人参皂苷Rh2对肝癌SMMC-7721细胞增殖和细胞骨架的影响

目的: 探讨人参皂苷Rh₂(Rh₂)对人肝癌细胞SMMC-7721细胞生长和细胞骨架的影响。方法: 应用MTT法及流式细胞仪检测不同浓度Rh₂对SMMC-7721细胞增殖的抑制及诱导凋亡作用;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架肌动蛋白F-actin的分布状态;整装细胞电镜术观察细胞核基质-中间纤维系统的变化。结果: MTT法和流式细胞仪分析结果分别显示,40 mg/L Rh₂ 作用SMMC-7721细胞4 d时的抑制率及细胞凋亡率明显高于对照组及10、20 mg/L组,显著差异(P＜0.05);激光共聚焦显微镜下,SMMC-7721细胞经Rh₂处理4 d,F-actin分布均匀,细丝排列整齐,数量增多;而对照组细胞F-actin细丝在细胞内排列紊乱,多呈斑点状分布。整装电镜结果显示,与对照组相比,实验组细胞的中间纤维丰富,均匀地满布细胞中,呈网架状连接的结构。结论: Rh₂能有效抑制SMMC-7721细胞的增殖,增加SMMC-7721细胞的凋亡,并且诱导SMMC-7721细胞骨架发生变化。     

汉黄芩素提高人CD3AK细胞杀伤肝癌细胞的实验研究和机理探讨

目的:观察汉黄芩素对人CD3AK细胞增殖及对肝癌细胞SMMC-7721杀伤活性的影响,并探讨其发生的机制。方法:分离健康者外周血PBMC;在体外用多种细胞因子联合诱导培养CD3AK细胞。收集培养第7天的CD3AK细胞给予不同浓度汉黄芩素诱导48 h:CCK-8法检测人CD3AK细胞增殖率;MTT法检测汉黄芩素对SMMC-7721细胞生长的影响;流式细胞术(FCM)检测汉黄芩素作用前后CD3AK细胞穿孔素(PFP)、颗粒酶B(Gr B)、CD107a的表达;乳酸脱氢酶(LDH)释放法测定汉黄芩素对CD3AK细胞杀伤肝癌细胞SMMC-7721活性;Western blot检测药物诱导前后CD3AK细胞胞外信号调节激酶(ERK1/2)蛋白表达。用transwell chambers小室进行药物诱导前后肝癌细胞SMMC-7721迁移率检测。划痕愈合实验观察药物诱导后肝癌细胞SMMC-7721生长融合情况。结果:汉黄芩素能明显促进CD3AK细胞增殖,汉黄芩素浓度为3.2 mg/L时,细胞增殖率比对照组(0 mg/L)高23%,两者比较有统计学差异(P0.05)。在汉黄芩素为3.2 mg/L时诱导的CD3AK细胞对靶细胞SMMC-7721杀伤活性最高(60.4%),与对照组(42.7%)比较差异有统计学意义(P0.05)。经汉黄芩素诱导后的CD3AK细胞PFP、Gr B、CD107a表达显著高于对照组(P0.05)。汉黄芩素作用48h后的CD3AK细胞其ERK1/2蛋白表达较对照组均有所上调,浓度在12.5~0.8 mg/L时,ERK1/2蛋白表达高于对照组(P0.05)。经浓度为50、12.5、3.2、0.8、0.2mg/L汉黄芩诱导48 h后,肝癌细胞SMMC-7721通过transwell小孔细胞数以汉黄芩浓度为12.5 mg/L时最低、肝癌细胞SMMC-7721的融合率以3.2 mg/L时最低,与对照组比较有统计学意义(P0.05)。结论:汉黄芩素在一定浓度范围内能够促进CD3AK细胞增殖,增强其对肝癌细胞SMMC-7721的杀伤活性,抑制SMMC-7721细胞生长、迁移和细胞的融合。汉黄芩素促进CD3AK细胞增殖和功能改变可能与活化细胞ERK1/2蛋白,上调CD3AK细胞表面PFP、Gr B、CD107a的表达有关。     

