氟对体外培养软骨细胞超微结构的影响

目的观察氟化物对体外培养乳鼠软骨细胞超微结构的影响。方法采用细胞培养的方法,原代培养昆明乳鼠软骨细胞,传第3代后按染氟剂量不同分为0（对照）、5、10、20、40mg／L组,染氟培养10d后,制备乳鼠软骨细胞超薄切片,透射电镜下观察软骨细胞的超微结构改变。结果电镜下5、10mg／L组软骨细胞增殖,双核细胞数量增多,细胞器发达,可见囊池扩张;20、40mg／L组细胞表面微绒毛减少,部分细胞染色质固缩,并凝结成块状,聚集在核膜周边,核基质密度下降,核膜迂回曲折,胞浆内线粒体空泡化,有些细胞胞浆内可见大量的囊泡,泡内含有电子致密物质;在40mg／L组中可见到凋亡细胞。结论高氟可以引起乳鼠软骨细胞超微结构的损伤。     

壳聚糖膜对体外培养大鼠软骨细胞增殖活性及分泌细胞外基质的影响

目的 探讨壳聚糖膜对体外培养大鼠软骨细胞增殖活性及分泌细胞外基质的影响.方法 制备壳聚糖膜材料.体外分离培养大鼠膝关节软骨细胞,随机分为6孔板细胞组、种植于壳聚糖膜细胞组、PBS处理组、壳聚糖膜浸出液处理组.通过CCK-8法检测培养不同时间软骨细胞的增殖活性,并通过Real-time PCR法检测不同培养时间软骨细胞分泌Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的量.结果 通过Ⅱ型胶原免疫组化染色发现,本实验培养的细胞呈阳性,表明该细胞为软骨细胞;CCK-8检测结果表明,种植于壳聚糖膜细胞组、壳聚糖膜浸出液处理组的软骨细胞增殖活性分别高于6孔板细胞组、PBS处理组(P均＜0.05);Real-time PCR检测结果表明,种植于壳聚糖膜细胞组、壳聚糖膜浸出液处理组的软骨细胞分泌Ⅱ型胶原及聚集蛋白聚糖的量分别高于6孔板细胞组、PBS处理组(P均＜0.05).结论 壳聚糖膜对体外培养大鼠软骨细胞增殖及分泌细胞外基质具有促进作用.     

氟对骨髓基质细胞增殖和成骨能力的影响

目的探讨氟对体外培养的大鼠骨髓基质细胞（MSCs）增殖能力与成骨能力的影响。方法体外培养大鼠MSCs。噻唑蓝（MTT）比色法分析不同染氟水平下MSCs的增殖能力；光、电镜下观察不同染氟水平下MSCs成骨转化能力和相应超微结构变化。结果与对照组比较，低水平染氟（0．02mg／L）96h后促进MSCs增殖（P〈0．05）；较高水平染氟（0．05～1．00mg／L）72h即可促进MSCs增殖（P〈0．05或〈0．01）；高水平染氟（10．00、20．00mg／L）对MSCs具有抑制增殖和促细胞凋亡作用（P〈0．01）。较高水平染氟（2．00～20．00mg／L）时MSCs成骨转化受抑（P〈0．01），较低水平染氟（0．01～1．00mg／L）时MSCs成骨转化增强（P〈0．01）。结论低水平染氟促进MSCs增殖。成骨转化能力增强；高水平染氟抑制MSCs增殖，促进细胞凋亡，抑制MSCs成骨转化能力。     

