心肌肌凝蛋白轻链—1与其血清浓度检测的临床意义

心肌肌凝蛋白轻链－１与其血清浓度检测的临床意义武强综述李小鹰审校关键词心肌梗塞；心肌肌凝蛋白；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ５４２．２心血管疾病如心肌梗死（ＡＭＩ）等严重威胁人类的健康和生命。人们一直探寻判断心肌细胞损伤灵敏特异的诊断指标。近年来，心...     

人心肌肌凝蛋白轻链的提纯及其抗体的制备

从人心肌中提纯的肌凝蛋白轻链(myosin-light chain,M-LC),SDS聚丙烯酰胺凝胶电脉呈三条蛋白带。经DEAE-纤维素柱层析出现三个峰。免疫白兔产生的抗血清,琼脂双扩散鉴定有一条沉淀线;亲和层析,用盐酸胍解离下一个抗体蛋白峰。     

人心肌肌凝蛋白轻链的分离提纯与鉴定研究

参考采用Schoβler方法并加以改进,分别应用等电点沉淀法、快速蛋白质液相层析(FPLC)及SDS聚丙烯酰胺凝胶制备电泳三种方法分离提纯肌凝蛋白轻链(CMLC),其各具有不同的优缺点,并对CMLC做了鉴定。同时证明在-20℃条件下,冻存时间较长或蛋白浓度较低的CMLC容易降解。     

抗人心肌肌凝蛋白轻链Ⅰ单克隆抗体的制备和鉴定

以人心肌肌凝蛋白轻链I免疫Balb/c小鼠,取其脾淋巴细胞与NS-1细胞融合,经过筛选、克隆化和再克隆已获得3-D_3、2-D_9、1-E_(10)和2-E_(10)等4个分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株。经免疫酶标和放免方法测定抗体工作滴度为1:1万。流动式荧光密度计检测NS-1、小鼠脾和杂交瘤细胞DNA的含量,结果表明杂交瘤细胞的DNA含量相当于NS-1和小鼠脾细胞DNA含量之和。杂文瘤细胞传代半年以上稳定地分泌特异性的单克隆抗体。用两个单抗进行了抗原双决定簇的放免測定,并制备了高效价的小鼠腹水。     

梗塞心肌摄取锝标抗心肌肌凝蛋白轻链mAb 99Tcm-AMLCA的影响因素

目的: 探讨注射锝标抗心肌肌凝蛋白轻链单克隆抗体(99Tcm-AMLCA)后不同时间,梗死时间和梗死区域对大鼠梗死心肌摄取99Tcm-AMLCA的影响. 方法: 大鼠静脉注射99Tcm-AMLCA 7.4 MBq,观察不同注射时间(2, 4, 8, 24 h),不同梗死时间(心梗后6, 12 h, 1～14 d)和不同梗死区域(梗死中央、周边的内层心肌和外层心肌)对梗死心肌/正常心肌发射性比的影响. 结果: 注射后2 h梗死心肌开始摄取99Tcm-AMLCA,梗死心肌/正常心肌发射性比是1.67±0.96, 4～8 h摄取逐渐增加,24 h达到高峰,梗死心肌/正常心肌发射性比是4.38±0.80. 心肌梗死后6 h～14 d,梗死心肌均有很强的99Tcm-AMLCA摄取,心梗后5 d摄取最强,梗死心肌/正常心肌发射性比是3.82±0.67;梗死中央区内层心肌的放射性摄取比值是4.52±0.60,外层心肌是3.32±0.58两者具有统计学显著意义(P<0.01). 结论: 急性心肌梗死大鼠梗死心肌特异性地摄取99Tcm-AMLCA迅速持久,不受心梗时间影响,梗死中央区内层心肌摄取最强,为99Tcm-AMLCA亲梗死心肌显像临床应用提供了实验依据.     

心肌肌凝蛋白轻链－1与心功能调节

心肌肌凝蛋白轻链─１与心功能调节武强综述李小鹰审校关键词心脏疾病；心肌肌凝蛋白；心功能；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ３６３．２１心功能调节的分子生物学是通过改变基因表达的调节机制，引起心肌蛋白质量和数量的改变，这是心肌细胞对心脏构型的不均一性和心肌...     