rhHGF/cHGF体外抑制SMMC-7721人肝细胞癌细胞生长

目的:观察重组人肝细胞生长因子(rhHGF)和天然小牛肝细胞生长因子(cHGF)对SMMC-7721人肝细胞癌细胞株的生长效应。方法:传代后处于指数生长期的SMMC-7721细胞经过(HGF处理组)或不经(对照组)rhHGF/cHGF处理培养1-4d,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞数。并通过流式细胞仪对rhHGF处理细胞作细胞周期分析。结果:rhHGF(5-20μg/L)和cHGF(25-100mg/L)对SMMC-7721细胞增殖具有类似的剂量依赖性抑制作用。在实验浓度内,使用最高浓度时(rhHGF为20μg/L、cHGF为100mg/L)对细胞增殖抑制作用最强。使用不同浓度(5μg/L、10μg/L、20μg/L)rhHGF处理3d的培养细胞均有一半以上停留在G₀/G₁期。结论:rhHGF和cHGF对SMMC-7721人肝细胞癌细胞的体外生长都有强烈的抑制效应。这是由于受HGF的作用细胞生长易于终止在G₀/G₁期。     

香烟提取物和脂多糖对人胚肺成纤维细胞TGF-β1 mRNA及蛋白表达的影响

目的:探讨香烟提取物(CSE)和脂多糖(LPS)对体外培养的人胚肺成纤维细胞(HELF)转化生长因子-β₁(TGF-β₁)mRNA及其蛋白表达的影响。方法:应用不同浓度的CSE(1∶50、1∶25和1∶10)、LPS(0.1 mg/L、1 mg/L和10 mg/L)及CSE(1∶25)与LPS(1 mg/L)联合作用于HELF, 37℃作用24 h后, 提取细胞总RNA, 应用逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)及免疫细胞化学技术检测TGF-β₁ mRNA和蛋白表达的变化。结果:CSE低浓度(1∶50和1∶25)时可增加HELF TGF-β₁ mRNA及蛋白的表达(Ｐ＜0.05), 高浓度(1∶10)时未引起TGF-β₁ mRNA及蛋白表达增强(Ｐ＞0.05)。不同浓度的LPS均引起HELF TGF-β₁ mRNA及蛋白表达增强(Ｐ＜0.05)。CSE与LPS联合作用也可增加HELF TGF-β₁ mRNA及蛋白的表达(Ｐ＜0.05)。结论：一定浓度的CSE和LPS可上调肺成纤维细胞TGF-β₁ mRNA及蛋白表达。     

2-脱氧-D-葡萄糖与奥沙利铂对人肝癌SMMC-7721细胞增殖及凋亡的影响

目的: 研究糖酵解抑制剂2-脱氧-D-葡萄糖(2-deoxy-D-glucose,2-DG)与奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)单独及联合应用对人肝癌细胞SMMC-7721增殖及凋亡的影响。方法: 将2-DG及L-OHP单药及联合用药作用于人肝癌细胞SMMC-7721,MTT法检测各组细胞的生长抑制率,并计算两药的协同作用q值,流式细胞仪检测各组细胞周期及凋亡情况,caspase-3试剂盒检测caspase-3活性。结果: 不同浓度的2-DG和L-OHP均可使肝癌细胞增殖受到抑制,并呈时间、浓度依赖性,两药合用后对细胞的增殖抑制作用明显增强(P<0.05)。2-DG可诱导细胞凋亡,使细胞周期阻滞于G₂/M期;与L-OHP合用后细胞凋亡率更高,可阻滞细胞于G₂/M期和S期。Caspase-3活性在两药联合应用时明显增强。结论: 2-DG能有效抑制SMMC-7721细胞生长增殖,并诱导其凋亡;当其与L-OHP联合应用时能增强L-OHP的抗肿瘤作用,其机制可能与增加caspase-3活性有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。     

白细胞介素-10抑制人肾系膜细胞环氧化酶-2表达及其催化的前列腺素E2释放的实验研究

目的:观察IL-10对IL-1β诱导的人系膜细胞(HMC)前列腺素E₂(PGE₂)释放及环氧化酶-2(cyclooxygenase-2,COX-2)基因和蛋白表达的影响。方法:应用放射免疫测定法检测HMC培养上清中PGE₂,应用RT-PCR和Westernblot分别检测COX-2mRNA和蛋白水平。结果:①IL-1β显著上调PGE₂释放及COX-2基因和蛋白的表达(P均＜0.01);②IL-10对基础状态下PGE₂释放及COX-2基因和蛋白表达无明显影响(P＞0.05);③IL-10可呈剂量依赖性地下调IL-1β诱导的PGE₂释放及COX-2mRNA和蛋白表达(P＜001)。结论:IL-10抑制IL-1β诱导的HMCPGE₂释放及COX-2表达,提示IL-10对HMC具有多方面抗炎作用。     

