XCT790对缺氧、无血清及高糖诱导骨髓间充质干细胞凋亡的影响

目的：观察雌激素相关受体α（estrogen-related receptor α,ERRα）的特异性反向激动剂XCT790对无血清、缺氧及高糖诱导的C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：MSCs分为正常培养对照组（正常条件下培养）和0、5、10、20 μmol/L XCT790干预组（在3％ O2、无血清、25 mmol/L葡萄糖浓度条件下培养）,以流式细胞仪Annexin V/7-AAD双染法检测各组在缺氧、缺营养、高葡萄糖条件下的凋亡率;Western blot检测B淋巴细胞瘤-2 （B cell lymphoma-2,Bcl-2）和Bax蛋白表达水平,并计算其比值。结果：缺氧、无血清及高糖诱导24 h后,5 μmol/L XCT790干预组（20.02±0.92）%、10 μmol/L XCT790干预组（26.04±1.24）%、20 μmol/L XCT790干预组（50.73±3.55）% 的凋亡率明显高于0 μmol/L XCT790干预组（14.34±0.61）%,呈剂量依赖性（P<0.05）。Western blot显示,前凋亡蛋白Bax的表达5 μmol/L XCT790干预组（0.132 3±0.033 8）、10 μmol/L XCT790干预组（0.140 8±0.006 8）、20 μmol/L XCT790干预组（0.199 4±0.061 7）较0 μmol/L XCT790组（0.116 4±0.017 2）明显升高,而凋亡蛋白Bcl-2表达5 μmol/L XCT790干预组（0.069 7±0.013 2）、10 μmol/L XCT790干预组（0.051 2±0.005 6）、20 μmol/L XCT790干预组（0.041 3±0.005 5）较0 μmol/L XCT790组（0.092 3±0.021 3）明显降低（P<0.05）。Bcl-2/Bax比值5 μmol/L XCT790干预组（0.530 7±0.027 9）、10 μmol/L XCT790干预组（0.397 9±0.004 2）、20 μmol/L XCT790干预组（0.234 8±0.032 1）较0 μmol/L XCT790组（0.851 7±0.084 4）明显降低,呈剂量依赖性（P<0.05）。结论：缺氧、无血清及高糖诱导下,拮抗ERRα可以使MSCs的凋亡率和Bcl-2/Bax比例明显降低,提示ERRα在细胞耐受凋亡过程中可能发挥重要保护作用。     

姜黄素对人鼻咽癌CNE-2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨姜黄素对人鼻咽癌(NPC)CNE-2细胞增殖及凋亡的影响.方法 不同浓度(0、10、20、40、60 μmol/L)姜黄素处理NPC细胞株CNE-2,利用噻唑蓝(MTT)实验检测CNE-2细胞增殖活性,利用流式细胞仪检测CNE-2细胞周期及凋亡率,利用Hoechest33258荧光染色法观察细胞凋亡情况.结果 姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且随姜黄素浓度增加,CNE-2细胞抑制率呈上升趋势(P＜0.05),姜黄素作用CNE-2细胞24、48、72 h的半抑制浓度(IC50)分别为(23.54±0.36)、(18.31±0.42)、(8.56±0.37)μmol/L,即姜黄素可明显抑制CNE-2细胞增殖作用,且呈现明显浓度、时间依赖性;流式细胞检测结果显示,0、10、20、40、60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞,凋亡率随着姜黄素浓度增加而上升;荧光染色结果可见,CNE-2细胞未给予姜黄素处理,细胞呈圆形或者椭圆形,细胞核大小均匀一致,染色质分布均匀的淡蓝色荧光;10 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24h后,细胞胞体缩小,细胞核染色质凝聚,呈颗粒状亮蓝色荧光;20 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞出现胞体缩小,细胞核浓缩、染色质不均匀,出现凋亡小体,甚至出现核碎裂;40和60 μmol/L姜黄素处理CNE-2细胞24 h后,细胞凋亡小体数量增多,出现大量核碎裂.结论 姜黄素对NPC细胞株CNE-2细胞增殖具有明显抑制作用,且促进CNE-2细胞凋亡.     