抗人心肌肌凝蛋白单克隆抗体亲梗死心肌显像的临床应用

抗人心肌肌凝蛋白单克隆抗体亲梗死心肌显像的临床应用武强综述李小鹰审校关键词心肌肌凝蛋白；单克隆抗体；心脏疾病；综述中国图书资料分类法分类号Ｒ５４１随着溶栓治疗和经皮腔内血管成形术（ＰＴＣＡ）在急性心肌梗死治疗中的广泛应用，判断不可逆损伤心肌的方法越来...     

大鼠心肌肌凝蛋白a重链基因逆转录病毒载体的构建

目的 :克隆编码大鼠心肌肌凝蛋白α重链 aa736～ 96 0的 c DNA片段 ,构建携带 hu IL - 2 / m yosin融合基因的逆转录病毒载体。方法 :以 RT- PCR方法从幼龄大鼠心肌组织中扩增出 6 81bp的目的基因 ,与 hu IL - 2 c DNA序列拼接 ,构建融合基因 hu IL - 2 / m yosin及其逆转录病毒载体。采用脂质体法转染 NIH 3T3细胞 ,经 G418筛选后 ,用 RT- PCR和免疫组化法分析重组逆转录病毒的表达。 结果 :核苷酸序列测定显示 ,克隆基因的核苷酸及推导的氨基酸序列与报告序列一致 ,开放阅读框正确 ;逆转录病毒载体 p L NC- hu IL - 2 - m yosin酶切结果与预期一致。RT- PCR检测提示转染细胞有 p L NC- hu IL - 2 - myosin m RNA转录 ;免疫组化分析表明转染细胞胞质内有大量肌凝蛋白表达。 结论 :大鼠心肌肌凝蛋白α重链基因逆转录病毒载体构建成功 ,并可在 NIH3T3细胞中表达 ,为心肌肌凝蛋白基因转移诱导机体特异性免疫耐受对心肌免疫损伤的防治研究打下了基础     

肌球蛋白轻链激酶与炎症性疾病关系的研究进展

肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)可以调控肌球蛋白轻链的磷酸化,进而调控基于肌动蛋白与肌球蛋白之间相互作用的细胞骨架活动.近几年研究报道,长链MLCK与短链MLCK的异常表达在不同的炎症性疾病中多有发生,炎症相关因子能诱导MLCK表达升高.本文对MLCK在肺炎、血管损伤以及炎性肠病中的作用,及MLCK参与炎症性疾病的可能信号通路进行了综述.     

硫化氢对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶表达的影响

目的：观察外源性硫化氢(H2S)对糖尿病大鼠心肌肌球蛋白轻链激酶(myosin light chain kinase,MLCK)表达的影响。方法：32只雄性SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)、糖尿病对照组(DM组)、NaHS治疗组(DM+NaHS组)和NaHS对照组(NaHS组),每组8只。采用链脲佐菌素55 mg/kg腹腔注射诱导1型糖尿病大鼠模型。造模成功后,DM+NaHS组和NaHS组大鼠腹腔注射NaHS溶液28 μmol/kg干预治疗。8周后,测定大鼠左心室功能指标;计算心体比;测定血清乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase MB isozyme,CK-MB)水平;透射电镜观察心肌细胞超微结构变化; RT-PCR和Western印迹分别检测心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达。结果：与NC组比较,NaHS组各项指标差异无统计学意义(均P>0.05),而DM组左心室收缩和舒张功能下降,心体比明显增大(均P<0.01),血清中LDH和CK-MB水平明显增高(均P<0.01),心肌超微结构损伤明显,心肌组织MLCK mRNA和蛋白表达明显降低(均P<0.01)。与DM组比较,DM+NaHS组左心室功能和心肌超微结构损伤明显改善,心体比明显降低(均P<0.05),血清中LDH和CK-MB水平明显下降(均P<0.01),MLCK mRNA和蛋白表达明显升高(均P<0.01)。结论：外源性H2S对糖尿病大鼠心肌损伤具有保护作用,机制可能与增强心肌MLCK表达有关。     