溶血磷脂酸对上皮细胞整合素β6表达的影响

目的: 探讨溶血磷脂酸(LPA)在体外对整合素β₆(ITGB6)表达的影响,并进一步研究LPA诱导的活化转化生长因子β(TGF-β)在此过程中的作用。方法: 原代培养的正常人支气管上皮(NHBE)细胞接种于6孔板中,经LPA诱导,收集细胞,分别利用RT-PCR和流式细胞术检测ITGB6 mRNA及细胞表面蛋白的表达;利用转染有TGF-β应答性纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)启动子片段并融合萤火虫荧光报告基因片段的转化貂肺上皮细胞(TMLC)作为TGF-β活性报告细胞检测活化的TGF-β。结果: (1) 10 μmol/L LPA诱导2 h后,ITGB6 mRNA在上皮细胞中表达显著增加,具有明显的时间依赖性。(2) 10 μmol/L LPA诱导4 h后,上皮细胞表面ITGB6蛋白表达明显增加。(3) 抗α_Vβ₆抗体可阻断LPA诱导的活化TGF-β,但不能阻断LPA诱导的ITGB6 mRNA的表达。结论: (1) LPA可诱导上皮细胞ITGB6 mRNA和细胞表面蛋白的表达。(2) LPA诱导的ITGB6 mRNA 表达不依赖LPA 诱导的TGF-β活化。     

三氧化二砷抑制人肝癌SMMC-772细胞侵袭及其机制

目的:探讨三氧化二砷(As2O3)对人肝癌SMMC-7721细胞迁移和侵袭的影响及其分子机制.方法:划痕愈合和侵袭实验检测As2O3对SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力的影响;Real-time PCR、Western blot法检测As2O3作用SMMC-7721细胞后CD147、MMP-2的表达.结果:划痕实验结果显示,2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞12 h和24 h后,较未处理组划痕距离明显增加(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞迁移.Transwell实验结果显示,2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞12 h和24h后,穿膜细胞数较未处理组明显减少(P＜0.05),表明As2O3可抑制SMMC-7721细胞侵袭能力.Real-time PCR结果显示,以2.0μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞6、12、24h后,CD147和MMP-2 mRNA表达均明显下调(P＜0.05).Western blot结果显示,2.0 μmol/L As2O3处理SMMC-7721细胞12、24、48h后,CD147和MMP-2蛋白表达均明显降低(P＜0.05).结论:As2O3可抑制人肝癌SMMC-7721细胞迁移与侵袭能力,其机制可能与下调CD147和MMP-2有关.     

β3整合素在生长因子促血管平滑肌细胞粘附和迁移中的作用

目的:探讨血小板衍生生长因子(PDGF)对β₃整合素表达的影响及β₃整合素在PDGF促血管平滑肌细胞(VSMC)粘附、迁移和增殖中的作用。方法:用抗β₃整合素胞外域抗体封闭VSMCβ₃整合素后,通过-TdR掺入、细胞粘附、细胞迁移分析及RT-PCR等方法,检测PDGF对β₃整合素表达及对VSMC粘附、迁移和增殖的影响。结果:阻断β₃整合素与细胞外基质(ECM)蛋白相互作用后,可在一定程度上抑制PDGF刺激的VSMC增殖,使-TdR掺入率降低39%;在β₃整合素抗体浓度为10mg/L时,PDGF引发的细胞粘附和迁移受到显著抑制(P＜0.05);PDGF作用于VSMC6h,β₃整合素基因表达活性达到峰值,比对照细胞高87%。结论:PDGF可显著诱导β₃整合素在VSMC中表达;β₃整合素与ECM蛋白相互作用在PDGF促VSMC粘附、迁移方面发挥重要作用。     

