白血病细胞诱导分化过程中nm23-H1表达变化及其分子调控机制

目的 探讨在白血病细胞HL-60分化过程中nm23-H1、c-Myc、粒细胞集落刺激因子(G-CSF)的作用机制及相互关系,为临床治疗提供理论依据和治疗靶点.方法 CCK-8实验测定全反式维甲酸(ATRA)作用下的靶细胞增殖情况,瑞士-吉姆萨染色观察细胞形态学变化.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)或Western blotting测定nm23-H1、c-Myc和G-CSF的基因、蛋白表达水平.酶联免疫吸附试验(ELISA)测定ATRA诱导HL-60细胞分化过程中培养上清G-CSF水平的变化.结果 分别使用药物浓度为0.25、0.50、1.00、2.00和4.00 μmol/L的ATRA诱导HL-60细胞72 h,细胞增殖抑制率分别为(43.00±0.08)%、(49.55±2.30)%、(58.90±6.70)%、(64.60±4.70)%、(72.70±3.20)%,差异有统计学意义(F=69.887,P=0.000).在ATRA诱导下,细胞形态学证实HL-60细胞向成熟粒细胞方向分化.nm23-H1的mRNA相对表达量由0.79±0.03逐渐降低到0.52±0.09,差异有统计学意义(F=9.679,P=0.002),蛋白相对表达量由1.54±0.12逐渐降低到0.40±0.04,差异有统计学意义(F=90.140,P=0.000).c-Myc的mRNA相对表达量由0.95±0.05逐渐降低到0.46±0.05,差异有统计学意义(F=27.900,P=0.000),蛋白相对表达量由1.12±0.11逐渐降低到0.14±0.03,差异有统计学意义(F=115.500,P=0.000).而G-CSF的mRNA相对表达量由0.26±0.07逐渐升高到0.55±0.09,差异有统计学意义(F=7.817,P=0.004),细胞分泌水平由(13.67±7.51)pg/ml逐渐升高到(128.30±25.77)pg/ml,差异有统计学意义(F=28.020,P=0.000).结论 nm23-H1可能通过与c-Myc和G-CSF相互作用而发挥其诱导白血病HL-60细胞分化的作用.     

可溶性CD40配体对HL-60细胞增殖影响及其机制探讨

目的 Survivin和IL-8在急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)等多种恶性肿瘤中高表达,与白血病的治疗效果及预后密切相关.本研究分析可溶性CD40配体(soluble CD40L,sCD40L)对人白血病HL-60细胞增殖的影响,探讨其可能作用机制.方法 2、4和6 μg/mL 3组不同浓度的sCD40L作用HL-60细胞24、48和72 h,采用MTT法检测sCD40L孵育HL-60细胞体外增殖的影响;通过RT-PCR检测sCD40L对HL-60细胞Survivin mRNA表达的影响;采用ELISA测定sCD40L对HL-60细胞分泌IL-8的影响.结果 sCD40L 3组不同浓度(2、4和6μg/mL)均能显著抑制HL-60细胞增殖,并呈剂量依赖关系,不同浓度之间差异有统计学意义,F＝ 150.076,P＜0.05;不同时间之间差异有统计学意义,F＝ 358.969,P＜0.05.在24、48和72 h,以作用48 h时抑制效果最明显.RT-PCR检测结果显示,以6.00 μg/mL的sCD40L作用时SurvivinmRNA表达量最低,时间以作用48 h时HL-60细胞中SurvivinmRNA表达量最低,其表达量为89.7±6.2,与As2 O3阳性对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05.ELISA检测结果显示,以6.00 μg/mL的sCD40L作用时IL-8表达量最低,时间以作用48 h时HL-60细胞中IL-8表达量最低,其表达量为380.2±29.5,与As2 O3阳性对照组比较,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 sCD40L在体外能够明显抑制HL-60细胞增殖,具有浓度依赖性,且与作用时间有关.sCD40L抑制HL-60细胞增殖与Survivin及IL-8表达相关,并可能与其下调有关.     