肌球蛋白轻链激酶在急性肺损伤模型的表达及意义

目的通过建立细菌脂多糖(LPS)诱导的小鼠肺损伤模型,并观察其炎症程度和肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的表达,探讨MLCK在急性肺损伤发病机制中的作用。方法20只BALB/c雌性小鼠,按随机数字表法分为LPS组(n=10)和生理盐水对照组(n=10),LPS组鼻内注入30μL含20μg LPS的生理盐水,对照组仅用生理盐水。比较两组的病理学、湿干比重、肺泡灌洗液(BALF)总细胞计数的不同,并采用免疫组化法观察MLCK在肺组织的表达,用RT-PCR法检测肺组织中MLCK mRNA的表达。结果与对照组比较,LPS组表现为明显的肺充血、水肿、中性粒细胞浸润,肺含水量增加,BALF细胞总数含量增高(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果显示,LPS组MLCK表达较对照组更明显;RT-PCR结果显示LPS组MLCK mRNA吸光度值较对照组高。结论LPS能导致急性肺损伤,MLCK活性上调在其发病机制中起一定作用。     

脂质过氧化对培养心肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化系统的影响

应用氢过氧化枯烯（ＣＨＰＯ）作为机体产生自由基的引发剂，作用于培养的心肌细胞，激起和促使细胞遭受过氧化损伤，同时使用硒（Ｓｅ）、维生素Ｅ（ＶＥ）等抗自由基物质，观察细胞中肌球蛋白轻链磷酸化系统的变化。结果表明，ＣＨＰＯ引发的自由基以及脂质过氧化反应，造成肌球蛋白轻链激酶（ＭＬＣＫ）和ＡＴＰ酶活性显著下降，Ｓｅ、ＶＥ以及二者联合应用，可使心肌细胞抗自由基损伤的能力极大增强，ＭＬＣＫ和ＡＴＰ酶活性都有不同程度的提高。提示：ＣＨＰＯ引发的自由基已造成了对心肌细胞肌球蛋白磷酸化系统的损害，Ｓｅ和ＶＥ的应用，对保护肌球蛋白分子的完整结构和其生化功能起着重要作用。     

抑制肌球蛋白轻链激酶活性诱导细胞凋亡的研究

目的:探讨抑制肌球蛋白轻链激酶(MLCK)活性诱导细胞凋亡。方法:应用尿素/甘油胶检测平滑肌细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平,流式细胞仪检测平滑肌细胞凋亡细胞比例。结果:ML-7处理后细胞具有剂量依赖的肌球蛋白轻链去磷酸化与细胞凋亡,肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。结论:抑制MLCK活性足以引起细胞凋亡,且肌球蛋白轻链去磷酸化早于细胞凋亡。     

心肌型肌球蛋白轻链激酶调控肌球蛋白轻链对心肌肥大的影响

  目的  探讨心肌型肌球蛋白轻链激酶(cardiac myosin light chain kinase, cMLCK)对AngⅡ诱导的心肌肥大的作用。  方法  纯化cMLCK作为激酶,体外激酶反应实验探索cMLCK活性位点。制作野生型cMLCK(WT-cMLCK)及敲除了氨基端(N端)的变异体(ΔNT-cMLCK)腺病毒,感染原代心肌细胞,并用随机数法随机分为6组:对照组、AngⅡ组、WT-cMLCK组、WT-cMLCK+AngⅡ组、ΔNT-cMLCK组、ΔNT-cMLCK+AngⅡ组,每组3个样本。RT-PCR检测心衰因子表达;Western blotting检测cMLCK及底物的表达;免疫荧光检测细胞表面积。  结果  WT-cMLCK在体外体系能对其底物MLC2v进行磷酸化;而ΔNT-cMLCK对MLC2v的磷酸化作用消失;使用AngⅡ处理后,可见细胞面积增大[(1 787.0±142.6)μm2 vs.(2 458.0±211.3)μm2,P < 0.001],ANP、β-MHC表达上调(均P < 0.05);cMLCK及p-MLC2v表达上调(均P < 0.05);过表达WT-cMLCK可逆转心肌肥大[(2 527.0±116.4)μm2 vs.(1 775.0±88.5)μm2,P < 0.001];敲除N端可使cMLCK的保护作用丧失[(1 775.0±88.5)μm2 vs.(2 613.0±118.4)μm2,P < 0.001]。  结论  过表达cMLCK可改善AngⅡ诱导的心肌肥大,该作用依赖于其N端。      

