植块法体外培养大鼠肾小球系膜细胞

肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)是肾脏领域开展一系列基础研究的重要平台,已日益受到重视.然而尽管GMC的原代培养技术已较成熟,但我们发现采用经典的培养方法仍存在许多技术上的瓶颈,成功率并不高.为此,我们实验室尝试采用植块法培养大鼠GMC,取得了满意的结果,现介绍如下.     

中医药对肾小球系膜细胞作用机理的探讨

肾小球系膜细胞 (GMC)属于肾脏血管周固有细胞 ,在正常情况下 ,GMC的数量、形态和位置均保持相对稳定 ,其合成基质的能力也较小 ;但在异常时 ,GMC是肾小球肾炎发生发展过程中的主要靶细胞[1,2 ] ,GMC异常增生是多种肾脏疾病的主要形态表现和核心病理环节。随着分子生物学技术在中医药学中的深入研究 ,现已证实某些中药对GMC的异常增殖有抑制作用 ,这为中医药治疗以GMC增生为主要病理改变的肾小球疾病提供了理论依据。现将中医药对GMC的作用机理探讨如下。　　 1　调控GMC的基因表达GMC增殖时存在着bcl- 2、ICE两种基因的异常表…     

雷公藤多甙对肾小球系膜细胞细胞因子生成的影响

雷公藤多甙（TW）对大鼠肾小球系膜细胞（GMC）具有抑制增殖的作用[1],但TW对GMC细胞因子生成的影响尚未见报道。我们利用小鼠GMC体外培养技术,除采用直接加药方法外,还采用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆（S9）-多种功能氧化酶代替体内的代谢活化系统与药物共同孵育后[2],加入细胞培养体系中。在模拟体内药理效应的前提下,观察TW对GMC细胞因子生成的影响。     

系膜增生性肾炎的中药治疗研究进展

系膜增生性肾小球肾炎(MsPGN),是病理形态学诊断病名,特征为光镜下肾小球呈弥漫性系膜细胞(glomerular mesangial cell,GMC)增生、细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)增多,毛细血管壁正常,是我国最常见的原发性肾小球疾病,约占成人原发性肾小球疾病肾活检病例数的24.7%~30.3%[1]。本病发病机制尚未完全阐明,多数学者认为与遗传、黏膜免疫异常、免疫调节功能紊乱、细胞因子及免疫复合物     

体外肾系膜细胞对成骨细胞增殖及功能的影响

目的:从生长因子角度研究肾小球系膜细胞对成骨细胞增殖及功能的影响和机制。方法:应用体外细胞培养的方法,将成骨细胞分为正常血清组和系膜细胞组,分别予10%正常血清培养液及20%系膜细胞培养上清液。MTT法分别检测培养24、48、72、120 h后两组成骨细胞增殖情况;在培养72及144 h后检测上清液骨钙素(BGP)及骨桥蛋白(OPN)浓度;在培养144 h后检测培养液胰岛素样生长因子-α(IGF-α)、转化生长因子-β(TGF-β)的浓度。结果:在培养的各个时间点,系膜细胞组的成骨细胞增殖均明显高于正常血清组(P<0.05)。在培养72、144 h后,系膜细胞组BGP及OPN的浓度分别高于正常血清组11.3%、16.4%和55.0%、39.6%。在培养144 h后,系膜细胞组的IGF-α、TGF-β浓度比正常血清组分别增高10.1%和47.7%。结论:肾小球系膜细胞能直接作用于成骨细胞,促进成骨细胞的增殖及功能。这种作用可能是通过促进成骨细胞分泌TGF-β来实现的。     

