携带鼠GM-CSF基因的穿梭质粒抗结肠癌作用研究

目的 探究粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因修饰的穿梭质粒能否对BALB/c小鼠结肠癌有疗效。方法 构建表达鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(mGM-CSF)的穿梭质粒。实验分为pT7 mGM-CSF组(质粒组)、空载体对照组(pT7 GFP组)和溶剂对照组(PBS组)。Elisa检测pT7 mGM-CSF体外转染真核细胞后的表达量;选取雌性BALB/c小鼠,用表达近红外荧光蛋白(IRFP)的鼠结肠癌细胞株(CT26-IRFP)皮下植瘤;采用瘤内注射方式给药,游标卡尺测量实验组BALB/c小鼠肿瘤生长的情况;用小动物活体成像仪观察BALB/c小鼠体内肿瘤IRFP荧光强度表达情况并记录存活率;IHC法检测瘤组织内免疫细胞浸润情况。结果 与pT7 GFP组和PBS组比较,质粒组的表达在转染pT7 mGM-CSF质粒的293T细胞上清中的含量达到600pg/mL;和溶剂PBS组相比,质粒组与pT7 GFP组动物肿瘤生长趋势更为平缓,给药第21d,与PBS组比较,质粒组治疗效果明显;在治疗28d后质粒组小鼠存活率为40%,与pT7 GFP和PBS组相比有显著性差异;携带mGM-CS...     

GM-CSF诱导GM-CSF受体内在化的实验研究

目的 通过131I标记GM-CSF研究GM-CSF诱导白血病细胞株表面GM-CSF受体(GMR)的内在化,为131I-GM-CSF的进一步应用提供实验依据.方法 使用氯胺-T的方法对GM-CSF进行131I标记,用三氯醋酸沉淀法观察标记物的放射纯度及稳定性;将标记物分别与TF-1、HL-60、K-562三种白血病细胞株进行孵育,然后检测配体的胞吞效应.结果 氯胺-T法标记GM-CSF,131I标记率为65%,标记物放化纯能达到98%,4℃下静置第4天时放化纯仍能高于85%;131I-GM-CSF/GMR内在化效率在低表达GMR的K-562细胞中仅为10%,高表达GMR的TF-1为48%,为前者的4.8倍,HL-60的效率介于前两者之间为27%.结论 GMR内在化的数量和细胞表面GMR表达水平成正相关,TF-1细胞GMR表达水平最高,其内在化率明显高于HL-60细胞和K-562细胞.     

GM-CSF在小鼠放射性复合切割伤中的异常表达及干预治疗实验

目的：对比观察小鼠放射性复合切割伤与单纯切割伤愈合过程中粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage Colony Stimulating Factor,GM-CSF）动态表达水平的差异以及 GM-CSF对小鼠放射性复合切割伤的干预治疗效果,进一步探讨 GM-CSF 对放射性复合切割伤愈合的影响。方法：56 只雌性昆明种小鼠（20-22g）随机分为两组（实验组与对照组,n=28）,实验组小鼠在 6 Gy 60 Co γ 全身一次性均匀辐照后,即刻于背部皮肤制作全层缺损伤口,构建放射性复合切割伤模型,对照组小鼠伤口制备部位、方法同实验组,但小鼠不作辐照处理。伤后 1、3、5、7d 分别处死小鼠（每个时间点各 7 只小鼠）,取创面周围皮肤及下方的薄层肌肉组织,通过Real-Time PCR和免疫组化方法检测伤口愈合过程中GM-CSF mRNA及蛋白表达水平。随后,将 40 只同品系、同质量小鼠随机分为两组（n=20）,按上述相同方法构建放射性复合切割伤小鼠模型,实验组小鼠于伤后 0、1、3、4、5、7、9、11、14d 给予rhGM-CSF(6000ng/ml) 凝胶涂抹创面,对照组小鼠给予空白凝胶涂抹,通过检测创面残余面积与胶原纤维水平,评价 rhGM-CSF 凝胶对放射性复合切割伤口的治疗效果。结果：致伤后 1-3d 辐照组GM-CSF mRNA及蛋白水平均显著低于对照组（P<0.05）;5-7d 时,对照组 GM-CSF mRNA及蛋白表达逐渐下降,而辐照组GM-CSF水平无明显改变。凝胶涂抹14d内,rhGM-CSF凝胶治疗组中小鼠皮肤伤口残余面积显著低于空白凝胶组（P<0.05）;Masson 染色显示：与空白凝胶组相比,rhGM-CSF 凝胶治疗后放射性复合切割伤口中可见显著增生、广泛分布,排列紧密的胶原纤维。结论：放射性复合切割伤口早期愈合过程中 GM-CSF mRNA及蛋白表达水平较正常伤口低,而持续给予 6000ng/ml rhGM-CSF 刺激可明显加快放射性复合切割伤的愈合进程。     