柯萨奇B3病毒抗体与心肌细胞结合的发病作用

目的 研究柯萨奇B3病毒单克隆抗体（CVB3－mAb0与心肌细胞结合，以探讨CVB3－mAb对心肌细胞的致病作用。方法 采用细胞副合技术制备CVB3-mAb，并应用各细胞株分泌的mAb与人、牛、大鼠心肌细胞进行免疫组化分析,比较各株分泌的CVB3－mAb与不同种动物心肌细胞间结合的差异。结果 利用细胞融合技术制备出26种CVB3-mAb。其部分CVB3－mAb可与心肌细胞膜或心肌细胞内的肌原纤维结合，呈棕黄色环状重叠或横纹，CVB3－mAb 2A4，2D4，1G6，1H9，1H10，1H11与人、牛、大鼠心肌细胞均呈阳性反应；CVB3－mAb 2A2仅与人的心肌细胞结合；CVB3－mAb 2B2，2H4，1C10，1G4与人及大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2A3与牛和大鼠心肌细胞结合；CVB3－mAb 2G12仅与大鼠心肌细胞结合；CVB3-mAb 1E8仅与牛的心肌细胞结合，且CVB3－mAb 2D4与人心肌的结合为心肌细胞膜，而与牛及大鼠心肌的结合为心肌细胞内的肌原纤维。结论 各CVB3－mAb与不同动物心肌细胞间的结合及结合形式不同；且同一动物的心肌细胞与CVB3－mAb结合有差异。部分柯萨奇B3病毒抗体与动物心肌细胞结合，可引起心肌炎。     

癌蛋白PRC17与人肌球蛋白调节轻链相互作用的初步鉴定

目的：分析前列腺癌基因17（PRC17）与人肌球蛋白调节轻链（MLC2）之间的相互作用,并鉴定PRC17蛋白序列上与MLC2相互作用的功能区域。方法：经大肠杆菌表达并用GlutathioneSepharose4B纯化GST及融合蛋白GST-MLC2,用SMMC-7721细胞表达带HA标签的PRC17及其截短突变体HA-PRC17（353）、HA-PRC17（251）、HA-PRC17（164）和HA-PRC17（A164）,GST沉淀实验分析GsT-MLC2与PRCl7及其截短体的相互作用。结果：经诱导表达并纯化的GST和GST-MLC2分子质量符合预期,分别约为28．4kD和46．6kD,纯度均95％以上;GST沉淀实验结果显示,PRC17结合MLC2,不结合阴性对照GST;PRC17（353）和PRC17（251）也能有效结合MLC2,但PRC17（164）和PRC17（A164）都不能与MLC2结合。结论：PRC17能特异性结合MLC2,其蛋白序列上与MLC2结合的部位位于其氨基端251位氨基酸之内,可能在164位氨基酸附近。     

心肌肌凝蛋白诱导BALB/c小鼠发生自身免疫性心肌炎

目的:建立BALB/c小鼠实验性自身免疫性心肌炎模型.方法:采用差速离心、分级饱和硫酸铵沉淀和DEAE-Sephadex A-50离子交换层析纯化等方法自猪心中提取并纯化心肌肌凝蛋白,经SDS-PAGE和Western印迹方法鉴定.以此蛋白免疫遗传易感的BALB/c小鼠,建立自身免疫性心肌炎模型.结果:97％(35/36)小鼠在免疫后第14天出现不同程度的心肌炎病理改变,主要表现为心肌间质单个核细胞浸润、肌纤维排列紊乱和肌浆溶解.免疫鼠血清肌钙蛋白I水平升高,并出现较高滴度的抗肌凝蛋白自身抗体.结论:猪心肌肌凝蛋白可以诱导BALB/c小鼠出现典型的自身免疫性心肌炎.