细胞间粘附分子对肾小球系膜细胞增殖的影响

近年来免疫病理学研究已证实细胞间粘附分子-1(ICAM-1)作为细胞粘附分子中免疫球蛋白超家族成员之一,通过与炎性细胞表面同族型配体之间相互作用形成粘附,在免疫监督、炎症反应和动脉粥样硬化等过程中起着重要的作用。因此,有关ICAM-1与肾小球系膜细胞增殖的相关研究对进一步阐明肾小球炎性疾病的发病机理及治疗的进展具有重大意义。 一、材料与方法 1.按经典方法培养、鉴定C57BL/6小鼠肾小球系膜细胞及巨噬细胞,选取第4～6代细胞用于本实验。 2.取系膜细胞,胰酶消化后,将制成的浓度为1.0×10~4/L细胞悬液加入24孔培养板内,正常对照组和     

褐藻多糖硫酸酯对人肾小球系膜细胞增殖及纤连蛋白与转化生长因子分泌的影响

肾小球硬化是各种原因引起的肾小球损伤的晚期变化，是终末期肾衰的基本病变，而系膜细胞过度增殖和细胞外基质（EC-M）的积聚在肾小球硬化的发生中起重要作用。褐藻多糖硫酸酯（FPS）作为一种新的海洋药物用于治疗慢性肾功能衰竭。在降低Ser和BUN、抗凝血等方面有非常确切的疗效。我们通过人肾小球系膜细胞（GMC）体外培养，研究FPS对其细胞增殖和分泌纤连蛋白（FN）、转化生长因子β1（TGF-β1）的影响，以期从细胞水平探讨FPS对慢性肾功能衰竭的防治机制。     

重组大鼠肝再生增强因子对系膜细胞增殖及分泌转化生长因子β的影响

目的 探讨重组大鼠肝再生增强因子（rrALR)对大鼠肾小球系膜细胞在白介素1β（IL－1β）刺激下生物活性的变化。方法 用^3H-TdR掺入法检测大鼠肾小球系膜细胞（GMC）的增殖情况，用ELISA法检测大鼠肾小球系膜细胞培养上清中TGF－β蛋白的含量。结果 rrALR在0.005pg/ml到0.1ng/ml的浓度范围内对IL－1β刺激下的GMC的增殖以及TGF－β的分泌有促进作用，并呈一定量效关系。而rrALR与无IL－1β刺激的大鼠GMC共培养则与对照组差异无显著性意义。结论 rrALR可促进IL－1β刺激下的GMC增殖及TGF－β的产生，具有炎症协同作用，同时对不同靶细胞具有不同作用。     

磷脂酶D对高糖培养的肾小球系膜细胞骨架的影响

目的 研究高糖环境下肾小球系膜细胞（GMC）内磷脂酶D（PLD）的活性改变及其对细胞骨架的影响。方法 对高糖（30mmol/L)刺激48h的大鼠GMC，用酶联比色法测定磷脂酰胆碱专一性磷脂酶D（PC-PLD）活性，底物磷酸化法检测蛋白激酶C（PKC）的活性。用免疫荧光标记和共聚焦显微镜显示并测量F-actin的表达。结果 高糖刺激48h后，GMC内PC-PLD和PKC活性明显增高，而F-actin荧光表达减少，排列紊乱，给予PC-PLD抑制剂后，高糖培养的GMCPKC活性明显下降。F-actin的荧光表达和排列都得到显著改善。结论 高糖时PLD活性增高可以通过PKC途径影响GMC骨架的组装状态。改变系膜细胞收缩功能。     

肾小球系膜细胞体外培养技术的几点改进

肾小球系膜细胞是肾小球中最活跃的固有成分。系膜细胞的异常增殖并伴大量系膜基质积聚是各种增生性肾小球疾病的特征。多年以来 ,采用系膜细胞体外培养方法是研究肾小球疾病发病机理的常用方法之一。我们根据自己实验室的具体情况 ,选用家兔为实验动物 ,探索系膜细胞分离、培养、传代的适宜条件 ,获得了生长状态良好 ,生物学特性稳定 ,纯度较高的系膜细胞。资料与方法1　提取肾小球　取 3月龄日本产大耳白兔 1只 ,解剖取双肾皮质部位剪碎、研磨 ,分别通过重叠的 140目 (孔径为 110 μｍ)、80目 (孔径为 2 16 μｍ)的不锈钢筛网 ,平皿收集通…     