低氧对人前列腺癌DU145细胞c-met表达及其侵袭力影响的研究

目的:探讨低氧对前列腺癌DU145细胞c-met表达及侵袭力的影响.方法:将DU145细胞分为常氧组和低氧组,分别置于常氧(37℃、5%CO2、20%O2)和低氧(37℃、5%CO2、1%O2)条件下培养6、12、24和36 h,采用蛋白质印迹法及RT-PCR技术分别检测c-met蛋白及mRNA相对表达量,采用Transwell侵袭实验检测各组细胞侵袭力.结果:常氧及低氧6、12、24和36 h状态下DU145细胞c-met蛋白及mRNA的相对表达量依次升高,常氧组与低氧6、12、24和36 h组c-met mRNA的相对表达量比较差异有统计学意义,P＜0.01;常氧组与低氧6 h组c-met蛋白的相对表达量比较差异有统计学意义(P＜0.05),常氧组与低氧12、24和36 h组c-met蛋白的相对表达量比较差异有统计学意义,P＜0.01;在低氧6～36 h,c-met蛋白及mRNA的相对表达量组间比较差异有统计学意义,P＜0.01;低氧6、12、24和36 h组侵袭细胞数比常氧组明显增多,差异有统计学意义(P＜0.05),而且随着低氧时间延长,侵袭细胞数逐渐增多,组间比较差异有统计学意义,F=25.396,P＜0.01;c-met蛋白表达的变化与细胞侵袭力的变化呈正相关,r=0.984,P＜0.01.结论:低氧环境可使DU145细胞c-met蛋白及mRNA表达明显增加,使细胞的侵袭力增强,其侵袭力的增强可能与c-met表达水平增高有密切关系.     

电离辐射对肿瘤细胞SCC25表面NKG2D配体表达的影响及对肿瘤细胞的杀伤作用

目的 探讨电离辐射对口腔鳞状细胞癌细胞SCC25表面NKG2D配体表达的影响及其对肿瘤细胞的杀伤作用.方法 SCC25细胞培养至对数生长期时,通过抽签的方式完全随机设计为对照组(未作处理)和实验组(2Gy电离辐射处理).对照组和实验组细胞培养24 h后,流式细胞术检测SCC25表面NKG2D配体主要组织相容性复合体Ⅰ类链相关分子(MIC)A、MICB、UL16结合蛋白(ULBP)1的表达量.实验组和对照组细胞培养24 h后,实时荧光定量PCR (RT-PCR)法检测SCC25细胞表面NKG2D配体mRNA表达的变化;制备细胞,将细胞分为空白对照组(NC)、2Gy电离辐射(R)组、NK1组(效靶比为5∶1)、NK2组(效靶比为20∶1)、NK1+R组(效靶比5∶1,2Gy电离辐射)、NK2+R组(效靶比20∶1,2Gy电离辐射),各组细胞培养24 h后,细胞增殖-毒性试验(CCK8)法检测电离辐射和自然杀伤(NK)细胞对口腔鳞状细胞癌SCC25细胞的杀伤能力.结果 流式细胞术结果显示,NKG2D配体MICA对照组和实验组的荧光值分别为21.04±0.39、22.90±0.40(江2.465,P=0.069),MICB荧光值分别为27.58±0.50、29.83±1.05(t=1.936,P=0.125),ULBP1的荧光值分别为21.04±0.40、21.78±0.50(t=1.154,P=0.313),表明SCC25经过电离辐射后,其表面NKG2D配体MICA、MICB、ULBP1的表达量稍有上升,但差异无统计学意义.RT-PCR显示,MICB、ULBP1 mRNA表达对照组和实验组差异均有统计学意义(t=18.334,P=0.000;t=6.381,P=0.008),实验组的表达量分别是对照组的6.49、1.64倍;CCK8结果显示,NK1、NK2组和NC组相比,细胞杀伤能力的差异有统计学意义(F=344.600,P=0.000),表明NK细胞可以明显杀死肿瘤细胞,且提高NK细胞与SCC25的比例后杀伤作用更强.R组和NC组相比,细胞杀伤能力差异无统计学意义(P =0.567),NK1+R组和NK1组相相比,差异无统计学意义(P=0.915),NK2+R组和NK2组相比,差异亦无统计学意义(P =0.678),表明电离辐射杀伤作用不明显.结论 电离辐射可以使NKG2D配体MICB、ULBP1的mRNA表达增强,可能为肿瘤的免疫治疗提供新的途径.电离辐射对细胞的杀伤作用不明显,可能与辐射剂量低且细胞仅培养24h有关.     

