,对其增殖活性的影响则不明显。     

重组人乳铁蛋白对口腔癌细胞周期及周期因子表达影响的实验研究

目的：探讨重组人乳铁蛋白（Recombinate human lactoferrin,rhLF）对口腔癌Tea8113细胞周期及周期调控因子cyclinD1、p19和p27基因表达的影响。方法：分别采用流式细胞仪和RT—PCR方法分析细胞周期及周期调控因子cyclinD1,p19和p27的mRNA水平。结果：50μg／mL、100gg／mLrhLF作用Tca8113细胞后,细胞增殖减慢,G0／G1期细胞明显增多,与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）;Tca8113细胞的cyclinDlmRNA表达下降显著,50μg／mL和25μg／mL rhLF实验组与对照组相比差异具有统计学意义（P〈0．05）;p19和p27mRNA表达水平的变化不明显。结论：rhLF通过下调口腔癌细胞周期蛋白cyclinD1的表达来调控周期阻滞,为乳铁蛋白用于肿瘤的预防及治疗提供实验基础。     

婴幼儿血管瘤中livin和caspase-3表达及其与细胞凋亡的关系

目的:研究凋亡调控基因livin和caspase-3在婴幼儿血管瘤组织中的表达及与细胞凋亡的关系,探讨其变化对血管瘤病程演化的影响。方法:采用免疫组织化学SABC法检测血管瘤组织标本中livin和caspase-3的表达,同时采用末端转移酶介导的原位缺口末端标记染色(TUNEL)技术检测血管瘤细胞的凋亡情况。应用SPSS17.O软件包对结果进行统计学分析。结果:Caspase-3阳性表达率在增殖期和消退期血管瘤分别为42.31%和81.82%,2组之间差异显著(P<0.01);Caspase-3在血管畸形和正常皮肤组织不表达或低表达。Livin阳性表达率在增殖期和消退期血管瘤分别为88.46%和31.82%,2组之间差异显著(P<0.01);Livin在血管畸形和正常皮肤组织不表达或低表达。Livin与caspase-3的表达呈负相关(r=-0.539,P<0.01)。血管瘤消退期细胞凋亡显著高于增殖期,在血管瘤内皮细胞中,Livin与凋亡呈负相关(r=-0.640,P=0.004),而caspase-3与凋亡呈正相关(r=0.471,P=0.042)。结论:Livin和caspase-3与血管瘤的发生、发展密切相关。     

Ki-67、EGFR、p53及RARβ在口腔鳞癌化疗前后的变化及临床意义评价

目的：通过检测PF方案（DDP＋5-Fu）新辅助化疗前后口腔鳞癌细胞中Ki-67、EGFR、p53及RARβ表达状况,评价新辅助化疗PF方案对口腔鳞癌的疗效并探讨其作用机理。方法：用免疫组织化学方法检测PF方案新辅助化疗前后20例口腔鳞癌细胞中Ki-67、EGFR、p53及RARβ的表达状况。结果：新辅助化疗前后口腔鳞癌细胞中Ki-67、EGFR、p53及RARβ表达变化显著,Ki-67、EGFR、p53分别由化疗前的75.0%、45.0%、40.0%降到化疗后的35.0%、15.0%、10.0%;RARβ由化疗前25.0%升至化疗后60.0%,P〈0.05。EGFR、RARβ在新辅助化疗前后两组等级资料比较中差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：化疗后,口腔鳞癌细胞中Ki-67表达明显减少,表明PF新辅助化疗能有效抑制口腔鳞癌细胞的增殖活性;下调EGFR、抑制p53基因突变及上调RARβ表达是其作用的有效途径。     

