靶向STAT5的siRNA诱导人肝癌SMMC-7721细胞凋亡

目的 采用RNA干扰技术阻断STAT5基因的表达,观察其对人肝癌SMMC-7721凋亡的影响.方法 构建3种靶向STAT5的小干扰RNA(siRNA)真核表达载体,采用LipofectamineTM2000转染肝癌细胞SMMC-7721;分别采用半定量RT-PCR、Western blot技术检测转染前后SMMC-7721细胞STAT5 mRNA和蛋白质表达的变化;采用透射电镜技术观察细胞形态变化;流式细胞术检测细胞凋亡率.结果 3条靶向STATS的序列特异性的siRNA可以有效地抑制SMMC-7721细胞STATS mRNA和蛋白质表达,STAT5 mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,STAT5蛋白表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%;转染靶向STAT5的siRNA真核表达载体48 h后出现凋亡细胞的典型形态学变化,并诱导25.61%的SMMC-7721细胞发生凋亡.结论 靶向STAT5的siRNA真核表达载体可以有效、特异地阻断SMMC-7721细胞STAT5基因的表达,并能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,STAT5 siRNA在人肝癌的基因治疗中可能具有潜在的应用价值.     

槲寄生生物碱通过P53途径抑制肝癌细胞株SMMC-7721的研究

目的：探讨槲寄生生物碱对肝癌细胞株SMMC-7721 P53基因表达的影响。方法：MTT法测定槲寄生生物碱对人肝癌细胞株SMMC-7721增殖的抑制作用;半定量RT—PCR法测定抑癌基因P53 mRNA表达变化。结果：槲寄生生物碱作用后SMMC-7721细胞出现显著生长抑制作用,且呈剂量和时间依赖性。RT—PCR检测SMMC-7721细胞中P53 mRNA表达的相对强度,发现0.100mg／mL的槲寄生生物碱作用于SMMC-7721细胞24小时后,P53 mRNA表达的相对强度增高（P〈0．01）。结论：擗寄生生物碱对抑癌基因P53表达的影响可能是其抑制肿瘤生长的分子基础。     

蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响

目的 研究蟾酥注射液对人肝癌SMMC-7721细胞增殖与凋亡的影响.方法 CCK-8法检测SMMC-7721细胞活力;DCFH-DA染色法检测SMMC-7721细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平;荧光染色法观察SMMC-7721细胞线粒体膜电位变化;流式细胞术检测SMMC-7721...     

HCV核心蛋白对人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响

目的:观察HCV核心蛋白对低侵袭性人肝癌细胞系SMMC-7721增殖的影响。方法:将HCV核心蛋白的原核表达质粒pcDNA3.0-C-EGFP转染SMMC-7721细胞,以空质粒pcDNA3.0(-)转染的细胞作对照。分别采用RT-PCR、Western blot和ELISA法检测转染细胞HCV核心蛋白mRNA、蛋白及培养上清中蛋白的表达水平;进行纤维连接蛋白黏附实验、侵袭实验及运动实验,MTT法观察细胞增殖情况。结果:重组质粒pcDNA3.0-C-EGFP转染的SMMC-7721细胞HCV核心蛋白mRNA、蛋白及培养上清中蛋白的表达水平,细胞黏附率,侵袭实验及运动实验穿膜细胞数均高于对照(t=8.141、5.762、19.931、2.961、4.112和4.213,P均<0.05)。pcDNA3.0-C-EGFP转染的SMMC-7721细胞增殖率也较对照明显增加(P<0.05)。结论:HCV核心蛋白外源基因可促进SMMC-7721细胞系的增殖。     

青蒿素联合琥珀酸亚铁对人肝癌细胞SMMC-7721选择性抑制作用的实验研究

目的研究青蒿素联合琥珀酸亚铁对人肝癌细胞SMMC-7721的选择性抑制作用。方法将人肝癌细胞株SMMC-7721接种于小鼠腰部皮下,制成小鼠荷瘤动物模型,分别用青蒿素、琥珀酸亚铁、青蒿素＋琥珀酸亚铁、生理盐水（对照组）对荷瘤小鼠进行干预,观察小鼠肿瘤体积的变化;TUNEL法检查肿瘤细胞的凋亡,计算抑瘤率和凋亡指数。结果青蒿素和青蒿素＋琥珀酸亚铁与生理盐水相比,明显抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长（P〈0.05）,其抑瘤率分别为33.21%和55.04%,2组间存在明显差异（P〈0.05）。青蒿素联合琥珀酸亚铁表现出明显的促凋亡作用,凋亡指数为31.35%,与对照组相比差异有统计学意义（P〈0.05）。结论青蒿素和青蒿素联合琥珀酸亚铁对人肝癌细胞SMMC-7721均有肿瘤抑制作用和促进肿瘤细胞凋亡的作用,但是联合用药作用更强。     

沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体内外肿瘤血管的影响

目的 观察沙利度胺对人肝癌细胞株SMMC-7721体内外肿瘤血管的影响.方法 体外实验:将不同浓度的沙利度胺作用于人肝癌细胞株SMMC-7721,采用ELISA方法测定细胞株VEGF分泌量变化.体内实验:首先建立肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤小鼠模型,应用免疫组化测定瘤体组织中微血管密度,ELISA法测定小鼠外周血VEGF表达.结果 体外实验中随着沙利度胺药物浓度增加,VEGF含量逐渐下降:沙利度胺浓度从0 μg/ml升至400 μg/ml,VEGF值由(83.21±8.32)pg/ml降至(33.59±10.98)pg/ml;体内实验:成功建立了肝癌细胞株SMMC-7721的荷瘤小鼠模型,沙利度胺组小鼠外周血VEGF含量为(32.17±12.11)pg/ml,对照组为(69.35±17.56)pg/ml,在沙利度胺瘤体中微血管密度值为13.17±3.15,对照组为18.34±2.25,均有显著性差异(P<0.01).结论 沙利度胺能抑制SMMC-7721细胞株及荷瘤鼠肿瘤血管的形成.     

重组人内皮抑素对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响

目的 初步研究Wnt通路在重组人血管内皮抑素(rh-Endostatin,ES)诱导人肝癌细胞SMMC-7721增殖、凋亡过程中的作用及可能机制.方法 分别以50、100、200、400 μg/ml ES体外处理人肝癌细胞株SMMC-7721,利用MTT比色法检测不同浓度、时间ES作用下的细胞增殖状态;利用流式细胞仪检...     

抑制肝癌SMMC-7721细胞TWIST基因表达对细胞侵袭能力的影响

目的:探讨抑制肝癌SMMC-7721细胞中TWIST基因表达对其侵袭能力的影响。方法:将靶向TWIST基因的siRNA序列和阴性对照siRNA序列转染入人肝癌SMMC-7721细胞,同时以未转染细胞作空白对照。于转染后48h,采用半定量RT-PCR和Western blot法检测各组细胞TWIST、E-cadherin mRNA和蛋白的表达,Boyden侵袭小室检测细胞体外侵袭能力的变化。结果:3组TWIST、E-cadherin mRNA和蛋白表达,以及穿膜细胞数差异有统计学意义(F=32.023、38.732和24.034、49.083、44.387,P<0.001);TWIST siRNA组TWIST mRNA和蛋白的表达低于空白和阴性对照组,E-cadherin mRNA和蛋白的表达高于空白和阴性对照组,TWIST siRNA组穿膜细胞数较空白对照组和阴性对照组下降(P<0.05)。结论:抑制肝癌SMMC-7721细胞TWIST基因表达可以抑制肝癌细胞上皮间质转化的发生,同时可有效降低肝癌细胞的侵袭转移能力。     

槲寄生碱对人肝癌细胞SMMC-7721生长抑制作用的研究

目的:研究槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用.方法:取对数生长期的人肝癌SMMC-7721细胞接种96孔板,待细胞生长良好后加入含不同浓度槲寄生碱培养液,取3个时间点(作用24h、48h、72h)采用MTT比色法观察槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长的抑制作用,抑制率(%)=(1-实验组A值/对照孔A值)×100%.结果:0.1mg/mL和0.2mg/mL浓度组在24h、48h、72h均表现出抑制SMMC-7721细胞生长作用,且作用强于5-Fu.0.05mg/mL组在3个时间点也表现出抑制SMMC-7721细胞生长作用,但作用弱于5-Fu.0.025mg/mL组在作用48h后才表现出对SMMC-7721细胞生长抑制作用.结论:槲寄生碱对人肝癌SMMC-7721细胞生长有显著的抑制作用,且呈剂量和时间依赖方式.     