胸腺肽α1调节AML细胞株IDO表达对T细胞免疫抑制作用影响的研究

目的 吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine 2,3 dioxygenase,IDO)是色氨酸代谢过程中的限速酶,近年来研究发现,IDO高表达是急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞介导免疫耐受的重要机制,因此研究如何调控IDO表达,将有可能为AML治疗提供新的辅助方法.本实验拟从分子生物及蛋白质水平,探讨胸腺肽α1(thymosin-α1,Tα1)调节AML细胞株IDO表达及改善T细胞的免疫抑制作用,为AML免疫治疗提供理论依据.方法 采用逆转录-聚合酶联反应(RT-PCR)检测γ-干扰素(interferon-γ,IFN-γ)、Tα1对HL60/K562细胞株IDO mRNA表达的影响;采用蛋白质印迹法检测IFNγ和Tα1对HL 60/K562细胞株IDO蛋白表达的影响;采用MTT检测Td1和1甲基色氨酸(1-methyl-tryptophan,1-MT)作用后经IFN-γ诱导的HL-60/K562细胞对植物血凝素(phytohaermagglutinin,PHA)刺激T细胞增殖抑制作用.结果 HL-60/K562细胞株均表达IDO mRNA;IFN γ作用后,IDO mRNA表达明显增加(HL-60细胞株t=130.19,K562细胞株t=67.38,均P＜0.05);IFN γ+Tα1共同作用后,明显下调IDO mRNA表达(HL 60细胞株F=132.55,K562细胞株F=77.36,均P＜0.05),并呈浓度依赖性(HL 60细胞株r=0.71,K562细胞株r=0.80);HL-60/K562细胞株低水平表达IDO蛋白;经IFNγ作用后,HL-60细胞株IDO蛋白表达水平为2.505 6±0.019 6,明显高于空白对照组0.189 7±0.083 4,t=326.79,P＜0.05;K562细胞株IDO蛋白表达水平为0.988 8±0.023 9,明显高于空白对照组0.253 6±0.016 3,t=76.12,P＜0.05;IFN-γ+Tα1共同作用后,经IFN-γ+Tα1共同作用后,IDO蛋白在HL 60细胞株各组的表达水平分别为2.455 0±0.066 1、1.526 0±0.017 3、1.134 1±0.060 1、0.806 0±0.029 7和0.070 0±0.003 6,并呈浓度依赖性,F=4 187.76,r=0.77,P＜0.05;经IFN-γ+Tα1共同作用后,IDO蛋白在K562细胞株各组的表达水平分别为0.998 6±0.016 4、0.784 3±0.014 9、0.714 5±0.009 5、0.656 6±0.007 6和0.492 2±0.010 9,并呈浓度依赖性,F=59.50,r=-0.76,P＜0.05.IFN γ诱导的HL-60/K562细胞可抑制PHA刺激的T细胞增殖(P＜0.05),并呈浓度依赖性(HL-60细胞株r—0.99,K562细胞株r—0.98);1-MT组和Tα1组中HL 60/K562细胞株对T细胞增殖的抑制率明显低于对照组,差异有统计学意义,P＜0.05.结论 IDO可能在AML诱导机体产生免疫耐受过程中起重要作用,Tα1可下调AML细胞IDO表达,改善AML细胞对T细胞的免疫抑制作用.     