ICAM-1在肾小球系膜区炎症、增生过程中的作用及己酮可可碱的保护效应

目的：探讨细胞间粘附分子－1（ICAM）－1在肾小球系膜区炎症、增殖过程中的作用及己酮可可碱的保护效应。方法：采用体外肾小球系膜细胞与巨噬细胞共同培养的方法,观察抗ICAM－1MAb对巨噬细胞促进系膜细胞增殖的影响及己酮可可碱的保护效应。结果：抗ICAM－1MAb对巨噬细胞促进系膜细胞的增殖具有抑制作用,呈剂量依赖性;己酮可可碱可抑制TNF－α诱导的系膜细胞与巨噬细胞粘附。结论：ICAM－1参与、影响肾小球系膜区炎症、增殖的过程,己酮可可碱在肾脏疾病的防治中可能有一定的意义。     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物—1,—2及凝？…

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI1640培养12h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.     

转化生长因子-β1对肾小球系膜细胞TRPC6表达的影响

目的：观察转化生长因子-β1（TGF-β1）对体外培养的大鼠肾小球系膜细胞（GMC）瞬时受体势C6（TRPC6）表达的影响,并探讨糖尿病肾病（DN）的发病机制。方法：GMC予TGF—β1 10ng／ml刺激24h后,间接免疫荧光法检测GMC TRPC6的表达;免疫印迹法观察TRPC6的表达。结果：GMC存在TRPC6的表达,以细胞膜表达为主;TGF-β1刺激GMC可有TRPC6表达下调（P〈0．05）。结论：肾小球系膜细胞存在TRPC6的表达,TGF-β1刺激后TRPC6表达下调;TGF-β1可能通过下调TRPC6参与了DN的发病。     

Megsin与肾脏疾病

肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cell,GMC）是肾脏重要的固有细胞之一,维持着肾脏的组织结构和生理功能,具有产生细胞外基质（extracellular matrix,ECM）、分泌细胞因子（cytokine,CK）、吞噬和清除异物等多种功能,同时也参与了肾小球疾病尤其是系膜增生性疾病的发生、发展。Megsin是近10年来被新认识的GMC优势表达基因,本文就megsin与肾脏疾病的关系做一综述。     

ROS与肾小球系膜细胞增殖及细胞外基质积聚

肾小球系膜细胞(GMC)增生及细胞外基质(ECM)积聚是导致多种肾小球疾病进展的重要因素。ROS可通过激活相关的信号转导级联反应及转录因子等多种机制介导GMC增殖及ECM的积聚。完善对ROS作用机制的认识，可能会对临床诊疗产生积极的影响。     

肾小球系膜细胞,胞外基质及细胞因子与肾小球疾病

肾小球系膜细胞及其胞外基质，细胞因子在肾小球疾病的发生发展中有重要作用。ＭＣ研究需关注种属差异，ＭＣ培养有助于研究糖尿病，脂质性肾小球肾炎的病理过程。     

尿毒清对晚期糖基化终末产物作用下肾小球系膜细胞影响

目的观察尿毒清对晚期糖基化终末产物（advanced glycosylation end products, AGEs）作用下肾小球系膜细胞的影响,探讨中药尿毒清在治疗糖尿病肾脏疾病（diabetic kidney dis-ease,DKD）中对肾小球系膜细胞的保护作用。方法采用冻干牛血清白蛋白和糖制备无内毒素的AGE-BSA及人工培养牛肾小球系膜细胞,培养时分为3组,在加入终浓度为0.25 mg/ml AGEs 的同时给予浓度为0.2 mg/ml的尿毒清成分溶液为尿毒清组,加入终浓度为0.25 mg/ml AGEs 为 AGEs组,同时设空白对照组,应用 MTT比色法,观察尿毒清组对体外 AGEs 培养的牛肾小球系膜细胞增殖的影响;以系膜细胞与 Alcain Blue（AB,阿利新蓝）结合量为指标,观察尿毒清组对 AGEs导致的系膜细胞膜表面电荷的影响;利用 AO/EB染料观察尿毒清组对 AGEs 诱导作用下的牛肾小球系膜细胞凋亡的影响,并利用荧光显微镜观察尿毒清的抑制作用。结果尿毒清组可以有效地抑制 AGEs对牛肾系膜细胞的促进增殖作用;对抗 AGEs 诱导的牛肾小球系膜细胞表面电荷的影响;减少 AGEs诱导的牛肾小球系膜细胞凋亡。结论尿毒清组能减少对晚期糖基化终末产物作用下肾小球系膜细胞增殖和凋亡,保护肾小球系膜细胞表面电荷。     