糖基化终产物对人牙龈成纤维细胞2种基质金属蛋白酶表达的影响

目的研究糖基化终产物(advanced glycation end products,AGEs)对人牙龈成纤维细胞(human gingivalfibroblasts,HGF)表达基质金属蛋白酶-1(matrix matelloproteinase-1,MMP-1)和基质金属蛋白酶-8(matrix matallo-proteinase-8,MMP-8)的影响,探讨糖尿病加速牙周炎发展的可能机制。方法将培养的HGF随机分成6组:空白对照组只加入培养液;阴性对照组仅加入含50μg/mL人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)的培养液;4个含AGE-HSA的实验组分别加入含0.5、5、50、100μg/mL AGE-HSA的培养液。培养24、48、72 h后,分别应用酶联免疫吸附测定法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)和实时定量聚合酶链反应(real-time quantitativepolymerase chain reaction,QPCR)检测细胞MMP-1、MMP-8的蛋白和mRNA表达。结果 100μg/mL AGE-HSA组培养24、48和72 h后,MMP-1水平明显高于阴性对照组、空白对照组及0.5μg/mL AGE-HSA组,差异具有统计学意义(P<0.05)。各浓度AGE-HSA组MMP-1 mRNA水平均显著高于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。各浓度AGE-HSA组MMP-8水平与阴性对照组相比差异均无统计学意义(P>0.05),MMP-8 mRNA表达均为阴性。结论 AGEs可能通过促进HGF合成MMP-1,介导胶原降解,从而加重糖尿病患者的牙周组织破坏,尚不能说AGEs影响MMP-8的表达。     

普萘洛尔治疗婴幼儿血管瘤前后EGFL7的表达变化

目的：研究口服普萘洛尔治疗增殖期婴幼儿血管瘤的临床疗效和治疗过程中表皮生长因子样结构域7（EGFlike domain 7,EGFL7）在血清、尿液中表达的变化。方法：采用ELISA法检测30例患者服药前以及服药后4、12周血清及尿液中EGFL7的水平,分析其与疗效的关系。采用SPSS 17.0软件包对实验数据进行Ridit检验和F检验。结果：2例效果为优（17%）,11例为好（46%）,14例为良（29%）,3例效果差（9%）。治疗前血清EGFL7水平最高（20.62±12.011）μg/mL,服药后4周（13.488±9.826）μg/mL和服药后12周（3.811±2.154）μg/mL,EGFL7水平呈逐渐下降趋势。治疗前尿液EGFL7水平最高（13.373±0.621）μg/mL,服药后4周（9.584±0.659）μg/mL和服药后12周（2.358±0.597）μg/mL,EGFL7水平呈逐渐下降趋势。血清中EGFL7治疗前与治疗后12周比较,有显著差异（P〈0.05）;治疗前与治疗后4周比较,无显著差异（P〉0.05）;治疗后4周与12周比较,无显著差异（P〉0.05）。尿液中EGFL7在治疗前,治疗后4周、12周两两比较,均有显著差异（P〈0.05）。结论：口服普萘洛尔治疗增殖期婴幼儿血管瘤有效,可能是与降低患者血清及尿液EGFL7分子水平有关。     

α亚族趋化因子受体3在人舌鳞癌细胞株的表达及其配体干扰素诱导蛋白-10对CAL-27细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨α亚族趋化因子受体3(CXC-chemokine receptor 3,CXCR3)在不同人舌鳞癌细胞株的表达以及其配体干扰素诱导蛋白-10(interferon induced protein 10,IP-10)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响。方法采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)IP-10的相应受体CXCR3的表达进行检测。CAL-27细胞被分为3个实验组和1个对照组,3个实验组根据IP-10的刺激浓度,分为10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组,对照组不予刺激。12 h、24 h、48 h时检测4组细胞的增殖;24 h时用流式细胞仪检测细胞的凋亡。结果 CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CXCR3在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色。和对照组相比,12 h、24 h时,3种浓度的IP-10均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);在48 h时,只有40 ng/mL的IP-10能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),10 ng/mL、20 ng/mL的IP-10对CAL-27细胞的增殖无促进作用(P>0.05)。在24 h时,对照组、10 ng/mL组、20 ng/mL组和40 ng/mL组的细胞凋亡率分别为(0.053 3±0.472 6)%、(3.236 7±0.940 0)%、(4.516 7±1.115 4)%和(3.363 3±0.571 2)%,3种浓度IP-10均能够促进CAL-27细胞的凋亡(P<0.05),但3个实验组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论CXCR3在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;IP-10既能促进CAL-27细胞的增殖,又能促进其凋亡。随着时间的延长,IP-10的促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由IP-10的促凋亡作用的逐步发挥所引起的。