siRNA敲减DNMT1表达对T-cadherin基因甲基化及结肠癌细胞生物学行为的影响

目的 肿瘤的发生、发展和侵袭转移是影响结肠癌治疗的重要原因,有研究发现DNA甲基化状态在肿瘤的发生、发展中起着重要作用,抑制T-cadherin表达可增强肿瘤细胞侵袭和迁移能力.本研究探讨siRNA敲减DNA甲基转移酶1(DNA methyl transferase 1,DNMT1)基因表达对结肠癌细胞T-cadherin基因甲基化及细胞生物学行为影响.方法 设计针对DNMT1的siRNA1、siRNA2和siRNA3重组质粒,分别转染HT-29、SW620和HCT116细胞系,采用实时荧光定量PCR检测DNMT1表达,以筛选敲减效率最高的DNMT1 siRNA和细胞系.用敲减效率最高的DNMT1 siRNA转染相应细胞系,采用甲基化特异性PCR检测T-cadherin甲基化水平,采用实时荧光定量PCR和蛋白印迹法检测T-cadherin表达.用敲减效率最高的DNMT1 siRNA转染相应细胞系,采用噻唑蓝比色法、流式细胞术、Transwell和细胞划痕实验检测细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移情况,观察敲减DNMT1对细胞生物学行为的影响;同时设置T-cadherin shRNA重组质粒转染组,观察同时敲减DNMT1和T-cadherin对细胞生物学行为的影响.结果 DNMT1 siRNA1重组质粒对HT-29细胞系DNMT1的敲减效果最好.DNMT1 siRNA1转染HT-29细胞后,DNMT1组T-cadherin基因甲基化水平明显低于空质粒组和空白组,DNMT1组与空质粒组(F=314.182)和空白组(F=283.625)差异有统计学意义,均P<0.001.DNMT1组和联合组DNMT1 mRNA表达量(0.27±0.08)和蛋白表达量(0.41±0.12)显著低于空质粒组和空白组.其中mRNA表达,DNMT1组与空质粒组(F=544.581)和空白组(F=525.811)组差异有统计学意义,均P<0.001;联合组与空质粒组(F=507.501)和空白组(F=494.958)也差异有统计学意义,均P<0.001.蛋白表达量,DNMT1组与空质粒组(F=217.550)和空白组(F=275.469)差异有统计学意义,均P<0.001:联合组与空质粒组(F=321.707)和空白组(F=407.225)也差异有统计学意义,均P<0.001:而DNMT1组和联合组比较mRNA(F=0.002,P=0.965)和蛋白表达量(F=0.811,P=0.394)均差异无统计学意义.DNMT1组T-cadherin mRNA表达量(1.17±0.34)和蛋白表达量(1.38±0.54)显著高于联合组、空质粒组和空白组.其中mRNA表达,DNMT1组与联合组(F=433.103)、空质粒组(F=313.768)、空白组(F=372.118)差异有统计学意义,均P<0.001.对于蛋白表达量,DN-MT1组与联合组(F=89.315)、空质粒组(F=156.745)、空白组(F=196.702)差异有统计学意义,均P<0.001.而联合组与空质粒组(F=1.310,P=0.262;F=0.144,P=0.714)和空白组(F=3.713,P=0.064;F=0.038,P=0.850)的mRNA和蛋白表达量比较差异无统计学意义.与联合组、空质粒组和空白组比较,DNMT1组第24、36、48、72 h的A值显著减小,F组别=14.479,P<0.001;F时间=37.755,P<0.001.DNMT1组与联合组(F=1004.194,P<0.001)、空质粒组(F=1190.815,P<0.001)、空白组(F=781.018,P<0.001)比较细胞总凋亡率显著升高;DNMT1组穿膜细胞数目为(61.3±10.7)个,与联合组(F=86.730,P<0.001)、空质粒组(F=282.962,P<0.001)、空白组(F=152.538,P<0.001)比较显著减少.DNMT1组细胞迁移距离为(235.8±6.3)μm,与联合组(F=2535.55,P<0.001)、空质粒组(F=9767.233,P<0.001)、空白组(F=8420.830,P<0.001)比较显著减少.而联合组与空质粒组和空白组比较,A值、细胞总凋亡率、穿膜细胞数目和细胞迁移距离均差异无统计学意义,P>0.05.结论 DNMT1 siRNA1可有效敲减HT-29细胞DNMT1表达,逆转T-cadherin高甲基化状态并上调其表达.敲减DNMT1可明显抑制HT-29细胞增殖,促进其凋亡,降低其侵袭和迁移能力;而同时敲减T-cadherin能够逆转此种现象,说明敲减DNMT1引起的细胞生物学行为改变可能是通过T-cadherin来实现的.     

