兔抗金黄地鼠酶标抗体的制备及应用

目的纯化金黄地鼠血清IgG,制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(IgG-HRP),开展金黄地鼠仙台病毒的初步检测。方法采用亲和层析纯化法纯化金黄地鼠IgG, 用SDS- PAGE电泳测定IgG纯度并制备兔抗金黄地鼠IgG抗体(second antibody,Ab₂)；用免疫双扩散法检测抗血清效价后,再用亲和层析纯化抗血清IgG(Ab₂)；采用改良过碘酸钠标记法制备兔抗金黄地鼠酶标抗体(rabbit anti-hamster IgG-HRP)；用直接ELISA 和 Western-blot法对兔抗金黄地鼠IgG酶标抗体进行工作浓度测定；应用金黄地鼠酶标抗体对金黄地鼠仙台病毒进行酶免检测(IEA)。结果金黄地鼠血清IgG纯度达95%；兔抗金黄地鼠IgG抗体(Ab₂)免疫双扩散效价为1:64；兔抗金黄地鼠IgG-HRP经直接ELISA 和 Western-Blot测定工作浓度分别为1∶5000和1∶2000；酶免(IEA)效价为1∶2000。 结论高效快速纯化了金黄地鼠IgG,制备了金黄地鼠IgG-HRP,为金黄地鼠病原微生物的血清学检测提供了条件。     

长爪沙鼠IgG的纯化及抗血清的制备

目的纯化长爪沙鼠血清IgG,制备兔抗长爪沙鼠IgG抗血清。方法采用Hitrap Protein G亲和层析预装柱来纯化长爪沙鼠血清IgG;通过SDS-PAGE电泳和Western-Blotting免疫印迹法对长爪沙鼠血清IgG进行纯度鉴定,免疫兔子制备抗血清。结果7 mL长爪沙鼠血清纯化得到11 mg IgG;电泳和免疫印迹测定,IgG纯度大于95%;用纯化的IgG作抗原制备了兔抗血清,免疫双扩散测定效价达1∶32。结论建立了长爪沙鼠血清IgG的纯化方法,制备了长爪沙鼠IgG抗血清,证实长爪沙鼠血清IgG和Protein G具有较高的亲和性。     

抗树鼩、灰仓鼠和长爪沙鼠IgG抗体的制备及标记

目的 制备抗树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠IgG抗体,并分别用异硫氰酸荧光素和辣根过氧化物酶进行标记.方法 采用Protein G分别提纯树鼩、长爪沙鼠和灰仓鼠血清中的IgG,纯化后免疫家兔,制备兔抗三种动物IgG抗体;采用亲和层析纯化兔抗三种动物IgG抗体,并分别进行FITC和HRP标记.结果 分别获得抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG抗体,浓度分别为:2.2 mg/ml、2.3 mg/ml和2.3 mg/ml; FITC标记的兔抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG含量分别为:1.19 mg/ml,1.36 mg/ml和1.55 mg/ml; HRP标记的兔抗灰仓鼠、树鼩和长爪沙鼠IgG含量分别为:0.84 mg/ml、1.09 mg/ml和1.31 mg/ml.结论 得到了适合检测用的FITC和HRP标记二抗,为建立这三种动物致病微生物和寄生虫检测方法提供了试剂.     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒(MHV)S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHV RT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHV RNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3.1 pg/μL,可检测病毒最小滴度为10-3/mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT-PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97%。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒(MHV)RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