多球壳菌素对肾小球系膜细胞肥大及细胞周期蛋白的影响

糖尿病肾病及高血压肾病会导致慢性肾功能衰竭（CRF），其病理改变为肾小球系膜细胞（GMC）肥大以及系膜基质的积聚，并最终导致肾小球硬化。目前尚缺乏有效的药物来阻滞肾脏病变的进展。临床观察表明虫草可延缓肾脏病变的进展。近年从虫草分离出多球壳菌素（ISP-1），该物质具有较强的免疫调节活性，有可能是虫草治疗肾病的物质基础。我们曾发现其可显著抑制GMC肥大及细胞外基质的分泌。由于细胞的肥大实际上是细胞周期运行的失常，因此我们以高糖诱导GMC肥大模型，旨在观察ISP-1对GMC肥大及细胞周期调控的影响，以探讨ISP-1的作用机制及意义。     

肾小球系膜细胞和上皮细胞的相互作用

了解肾小球系膜细胞（ＧＭＣ）和上皮细胞（ＧＥＣ）的相互作用。方法运用肾小球细胞体外培养方法和双同位素标记技术，观察阿霉素肾病大鼠ＧＭＣ条件培养液（ＧＭＣ－ＣＭ）对正常大鼠ＧＥＣ掺入３５Ｓ、３Ｈ－亮氨酸和３Ｈ－ＴｄＲ的影响，以及肾病大鼠ＧＥＣ－ＣＭ对正常大鼠ＧＭＣ掺入３Ｈ－ＴｄＲ的作用。结果肾病极期的ＧＭＣ－ＣＭ明显促进了ＧＥＣ增殖及合成含硫化合物、蛋白质的功能，反之肾病极期ＧＥＣ－ＣＭ则明显刺激了ＧＭＣ增殖。结论ＧＭＣ和ＧＥＣ可通过其可溶性产物相互作用。     

肾小球系膜细胞表达基质金属蛋白酶组织抑制物-1、-2及凝血酶调控的研究

目的探讨人肾小球系膜细胞基质金属蛋白酶组织抑制物(TIMP-1、-2)的表达及凝血酶对它们的调节作用,进一步阐明凝血酶促进肾小球损伤及硬化过程中的分子生物学机制.方法利用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)、Northern杂交和Western印迹等分子生物学方法,观察了凝血酶对体外培养的人肾小球系膜细胞表达TIMP-1、-2的诱导作用.结果在无血清RPMI 1640培养12 h后,RT-PCR、Northem和Western分析显示,系膜细胞可表达基础水平的TIMP-1、-2 mRNA及其蛋白质;凝血酶(0.5、1.5、4.5 HIU/ml)可浓度依赖性地上调系膜细胞TIMP-1、-2 mRNA的表达水平,Western印迹分析证明凝血酶还可以上调系膜细胞表达TIMP-1、-2蛋白水平;凝血酶的上述作用可被其特异性抑制物一水蛭素部分性阻断.结论正常人肾小球系膜细胞在基础状态下可以表达TIMP-1、-2,我们首次证实凝血酶在基因转录和蛋白质翻译水平促进系膜细胞表达TIMP-2,从而参与病理状态下肾小球内细胞外基质的异常代谢过程.