解毒祛瘀方联合化疗对MCF-7人乳腺癌细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达的影响

目的: 观察解毒祛瘀方联合化疗对MCF-7人乳腺癌细胞凋亡和Bcl-2/Bax表达的影响。 方法: 采用MTT法测定药物对MCF-7细胞增殖抑制作用;流式细胞术双标法检测细胞凋亡指数;免疫细胞化学检测Bcl-2,Bax的表达状况。 结果: 解毒祛瘀方能够抑制MCF-7细胞的增殖,且对时间、药物浓度呈依赖关系;对化疗有增效作用。通过流式细胞术双标法检测发现解毒祛瘀方对诱导早期MCF-7细胞凋亡更有优势;在分子蛋白层面上,解毒祛瘀方可以明显降低MCF-7细胞Bcl-2的表达,且对时间、药物浓度呈依赖关系;Bax表达与对照组比较则无明显差异;Bcl-2/Bax呈下降趋势。 结论: 解毒祛瘀方能抑制肿瘤细胞增殖,促进凋亡,并对化疗有增效作用,降低Bcl-2表达是其可能机制之一。     

解毒祛瘀方对乳腺癌细胞MCF-7/ADM的耐药逆转作用

目的:研究解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM耐药逆转的作用及机制。方法:以MCF-7/ADM细胞为研究对象,利用噻唑蓝(MTT)比色法检测解毒祛瘀方对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM生长的影响;应用流式细胞术检测肿瘤细胞内罗丹明123(Rh-123)的含量;分别利用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤细胞内多药耐药蛋白1(MDR1),乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)mRNA及蛋白表达变化。结果:与空白组比较,经1.25,2.5 g·L~(-1)解毒祛瘀方作用后,阿霉素对人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM的逆转倍数(RF)分别提升1.7倍和3.0倍(P0.05);人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM中Rh-123含量分别提高了1.8倍和2.5倍(P0.05),MDR1和BCRP蛋白和mRNA表达水平明显下降(P0.05),1.25,2.5 g·L~(-1)解毒祛瘀方MDR1 mRNA表达分别降低35.5%和56.0%(P0.05),BCRP mRNA表达分别降低41.6%和49.5%(P0.05)。结论:解毒祛瘀方可提高人乳腺癌耐药细胞MCF-7/ADM对阿霉素的敏感性,逆转该细胞对阿霉素的耐药性,其机制可能与降低MDR1和BCRP蛋白和mRNA的表达,抑制细胞药物外排作用相关。     

羽扇豆醇抑制乳腺癌 MCF-7增殖迁移和侵袭及机制研究

目的 探讨羽扇豆醇抑制乳腺癌MCF-7增殖迁移和侵袭及可能机制。方法 以人乳腺癌MCF-7细胞为对象,根据加入羽扇豆醇的浓度不同分为不同组(羽扇豆醇最终质量浓度分别为0、7.5、15、30、60、90 mg/L),以MTT法检测培养24 h后细胞增殖情况,划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR法检测Wnt/β-catenin信号通路下游基因表达,蛋白免疫印迹法检测细胞周期蛋白D1(cyclin-D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、C-myc、β-联蛋白(β-catenin)蛋白表达。结果 不同浓度羽扇豆醇下MCF-7细胞存活率、迁移率及侵袭细胞数量均明显不同,比较差异有统计学意义(P<0.05),与对照组(羽扇豆醇0.00 mg/L,即不加入羽扇豆醇)比较,加入7.5、15、30、60、90 mg/L羽扇豆醇组细胞的存活率、迁移率、侵袭细胞数量均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05);不同浓度羽扇豆醇下MCF-7细胞中Wnt、cyclin-D1、MMP-2、C-myc、β-catenin基因蛋白表达量明显不同,比较差异有统计学...     

紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖及凋亡的影响

目的观察复方中药紫龙金对人乳腺癌细胞系MCF-7增殖的抑制作用及对其凋亡的诱导作用,探讨紫龙金治疗乳腺癌的作用机制。方法依据培养液紫龙金浓度的差异,实验共设4组:(1)对照组:不加紫龙金干预的1640培养液;(2)紫龙金低浓度组:1.5 mg生药/mL紫龙金培养液;(3)紫龙金中浓度组:3 mg生药/mL紫龙金培养液;(4)紫龙金高浓度组:6 mg生药/mL紫龙金培养液。采用细胞计数法绘制生长曲线及四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度紫龙金对MCF-7细胞增殖能力的影响,并应用流式细胞术、Hoechst 33342核染色法及DNA梯度形成法测定紫龙金诱导凋亡的作用。结果(1)与对照组比较,紫龙金各剂量组的细胞计数在各时间点(24、48、72、96、120、144 h)明显减少,其差异均有统计学意义(P0.05);紫龙金各剂量组间的生长抑制率差异除低、中浓度组间在24、72 h无统计学意义外(P0.05),各剂量组间两两比较在不同时间点(24、48、72、96、120、144 h),其差异均有统计学意义(P0.05)。紫龙金对MCF-7细胞的增殖抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性;(2)紫龙金使细胞阻滞在G_0/G_1期;(3)中、高浓度紫龙金诱导MCF-7细胞凋亡,并形成DNA ladder。结论紫龙金能抑制人乳腺癌细胞MCF-7细胞增殖,并诱导细胞凋亡,从而起到抗肿瘤的作用。     

苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及细胞凋亡的影响

目的:研究苦参碱对人乳腺癌MCF-7细胞自噬及凋亡的影响,并分析其机制,探索二者之间潜在的关系。方法:采用MTT法和Annexin V/PI双染法检测细胞增殖活力和凋亡率;自噬双标腺病毒法(mRFP-GFP-LC3)和透射电镜法检测细胞自噬水平;Western Blot检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3及凋亡相关蛋白Caspase-3、cleavedCaspase-3、cleaved-Caspase-9的表达;运用自噬抑制剂(3-MA)和凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)对上述相关指标进行干预。结果:苦参碱在未加入抑制剂干预的情况下可显著抑制MCF-7细胞的增殖,提高凋亡率和自噬水平,可上调自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和凋亡相关蛋白cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase9的表达(P<0.05或P<0.01)。加入自噬抑制剂(3-MA)后,细胞存活率显著降低,凋亡率显著升高(P<0.05);加入凋亡抑制剂(Z-VAD-FMK)后,自噬水平显著升高(P<0.05)。结论:苦参碱可诱导人乳腺癌MCF-7细胞凋亡和细胞自噬,二者之...     

解毒祛瘀滋阴方对巨噬细胞吞噬细菌的影响

目的:观察解毒祛瘀滋阴方对糖皮质激素造成的免疫抑制的RAW264.7巨噬细胞吞噬功能的影响。方法:通过构建YFP-PGEX-4T-1载体并转化,制备能够产生荧光的大肠杆菌BL21。应用不同浓度的地塞米松以及解毒祛瘀滋阴方干预后,加入大肠杆菌,观察巨噬细胞吞噬细菌的情况。结果:转化YFP-PGEX-4T-1载体后,大肠杆菌能够发出荧光。经不同浓度的地塞米松作用后,RAW264.7细胞吞噬能力减弱,加用解毒祛瘀滋阴方后,吞噬能力有一定程度的恢复。结论:解毒祛瘀滋阴方可以增强糖皮质激素造成的免疫抑制的RAW264.7巨噬细胞吞噬功能,这可能是解毒祛瘀滋阴方可以减少SLE患者继发感染的原因之一。     

苦瓜皂苷对人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用的影响

目的 研究苦瓜皂苷抑制乳腺癌MCF-7细胞的作用及其诱导凋亡的机制.方法 采用MTT法观察苦瓜皂苷对MCF-7细胞的生长抑制作用;HE染色观察皂苷作用后癌细胞的形态学变化;免疫荧光染色检测Bcl-2的阳性表达率变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡率.结果 MTT法得到苦瓜皂苷与MCF-7细胞生长抑制率之间存在浓度依赖关系,半数致死量IC50为159.02 mg/L;HE染色观察到经苦瓜皂苷作用24h后的MCF-7细胞出现典型的凋亡形态学特征;免疫荧光检测到苦瓜皂苷作用细胞24h后,Bcl-2的阳性表达率为22.35％,远小于对照组75.61％;流式细胞术表明苦瓜皂苷处理细胞后,S期细胞数明显增加,细胞周期被阻滞在S期,随着皂苷作用时间的延长细胞凋亡率增加.结论 苦瓜皂苷可抑制体外培养MCF-7细胞乳腺癌细胞的增殖,其抑制作用与细胞凋亡机制有关.     