柔肝中药对体外培养软骨细胞增殖能力及关节软骨低聚基质蛋白分泌的影响

目的 探讨柔肝中药对体外培养软骨细胞增殖能力及关节软骨低聚基质蛋白（COMP）分泌的影响。方法 采用分阶段酶消化法体外培养兔软骨细胞，以2×10^4／ml密度接种3代内细胞，以Ⅱ型胶原的免疫组织化学研究鉴定细胞。给予家兔临床等效剂量灌胃后，抽取含药血清培养细胞，分别用5％、10％的柔肝方含药血清（分给药后1、3、5h3个时间点）以及正常兔血清、小牛血清干预7d，采用四甲基偶氮唑蓝（MTF）法观察中药含药血清对体外培养的软骨细胞增殖的影响；体外培养人软骨细胞，采用柔肝复方组及单味柔肝药提取物直接添加体外培养体系3d，添加终浓度为10mg／ml。采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测药物对体外培养的人软骨细胞COMP分泌的影响。结果 培养细胞经Ⅱ型胶原的免疫组织化学染色后有阳性表现，在对软骨细胞增殖的影响方面，柔肝方含药血清各组均优于兔血清组和小牛血清组，其中含药血清组的3h时间点总体优于1h及5h时间点（P〈0．05）；在对软骨细胞上清COMP分泌方面，柔肝复方及单方提取物组均有促进细胞分泌COMP的作用（P〈0．05），但两组之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 柔肝方中药含药血清可以促进体外培养软骨细胞增殖；在药物直接干预的条件下，柔肝复方及单方提取物可以促进软骨细胞分泌COMP。     

氟对小鼠成骨细胞增殖的影响

目的 观察氟对体外培养小鼠成骨细胞增殖的影响。方法 原代培养小鼠成骨细胞，以0（对照组）、5、10、20、40mg／L剂量染氟，光、电镜观察成骨细胞的形态学变化；采用生长曲线、噻唑蓝（MTT）法及流式细胞仪检测细胞周期，观察细胞数量变化和细胞周期时相分布。结果 第10天时，5、10、20mg／L染氟组从形态学上表现出细胞增殖。而40mg／L组中出现细胞凋亡。染氟24h时，20mg／L组与对照组相比细胞增殖明显，差异具有统计学意义（P〈0．05），随着时间延长，染氟组表现出更强的增殖活性，至72h时，各染氟组成骨细胞增殖均高于对照组（P〈0．05）。24h时各染氟组间细胞增殖水平未见明显差异（P〉0．05），48h以后40mg／L组明显低于其他各染氟组（P〈0．05）。而染氟72h时5mg／L组增殖强度也低于10、20mg／L组（P〈0．05）。与对照组相比，10、20mg／L组处于G0／G1期的细胞数减少，而S期细胞数增加（P〈0．05），同时两组的细胞增殖指数也高于对照组（P〈0．05），生长表现出增殖状态；其中10mg／L组与其他染氟组之间，差异有统计学意义（P〈0．05），表现为细胞增殖能力增强。结论 低剂量的氟在较短作用时间内可以促进体外培养小鼠成骨细胞增殖，随剂量增加和暴露时间延长其促进作用减弱。     

血浆miR-320c在骨关节炎患者的表达及其对软骨细胞增殖和凋亡的影响

目的:检测微小RNA-320(miR-320c)在骨关节炎外周血的表达水平,探讨miR-320c的临床意义及在骨关节炎发病机制中的作用。方法:收集30例原发性膝骨关节炎、30例结缔组织病患者及同期30例健康对照者的血浆标本,采用荧光定量PCR检测外周血中miR-320c的表达水平。分析其与骨关节炎患者的膝关节严重程度和...     

透明质酸对体外培养大骨节病软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的 通过观察透明质酸(HA)对体外培养的大骨节病(Kashin-Beck disease,KBD)软骨细胞增殖、凋亡的影响,为临床上HA治疗KBD提供实验依据.方法 依据<大骨节病诊断标准>(GB 16003-1995)收集KBD患者和遭遇意外事故的病人(对照组)关节软骨,分离、体外培养关节软骨细胞.选用第2代细胞进行实验.两组软骨细胞分别给予不同剂量的HA,按HA剂量分为0、100、500 mg/L组.通过二苯甲唑溴盐(MTT)实验,测定第2、4、6天HA对KBD组、对照组软骨细胞增殖的影响.并通过流式细胞检测观察HA对软骨细胞凋亡的影响.结果 对照组在第4天时,500 mg/L组(0.140 ±0.049)促软骨细胞增殖作用大于0 mg/L组(0.116±0.021);KBD组在第6天时,500 mg/L组(0.179±0.081)与0 mg/L组(0.128 ±0.017)比较,显示了明显的促增殖作用(P<0.05).KBD组细胞凋亡率100、500 mg/L组(10.458±1.143、7.877±1.346)均较0 mg/L组(12.860±2.159)下降(P<0.05);对照组500 ms/L组(4.045±1.204)较0 mg/L组(7.128±1.244)细胞凋亡率下降(P<0.05).结论 HA对KBD软骨细胞具有促进增殖和抑制软骨细胞凋亡的作用,其中500 mg/L的HA改善KBD软骨细胞代谢的作用较100 mg/L明显.     