人GM-CSF基因的克隆及其稳定表达细胞系的建立

目的研究和建立人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（gramulocyte／macrophase colony-stimulating factor,GM—CSF）造血生长因子的高效表达细胞系,以降低生产成本。方法GM—CSF cDNA基因的扩增采用RT—PCR方法;基因转移采用电转移方法;细胞系采用小鼠B淋巴细胞系（L1／2）;表达产物鉴定采用Western blotting、ELISA及其生物活性测定方法。结果将扩增出的GM-CSF cDNA克隆到pcDNA3．1A载体上,构建成GM—CSF基因的重组表达载体（pcDNA—GMCSF）;经电转移将GM—CSF cDNA转移L1／2细胞中,通过G418的筛选,得到稳定表达重组人GM—CSF的细胞系。经过分析证明表达的重组人GM-CSF具有生物学活性,平均表达水平可达850ng／10^6细胞。结论本文建吐的细胞系能够高效表达具有生物学活性的重组人GM—CSF。     

HBsAg和GM-CSF融合表达质粒的构建

目的：构建乙肝HBsAg和GM-CSF的融合表达质粒，借助GM—CSF的免疫佐剂作用，提高乙型肝炎DNA疫苗的免疫效果。方法：用PCR方法分别从pEcob6和pCD-hGM—CSF中扩增出基因S和GM-CSF，克隆到真核表达质粒pcDNA3．1( )中，构建pcDNA3．1-S及融合表达质粒pcDNA3．1-GM-CSF-S，然后以重组质粒转染真核细胞，研究重组质粒体外表达。结果：经酶切鉴定及DNA序列证实重组质粒构建正确，细胞转染试验表明重组质粒能在COS-7及HepG-2内表达。结论：乙肝HBsAg和GM-CSF的融合表达质粒构建成功，重组质粒能在真核细胞内表达。     

体外人脐静脉内皮细胞分泌GM-CSF的研究

目的 :内皮细胞是一个非造血细胞 ,表达和 (或 )产生大多数已知的造血受体和细胞因子。这些因子和受体的生物学作用仍不十分清楚。本研究旨在探求内皮细胞产生的与造血有关的细胞因子GM -CSF及其生物学功能。同时对GM -CSF在造血调控中的作用及意义进行讨论。方法 :在建立人脐静脉内皮细胞体外培养模型的基础上 ,收集原代培养内皮细胞 1～ 9d培养上清液 ,离心 ,- 2 0℃保存备用。采用双抗夹心ELISA法对上清液中GM -CSF进行定性和定量测定。结果 :在未加任何刺激因素的条件下 ,从培养的人脐静脉内皮细胞培养上清液中可测及GM -CSF(35 0 794± 12 .10 95 pg/ml)。随着内皮细胞培养天数的增加 ,GM -CSF的释放量也随之增加。在第 6天时接近释放峰值GM -CSF(6 3 0 19pg/ml)。 结论 :体外培养的人脐静脉内皮细胞具有自发分泌GM -CSF的功能。GM -CSF能够促进粒系、红系和巨核系克隆形成。本研究为内皮细胞支持各系造血干、祖细胞的增殖和分化提供了理论依据。     

