线粒体ATP敏感性钾通道在七氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 探讨线粒体ATP敏感性钾通道(mito-K_(ATP)通道)在七氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性SD大鼠100只,体重250～300 g,随机分为5组(n=20):假手术组(S组)、缺血再灌注组(I/R组)、七氟醚预处理组(Sevo组)、mito-K_(ATP)通道阻断剂5-羟基葵酸(5-HD)组及5-HD+七氟醚预处理组(5-HD+Sevo组).采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,七氟醚预处理方法:吸入2.4%七氟醚60 min后吸入纯氧洗脱15 min,停止吸入七氟醚后24 h时制备脑缺血再灌注模型.分别于再灌注6、24 h时进行神经功能损伤评分,计算脑梗死体积百分比,采用Western blot法测定蛋白激酶Cε(PKCε)膜转位水平.结果 与S组比较,其余各组大鼠再灌注6、24 h时神经功能损伤评分升高,脑梗死体积百分比及脑组织PKCε膜转位水平升高(P<0.05);与I/R组、5-HD组及5-HD+Sevo组比较,Sevo组大鼠再灌注6、24 h时神经功能损伤评分降低,脑梗死体积百分比降低,再灌注6 h时脑组织PKCε膜转位水平升高(P<0.05).结论 mito-K_(ATP)通道介导了七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的作用,其机制可能与调控PKCε膜转位有关.     

N-myc下游调节基因2在七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价N-myc下游调节基因2(NDRG2)在七氟醚预处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 健康雄性成年SD大鼠48只,体重280～320 g,采用随机数字表,将大鼠随机分为3组(n=16):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和七氟醚预处理组(Sev组).采用大脑中动脉阻断法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.大鼠吸入2％七氟醚lh,每天1次,连续5d行七氟醚预处理.Sev组于七氟醚预处理结束后24h制备局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24h时行神经功能评分,随后处死大鼠,取脑组织,测定脑梗死体积百分比,采用Western Blot法测定缺血半暗带区NDRG2和活化的Caspase-3的表达,采用免疫组织荧光测定缺血半暗带区NDRG2的表达及定位.结果 与S组比较,I/R组和Sev组脑梗死体积百分比升高,神经功能评分降低,脑组织缺血区半暗带NDRG2和活化的Caspase-3表达上调(P＜0.05);与I/R组比较,Sev组脑梗死体积百分比降低,神经功能评分升高,脑组织缺血区半暗带NDRG2和活化的Caspase-3表达下调(P＜0.05).Sev组核内NDRG2阳性染色较I/R组减浅.结论 七氟醚预处理可能通过抑制脑组织NDRG2的表达、活性和细胞凋亡,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马TREK-1表达的影响

目的 探讨七氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠海马机械敏感性钾通道TREK-1表达的影响.方法 健康雄性SD大鼠36只,体重240～280 g,随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、局灶性脑缺血再灌注组(l/R组)和七氟醚预处理组(Sevo组).结扎右侧颈总动脉、颈外动脉,采用线栓法阻断颈内动脉2 h,再灌注24 h制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型;Sevo组于缺血前1 h经半密闭的吸入箱持续吸入含2.5%七氟醚的02;S组仅分离并结扎右侧颈总动脉、颈外动脉,不置入线栓.各组于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分后断头取脑,TIC染色后测定脑梗死体积,采用RT-PCR法测定海马TREK-1 mRNA的表达.结果 与S组相比,I/R组和Sevo组神经功能缺陷评分和脑梗死体积比升高(P<0.01);与I/R组相比,Sevo组神经功能缺陷评分和脑梗死体积比降低,海马TREK-1 mRNA表达上调(P<0.05).结论 七氟醚预处理可通过激活海马TREK-1减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

七氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的观察七氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血一再灌注损伤的保护作用。方法32只雄性SD大鼠随机均分为四组,假手术组：仅分离血管,不留置线栓;Sevol、Sevo2和对照组：分别在缺血前吸入2％、3％七氟醚和纯氧30min。用左颈内动脉尼龙线线栓法使大脑中动脉阻闭120min,拔出尼龙线恢复再灌注。观察再灌注24h后神经功能损害改变并评分,然后处死动物取大脑行2,3,5-氯化三苯基四氮唑（TTC）染色以测量脑梗死体积。结果缺血-再灌注损伤后对照组大鼠神经功能损害较Sevol和Sevo2组更明显（P〈0．05或P〈0．01）。缺血-再灌注损伤24h后Sevo1组和Sevo2组脑梗死体积和梗死体积百分比,较对照组减小（P〈0．01）。结论缺血前吸入2％、3％七氟醚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤可产生保护作用。     