千金子甾醇诱导HL-60细胞凋亡机制研究

目的探讨Bcl-2/Bax信号通路在千金子甾醇诱导HL-60白血病细胞发生凋亡中的作用及其分子机制研究。方法HL-60细胞培养体系中分别加入大、中、小剂量千金子甾醇溶液,甾醇溶液作用细胞24h后,采用CCK-8法检测千金子甾醇对HL-60细胞增殖的抑制作用,光镜下观察细胞形态学变化,AnnexinⅤ/PI流式细胞术检测细胞凋亡,RT-PCR法检测Bcl-2/Bax、Caspase-9和Caspase-3mRNA转录水平,ELISA法检测Caspase-9和Caspase-3蛋白活性。结果 CCK-8法检测结果显示,与对照组比较,千金子甾醇能明显抑制HL-60细胞增殖（F=42.97,P〈0.001）,各个浓度之间进行比较,差异有统计学意义,P〈0.05。流式细胞术检测细胞凋亡率显著增加（F=56.74,P〈0.001）,经10、20和40μg/mL千金子甾醇处理24h后,HL-60细胞早期凋亡率分别为（23.4±3.1）%、（35.7±4.3）%和（53.2±3.9）%,细胞呈典型凋亡形态学改变。千金子甾醇作用后,Bax mRNA转录水平显著升高,Bcl-2mRNA转录水平显著降低,且呈化合物剂量依赖性（F=53.45,P〈0.001）,Caspase-9和Caspase-3 mRNA转录水平升高,且呈化合物剂量依赖性（F=34.21,P〈0.001）,千金子甾醇对HL-60细胞作用24h后Caspase-9和Caspase-3蛋白活性显著升高（F=54.33,P〈0.001）,且随着千金子甾醇浓度增加蛋白活性逐渐升高。结论千金子甾醇通过调节Bcl-2/Bax凋亡信号通路,诱导HL-60细胞凋亡,其作用呈明显剂量依赖性。     

蛇床子素诱导HL-60细胞凋亡及其分子机制研究

目的 研究蛇床子素对急性髓系白血病HL-60细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制.方法 CCK8实验检测蛇床子素对HL-60细胞的增殖抑制作用,Hoechst染色观察药物8h作用后细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡情况,反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）检测HL-60细胞的Bcl-2、Bax mRNA表达变化,Western bolt检测HL-60细胞的活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达变化.结果 蛇床子素可明显抑制HL-60细胞增殖并诱导其发生凋亡,抑制率最高达（90.7±4.5）％,F=138.46,P=0.000;总凋亡率为33.6％,F=27.75,P=0.006.诱导后Bcl-2 mRNA表达下调,Bax mRNA表达上调,Bax/Bcl-2比值升高（F=210.12,P=0.000）,活性caspase-3、caspase-8、caspase-9、Fas、FasL蛋白表达水平随药物作用时间延长而升高.结论 蛇床子素可抑制HL-60细胞增殖并诱导凋亡,其诱导凋亡机制与同时激活线粒体途径和死亡受体途径相关.     