细胞铁代谢变化参与阿司匹林抗氧化作用的调控机制

目的:探讨铁蛋白(Fn)表达及细胞内铁的变化在阿司匹林(AS)抗氧化损伤中的调控作用。方法:ELISA法检测不同浓度AS诱导Fn的表达,以及FeCl₃和去铁胺对AS诱导Fn表达的影响;同时使用RNA-proteinbandshiftassay及RT-PCR检测AS诱导铁蛋白表达过程中铁调节蛋白(IRP)结合活性及IRP₂mRNA水平的变化。结果:0.1mmol/L的AS可诱导内皮细胞Fn表达超过对照25%,随AS剂量的增大诱导Fn表达逐渐增加,二者间有明显的剂量依赖关系。AS诱导Fn表达后能明显增强细胞抗H₂O₂损伤的能力。但去铁胺+AS组细胞Fn表达明显降低,此时IRP的结合活性却为正常的3倍,IRP₂mRNA的表达水平也升高;而FeCl₃+AS组Fn表达明显高于去铁胺组,但IRP的结合活性降低、IRP₂mRNA表达水平下降。结论:阿司匹林通过下调IRP结合活性及IRP₂mRNA水平,导致细胞铁蛋白表达增加而发挥抗氧化损伤的作用。     

细胞外基质促血管平滑肌细胞迁移及β3整合素和粘着斑激酶表达

目的:研究细胞外基质(ECM)蛋白促血管平滑肌细胞(VSMC)迁移与β₃整合素及粘着斑激酶(FAK)表达之间的关系。方法:应用细胞迁移实验观察骨桥蛋白(OPN)和纤连蛋白(FN)对VSMC迁移活性的影响,利用RT-PCR和Western印迹探讨β₃整合素、FAK和转录因子Gax表达与细胞迁移之间的关系。结果:VSMC经10、20mg/LOPN和20mg/LFN处理后,迁移活性分别达对照组的1.36、1.57和1.26倍(P＜0.05)。用相同浓度(20mg/L)OPN和FN刺激细胞,随着作用时间延长,VSMC迁移距离逐渐增加。Western印迹和RT-PCR结果证实,两种基质蛋白促进VSMC迁移与诱导β₃整合素和FAK基因表达及抑制转录因子Gax表达有关。结论:β₃整合素-FAK是介导OPN和FN促VSMC迁移的信号途径之一。     

胰岛素促进心肌成纤维细胞增殖和心肌细胞肥大的作用

目的:研究胰岛素对心脏细胞增殖和心肌细胞肥大的影响,探讨其在心肌肥厚中的作用。方法:①乳鼠心肌细胞和心肌成纤维细胞的培养及光镜、电镜和免疫细胞化学染色的鉴定。②测定细胞的数量、代谢活性(WST-1)与DNA合成(BrdUELISA法)及细胞周期百分比(流式细胞仪)以反映细胞增殖。③用细胞蛋白含量(考马斯亮蓝法)评估细胞肥大。结果:①培养的细胞分别为心肌细胞和心肌成纤维细胞。②胰岛素处理后,心肌成纤维细胞数量、WST-1与BrdU的吸光值及S+G₂+M期细胞百分比明显升高(P＜0.01或P＜0.05),而心肌细胞的上述参数无明显变化(P＞0.05)。③胰岛素作用下,心肌细胞蛋白含量明显增加,且在10^-10mol/L-10^-7mol/L范围内呈量效关系(P＜0.01或P＜0.05)。结论:在体外胰岛素有促进心肌成纤维细胞增殖和增加心肌细胞蛋白含量(诱导心肌细胞肥大)的作用,可能在体内心肌肥厚的发生发展过程中起重要作用。     