益气活血方对乳腺癌MCF-7细胞系增殖侵袭能力及miR-100表达水平影响的研究

目的:探讨益气活血方对乳腺癌MCF-7细胞系增殖侵袭能力及microRNA-100(miR-100)表达水平的影响。方法:取对数生长期的MCF-7乳腺癌细胞,将益气活血方以培养液稀释调整为20、40、80 mg/L培养细胞,设置高、中和低浓度组,并以不含药物的相同培养液培养细胞为对照组。分别采用qRT-PCR检测miR-100的表达水平; MTT法检测细胞增殖; Transwell小室法检测细胞侵袭; 并采用Western blot法检测细胞增殖相关蛋白特异性周期蛋白D1(Cyclin D1)和侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达水平。结果:与对照组相比,实验组miR-100表达水平升高; 且与较低浓度组相比,较高浓度组miR-100表达水平亦呈上升趋势(均P<0.05)。与对照组相比,实验组细胞增殖抑制率和侵袭抑制率明显升高,且与较低浓度组相比,较高浓度组各抑制率均亦呈上升趋势(均P<0.05)。同时,与对照组相比,实验组Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平明显降低,且与较低浓度组相比,较高浓度组Cyclin D1和MMP-9蛋白表达水平亦呈下降趋势(均P<0.05)。结论:益气活血方可抑制乳腺癌细胞的增殖和侵袭。其机制可能与益气活血方可提高miR-100表达水平、降低Cyclin D1和MMP-9表达水平相关。     

人参蛋白质对乳腺癌MCF-7细胞的影响

目的研究人参蛋白质对乳腺癌MCF-7细胞的影响。方法采用CCK-8法测定不同质量浓度(0、0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 mg/mL)人参蛋白质分别作用MCF-7细胞24、48、72 h后的细胞增殖抑制;采用流式细胞术检测人参蛋白质处理48 h后细胞的周期;采用DAPI染色法观察人参蛋白质处理48 h后的细胞凋亡形态;Annexin V/FITC双染法检测人参蛋白质处理48 h后的细胞凋亡。结果人参蛋白质能抑制MCF-7细胞的增殖,且呈浓度及时间依赖性,作用24、48、72 h后的IC₅₀值分别为5.21、2.60、1.11 mg/mL。人参蛋白质可将MCF-7细胞周期阻滞在G1期,并能诱导MCF-7细胞的凋亡。结论人参蛋白质对人乳腺癌MCF-7细胞具有显著地抗肿瘤作用。     

异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制

目的 探讨异长春花碱抑制人乳腺癌细胞转移侵袭的作用及其机制.方法 人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞分别用异长春花碱1、10 μmol/L处理后,MTS法检测细胞黏附能力,Transwell法检测细胞侵袭能力,ELISA法检测细胞转移生长因子-β (TGF-β)分泌的变化,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(MMP)-2和MMP-9活性,Western blotting法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素、MMP-2、MMP-9、p-JNK及p-Akt蛋白的表达,RT-PCR法检测肿瘤细胞E-钙黏素、N-钙黏素及MMP-2、MMP-9基因的表达,双荧光素酶报告基因实验考察AP-1和核因子-κB (NF-κB)活性的变化.结果 异长春花碱1、10 μmol/L给药后,细胞黏附能力:MCF-7细胞分别下降34.8％、66.8％,MDA-MB-435细胞分别下降42.6％、72.3％;侵袭能力:MCF-7细胞分别下降44.4％、72.2％,MDA-MB-435细胞分别下降47.7％、86.4％; TGF-β分泌:MCF-7细胞分别下降28.2％、52.1％,MDA-MB-435细胞分别下降39.0％、55.1％;E-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别上调86.5％、181.6％,MDA-MB-435细胞分别上调116.6％、160.7％; N-钙黏素基因表达:MCF-7细胞分别下降33.7％、74.1％,MDA-MB-435细胞分别下降57.6％、76.9％; MMP-2基因表达:MCF-7细胞分别下降71.6％、88.4％,MDA-MB-435细胞分别下降57.4％、69.4％; MMP-9基因表达:MCF-7细胞分别下降15.0％、84.0％,MDA-MB-435细胞分别下调22.1％、73.0％;E-钙黏素蛋白表达显著上调,N-钙黏素蛋白表达明显下调,MMP-2和MMP-9及p-JNK、p-Akt蛋白表达显著下降;AP-1活性:MCF-7细胞分别下降27.7％、68.2％,MDA-MB-435细胞分别下降34.8％、71.4％; NF-κB活性:MCF-7细胞分别下降18.4％、44.8％,MDA-MB-435细胞分别下降24.4％、51.9％.结论 异长春花碱可抑制人乳腺癌MCF-7和MDA-MB-435细胞体外侵袭能力,其机制可能与下调肿瘤转移相关信号通路及上皮间质转化表达有关.     