GM-CSF在小鼠放射性复合切割伤中的异常表达及干预治疗实验

目的 对比观察小鼠放射性复合切割伤与单纯切割伤愈合过程中粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocytemacrophage colony stimulating factor,GM-CSF)动态表达水平的差异以及GM-CSF对小鼠放射性复合切割伤的干预治疗效果,进一步探讨GM-CSF对放射性复合切割伤愈合的影响.方法 56只雌性昆明种小鼠(20～22 g)随机分为辐照组和对照组,各28只,辐照组小鼠在6 Gy 60Co γ射线全身一次性均匀辐照后,即刻于背部皮肤制作全层缺损伤口,构建放射性复合切割伤模型;对照组小鼠伤口制备部位、方法同实验组,但小鼠不作辐照处理.伤后1、3、5、7d时分别处死小鼠7只,取创面周围皮肤及下方的薄层肌肉组织,通过Real-time PCR和免疫组化方法检测伤口愈合过程中GM-CSF的mRNA及蛋白表达水平.另将40只同品系、同体质量小鼠随机分为两组(实验组和对照组,各20只),均按上述相同方法构建放射性复合切割伤小鼠模型,于伤后0、1、3、4、5、7、9、11、14 d时分别给予rhGM-CSF(6 000 ng/mL)凝胶或空白凝胶涂抹,通过检测创面残余面积与胶原纤维水平,评价rhGM-CSF凝胶对放射性复合切割伤口的治疗效果.结果 致伤后1～3 d辐照组GM-CSF的mRNA及蛋白水平均低于对照组(P＜0.05或P＜0.01);5～7 d时,对照组GM-CSF的mRNA及蛋白表达逐渐下降,而辐照组GM-CSF水平无明显改变.凝胶涂抹4～11 d内,rhGM-CSF凝胶治疗组中小鼠皮肤伤口残余面积低于空白凝胶组(P＜0.05或P＜0.01);Masson染色显示:与空白凝胶组相比,rhGMCSF凝胶治疗后放射性复合切割伤口中可见显著增生、广泛分布,排列紧密的胶原纤维.结论 放射性复合切割伤口早期愈合过程中GM-CSF的mRNA及蛋白表达水平较正常伤口低,而持续给予6 000 ng/mL rhGM-CSF刺激可明显加快放射性复合切割伤的愈合进程.     

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)与创面愈合

粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte macrophage colony factor,GM-CSF）作为一种多功能的造血生长因子,除了具有促进恢复骨髓造血和增强机体免疫功能的生物学作用,它还具有促进创面愈合的生物学作用,本文综述GM-CSF在创面愈合中的促愈作用及相关机制。     

不同刺激因子对树突状细胞未成熟状态影响的实验研究

目的探讨重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)和粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)在大鼠体内对树突状细胞(DC)数量及成熟度的影响,为诱导移植免疫耐受提供新途径。方法将Wistar雄性大鼠随机分成3组,对照组,GM-CSF预处理组,G-CSF预处理组。分别在给药的3,5,7,9,11d取脾脏并分离DC。采用流式细胞技术检测DC的数量及未成熟树突状细胞(imDC)及imDC/DC的比值。结果DC数量增长与两组药物刺激时间呈线性关系;两组imDC/DC与刺激时间呈正相关性,其中预处理后的第7d达最大值;两种刺激因子对大鼠体内DC增值的数量不具有统计学差异;两种预处理因素对大鼠体内DC成熟度的表达具有统计学差异。结论GM-CSF或G-CSF在大鼠体内作用时,可增加DC的数量及imDC/DC的比率。提示体内使用G-CSF在促进DC的未成熟状态以及诱导免疫耐受方面可能比GM-CSF更明显。     

重组腺病毒为载体的人GM—CSF基因在不同受体细胞中的表达研究

将携带人ＧＭ－ＣＳＦ基因的重组腺病毒分别感染人外周血 单个核细胞、胃癌、乳腺癌、直肠细胞，并将该基因转染的人胃癌、乳腺癌、直肠癌细胞以３５Ｇｙ剂量辐照处理后，检测上述细胞培养上清中ＧＭ－ＳＣＦ含量。     

Experimental study on the antitumor effect of mouse B7-1 gene

ＴｗｏｓｉｇｎａｌｔｈｅｏｒｙｆｏｒＴｃｅｌａｃｔｉｖａｔｉｏｎｐｒｏｖｉｄｅｄａｎｅｗａｐｐｒｏａｃｈｆｏｒｔｕｍｏｒｇｅｎｅｔｈｅｒａｐｙ［１－２］．Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｍｏｌｅｃｕｌｅｇｅｎｅｉｎｔｒａｎｓｆｅｃｔ...     