柴胡皂苷在体外对人白血病细胞株K562/ADM多药耐药性的逆转作用

目的: 研究柴胡皂苷(SS)对白血病细胞株K562/ADM 多药耐药性(MDR)的逆转作用,并进一步探讨其耐药逆转机制。方法: 分别以不同浓度(1~100 mg/L)的SS作用于体外培养的K562和K562/ADM 细胞48 h,采用MTT 法检测细胞增殖抑制率,确定SS的非毒性剂量;采用非毒性剂量SS 1.25、2.5和5.0 mg/L,分别与不同浓度(0.05~100 mg/L)阿霉素(ADM)联合作用,检测各组细胞生长抑制50%的ADM浓度(IC₅₀),计算逆转指数和两药相互作用系数(CDI),观察SS协同ADM作用后的细胞形态;利用流式细胞术检测SS联合ADM作用后K562/ ADM细胞内ADM的蓄积程度、细胞凋亡和细胞周期变化。结果: 随着SS浓度的增加,细胞增殖抑制率也相应增加,呈剂量-效应关系;SS的非细胞毒性剂量为5.0 mg/L,逆转倍数为21.5倍;SS协同ADM作用后形态学方法显示肿瘤细胞数量减少,并出现了大量凋亡细胞,呈剂量-效应关系;SS可明显提高ADM在K562/ADM细胞内的蓄积,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);SS可增强ADM对K562/ADM细胞的凋亡诱导作用,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05);K562/ADM细胞被阻滞在G₀/G₁期,与未加SS对照组比较差异显著(P<0.05)。结论: SS对白血病耐药细胞株K562/ADM有增殖抑制和逆转多药耐药性的作用,其部分逆转机制可能是通过增加细胞内化疗药物蓄积,诱导细胞凋亡和使细胞阻滞在G₀/G₁期而实现的。     

茶多酚对高脂环境中THP-1细胞核因子-κB、转化生长因子-β1mRNA表达的影响

目的:观察茶多酚(TP)对单核细胞源性泡沫细胞核因子-κB(NF-κB)、转化生长因子-β₁(TGF-β₁)mRNA表达的影响。方法:分别用极低密度脂蛋白(VLDL)、低密度脂蛋白(LDL)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导人髓系白血病单核细胞株THP-1细胞向泡沫细胞转化, 加入TP干预后检测细胞NF-κB的核移位率、TGF-β₁mRNA阳性指数、细胞内胆固醇含量等。结果:茶多酚浓度为0.4-40μg/L时细胞NF-κB的核移位率、TGF-β₁mRNA阳性指数、细胞内胆固醇含量等均低于未用TP干预的细胞(P＜0.05)。结论:一定浓度的TP对高脂环境中单核-巨噬细胞NF-κB活化、TGF-β₁mRNA表达有抑制作用, 并阻止泡沫细胞形成。     

雌激素对去卵巢家兔血浆氧化型低密度脂蛋白的影响

目的:探讨胆固醇饲养的去卵巢兔接受17β-雌二醇(17β-estradiol,E₂)替代治疗后血浆氧化型低密度脂蛋白(oxidizedLDL,oxLDL)的变化及其与主动脉粥样硬化形成的关系。方法:全部兔切除双侧卵巢,喂饲含1.5%胆固醇的标准颗粒饲粒。2周后随机分成4组,其中3组分别用E₂1mg,2mg和4mg替代治疗,另1组为对照组。分别在用E₂后0,3,8,12周测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和oxLDL水平,用计算机测定主动脉粥样斑块面积。结果:17β-雌二醇替代治疗后,血清SOD明显上升(P＜0.05),而血浆oxLDL水平和主动脉粥样斑块面积显著降低(P＜0.01),且与E₂有量效关系。全部实验兔血浆oxLDL水平和主动脉粥样斑块面积呈显著正相关(r=0.74,P＜0.01)。结论:雌激素抑制低密度脂蛋白的氧化修饰可能是其抑制主动脉粥样斑块形成的重要机制。     