橙皮素衍生物对肝癌细胞SMMC-7721的促凋亡作用

目的 以橙皮素为原型,合成了新型化合物HY-12,研究其体外对SMMC-7721细胞的促凋亡作用及机制.方法 在3个时间点(24、48、72 h)采用 MTT 比色法观察不同浓度HY-12对肝癌细胞、肝细胞增殖的影响,计算半数抑制率(IC50).根据结果选取了24 h,12.5×10-6,25×10-6,50×10-6 mol/L 3个浓度进行下述实验.通过Annexin V/PI双染,流式细胞仪检测细胞凋亡率;制备细胞爬片, Hoechst 33342染色,在荧光倒置显微镜下观察细胞凋亡的形态学改变;采用Western blot 法检测细胞凋亡相关因子Bcl-2、Bax蛋白水平的表达情况.结果 ① MTT法显示在对肝细胞活性无显著影响的前提下,HY-12在体外可抑制SMMC-7721细胞的增殖,且具有剂量-时间依赖性;② 流式细胞仪检测显示HY-12作用后,SMMC-7721细胞凋亡率增加,且呈浓度依赖性趋势;③ 经Hoechst 33342染色,药物处理后细胞核皱缩断裂呈现亮蓝色新月状;④ Western blot 结果显示药物处理可以使Bax蛋白表达上调,相反地Bcl-2蛋白表达下调.结论 橙皮素衍生物HY-12有明显抑制肝癌细胞SMMC-7721增殖作用.其机制可能是通过调节Bcl-2、Bax表达以诱导细胞凋亡.HY-12可能成为治疗肝癌的有效化疗药物.     

阿司匹林对SMMC-7721人肝癌细胞增殖的影响

目的:探讨阿司匹林对肝癌细胞株SMMC-7721体外增殖的影响。方法:SMMC-7721细胞体外培养,阿司匹林处理细胞,倒置显微镜观察细胞形态学改变,MTT法检测细胞增殖程度,Tunel法检测细胞凋亡指数。结果:不同浓度的阿司匹林能明显抑制细胞增殖,且抑制程度呈现剂量和时间依赖关系。细胞凋亡指数也随阿司匹林浓度的增加而增加。结论:阿司匹林对SMMC-7721的增殖具有抑制作用,抑制程度与阿司匹林的浓度和作用时间呈正相关,其作用机制可能是通过诱导细胞凋亡来抑制细胞的增殖。     

热疗对SMMC-7721肝癌细胞形态、增殖、凋亡的影响

目的探讨热疗对SMMC-7721肝癌细胞的影响。方法将SMMC-7721肝癌细胞置恒温循环水浴锅中(42.5±0.5)℃孵育1h,然后放入37℃、5%CO2的培养箱中继续培养,分别于热处理后0、6、12、24h采用倒置显微镜(LM×400)观察细胞形态变化,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,予Annexin V/PI染色后用流式细胞仪检测细胞凋亡,予366EC和FITC-羊抗鼠IgG处理细胞后用流式细胞仪检测细胞DR5表达,用Fluo-3/AM负载细胞检测胞内Ca2+浓度的变化。结果热疗可导致肿瘤细胞形态改变,表现为细胞变小,变圆,脱落,出现空泡;热疗可抑制细胞增殖,细胞热疗后0、6、12、24h细胞抑制率分别为22.18%、26.76%、31.30%、36.62%。热疗后0h细胞凋亡率为15.00%,其中早期凋亡率为2.00%,晚期凋亡率为13.00%;热疗后6h细胞凋亡率为65.45%,其中早期凋亡率为43.23%,晚期凋亡率为22.22%;热疗后12h细胞凋亡率为12.32%,其中早期凋亡率为4.60%,晚期凋亡率为7.72%;热疗后24h细胞凋亡率为22.58%,其中早期凋亡率为7.15%,...     