Epstein－Barr病毒潜伏膜蛋白基因免疫的实验研究

利用基因免疫技术，将重组质粒ｐＢｓ－ＬＭＰ－Ｈｙｇ注入ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠骨骼肌中，于第２、４、８周用间接免疫荧光法检测鼠血清中ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）特异抗体。结果：所有免疫小鼠（５／５）均产生特异抗体，平均抗体滴度第２周为１／１６，第４周为１／３２，第８周为１／４４．８，质粒注射８周后的肌细胞中仍可扩增出目的基因ＤＮＡ序列。提示：目的基因至少可在受体组织中存在并表达到第８周，质粒ＤＮＡ１次性免疫后抗体滴度随时间变化逐渐增高。     

海嘧啶抗肿瘤作用的实验研究

目的 研究海嘧啶的抗肿瘤作用。方法 采用MTT实验和集落形成实验观察海嘧啶的体外抗肿瘤作用;通过海嘧啶对FC小鼠和S180、H22荷瘤小鼠瘤重和生存时间的研究,观察了海嘧啶的体内抗肿瘤作用。结果 海嘧啶对8种人癌细胞具有一定的杀伤作用,以对BGC-823、Eca-109、HCT-8细胞的抑制作用最强;对BGC-823、Eca-109、HCT-8细胞的集落形成有明显的抑制作用,以对Eca-109细胞集落形成抑制作用最强;可明显抑制FC小鼠和S180小鼠瘤体的生长,明显延长H22荷瘤小鼠的生存时间。结论 海嘧啶由中药复方和5-Fu两部分复合而成,其抗肿瘤作用与二者相比具有明显的协同作用．倬抑瘤率大幅度提高．     

牛蒡子提取液的抗癌性研究

目的：通过牛蒡子酒精提取液对几种癌细胞株的体外和体内实验，验证牛蒡子是否具有抗癌性。方法：在人体结肠癌细胞、直肠癌细胞和肝癌细胞培养液中加牛蒡子酒精提取液，培养72h并观察各癌细胞株的增殖抑制率及癌细胞形态变化。用小白鼠肉瘤细胞(Sarcoma-180)制成小白鼠腹水模型，经口给牛蒡子酒精提取液并观察小白鼠的生存时间。用Sarcoma-180细胞制成小白鼠荷瘤模型，经口给牛蒡子酒精提取液2周，并观察瘤体增长抑制率。结果：牛蒡子酒精提取液抑制各癌株细胞生长，可延长腹水模型小白鼠的生存时间，并抑制荷瘤小白鼠瘤体生长。结论：牛蒡子酒精提取液具有抗癌性。     

健康供者外周血造血干细胞动员的临床研究

目的:探讨造血生长因子(HGFs)对健康供者外周血干细胞(PBSC)的动员作用,并比较粒细胞集落刺激因子(G-CSF)单用及G-CSF联合粒-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)的动员效果.方法:52例健康供者分成G-CSF单用组(34例)及与GM-CSF合用组(18例),分别采用G-CSF(5 μg·kg-1·d-1)及G-CSF(3 μg·kg-1·d-1)+GM-CSF(2 μg·kg-1·d-1),连续皮下注射5～6 d动员,采集PBSC.动员前后动态检测外周血及采集物MNC、CD34+细胞、CFU-GM计数.52例血液病患者接受上述供体动员之PBSC并行异基因PBSC移植(Allo-PBSCT).结果:动员后CD34+细胞及CFU-GM分别较动员前增加10.83及8.7倍,并在第5～6天达到高峰;G-CSF单用及与GM-CSF合用均可有效动员CD34+细胞和CFU-GM,但合用较单用更有效(P<0.05);所有患者接受Allo-PBSCT后均满意获得造血重建;随访观察至今应用HGFs对健康供者无明显不良反应.结论:采用中小剂量G-CSF单用和与GM-CSF合用均能安全、有效动员健康供者PBSC,但以合用更为有效.     

新疆阿魏菇提取物对4种肿瘤细胞p53表达的影响

目的：研究新疆阿魏菇提取物影响体外培养的肿瘤细胞p53表达，从细胞凋亡角度探讨其抗肿瘤机制。方法：采用肿瘤细胞体外培养技术及流式细胞技术．观察不同剂量的阿魏菇水提物及醇提物对体外培养的4种类型肿瘤细胞p53表达的影响。结果：受试物对4种类型肿瘤细胞均具有较强的杀伤作用．尤其以0．1g／ml剂量组为明显；经受试物处理后，4种类型肿瘤细胞均观察到细胞核固缩，DNA浓缩并向核膜靠拢形成浓染致密颗粒．并有典型凋亡小体出现。提示．受试物可能通过诱导肿瘤细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用；流式细胞仪检测结果显示，受试物处理后，4种类型肿瘤细胞p53表达水平均有不同程度的上调，尤其以醇提物作用24h后影响Q3细胞p53表达水平最为明显。结论：阿魏菇提取物中的各组分可协同作用诱导肿瘤细胞促凋亡基因的表达，从而达到抗肿瘤之目的。     