Th17细胞过继免疫对DLBCL小鼠CXCL6/CCL2表达的影响及其意义分析

目的 建立弥漫大B细胞淋巴瘤(diffuse large B lymphoma,DLBCL)小鼠模型,在肿瘤发生发展阶段中给予Th17细胞过继免疫治疗,检测肿瘤组织中趋化因子CXCL6/CCL2的表达,了解Th17细胞对DLBCL肿瘤微环境中CX-CL6/CCL2表达的影响,及其与DLBCL发生发展的相关性.方法 人生发中心B细胞(germinal center B cell,GCB)样DLBCL细胞株SUDHL-4进行传代培养后接种10只SCID小鼠建立DLBCL小鼠模型,观察小鼠肿瘤发生发展过程并得出DLBCL小鼠肿瘤中位发病时间T1及小鼠中位生存时间T2.体外培养Th17细胞,在接种肿瘤细胞株时予30只DLBCL小鼠注射Th17细胞行过继免疫,并分别于T0(接种Th17细胞后)、T1和T2这3个时间点处死小鼠,获得A0、A1和A2组,每组10只小鼠.实时定量PCR法检测DLBCL小鼠肿瘤组织CXCL6/CCL2表达,与同一时间点15只小鼠的生理盐水对照组(B0、B1和B2组,每组5只)进行对比,并对比T0、T1和T2这3个时间点各组CXCL6/CCL2的表达.结果 A0组、A1组和A2组CXCL6 mRNA表达量分别为0.115士0.021、0.657±0.142和0.935士0.322,差异有统计学意义,F=7.013,P=0.025.B0组、B1组和B2组CXCL6mRNA表达量分别为0.175±0.024、0.321±0.011和0.631±0.027,差异有统计学意义,F=6.007,P=0.008.A0组CXCL6mRNA表达量与B0组对比差异无统计学意义,t=2.03,P=1.25;A1组明显高于B1组,t=6.43,P＜0.01;而A2组也明显高于B2组,t=6.35,P＜0.01.A0组、A1组和A2组CCL2 mRNA表达量分别为0.133±0.015、0.654±0.534和0.928±0.322,差异有统计学意义,F=7.021,P=0.023.B0组、B1组和B2组CCL2 mRNA表达量分别为0.124±0.013、0.327±0.025和0.628±0.322,差异有统计学意义,F=6.005,P=0.007.A0组CCL2 mRNA表达量与B0组对比差异无统计学意义,t=1.98,P=1.75;A1组明显高于B1组,t=6.13,P＜0.01;A2组也明显高于B2组,t=7.59,P＜0.01.结论 随着DLBCL肿瘤进程,CXCL6和CCL2的表达上升,CXCL6和CCL2可能是影响DLBCL肿瘤发生发展的因子,而Th17过继免疫治疗可以上调DLBCL肿瘤组织CXCL6和CCL2的表达,可能会对DLBCL肿瘤的发生发展产生影响.     

Notch信号通路对肝癌细胞迁移的调控机制研究

目的：探讨Notch信号通路对肝癌细胞迁移的调控机制。方法体外培养HepG2、MHCC97H、Huh-7肝癌细胞株和HL-7702正常肝细胞株,Transwell小室检测细胞迁移能力,蛋白免疫印迹法检测各细胞系Snail、E-cadherin蛋白表达水平,实时定量RT-PCR检测Snail、E-cadherin mRNA表达水平;采用DAPT阻断Notch信号通路,比较其对细胞迁移能力和Snail、E-cadherin蛋白及mRNA表达水平的影响。结果 HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞株迁移能力高于HL-7702细胞株（P﹤0.05）,HepG2、MHCC97H、Huh-7肝癌细胞株迁移能力比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞Snail蛋白及mRNA高于HL-7702细胞,E-cadherin蛋白及mRNA表达低于HL-7702细胞（P﹤0.05）,HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞间Snail、E-cadherin蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P﹥0.05）。HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞经DAPT处理后迁移能力低于未经DAPT处理的细胞株（P﹤0.05）,HL-7702细胞DAPT处理与未经DAPT处理迁移能力比较差异无统计学意义（P﹥0.05）。DAPT处理后,HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞株Snail蛋白及mRNA表达水平降低,E-cadherin蛋白及mRNA表达增加,与未经DAPT处理的细胞株比较差异具有统计学意义（P﹤0.05）,HepG2、MHCC97H、Huh-7细胞间Snail、E-cadherin蛋白及mRNA表达差异无统计学意义（P﹥0.05）。结论 Notch信号通路可能是通过调控Snail、E-cad-herin通路调控肝癌细胞的迁移过程。     

