rhG—CSF增加实验性脑缺血周围区的突触囊泡蛋白的表达

目的:研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死周围区的突触囊泡蛋白(synapstophin,SYN)表达的影响。方法:用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,观察rhG-CSF对神经功能缺损评分的影响;应用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法和免疫组织化学方法分别测定梗死周围区SYN的mRNA和蛋白表达水平的变化。结果:与对照组相比,治疗组的神经功能缺损评分较低,脑缺血周围区SYN的mRNA和蛋白表达较对照组增高。结论:rhG-CSF可以促进脑缺血周围区的突触囊泡蛋白的表达,从而减轻脑缺血再灌注损伤。     

重组人粒细胞集落刺激因子在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用的实验研究

目的 探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠局灶性脑缺血中促进神经细胞分化作用.方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)模型,于再灌注不同时间点对治疗组和对照组进行神经功能缺损评分,并用免疫组织化学方法测定5-溴脱氧尿核苷(Brdu)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和神经元特异性核蛋白(NeuN)的表达.结果 与对照组相比,rhG-CSF治疗组大鼠的神经功能缺损评分明显降低,治疗组缺血区及周边的Brdu、GFAP、NeuN表达较对照组增多.结论 脑缺血再灌注后,rhG-CSF可促进神经细胞分化,增加神经细胞修复,具有神经保护作用.

Abstract：

Objective To investigate recombinant human granulocyte colony-stimulating factor ( rhG-CSF) induce neuronal differentiation in focal cerebral ischemia rats. Methods A model of focal cerebral ischemia /reperfusion in rats was performed with the intraluminal filament occlusion. To evaluate neurological severity score of rhG-CSF treated group and contrast group in different reperfusion time,and using immunohistochemistry to measure the expression of 5-bromodeoxyuri-dine( Brdu) ,glial fibrilary acidic protein( GFAP) ,Neuronal Nuclei( NeuN) . Results Compare to contrast group, rhG-CSF significantly reduced the neurological severity scores and increased the expression of Brdu, GFAP, NeuN in peri-infarcted zones. Conclusion The rhG-CSF treatment can induce neuronal differentiation, can enhance the repairment of neuronal cells and have neuroprotective effects.     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑缺血再灌注大鼠的神经保护和血管再生作用

目的利用局灶性脑缺血再灌注模型,观察重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑缺血大鼠的神经保护和血管再生作用。方法健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组,生理盐水对照组,rhG-CSF治疗组。线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,模型缺血90min时再灌注,治疗组予rhG-CSF 50μg/(kg·d),连续5d。每只大鼠均于治疗结束后分别进行神经功能缺损评分。采用免疫组化法检测CD105、VEGF的表达。结果 (1)病死率:对照组病死率为53.85%,rhGCSF治疗组为25%,差别有统计学意义(P0.05)。(2)神经功能评分:治疗后24h,对照组和治疗组较假手术组评分均明显上升,有显著性差异(P0.05)。治疗后7d和14d,治疗组较对照组神经功能恢复较好(P0.05)。(3)免疫组化结果:对照组及治疗组大鼠的CD105、VEGF阳性表达高于假手术组,治疗组的CD105、VEGF阳性表达要高于假手术组和对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论 rhG-CSF具有神经保护作用,能促进缺血区脑组织血管再生,其神经保护作用可能与促进血管再生有关。     

rhG-CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor，rhG-CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白(macrotubule-associated protein2，MAP-2)mRNA表达的关系。方法 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型，观察rhG-CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法，测定rhG-CSF用药组和非用药组的MAP-2 mRNA表达水平的改变。结果 比较rhG-CSF治疗组与非用药组：治疗组大鼠，局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低，神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP-2 mRNA表达明显提前恢复正常。结论 一定剂量的rhG-CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤，保护神经元，改善功能预后。     