Wnt/β-catenin/TCF-4信号通路调节livin表达在肾癌细胞增殖凋亡中的研究

目的：研究人肾癌细胞系786-0中Wnt/β-catenin/TCF-4通路与livin的关系,探索Wnt/β-catenin/TCF-4通路在肾癌细胞中的凋亡调节机制。方法：不同浓度吲哚美辛处理肾癌786-0细胞,CCK-8法检测各组细胞活性;流式细胞术检测各组细胞凋亡改变;荧光定量PCR检测β-catenin、TCF-4、caspase-3及livin转录水平变化;Western blot检测β-catenin、caspase-3及livin蛋白表达水平变化。结果：随吲哚美辛浓度增加,细胞活力降低,呈剂量-效应关系（P=0.000）。流式结果显示伴随吲哚美辛浓度升高,细胞凋亡逐渐增加,25 μmol/L组、50 μmol/L组和100 μmol/L组凋亡率分别为（32.07±1.01）%、（40.03±1.95）%和（72.33±0.02）%,与对照组比较差异存在统计学意义（P=0.000,P=0.002,P=0.000）。Real-time PCR结果显示,β-catenin、TCF-4和livin相对表达水平均呈下降趋势（P=0.002,P=0.000,P=0.000）,而caspase-3相对表达呈明显上升趋势（P=0.001）。Western blot分析显示在25 μmol/L组、50 μmol/L组和100 μmol/L组中β-catenin相对表达量分别为0.568±0.020（P=0.001）、0.396±0.030（P=0.000）、0.142±0.038（P=0.000）;livin相对表达量分别为0.139±0.016（P=0.005）、0.050±0.006（P=0.000）、0.011±0.001（P=0.000）;而caspase-3相对表达量分别为0.278±0.035（P=0.046）、0.396±0.071（P=0.000）、0.518±0.015（P=0.000）。结论：吲哚美辛介导的肾癌细胞中β-catenin/TCF-4降解可能导致livin的转录抑制和caspase-3表达水平的上调,进而诱导肾癌细胞凋亡。     

芍药苷通过抑制Notch-1信号通路影响肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡

摘要 目的 探讨芍药苷对肝癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法 使用不同浓度芍药苷（0、25、50、75、100、150 μmol/L）处理人肝癌细胞系HepG2,采用CCK-8 法检测细胞增殖活性。根据芍药苷浓度将HepG2细胞株分为四组：空白对照组（0 μmol/L）、低剂量组（25 μmol/ L）、中剂量组（50 μmol/L）和高剂量组（75 μmol/L）。采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Transwell 法细胞侵袭迁移能力,Western blot法测定细胞表达Notch-1和Hes-1的水平变化情况。结果 使用不同浓度（0、25、50、75、100、150 μmol/L）芍药苷处理HepG2 细胞24 h后,细胞增殖活性呈剂量依赖性降低[（100.00）％、（83.34±8.06）%、（74.46±7.34）%、（63.59±2.51）%、（55.93±4.05）%、（39.99±6.06）%,P＜0.05]。当根据不同芍药苷处理浓度（0、25、50、75 μmol/L）处理HepG2 细胞24 h后,细胞穿膜数逐渐降低[（85.33±5.51）;（64.33±5.13）;（49.67±3.51）;（30.00±2.00）,P＜0.05];细胞凋亡率逐渐升高[（2.43±0.93）%;（13.37±2.57）%;（22.64±2.19）%;（28.53±1.37）%,P＜0.05];Notch-1蛋白表达水平逐渐降低[（1.13±0.15）;（0.75±0.05）;（0.55±0.06）;（0.39±0.04）,P＜0.05];Hes-1蛋白表达水平也逐渐降低[（0.80±0.07）;（0.55±0.07）;（0.38±0.04）;（0.17±0.03）,P＜0.05]。结论 芍药苷呈剂量依赖性抑制肝癌细胞HepG2增殖、侵袭,并可促进细胞发生凋亡,其机制可能与Notch-1 信号通路相关。     