淫羊藿素对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞作用的影响

目的:探讨淫羊藿素(ICT)对雌激素依赖性乳腺癌MCF-7细胞的作用.方法::以在37℃、5％ CO2培养箱培养的人乳腺癌MCF-7为研究对象,用不同浓度的淫羊藿素单独作用及与雌二醇联合作用,测定人乳腺癌MCF-7细胞的增殖率,并检测该过程中雌激素受体ERα的表达情况.结果:当ICT浓度大于1×10-10mol·L-1时单独使用能促进ERα阳性人乳腺癌MCF-7细胞增殖,能诱导ERα基因的表达;淫羊藿素与雌二醇联合作用抑制MCF-7细胞增殖,抑制ERα的表达.结论:淫羊藿素与雌二醇联合作用具有抑制E2诱导的人乳腺癌MCF-7细胞增殖作用;淫羊藿素与雌二醇联合作用可抑制ERα基因的表达.     

“固本解毒祛瘀”方药联合化疗治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

[目的]观察"固本解毒祛瘀"方药联合化疗治疗非小细胞肺癌(NSCLC)患者疗效观察。[方法]将80例非小细胞肺癌患者随机分为两组,对照组40例采用单纯化疗加对症治疗,治疗组40例在对照组基础上加用"固本解毒祛瘀"方药治疗,比较两组外周血常规、血T淋巴细胞亚群及卡氏(KPS)评分。[结果]与治疗前相比较,治疗组与对照组血WBC、HGB和PLT均减低(P0.05),而对照组减低更明显(P0.05);与治疗前比较,治疗组在CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+较治疗前明显上升,有显著差异(P0.01),而对照组治疗后CD3~+水平下降,与治疗前比较,有显著性差异(P0.05);KPS评分治疗组治疗前后组内比较,差异有统计学意义(P0.05)。[结论]"固本解毒祛瘀"方药可以减轻晚期NSCLC化疗患者骨髓抑制,增强免疫功能及改善生存质量。     

祛瘀解毒益气方对脓毒症患者炎症细胞因子的影响

目的观察祛瘀解毒益气方对脓毒症患者炎症因子的调节作用。方法将80例脓毒症患者随机分为治疗组（祛瘀解毒益气方加常规治疗）和对照组（常规治疗）,各40例,疗程均为14d;观察两组治疗前后急性生理学与慢性健康状况评价（APACHEⅡ评分）和血清TNFα-、IL-10含量的变化。结果治疗后两组APACHEⅡ评分和血清TNF-α、IL-10含量均明显降低（P〈0.05）,且治疗组的降低较对照组显著（P〈0.05）。结论祛瘀解毒益气方能改善脓毒症患者病情,减轻炎症反应。     

解毒祛瘀滋阴方冻干粉和含药血清对小鼠单核巨噬细胞的影响

目的探讨解毒祛瘀滋阴方冻干粉与含药血清对脂多糖(LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7炎症信号通路的影响。方法体外培养RAW264.7细胞,随机分为对照组、LPS组、解毒祛瘀滋阴方含药血清组、冻干粉组、LPS加含药血清组及LPS加冻干粉组。干预24 h后,采用CCK-8法筛选含药血清和冻干粉的最佳浓度并检测二者对细胞活力的影响;采用ELISA法测定细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;采用q RT-PCR法检测核转录因子-κB(NF-κB)、TNF-αm RNA的表达;采用Western blotting法检测NF-κB蛋白表达水平;采用LC-MS检测解毒祛瘀滋阴方含药血清中的有效成分。结果与对照组比较,LPS刺激组TNF-α炎性因子水平、NF-κB、TNF-αm RNA表达水平和NF-κB蛋白表达水平显著升高(P0.05),含药血清组TNF-α炎性因子水平、NF-κB、TNF-αm RNA表达水平和NF-κB蛋白表达水平较冻干粉组降低明显(P0.05);与LPS组比较,LPS加含药血清组TNF-α炎性因子水平、NF-κB、TNF-αm RNA表达水平和NF-κB蛋白表达水平降低较LPS加冻干粉组明显(P0.05);解毒祛瘀滋阴方含药血清中检测到芍药苷和阿魏酸。结论解毒祛瘀滋阴方冻干粉和含药血清均具有抑制炎症信号通路的作用。     