金属硫蛋白抑制同型半胱氨酸诱导的大鼠血管成纤维细胞激活

目的:观察外源性金属硫蛋白(MT)和ZnCl₂诱导内源性MT生成对同型半胱氨酸(HCY)激活大鼠血管成纤维细胞增殖的影响, 以探讨MT拮抗HCY血管损伤的可能机理。方法:采用[³H]-胸腺嘧啶([³H]－TdR)和[³H]-脯氨酸([³H]－Pro)掺入法测定细胞增殖及胶原生成, 自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶(LDH)漏出量, 台盼蓝排斥法计算细胞存活率, 并用[¹⁰⁹Cd]-血红蛋白饱和法检测细胞MT的含量。结果:HCY50、100、500μmol/L呈浓度依赖性刺激血管成纤维细胞增殖, 胶原合成和分泌(P＜0.05或P＜0.01), 500μmol/LHCY使细胞LDH漏出量增多, 细胞存活率降低。MT1×10^-5mol/L、1×10^-4mol/L与500μmol/LHCY共孵育组与单纯HCY组比较, [³H]-TdR、[³H]-Pro掺入、胶原分泌降低, LDH漏出量减少(P＜0.05或P＜0.01)。ZnCl₂预处理诱导细胞MT含量增加(P＜0.05), 而ZnCl₂处理与HCY50、100、500μmol/L共孵育组[³H]－TdR和[³H]－Pro掺入, 胶原分泌、LDH漏出量都明显低于单纯HCY组细胞, 且细胞存活率高于单纯HCY组(P＜0.05或P＜0.01)。结论:HCY刺激血管成纤维细胞增殖与胶原合成, MT无论外源应用或内源性诱导生成均能有效拮抗HCY的上述作用。MT对HCY作用的拮抗效应可能是其血管细胞保护的机理之一。     

脂氧素A4抑制内毒素诱导的人支气管上皮细胞环氧合酶2及前列腺素E2的表达

目的: 探讨脂氧素A₄对人支气管上皮细胞(HBECs)环氧合酶2(COX-2)表达的影响。方法: 应用不同浓度(0.1、1、10 mg/L)的内毒素(LPS)刺激HBECs 9 h,或者用1 mg/L LPS分别刺激HBECs不同时点(3 h、6 h、9 h)后,测定HBECs的COX-2 mRNA表达和细胞上清液前列腺素E₂(PGE₂)水平。应用不同浓度 (0、100、400 μmol/L) 的脂氧素A₄作用于经过LPS(1 mg/L)刺激培养9 h的HBECs,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液PGE₂的水平, 同时分别应用RT-PCR和Western blotting分别检测HBECs COX-2 mRNA及蛋白的表达。结果: LPS刺激培养条件下HBECs的COX-2 mRNA表达及其上清液PGE₂水平增加,并呈时间、剂量依赖性。脂氧素A₄能抑制LPS刺激培养HBECs COX-2蛋白和mRNA的表达及上清液PGE₂的水平,并呈剂量依赖性。结论: 脂氧素A₄能抑制LPS诱导的HBECs COX-2表达及上清液PGE₂的水平。     

NS-398对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶II(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法: 应用MTT法研究不同浓度NS-398对HepG2细胞增殖的影响,DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,竞争性RT-PCR检测环氧合酶II COX-2 mRNA及抑凋亡基因bcl-2 mRNA表达的改变。结果: NS-398呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明随着浓度增大S期细胞明显减少,有G₀/G₁期细胞累积现象,并伴有Bcl-2 mRNA表达的下调,而对COX-2 mRNA表达改变无明显影响,且COX-2表达改变与NS-398引起的HepG2细胞的增殖和凋亡均无相关性(相关系数分别为:r=0.056,P>0.05和r=0.119,P>0.05)。结论: NS-398能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,与细胞G₀/G₁期阻滞以及bcl-2基因表达下调有关,而非依赖于抑制COX-2基因的表达。     

维生素D受体在1,25(OH)2D3调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖中的作用

目的:研究维生素D₃受体(VDR)在1,25(OH)₂D₃及其类似物调节人骨肉瘤细胞系HOS-8603增殖中的作用。方法:用RT-PCR和免疫组织化学技术分别在mRNA和蛋白水平上明确HOS-8603细胞中是否有VDR表达;瞬时转染VDR报告基因技术观察HOS-8603细胞中VDR的功能活性;并进一步利用稳定表达VDR反义mRNA的细胞株VDRas3细胞研究VDR被阻断后细胞增殖以及基因转录的变化。结果:HOS-8603细胞有VDR表达,此内源性VDR具有激素依赖性的转录激活活性。在内源性VDR被阻断后,1,25(OH)₂D₃及其类似物对细胞增殖的抑制作用以及对VDR的靶基因p21mRNA表达的诱导作用均明显减弱。结论:1,25(OH)₂D₃及其类似物对HOS-8603细胞增殖抑制作用是由VDR介导的。