PI3K/Akt信号通路在七氟醚后处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用

目的 评价磷脂酰肌醇3激酶/蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶(PI3K/Akt)信号通路在七氟醚后处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用.方法 雄性SD大鼠64只,体重300～350 g,随机分为4组(n=16):局灶性脑缺血再灌注组(IR组)、七氟醚后处理组(SP组)、七氟醚后处理+Wortmannin组(SW组)和Wortmannin组(W组).采用电凝法阻断左侧大脑中动脉,夹闭双侧颈总动脉60 min恢复灌注的方法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注即刻SP组和SW组吸入2.5%七氟醚60 min,夹闭双侧颈总动脉30 min时SW组和W组股静脉输注Wortmannin 0.6 mg/kg.于再灌注24、48、72 h时行神经功能评分,最后1次评分后处死大鼠取脑,测定脑梗死体积,采用Western blot法检测左侧脑组织磷酸化Akt(p-Akt)和磷酸化Bad(p-Bad)的表达水平.结果 与IR组相比,SP组和SW组各时点神经功能评分升高,再灌注72 h时脑梗死体积比降低,脑组织p-Akt和p-Bad表达上调(P＜0.05),W组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与SP组相比,SW组各时点神经功能评分降低,再灌注72 h时脑梗死体积比升高,脑组织p-Akt和p-Bad表达下调(P＜0.05).结论 PI3K/Akt信号通路激活后p-Bad表达上调可能参与了七氟醚后处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的过程.     

七氟醚后处理对局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用

目的评价在缺血后期及再灌注早期吸入不同浓度的七氟醚行后处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤的保护作用及其剂量依赖性。方法雄性SD大鼠50只,随机分为空白对照组、吸氧组和0.5、1.0、1.5MAC七氟醚后处理组,每组10只。采用大脑中动脉线栓法阻闭(middle cerebral artery occlusion,MCAO)120min后再灌注72h制备局灶性脑缺血模型。各七氟醚后处理组于再灌注即刻的前20min和后10min给予不同浓度七氟醚吸入。再灌注后的24、48和72h行神经功能评分(NDS),并于最后一次评分后测定脑梗死容积比。结果0.5、1.0和1.5MAC组的脑梗死容积比分别为0.39±0.03,0.31±0.03和0.24±0.03(P<0.05),明显小于对照组0.53±0.05(P<0.05)。吸氧组为0.51±0.05,与对照组比差异无统计学意义。各个时间点七氟醚后处理组NDS明显优于对照组和吸氧组。结论在局灶性脑缺血-再灌注的缺血后期和再灌注早期吸入0.5、1.0和1.5MAC七氟醚行后处理均具有脑保护作用,并呈现剂量依赖性。     

异氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带TLR4-MyD88信号通路的影响

目的 探讨异氟醚预处理对局灶性脑缺血再灌注损伤大鼠缺血半暗带TLR4-MyD88信号通路的影响.方法 成年雄性SD大鼠54只,体重250 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=18):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)和异氟醚预处理组(IP组).S组仅分离血管不留置线栓;I/R组采用线栓法制备右侧局灶性脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h,再灌注24 h;IP组吸入2.0％异氟醚2h,预处理结束后24h时制备右侧局灶性脑缺血再灌注损伤模型.于再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,随后处死大鼠,每组随机抽取5只大鼠,取脑组织,测定脑梗死体积,采用Westernblot法和RT-PCR法检测大鼠右侧脑缺血半暗带区HSP60、TLR4、MyD88蛋白及mRNA的表达情况;每组剩余的3只大鼠,采用TUNEL法检测大鼠右侧脑缺血半暗带区细胞凋亡情况.结果 与S组比较,I/R组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,右侧脑缺血半暗带区凋亡指数升高,HSP60、TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达均上调(P＜0.05);与I/R组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,右侧脑缺血半暗带区凋亡指数降低,HSP60、TLR4、MyD88蛋白及mRNA表达均下调(P＜0.05).结论 异氟醚预处理可保护脑缺血再灌注大鼠缺血半暗带,其机制可能与抑制大鼠脑缺血半暗带TLR4-MyD88信号通路有关.     