姜黄素改善N2a/APP695swe细胞线粒体功能和抑制细胞凋亡的作用

目的：观察姜黄素（curcumin）对N2a/APP695swe细胞线粒体形态和功能及细胞凋亡的影响;探讨其可能的神经保护机制。方法：实验细胞分为4个组：N2a/APP695组（WT）、N2a/APP695swe组（APP）、溶剂对照组（DMSO,5 μmol/L）、姜黄素组（Curcumin,5 μmol/L）。流式细胞术分别检测细胞凋亡、活性氧水平和膜电位水平、免疫细胞化学检测细胞色素C的表达、电镜观察细胞线粒体形态的改变,Western blot检测Caspase3、Caspase9蛋白表达,分光光度检测Caspase3、Caspase9酶活性。结果：流式细胞术结果显示,Curcumin组细胞的凋亡率、活性氧水平较APP组明显降低[（0.05±0.01） vs. （0.18±0.01）,P=0.000;（49.67±4.16） vs. （197.67±8.08）,P=0.000];而Curcumin组线粒体膜电位较APP组升高[（1.00±0.03） vs. （0.64±0.03）,P=0.000]。电镜结果发现姜黄素可以减轻线粒体的肿胀,改善其形态。同时免疫细胞化学结果显示姜黄素减少了细胞色素C的释放。Western blot检测发现,与APP组相比,Curcumin组Caspase3、Caspase9蛋白的表达均降低[（0.62±0.12） vs. （1.39±0.10）,P=0.000;（0.64±0.20） vs. （1.78±0.03）,P=0.000];并且Curcumin组较APP组的Caspase3与Caspase9的活性明显降低[（0.66±0.04） vs. （2.12±0.06）, P=0.000;（0.58±0.04） vs. （0.93±0.03）, P=0.000]。结论：姜黄素能抑制N2a/APP695swe细胞的凋亡,其机制可能与改善线粒体功能有关。     

姜黄素影响N2a/APP695swe细胞中ABCA1表达的机制研究

目的：研究姜黄素（Curcumin）对N2a/APP695swe细胞钙调神经磷酸酶（Calcineurin,CaN）活性和三磷酸腺苷结合转运子A1（ATP-binding cassette transporter A1,ABCA1）表达的影响;探讨Curcumin影响N2a/APP695swe细胞中ABCA1表达的可能机制。方法：MTT法分别检测1、5、10、20、40 μmol/L Curcumin或0.1、0.5、1、2、4 μmol/L CaN活性抑制剂环孢素A（Cyclospo－rinA,CsA）对N2a/APP695swe细胞存活率的影响;依据MTT筛选结果,分为正常对照组、模型组、Curcumin组：5 μmol/L Cur－cumin处理24 h的N2a/APP695swe细胞、CsA组：0.5 μmol/L CsA处理48 h的N2a/APP695swe细胞。酶底物显色法检测CaN活性,real-time PCR、Western blot检测ABCA1表达水平的变化。结果：与未处理组比较,5 μmol/L Curcumin组细胞存活率[（110.495±4.005）%]最高（P=0.023）;0.1、0.5、1、2、4 μmol/L CsA组细胞存活率依次为（105.532±4.292）%、（115.211±4.826）%、（76.317±4.475）%、（69.177±5.267）%、（54.687±3.912）%,与未处理组比较,0.5、1、2、4 μmol/L CsA组差异均有统计学意义（P值依次为0.001、0.000、0.000、0.000）;酶底物显色法显示与正常对照组[（18.519±1.664） nmol/mg]比较,模型组CaN活性[（24.488±3.041） nmol/mg]增加（P=0.007）,Curcumin组[（16.717±2.055） nmol/mg]、CsA组[（4.928±1.232）nmol/mg] CaN活性明显受到抑制（P值依次为0.002、0.000）;real-time PCR和Western blot显示Curcumin组ABCA1表达量（real-time PCR：1.988±0.355;West－ern blot：0.294±0.015）高于模型组（real-time PCR：1.000±0.000;Western blot：0.175±0.008）,差异有统计学意义（real-time PCR：P=0.009;Western blot：P=0.000）;与模型组比较,CsA组（real-time PCR：4.000±0.464;Western blot：0.470±0.016）的ABCA1表达水平增加（real-time PCR：P=0.000;Western blot：P=0.000）。结论：Curcumin能上调N2a/APP695swe细胞中ABCA1的表达,其机理可能与抑制CaN活性有关。     