拓扑替康抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡机制与c-myc的关系

目的探讨拓扑替康（TPT）抑制白血病细胞的作用机制。方法采用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫组织化学方法,检测TPT作用后c—myc mRNA及其蛋白的表达情况。结果0．15μmol／L TPT作用HL-60细胞12h后,HL-60细胞c—myc mRNA表达为0．17±0．03,与空白对照组的1．11±0．25相比明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。HL-60细胞c—myc蛋白表达阳性细胞百分率为19．67％,较空白对照组的68．33％明显降低,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论拓扑替康抑制HL-60细胞增生和诱导凋亡可能是通过c—myc途径起作用的。     

过氧化物酶体通路氧化应激基因与青蒿琥酯抗胰腺癌敏感性的相关性研究

目的：探讨过氧化物酶体通路活性氧氧化应激关键基因的筛选及其与青蒿琥酯抗胰腺癌敏感性的相关性。方法基于美国国立癌症研究所（NCI）公共数据库55株肿瘤细胞表达谱基因芯片数据,采用 Kendall 相关分析方法筛选出与青蒿琥酯抗肿瘤半抑制浓度（IC50）显著相关的过氧化物酶体通路关键基因。利用荧光定量 PCR 验证候选基因在不同青蒿琥酯敏感性胰腺癌细胞的 mRNA 表达差异,并通过 DAB 染色检测胰腺癌细胞内过氧化物酶体含量。结果13个过氧化物酶体生物合成、增殖及其活性氧氧化应激通路关键基因 mRNA 表达与青蒿琥酯抗肿瘤药敏浓度 IC50有显著相关性。与正常肝细胞 HL-7702（1．00）比较,对青蒿琥酯敏感的胰腺癌 Panc-1细胞过氧化物酶体生物合成基因CRAT（2．89±0．06）、PEX11B（1．90±0．07）、PEX16（1．35±0．07）mRNA 相对表达水平均显著增高（t ＝33．00,P ＜0．01;t ＝17．85,P ＜0．01;t ＝4．54,P ＜0．05）;其活性氧氧化应激的抗氧化基因 CAT（1．43±0．03）、SOD1（2．07±0．04）、SOD2（1．15±0．01）mRNA 相对表达水平亦显著增高（t ＝11．71,P ＜0．01;t ＝35．85,P ＜0．01;t ＝13．22,P ＜0．01）;对青蒿琥酯不敏感的胰腺癌 BXPC-3细胞的 PEX12（0．51±0．02）、CAT（0．47±0．02）、PRDX1（0．43±0．01）、SOD1（0．44±0．01）mRNA 相对表达水平显著低于正常肝细胞 HL-7702（t ＝37．53,P ＜0．01;t ＝16．52,P ＜0．01;t ＝84．20,P ＜0．01,t ＝48．24,P ＜0．01）。DAB 染色显示对青蒿琥酯敏感的胰腺癌 Panc-1细胞过氧化物酶体阳性表达率（61．5％）明显高于HL-7702细胞（43．8％）,差异有统计学意义（χ2＝16．11,P ＜0．01）。结论过氧化物酶体及其活性氧相关抗氧化酶 CAT、PRDX1、SOD 基因表达可能是影响青蒿琥酯抗胰腺癌作用敏感性的重要因素。     