尤瑞克林对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响

目的研究尤瑞克林对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后炎性反应的影响。方法将90只SD大鼠随机分为3组:假手术组,对照组,治疗组。采用线栓法建立大鼠大脑中动脉闭塞再灌注模型,缺血2 h后,拔出线栓,恢复灌注24 h,观察大鼠神经功能缺损症状、脑梗死体积、脑组织中白细胞浸润、MPO活性、IL-1和ICAM-1的表达。结果 (1)假手术组大鼠在神经功能缺损评分、脑梗死体积均低于对照组,有显著的统计学差异(P<0.01);脑组织中白细胞浸润程度、髓过氧化物酶(MPO)活性、ICAM-1和IL-1的表达均较对照组低,统计学差异明显(P<0.01);(2)治疗组与对照组相比,大鼠的神经功能缺损评分低、脑梗死体积小,有显著统计学差异(P<0.01);白细胞浸润程度、MPO活性、ICAM-1和IL-1的表达均较对照组减少(P<0.01)。结论尤瑞克林可通过抑制大鼠脑缺血再灌注损伤后的炎性反应来实现其神经保护作用。     

莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 采用线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型,分别于MCAO后1h腹腔注射莱菔硫烷2.5mg/kg、5mg/kg、10mg/kg.于缺血2h再灌注24h时进行神经行为缺损评分,TTC染色评价脑梗死体积,测定脑组织中超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量.免疫荧光组织化学染色法检测黄核蛋白NQ01和脂质过氧化酶Prx6的表达.结果 莱菔硫烷给药组与对照组相比均能改善大鼠脑缺血再灌注后神经行为缺损评分,减少脑梗死体积.其中5mg/kg组能显著改善大鼠脑缺血再灌注后神经行为缺损评分,减少脑梗死体积,增强SOD活性,降低MDA含量.免疫荧光组织化学染色法提示NQ01和Prx6的表达明显增强.结论 莱菔硫烷对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能与上调内源性抗氧化蛋白NQ01和Prx6的表达有关.     

rhG-CSF增加糖尿病并发脑梗死大鼠神经细胞增殖的实验研究

目的研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对局灶性脑缺血糖尿病大鼠的神经功能是否得到改善,并观察对神经细胞的再生的影响。方法线栓法制作糖尿病大鼠大脑中动脉栓塞模型,rhG-CSF干预组连续皮下注射rhG-CSF 50μg/(kg.d),进行神经功能缺损评分,采用免疫组化方法观察BrdU蛋白表达。结果rhG-CSF干预组神经功能缺损评分明显低于对照组(P<0.01)。结论rhG-CSF可增加糖尿病脑缺血后缺血周边BrdU蛋白表达,促进脑组织的再生修复。     

神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

目的探讨胎鼠皮质培养的神经干细胞移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的可行性及疗效。方法取孕龄15d Sprague-Dawley(SD)胎鼠皮质细胞培养为神经干细胞;用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型;将24只健康SD大鼠分为假手术组、缺血对照组、缺血移植组,在移植后2周、4周依据Garcia的18分评分法对各组大鼠的神经功能进行评分;行脑灌注固定取材,免疫组化染色观察移植后神经干细胞的分化、迁移和整合情况。结果用胎鼠皮质培养的细胞nestin表达阳性;缺血移植组大鼠的神经功能评分明显高于缺血对照组(P<0.05);缺血移植组免疫组织化学染色能够检测到存活的BrdU阳性细胞,移植后4周时可见移植细胞向周围迁移、分化、参与血管形成,并可见梗死区边缘微血管明显增生;缺血移植组大鼠脑GFAP阳性细胞数较缺血对照组明显增多(P<0.05)。结论分离、培养胎鼠皮质细胞Nestin表达阳性,即是大鼠的神经干细胞;移植体外培养的神经干细胞能在脑缺血大鼠脑内存活、迁移、分化,并且对脑梗死大鼠的神经功能修复起到了积极作用。     