白藜芦醇对鼻咽癌细胞株 CNE-2Z 增殖和凋亡的影响

目的　探讨白藜芦醇 (resveratrol,Res)对鼻咽癌细胞株 CNE- 2 Z增殖和凋亡的影响。方法　采用 MTT法检测 IC50 值 ,流式细胞术、Hoechst 332 5 8/PI荧光染色和 DNA琼脂糖凝胶电泳分析细胞凋亡。结果　不同浓度Res分别处理细胞 2 4 ,4 8和 72 h,其 IC50 值分别为 (10 9.2± 7.5 ) ,(83.6± 6 .0 ) ,(5 4 .3± 2 .8) μmol/L,各 IC50 值间比较差异显著 (P<0 .0 1)。2 5 ,5 0 ,10 0和 2 0 0 μm ol/L Res分别处理细胞 2 4 h后 ,5 0 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组经流式细胞术和荧光染色检测出的细胞凋亡率均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,荧光染色可见典型的凋亡形态学改变 ,10 0 ,2 0 0 μmol/L Res处理组可见明显的 DNA梯带。结论　 Res可通过诱导 CNE- 2 Z细胞株凋亡而抑制其增殖。     

硫链丝菌肽对人喉癌Hep-2细胞生长及FoxM1表达的影响

目的研究硫链丝菌肽(thiostrepton,TST)对人喉癌Hep-2细胞株增殖能力及FoxM1表达的影响。方法用MTT法测定TST作用于人喉癌Hep-2细胞48 h的增殖抑制率;通过流式细胞仪(FCM)检测不同浓度TST分别作用于Hep-2细胞48 h后对其细胞周期动力学的影响;采用免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blot检测Hep-2细胞中FoxM1mRNA及蛋白表达,以及不同浓度TST作用于Hep-2细胞48 h FoxM1蛋白表达的变化。结果不同浓度(1、2、4、8、12、16μmol/L)TST作用于Hep-2细胞48 h后的增殖抑制率分别为5.27%、9.43%、20.25%、41.61%、67.96%、96.95%;浓度分别为2、3μmol/L的TST作用于Hep-2细胞48 h后,均使Hep-2细胞停滞于G1/G0期(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.05);同时将TST作用于Hep-2细胞48 h后,经免疫细胞化学法、RT-PCR和Western blot均检测到FoxM1 mRNA及蛋白在Hep-2细胞中表达显著降低(P<0.05)。结论 TST对人喉癌Hep-2细胞株具有明显的增殖抑制作用,其可能机制是与降低肿瘤细胞中FoxM1蛋白表达有关。     