SLC7A11在急性髓系白血病患者中的表达及抑制HL-60细胞增殖的机制

目的:探讨SLC7A11 siRNA及Erastin对人急性髓系白血病（acute myeloid leukemia,AML）细胞株HL-60细胞活性的影响。方法:应用生物信息学方法分析癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)中AML患者样本的数据,比较SLC7A11不同表达水平患者的预后。利用实时荧光定量聚合酶联反应（quantitative Real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白质印记法(Western-blot)检测SLC7A11在AML患者和缺铁性贫血（iron deficiency anemia,IDA）患者中mRNA和蛋白的表达水平。培养人AML细胞株HL-60,用病毒介导的siRNA转染HL-60细胞,建立SLC7A11基因沉默的HL-60细胞株(siSLC7A11),用Erastin和DMSO分别处理HL-60细胞。利用qRT-PCR和Western-blot方法检测HL-60细胞和siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白的表达水平。利用CCK-8试剂盒检测细胞增殖情况。结果:SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平在AML患者中明显高于IDA患者(P＜0.05)。siSLC7A11细胞中SLC7A11的mRNA和蛋白表达水平明显低于对照组(P＜0.05)。siSLC7A11细胞增殖率明显低于对照组(P＜0.05)。结论:SLC7A11在AML患者中表达增加,通过siRNA或Erastin抑制SLC7A11能明显抑制人AML细胞株HL-60细胞增殖,SLC7A11基因可能成为治疗AML的新靶点。     

Gallic acid induces G₀/G₁ phase arrest and apoptosis in human leukemia HL-60 cells through inhibiting cyclin D and E, and activating mitochondria-dependent pathway

Gallic acid (GA) induces apoptosis in different types of cancer cell lines. In this study, we investigate the apoptotic effects induced by GA in human promyelocytic leukemia HL-60 cells, and clarify the underlying mechanism. Our results showed that GA reduced the viability of HL-60 cells in a dose- and time-dependent manner. GA led to G(0)/G(1) phase arrest in HL-60 cells through promoting p21 and p27 and inhibiting the levels of cyclin D and cyclin E. GA caused DNA damage and fragmentation in HL-60 cells as assayed using DAPI staining and Comet assay. Flow cytometric analysis revealed that GA increased Ca(2+) levels and reduced the mitochondrial membrane potential (ΔΨ(m)) in HL-60 cells. Apoptotic protein expressions were determined by Western blotting. The results indicated that GA-mediated apoptosis of HL-60 cells mainly depended on mitochondrial pathway, by promoting the release of cytochrome c, apoptosis-inducing factor (AIF) and endonuclease G (Endo G) and by up-regulating the protein expression of Bcl-2-associated X protein (BAX), caspase-4, caspase-9 and caspase-3. In addition, GA also activated the death receptor-dependent pathway by enhancing the protein expressions of fatty acid synthase (FAS), FAS ligand (FASL), caspase-8 and BCL-2 interacting domain (BID). We determined the mRNA expression of the gene levels of these proteins by real-time PCR. The results showed that GA-mediated apoptosis of HL-60 cells mainly depended on up-regulation of the mRNA of caspase-8, caspase-9, caspase-3, AIF and Endo G. In conclusion, GA-induced apoptosis occurs through the death receptor and mitochondria-mediated pathways. The evaluation of GA as a potential therapeutic agent for treatment of leukemia seems warranted.     

食管鳞癌组织中RECK mRNA和蛋白的表达及意义

目的:探讨食管鳞癌组织中RECK mRNA和蛋白的表达情况及其与临床病理因素的关系.方法:应用RT-PCR和免疫组化SP法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管粘膜组织中mRNA和蛋白的表达.结果:在食管鳞癌癌变过程中RECK在癌组织、癌旁不典型增生组织及正常粘膜组织中mRNA的含量依次增高,分别为1.052±0.078、1.274±0.235、1.306±0.121,组间比较有明显差异(F=49.936,P＜0.05):不同分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移的食管鳞癌组织之间RECK mRNA相对含量差异均有统计学意义(F=5.081,F=26.084,U=24.011,P均＜0.05).食管鳞癌组织及癌旁不典型增生组织中RECK蛋白表达均低于正常粘膜组织,表达量分别为59.7%(37/62)、71.0%(22/31)、85.5%(53/62),组间比较有明显差异(x2=10.331,P＜0.01);食管鳞癌组织中RECK蛋白表达与癌组织的分化程度、不同浸润深度及有无淋巴结转移密切相关(P＜0.05).结论:食管鳞癌组织中RECK mRNA和蛋白表达均降低,其低表达可能与食管鳞癌发生有关.检测RECK mRNA及蛋白的表达可望成为食管鳞癌早期诊断和判断预后的分子指标之一.