氟对培养乳兔肋软骨中细胞柱形态和细胞凋亡的影响

目的观察氟对体外培养乳兔肋软骨的直接作用,探讨氟对软骨细胞形态和细胞凋亡的影响。方法采用乳兔的肋软骨体外培养方法,实验分为处理组和对照组。处理组根据加氟浓度的高低(20μmol/L、320μmol/L),加或不加SOD(0.006U/L)分为4组。培养18d后观察软骨细胞柱的形态学变化并做计量学分析;观察细胞超微结构变化;用TUNEL法检测细胞凋亡并计算凋亡指数(AI,%);测定细胞生长液中H2O2和NO水平。结果①光镜下,高氟组软骨增生区的软骨细胞数量增多,细胞柱较对照组明显增长,但变细,其余各处理组细胞柱也变细长。与对照组相比,2个单纯加氟组软骨细胞柱长度、面积和周长增加,细胞柱横径减少;2个氟 SOD组软骨细胞柱的改变与2个单纯加氟组相比程度明显减轻。电镜下,4组均有凋亡的特征性改变,以单纯高氟组为最多。②与对照组相比,高氟组细胞凋亡指数(AI)明显增高(P<0.01);与单纯加氟组相比,加SOD组细胞AI值明显下降(P<0.05,P<0.01)。③H2O2水平在2个高氟组与对照组比较,差异有显著意义(P<0.05,P<0.01)。除低氟 SOD组外,其余各组之NO浓度均升高,和对照组相比,差异有显著意义(P<0.01,P<0.05)。结论①氟可引起发育过程中的软骨细胞柱形态改变,损害细胞的超微结构。②氟可引起乳兔肋软骨中细胞凋亡增加,抗氧化剂SOD可以抑制     

甲巯咪唑对体外培养人甲状腺细胞增殖的影响

目的研究甲巯咪唑(MMI)对体外培养人的甲状腺细胞增殖的影响，以探讨MMI的药理作用，为指导临床用药提供一个理论依据。方法甲状腺细胞培养2天，之后分别培养在5H和6H液中，不同浓度MMI(1、10、100μmol/L)状态下孵育2天。以竞争性蛋白结合法测定cAMP。采用四氮唑蓝比色法测定甲状腺细胞增殖。结果MMI在较大范围(1-100μmol/L)内不影响细胞内的第二信使cAMP的含量。在细胞增殖实验中，小剂量MMI(1～10μmol/L)对甲状腺细胞增殖无明显影响，大剂量MMI(100μmol/L)抑制甲状腺细胞增殖。结论MMI对体外培养人的甲状腺细胞的生长有影响。     

氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 观察氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞增殖和凋亡的影响.方法 用不同浓度氟伐他汀作用于培养的小鼠Lewis肺癌细胞,用活细胞计数检测细胞增殖,以CCK-8试剂检测Lewis肺癌细胞生长抑制率,Annexin V-FITC/PI染色结合流式细胞仪定量检测氟伐他汀对小鼠Lewis肺癌细胞凋亡影响.结果 用不同浓度氟伐他汀(1、5、10和20 μmol/L)处理小鼠Lewis肺癌细胞12、24、48和72 h后,肺癌细胞增殖明显受抑制,细胞生长抑制率明显升高,这些作用呈明显剂量和时间依赖性,其中以10、20 mol/L氟伐他汀、处理48和72 h的作用最明显.Annexin V-FITC/PI染色后流式细胞仪检测表明,与对照组相比,20 μmol/L氟伐他汀处理肺癌细胞48 h后凋亡细胞明显增多(4.37% vs 12.83%,P＜0.01),当氟伐他汀与甲羟戊酸共同作用细胞后,氟伐他汀引起的细胞凋亡被明显逆转(4.37% vs 5.89%,P＞0.05),提示氟伐他汀对Lewis肺癌细胞的诱导凋亡作用是通过甲羟戊酸途径介导的.结论 氟伐他汀能抑制小鼠Lewis肺癌细胞增殖并诱导其凋亡.