雌二醇对人羊膜间充质干细胞增殖、凋亡的影响

目的：研究不同浓度雌二醇（estradiol,E2）对人羊膜间充质干细胞（human amniotic mesenchymal stromal cells,HAMSCs）体外培养中增殖、凋亡的影响。方法：采用改良酶消化法提取HAMSCs,流式细胞学方法和免疫荧光法鉴定提取细胞。HAMSCs培养方法分为对照组和E2组（分别加入浓度为10-5、10-6、10-7、10-8 mol/L E2）。CCK-8检测各组HAMSCs增殖情况;qRT-PCR检测干细胞特异基因Oct-4和凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达。结果：CCK-8检测显示各浓度E2组和对照组的HAMSCs增殖活性在1~6 d都随时间的变化而变化（F时间=2 418.132,P时间=0.000）;各浓度E2组在1~4 d的增殖率与对照组无明显差异;4 d后,各浓度E2组的增殖率明显高于对照组（F组别=246.601,P组别=0.000）,各浓度组间无明显差异。qRT-PCR检测显示10-6 mol/L E2组（1.00±0.10）的Oct-4 mRNA表达水平较对照组（0.58±0.16）和其他E2浓度组（1.31±0.22、0.81±0.04、0.78±0.07）上调（P=0.000,P=0.020,P=0.001,P=0.000）;除10-6 mol/L E2组（0.83±0.47,P=0.084）外,其他E2浓度组（0.49±0.25、0.38±0.19、0.32±0.10）抗凋亡基因Bcl-2基因表达量均较对照组（1.06±0.13）下调（P=0.038,P=0.015,P=0.010）。10-5 mol/L E2组（2.20±0.58）的Bax基因较对照组、其他E2浓度组（1.00±0.05、1.52±0.38、1.38±0.17、1.17±0.19）上调（P=0.001,P=0.028,P=0.012,P=0.003）。Western blot检测提示10-5 mol/L E2组（0.514±0.014）的促凋亡蛋白表达Bax较对照组（0.201±0.017）明显上调（P=0.000）,而抗凋亡蛋白Bcl-2（0.366±0.024）与对照组（0.215±0.080）之间差异无统计学意义（P=0.055）。而10-6 mol/L E2组（0.378±0.016）的促凋亡蛋白Bax较其他浓度E2组（0.514±0.014、0.547±0.036、0.577±0.028）表达降低（P=0.000）。结论：E2促进HAMSCs的增殖呈时间依赖性,高浓度E2（10-5 mol/L）促进HAMSCs凋亡,较高浓度E2（10-6 mol/L）维持HAMSCs活性并保护其分化潜能。     

小檗碱体内外对人鼻咽癌细胞CNE-2生长的抑制作用

目的观察小檗碱体内外对人鼻咽癌CNE-2细胞生长的影响,探讨小檗碱的抗肿瘤作用机制。方法MTT法测定小檗碱对CNE-2细胞生长的抑制作用;流式细胞仪检测小檗碱对CNE-2细胞凋亡和周期的影响;透射电镜观察CNE-2细胞经小檗碱处理后凋亡形态变化;Westernblotting法检测小檗碱对CNE-2细胞的细胞周期相关蛋白(cyclin)B1、CDK1、cdc25c表达的影响;3H-胸腺嘧啶(3H-TdR)和3H-亮氨酸(3H-Leu)标记前体掺入法检测小檗碱对CNE-2细胞DNA和蛋白质合成的影响;利用荷人鼻咽癌的裸鼠模型验证小檗碱的体内抗肿瘤作用。结果小檗碱能抑制CNE-2细胞生长,48h的半数抑制浓度(IC50)为(49.5±5.8)μmol/L,72h的IC50为(13.3±2.0)μmol/L;小檗碱能抑制CNE-2细胞DNA和蛋白质合成;小檗碱能诱导CNE-2细胞凋亡,细胞经过25.0μmol/L小檗碱处理48h后的凋亡指数为(48.9±10.4)%;50.0μmol/L小檗碱能诱导CNE-2细胞G2/M期阻滞,并且下调细胞周期相关蛋白B1、CDK1、cdc25c表达;小檗碱能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞在裸鼠体内的生长,30mg/kg剂量组的肿瘤体积中位数为317.9mm3,明显低于对照组(P<0.05)。结论小檗碱体内外均能抑制人鼻咽癌CNE-2细胞的生长,其抗肿瘤作用可能与其诱导细胞周期阻滞和凋亡,下调相关细胞周期蛋白有关。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。