重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织NF-κB和iNOS表达的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠脑缺血再灌注损伤中的神经保护机制。方法将健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和rhG-CSF治疗组(治疗组),每组12只。用Longa线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血模型,治疗组于脑缺血后2h实施再灌注并予rhG-CSF(50μg/kg)腹部皮下注射,假手术组和模型组给予等量生理盐水。采用Longa 5分制评分标准进行神经功能缺损评分,免疫组化法(PV-6001二步法)检测各组大鼠脑组织中核转录因子-κB p65(NF-κB p65)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积。结果模型组与治疗组大鼠均可见大脑中动脉供血区梗死灶,治疗组大鼠脑梗死体积〔(24.04±1.49)%〕较模型组〔(31.05±1.49)%〕减小(t=8.12,P<0.01),治疗组神经功能评分(1.25±0.45)低于模型组(2.58±0.67)(U=12.00,P<0.01);治疗组NF-κB p65、iNOS表达的灰度值〔分别为(136.18±5.26)、(128.05±3.19)〕均较模型组〔分别为(96.67±3.94)、(109.73±6.07)〕增高(分别t=-39.51、P<0.01,t=-18.31、P<0.01);假手术组大鼠脑组织未发现梗死灶,脑组织内NF-κB和iNOS表达的灰度值〔分别为(161.86±4.27)、(163.99±4.08)〕高于模型组(分别t=65.20、P<0.01,t=54.26、P<0.01)。结论 rhG-CSF对脑缺血再灌注损伤具有神经保护作用,其机制可能与降低NF-κB p65、iNOS表达,抑制炎性反应有关。     

重组人粒细胞集落刺激因子对脑梗死大鼠的神经保护作用及对脑组织Fas蛋白表达的影响

目的 研究重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对脑梗死大鼠的神经保护作用以及对脑组织Fas蛋白表达的影响.方法 线栓法制作大鼠脑梗死模型36只,随机分为rhG-CSF组和对照组,rhG-CSF组术后当日起给予rhG-CSF 50 μg/kg皮下注射,每日1次.比较两组术后不同时间点神经功能缺损评分(NSS)、病灶体积、脑组织形态学变化和Fas蛋白表达水平.结果 rhG-CSF组大鼠术后3 d、5 d时NSS明显高于对照组(均P＜0.01);梗死体积明显小于对照组(P＜0.05～0.01);术后5 d时神经细胞损伤明显轻于对照组;术后1 d、5 d时Fas蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05～0.01).结论 rhG-CSF对脑梗死大鼠具有神经保护作用,可以降低Fas蛋白的表达水平.     

rhG—CSF改变大鼠局灶性脑缺血预后的初步研究

目的　 研究重组人粒细胞集落刺激因子 (recombinanthumangranulocytecolony stimulatingfactor,rhG CSF)对大鼠局灶性脑缺血预后的影响以及与微管相关蛋白 (macrotubule associatedprotein 2 ,MAP 2 )mRNA表达的关系。 方法　 用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,观察rhG CSF对死亡率和神经功能评分的影响。用半定量逆转录 聚合酶链式反应 (RT PCR)方法 ,测定rhG CSF用药组和非用药组的MAP 2mRNA表达水平的改变。 结果　 比较rhG CSF治疗组与非用药组 :治疗组大鼠 ,局灶性脑缺血再灌注后死亡率显著降低 ,神经功能评分明显改善。治疗组缺血侧脑组织的MAP 2mRNA表达明显提前恢复正常。结论　一定剂量的rhG CSF可以减轻脑缺血再灌注损伤 ,保护神经元 ,改善功能预后。     

米诺环素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后ICAM-1表达的影响

目的观察米诺环素对大鼠短暂性脑缺血再灌注后细胞间黏附分子1表达的影响。方法采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24h模型,随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、米诺环素处理组和米诺环素预处理组,每组16只。模型成功后观测各组大鼠的神经行为变化、脑梗死体积以及HE染色计数缺血区中性粒细胞的浸润数目,应用免疫组化方法检测细胞间黏附分子-1的表达情况。结果米诺环素能明显改善大鼠局灶性脑缺血再灌注引起的神经行为障碍,减少脑梗死体积,减少脑缺血引起细胞间黏附分子1的表达,抑制中性粒细胞的浸润。结论米诺环素对大鼠局灶脑缺血再灌足损伤有保护作用,抑制黏附分子可能是一种机制。     

亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶表达的影响

目的研究亚低温对大鼠局灶性脑缺血再灌注后多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP-1)不同时空表达的影响,进一步探讨亚低温脑保护作用的分子机制。方法线栓法建立大鼠大脑中动脉阻塞再灌注模型,分假手术组、假手术 亚低温组、模型组及模型 亚低温组。应用Western blotting和免疫组化技术分别检测再灌注后不同时相缺血侧皮层PARP-1蛋白的表达与裂解。结果模型组PARP-1蛋白表达量随再灌注时间的延长逐渐增加,至再灌注24h达高峰,然后逐渐减少,再灌注72h时仍高于假手术组的水平;模型组PARP-1蛋白出现裂解,随再灌注时间的延长,裂解逐渐增强。每一相同再灌注时间点,模型 亚低温组PARP-1蛋白表达量和裂解片段含量均低于模型组。结论PARP-1的过度表达和裂解是局灶性脑缺血再灌注神经元死亡的重要分子机制。亚低温可通过抑制PARP-1的过度表达及减少PARP-1的裂解而发挥脑保护作用。     

普洛迪对局灶性脑缺血大鼠的神经保护作用研究

目的研究普洛迪对局灶性脑缺血大鼠的神经修复作用。方法采用Longa法制备SD大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),分为:假手术组;持续缺血组;药物干预(普洛迪、金纳多、施普善)组。应用免疫组化法观察巢蛋白(Nestin)和神经元特异性烯醇化酶(NSE)的表达变化,并使用多媒体彩色病理图像分析系统进行定量分析;利用草酸-焦锑酸钾电镜细胞化学技术观察缺血脑组织的超微结构改变。结果药物干预组的病变明显轻于持续缺血组;其中,普洛迪(高剂量)组优于金纳多、施普善组。普洛迪(高剂量)组Nestin的表达升高最显著,NSE的表达下降程度最轻,且呈显著的普洛迪剂量依赖性。结论普洛迪可使缺血后Nestin表达上调,并减轻NSE表达下降程度,从而起到减轻缺血性脑损伤的作用。     

脑缺血后钠通道Na(v)1.6的表达变化

目的 观察大鼠缺血脑组织中Na(v)1.6的表达变化及钠通道阻滞剂Riluzole对其表达的影响,探讨Na (v)1.6与脑缺血的关系.方法 105只SD大鼠按随机数字表法分假手术组(n=15)、脑缺血组(n=45)和Riluzole治疗组(n=45),后2组应用线栓法制作成大鼠右侧大脑中动脉永久性闭塞模型,Riluzole治疗组在造模后30 min按8 mg/kg静脉注射给药,1次/d.缺血后6 h、1 d、2 d、3 d、7 d时观察大鼠神经功能缺损情况,应用免疫荧光染色和实时定量PCR方法检测纹状体区Na(v)1.6的表达,TTC染色检测脑梗死体积的变化.结果 缺血组和Riluzole治疗组大鼠神经功能缺损在缺血后2 d表现最严重,相同时间点缺血组较Riluzole治疗组神经功能评分增高,比较差异有统计学意义(P＜0.05).免疫荧光染色显示缺血组和Riluzole治疗组Na(v)1.6表达均在缺血后1 d达高峰,随后下调.实时定量PCR显示缺血组Na(v)1.6 mRNA在缺血后6 h、1 d表达上调,2 d、3 d、7 d表达下调;Riluzole治疗组Na(v)1.6 mRNA缺血后6 h～7 d表达均呈下调趋势;相同时间点Riluzole治疗组Na(v)1.6 mRNA较缺血组表达下调,比较差异有统计学意义(P＜0.05).缺血组和Riluzole治疗组脑梗死体积均在缺血后3 d时最大,相同时间点Riluzole治疗组脑梗死体积比缺血组小,比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 Riluzole可以下调Na(v)1.6表达,减轻缺血性脑损伤,Na(v)1.6可能参与缺血性脑损伤的发病过程.