解毒祛瘀滋阴法对系统性红斑狼疮发病中CD28/B7表达的影响

目的:探讨CD28/B7在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用及解毒祛瘀滋阴法治疗SLE的分子免疫学机制。方法:63例SLE患者随机分为两组:西医组(32例)采用强的松、环磷酰胺治疗;中西医结合组(31例)采用解毒祛瘀滋阴法联合强的松、环磷酰胺治疗,均治疗3个月。另选20例健康女性作为正常对照。运用流式细胞仪检测外周血单个核细胞(PBMC)表面CD28、B7-1、B7-2的表达水平。结果:与正常对照组比较,治疗前不同病情SLE患者PBMC表面CD28的表达水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),而B7-1和B7-2的表达明显增加(P<0.01)。治疗后中西医结合组能显著降低B7-1、B7-2的表达(P<0.05,P<0.01),升高CD28的表达(P<0.01),且B7-2分子的改善优于治疗后西医组(P<0.05)。同时SLE患者PBMC表面B7-2分子表达水平与SLE病情活动指数呈直线正相关(r=0.76,P<0.01);B7-1及CD28与SLEDAI无明显相关性。结论:CD28/B7共刺激途径在SLE的发生和发展过程中起着重要作用,通过影响CD28/B7共刺激信号传导可能是解毒祛瘀滋阴法治疗SLE的机理之一。     

解毒祛瘀方联合化疗对EMT-6乳腺癌细胞株凋亡和COX-2表达的影响

目的观察解毒祛瘀方联合化疗对EMT-6乳腺癌细胞移植瘤小鼠细胞株凋亡和COX-2表达的影响。方法 BALB/c小鼠接种乳腺癌细胞株EMT-6,造模成功后分为模型组、解毒祛瘀方组、化疗组、解毒祛瘀方加化疗组,每组10只,分别给予相应药物干预,共用药14天,停药后24h处死动物取材;计算抑瘤率,应用流式细胞术双标法检测其细胞凋亡率,应用免疫组化技术检测各干预组对EMT-6乳腺癌细胞中COX-2蛋白表达的影响。结果与解毒祛瘀方组比较,化疗组对乳腺癌小鼠抑瘤率较高,差异有统计学意义（P〈0.05）;与解毒祛瘀方组和化疗组比较,解毒祛瘀方加化疗组对乳腺癌小鼠抑瘤率最高,差异有统计学意义（P〈0.05）。解毒祛瘀方组能诱导EMT-6乳腺癌细胞凋亡,作用较化疗组弱,而解毒祛瘀方加化疗组则能够进一步增强化疗药物对凋亡的影响。与模型组比较,各用药组COX-2表达均降低,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）;与解毒祛瘀方组、化疗组比较,解毒祛瘀方加化疗组COX-2的表达下调最明显,差异有统计学意义（P〈0.05,P〈0.01）。结论解毒祛瘀方联合化疗有一定抑瘤、促凋亡作用,其机制可能与下调乳腺癌细胞COX-2的表达有关。     

基于“肾主骨”理论探讨解毒祛瘀滋阴方治疗糖皮质激素性骨质疏松的作用机制

目的 基于“肾主骨”理论从“肾”的功能意义探讨解毒祛瘀滋阴方修复“肾”损伤治疗糖皮质激素性骨质疏松（GIOP）的作用机制。方法 将40只雌性C57BL/6小鼠随机分为对照组（Control）、模型组（Model）、解毒祛瘀滋阴方治疗组（JP）和阿仑膦酸钠治疗组（ALN），每组10只。Model组、JP组及ALN组给予地塞米松（5 mg/kg/d）肌注隔日给药造模，JP组及ALN组分别给予解毒祛瘀滋阴方[5 mg/（kg·d）]及阿仑膦酸钠混悬液[1.3 mg/（kg·d）]灌胃给药，连续12周。小鼠腿骨用MicroCT扫描观察骨状况[骨密度（BMD）及骨体积分数（BV/TV）、平均骨小梁宽度（Tb.Th）、骨小梁数目（Tb.N）、平均骨小梁分离度（Tb.Sp）]指标及建立股骨远端平扫图像；ELISA法检测各组小鼠血促肾上腺皮质激素释放激素（CRH）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质醇（CORT）；测量肾脏重量并观察组织形态学变化。结果 与Control组比较，Model组小梁显著减少、结构变薄，BMD、BV/TV、Tb.Th、CRH、ACTH、CORT水平降低、肾脏重量下降（P<...