线粒体KATP通道介导七氟醚预处理对大鼠的脑保护作用

目的 探讨七氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(IR)损伤的保护作用.方法 雄性SD大鼠60只随机均分为七氟醚预处理组(S组)、5-HD+七氟醚预处理组(HS组)、5-羟葵酸(5-HD)组(H组)、IR组和假手术组(C组).采用大脑中动脉线栓法缺血2 h、再灌注24 h制备大鼠局灶性脑IR模型(MCAO).S组于缺血前1 h经半密闭的吸入箱吸入七氟醚(呼气末浓度维持2.4%,持续30 min).HS、H组缺血前或七氟醚预处理前经尾静脉注射5-HD(10 mg/kg).再灌注24 h后用Zea Longa评分法进行神经功能缺陷评分,TTC染色法测大鼠脑梗死容积,免疫组化法测定大脑皮质Bcl-2和Bax蛋白表达.结果 与IR组比较,S组神经功能缺陷评分明显降低,脑梗死容积显著减少(P＜0.05);但HS、H、IR组神经功能缺陷评分和脑梗死容积差异无统计学意义.S组Bcl-2、Bax表达明显高于HS、H、IR组.结论 七氟醚预处理对局灶性脑IR损伤有一定程度的保护作用.其保护作用与mitoKATP通道的激活有关,并可能是通过调控凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达来实现.     

异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时TLR4和MyD88表达的影响

目的 评价异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注时Toll样受体4(TLR4)和髓样分化因子88(MyD88)表达的影响.方法 雄性成年SD大鼠54只,体重250～300 g,随机分为3组(n=18):假手术组(S组)仅分离血管,不留置线栓;脑缺血再灌注组(IR组)采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h,再灌注24 h;异氟醚预处理(IP组)吸入2%异氟醚,1h/d,连续5 d,处理结束后24 h时制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.再灌注24 h时进行神经功能缺陷评分,然后每组处死3只大鼠,测定脑梗死体积.分别于再灌注24、48和72 h时,处死5只大鼠,取右侧大脑缺血部位额叶皮质,采用Western blot法测定TLR4、MyD88和NF-κB的表达水平.结果 与S组比较,IR组和IP组神经功能缺陷评分升高,脑梗死体积增大,IR组TLR4、MyD88和NF-κB的表达均上调,IP组MyD88和NF-κB的表达上调(P＜0.05);与IR组比较,IP组神经功能缺陷评分降低,脑梗死体积减小,TLR4、MyD88和NF-κB的表达均下调(P＜0.05).结论 异氟烷预处理可通过抑制脑组织TLR4和MyD88的表达,减轻炎性反应,从而减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤.     

不同剂量乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的 探讨不同剂量乳化异氟醚预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响.方法 雄性SD大鼠96只,体重250～300 g,采用大脑中动脉线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型.大鼠随机分为6组(n=16),假手术组(S组)腹腔注射生理盐水(NS)10.5 ml/kg,24 h后只分离血管;缺血再灌注组(I/R组)腹腔注射NS 10.5 ml/kg,24 h后制备模型;低剂量乳化异氟醚预处理组(L组)、中剂量乳化异氟醚预处理组(M组)、高剂量乳化异氟醚预处理组(H组)和脂肪乳剂组(IL组)分别腹腔注射8%乳化异氟醚3.5 ml/kg+NS 7.0 ml/kg、8%乳化异氟醚7.0 ml/kg+NS 3.5 ml/kg、8%乳化异氟醚10.5 ml/kg和30%脂肪乳10.5 ml/kg,24 h后制备模型.于缺血前10 min和再灌注10 min时记录体温、心率和呼吸频率.再灌注24 h时行神经功能缺陷评分,然后取脑组织,测定脑梗死体积,行凋亡细胞计数,并观察脑组织病理学结果.结果 大鼠脑缺血再灌注时体温升高,心率加快,呼吸频率减慢.与S组比较,其余各组神经功能缺陷评分、脑梗死体积和凋亡细胞计数均升高(P＜0.05);与I/R组比较,L组、M组和H组神经功能缺陷评分、脑梗死体积和凋亡细胞计数均降低(P＜0.05),IL组差异无统计学意义(P＞0.05);L组、M组和H组神经功能缺陷评分、脑梗死体积和凋亡细胞计数依次降低(P＜0.05).结论乳化异氟醚可减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤,且呈剂量依赖性.