Abstract：

Objective To observe the changes of Na(v)1.6 expression in rats after acute cerebral ischemia and the effect of Riluzole (the sodium channel blocker) on these changes, and discuss the relationship between level of Na(v)l.6 and cerebral ischemia. Methods One hundred and five healthy SD rats were randomly divided into sham-operated group (n=15), ischemia control group (IC, n=45) and Riluzole therapy group (RT, n=45). Rat models of focal acute cerebral ischemia in the later 2 groups were established by permanent occlusion of right middle cerebral artery. Riluzole at a dosage of 8 mg/kg was given once daily to the rats of the RT group 30 min after ischemia. Tissues from the striatum were collected at different time points (6 h, and 1, 2, 3 and 7 d after ischemia); the expressions of Na(v)1.6 in the striatum were detected by immunofluorescence staining and real-time quantitative PCR at each time point; and the infarct volume was observed by triphenyltetrazolium chloride staining at each time point.Results The rats in the IC group and RT group showed neurologic impairment, especially 2 d after ischemia; rats of the IC group presented significantly higher scores of neurological function scale than those of the RT group at the same time point (P＜0.05). Immunofluorescence staining showed that the expression of Na (v)1.6 was up-regulated, and reached its peak level 1 d after ischemia but then, was down-regulated both in the IC group and RT group. Real-time quantitative PCR showed that the expression of Na(v)1.6 in the IC group was up-regulated 1 d after ischemia, and then down-regulated 2, 3 and 7 d after ischemia, however, that in the RT group was down-regulated 6 h after ischemia; the mRNA expression of Na (v)1.6 in the RT group was obviously down-regulated as compared with that in the IC group at the same time point (P＜0.05). The infarction volume became the largest 3 daRer ischemia both in the IC group and RT group; the infarction volume in RT group was smaller than that in IC group at the same time point (P＜0.05). Conclusion The expression of Na(v)1.6 is down-regulated after cerebral ischemic injury to mitigate acute cerebral ischemic injury, indicating that Na (v)1.6 might involve in the development of cerebral ischemic injury.     

Effects of fastigial nucleus electrical stimulation on lateral ventricle nestin expression after focal cerebral ischemia/reperfusion in adult rats**★

BACKGROUND： Previous studies have confirmed that fastigial nucleus electrical stimulation can induce endogenous neuroprotective mechanisms and produce wide and long-lasting neuroprotective effects. Nevertheless, the precise mechanisms remain poorly understood. OBJECTIVE： This study was designed to observe the effects of fastigial nucleus electrical stimulation on nestin-positive cell expression in adult rat lateral ventricle after focal cerebral ischemia/reperfusion, as well as neurological functional changes as a function of time. DESIGN： A randomized controlled animal experiment. SETTING： Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University; Chongqing Key Laboratory of Neurology. MATERIALS： This study was performed in the Department of Neurology, First Affiliated Hospital of Chongqing Medical University and Chongqing Key Laboratory of Neurology from September 2004 to February 2006. A total of 180 healthy, adult, male Wistar rats, aged 8 weeks old, were provided by the Laboratory Animal Center of Chongqing Medical University. The main reagents and equipments were as follows： rabbit anti-rat nestin monoclonal antibody （Wuhan Boster Company, China）. METHODS： The included male Wistar rats were randomly divided into 5 groups： normal control, sham-operated, model, fastigial nucleus sham-stimulation （sham-stimulation for short）, and fastigial nucleus electrical stimulation （stimulation for short） groups. Six time points （1 hour of ischemia and 1, 3, 7, 14, 21, and 28 days of reperfusion, 6 rats per time point） were allotted to each group. Cerebral ischemia/reperfusion was performed by occlusion to the right middle cerebral artery with suture, followed by suture removal. In the stimulation group, subsequent to reperfusion, the rat left cerebellar fastigial nucleus was immediately subjected to 1 hour of stimulation. After anesthesia, the rat left cerebellar fastigial nucleus was stimulated for 1 hour using a square-wave electronic stimulator with a current in