Experimental research on effects of a new Traditional Chinese medicine on antitumor metastases

ＴｒａｄｉｔｉｏｎａｌＣｈｉｎｅｓｅｍｅｄｉｃｉｎｅｈｅｒｂｓｈａｖｅｂｅｅｎｕｓｅｄｆｏｒｍｅｄｉｃｉｎａｌｐｕｒｐｏｓｅｓｆｏｒｃｅｎｔｕｒｉｅｓ .Ａｎｄｔｈｅｒｅ ｃｅｎｔｌｙｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｔｅｒｅｓｔｈａｓｆｏｃｕｓｅｄｏｎｖａｒｉｏｕｓｈｅｒｂｓｔｈａｔｐｏｓｓｅｓｓｈｙｐｏｌｉｐｉｄｅｍｉｃ ,ａｎｔｉｐｌａｔｅｌｅｔ ,ａｎｔｉｔｕｍｏｒ ,ｏｒｉｍｍｕｎｅ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓｔｈａｔｍａｙｂｅｕｓｅｆｕｌａｄｊｕｎｃｔｓｉｎｈｅｌｐｉｎｇｒｅｄｕｃｅｔｈｅｒ…     

Experimental study on immunomodulation and antitumor effects of melatonin in H22 hepatoma-bearing mice

Recently,itwasdemonstratedthatmelatonin(MLT)whichisreleasedmainlyfromthepinealgland,notonlyplayedanimportantroleintheregulationoftheneuroendocrineandlmmunesys-tems,butalsoaffectedtumorgrowthinvivo[l'2].Withthedevelopmentofneuroimmuno-modula-tion,peoplehavebeenstudyingtherolesofMLT-,.lnlmmunomodulationconcerningtheetiology,di-agnosisandtreatmentofinfection,tumorandau-to-immunediseases.InChina,therehavebeenfewreportsinthisfield.Inthisstudy,weobservedtheimmunomodulationandantitumoreffectofMLT…     

基因修饰的树突状细胞融合后的瘤苗抗肿瘤免疫应答的实验研究

目的观察粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（ＧＭ－ＣＳＦ）基因修饰的树突状细胞（ＤＣ）与肿瘤细胞融合后，体内诱导的抗肿瘤免疫应答及对荷瘤小鼠的治疗效果。方法从Ｃ５７ＢＬ／６小鼠脾脏中分离ＤＣ，用重组腺病毒载体进行ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰，再与Ｆ１０小鼠黑色素瘤细胞进行融合，通过抗Ｉａ抗体磁珠阳性选择和贴壁培养富集融合细胞。结果经灭活的、由ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的ＤＣ与Ｂ１６．Ｆ１０融合的ＦＤ－ＧＭ能在体内诱导出更强的细胞毒性Ｔ淋巴细胞（ＣＴＬ），抵抗野生型Ｂ１６．Ｆ１０细胞的再次攻击，使经治疗的肺转移荷瘤小鼠的存活期明显延长，肺转移结节显著减少。结论肿瘤细胞与ＧＭ－ＣＳＦ基因修饰的树突状细胞融合后进行体内免疫，能诱导出显著的抗肿瘤免疫反应，可望成为肿瘤基因治疗的新途径。     

次声暴露对小鼠卵巢细胞超微结构的影响

目的：研究次声暴露对小鼠卵巢细胞超微结构的影响。方法：用BALB／c雌性小鼠随机分为3组。对照组置于次声舱内但无次声作用，实验组分为1，7和14d组，分别暴露于8，16Hz及90，130dB声压场中，暴露结束当日处死，取卵巢固定，透射电子显微镜下观察卵巢细胞超微结构的变化情况。结果：1d组中卵泡细胞可见不同程度的细胞变性、坏死，水肿，线粒体肿胀、空泡化，溶酶体增多，髓鞘样结构等一系列急性细胞损伤变化，尤以8Hz,130dB损伤最严重。在7d组中，卵巢细胞内可见大量类固醇和脂滴的结晶，卵母细胞微绒毛减少，卵黄颗粒增多。14d组细胞出现卵泡细胞染色质的浓缩和边集。结论：次声暴露下可致卵泡细胞形态及分泌功能受损，使卵母细胞发育的内环境紊乱，发育异常。