人端粒酶逆转录酶启动子介导的E1A和IL-24表达及其对肝癌细胞生长的抑制作用

目的构建人端粒酶逆转录酶（hTERT）启动子介导的E1A和IL-24双基因靶向腺病毒载体,获得Ad-h-E1A-IL-24靶向重组病毒子,并探索其体外抑瘤作用。方法运用PCR扩增MCF-7乳腺癌细胞的DNA,XbaⅠ和HindⅢ酶切获得280 bp hTERT启动子,插入空载体构建成pTrack-hTERT;运用PCR及HindⅢ和XhoⅠ酶切获得E1A,与pTrack-hTERT构成pAdTrack-hTERT-E1A;运用PCR及NotⅠ和SalⅠ酶切获得IL-24,插入pTrack-PP-IRES;XbaⅠ和XhoⅠ酶切获得hTERT-E1A,与pTrack-PP-IL-24-IRES形成pTrack-hTERT-E1A-PP-IL-24-IRES,同源重组、包装和扩增获得Ad-h-E1A-IL-24重组靶向病毒子。用25 MOI重组靶向腺病毒感染SMMC-7721肝癌细胞,MTT法测定Ad-h-E1A-IL-24的细胞生长抑制作用。结果成功构建pTrack-hTERT-E1A-PP-IL-24-IRES,并获得Ad-h-E1A-IL-24重组病毒子。与非靶向双基因比较,Ad-h-E1A-IL-24组可明显抑制肿瘤细胞生长（P〈0.05或0.01）。结论Ad-h-E1A-IL-24靶向腺病毒载体的体外抑瘤作用优于非靶向双基因载体。     

重组人BMP-2对人肝癌SSMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响

目的观察重组人骨形成蛋白2(rhBMP-2)对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭能力的影响。方法以人肝癌SMMC-7721细胞株为研究对象,取对数期生长的SMMC-7721细胞随机分为4组:rhBMP-2200、400、600μg.L-1组和对照组。rhBMP-2200、400、600μg.L-1组分别加入rhBMP-2200、400、600μg.L-1,对照组加入2mLRPMI1640培养基。分别于12、24、48h后,用细胞划痕法检测细胞体外迁移能力,Transwell小室测定法检测细胞体外侵袭能力。结果rhBMP-2200、400、600μg.L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞迁移率与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),且rhBMP-2200、400、600μg.L-1组各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。rhBMP-2200、400、600μg.L-1组12、24、48hSMMC-7721细胞穿膜数与对照组比较差异均有统计学意义(均P<0.05),rhBMP-2200、400、600μg.L-1组各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。rhBMP-2200、400...     

微波和毫米波抑制人肝癌细胞SMMC-7721生长的研究

目的 探讨微波和毫米波联合应用对于人肝癌细胞SMMC-7721的生长抑制作用。方法实验分为对照组、微波组、毫米波组及微波联合毫米波组，应用MTT比色法检测各组的OD值，计算其抑制率。结果微波或毫米波对人肝癌细胞SMMC-7721均有生长抑制作用，二者联合应用抑制作用更强。结论微波联合毫米波对于人肝癌细胞SMMC-7721有明显的协同抑制效应，这些结果将为临床上肝癌等肿瘤的辅助治疗提供一定的实验基础。     

声化学疗法对SMMC-7721肝癌细胞的杀伤作用初探

[目的]观察体外超声波是否可激活光敏剂血卟啉,对体外培养的肝癌细胞发挥抑制增殖及杀伤作用.[方法]将体外培养的SMMC-7721肝癌细胞株随机分为单独血卟啉、单独超声、超声加血卟啉及空白对照四组,分别给予相应处理,观察细胞变化.[结果]超声加血卟啉组肝癌细胞于7 d后全部溶解死亡,单独血卟啉组、单独超声组肝癌细胞仍呈增殖状态,与空白对照组差异无显著性.[结论]运用超声波可以激活光敏剂血卟啉,发挥对肝癌细胞的抑制和杀伤作用.     

多西他赛对人肝癌放疗增敏及其作用机制探讨

目的 观察不同浓度多西他赛(Docetaxel)在体外对人肝癌细胞的放射增敏作用及其机制。方法 用0．125、0．25、0．5nmol／L多西他赛作用人SMMC-7721肝癌细胞株24h和0．125、0．25nmol／L多西他赛作用48h后分别给予0、2,4、6、8、10Gy剂量照射，单纯照射组未给予多西他赛处理而接受同等剂量照射，用集落形成实验分析放射增敏效应。另外用流式细胞术检测上述不同浓度多西他赛分别作用不同时间SMMC-7721细胞内活性氧(reactive oxygen species，ROS)和用比色法测定谷胱甘肽(glutathione，GSH)含量的变化。结果 用0．125、0．25、0．5nmol／L多西他赛作用24h和0．125、0．25nmol／L多西他赛作用48h均能观察到各自的放射增敏作用，其放射增敏比(SERDq)分别为1．12、1．19、1．43和1．37、1．48。同时观察到上述剂量多西他赛作用不同时间导致SMMC-7721细胞内ROS产生增多和GSH降低。结论 上述剂量多西他赛在体外对SMMC-7721肝癌细胞具有放射增敏作用，其增敏机制与用药后细胞内ROS产生增多和GSH降低有关。