蝙蝠血清IgG的纯化及兔抗蝙蝠IgG酶标抗体的制备

目的纯化蝙蝠血清IgG,制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体。方法采用亲和层析纯化法纯化蝙蝠血清IgG,SDS-PAGE电泳鉴定蝙蝠IgG纯度。免疫大白兔制备兔抗蝙蝠IgG抗血清,免疫双扩散法测定抗血清效价,亲和层析纯化法纯化抗血清IgG。用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,直接ELISA和Western blot法对兔抗蝙蝠IgG酶标抗体进行工作浓度测定。结果纯化的蝙蝠血清IgG,其SDS-PAGE测定纯度大于95%;免疫大白兔所制备的抗血清免疫双扩散效价为1∶64;用改良过碘酸钠标记法制备兔抗蝙蝠IgG酶标抗体,其直接ELISA和Western blot工作浓度分别为1∶12800和大于1∶2000。结论制备了蝙蝠血清IgG的抗血清和酶标抗体,为蝙蝠的血清学检测体系提供了技术和资源储备。     

十七种哺乳动物二级抗体的制备和辣根过氧化物酶标记

目的制备兔抗17种哺乳动物的二级抗体,并进行辣根过氧化物酶标记,为哺乳血清学检测系统的建立提供工具。方法利用饱和硫酸铵沉淀法粗纯抗体后,再利用protein A或protein G亲和层析的方法进一步纯化哺乳动物的IgG,免疫大耳白兔制备抗血清,利用免疫双扩散来检测抗血清的效价,并用Protein A亲和层析的方法来纯化兔抗哺乳动物的二级抗体,采用简易过碘酸钠法对纯化的兔抗哺乳动物的二级抗体进行辣根过氧化物酶标记,通过ELISA方法测定标记抗体的效价,并利用Western blot方法考察标记抗体的特异性。结果纯化了恒河猴、东北虎、布氏田鼠、黑线姬鼠、斑羚、原驼、果子狸、食蟹猴、梅花鹿、长爪沙鼠、马鹿、骆驼、大仓鼠、豚鹿、熊猴、大耳羊和雪貂等17种哺乳动物的血清IgG,分别免疫大耳白兔制备了这17种哺乳动物的兔抗血清,免疫双扩散法测定兔抗这17种哺乳动物的抗血清效价均达到1∶32,并对纯化的兔抗恒河猴IgG、兔抗东北虎IgG、兔抗布氏田鼠IgG、兔抗黑线姬鼠IgG、兔抗斑羚IgG、兔抗原驼IgG、兔抗果子狸IgG、兔抗食蟹猴IgG、兔抗梅花鹿IgG、兔抗长爪沙鼠IgG、兔抗马鹿IgG、兔抗骆驼IgG、兔抗大仓鼠IgG、兔抗豚鹿IgG、兔抗熊猴IgG、兔抗大耳羊IgG和兔抗雪貂IgG等17种哺乳动物的二级抗体进行了辣根过氧化物酶标记,ELISA测定标记抗体的效价达到1∶(2000～60000)左右,Western blots显示标记抗体具有很好的特异性。结论成功制备了HRP标记的兔抗17种哺乳动物的二级抗体,为哺乳动物血清学检测体系的建立提供了工具。     

金黄仓鼠病毒抗体ELISA检测方法的建立及应用

用本所制备的酶标兔抗仓鼠IgG，建立了检测金黄仓鼠的淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒、仙台病毒、呼肠孤病毒3型和小鼠肺炎病毒感染的ELISA方法。本法与酶标SPA－ELISA法比较，应用后者金黄仓鼠抗体阳性检出率，仅为前者的50％（85／169）。结果表明用酶标兔抗仓鼠IGG建立的ELISA法的敏感性和特异性要高于酶标SPA-ELISA法。     

普通环境长爪沙鼠种群中病原体携带情况普查

目的对普通环境饲养的长爪沙鼠病原感染情况进行初步调查,为制定长爪沙鼠病原体检测地方标准提供依据。方法参考小鼠、大鼠微生物和寄生虫检测方法,对普通环境饲养的30只长爪沙鼠进行16项细菌、11项病毒和8项寄生虫的检测。结果饲养于普通环境的30只长爪沙鼠有淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒、仙台病毒、小鼠肺炎病毒、呼肠孤病毒III型、小鼠脑脊髓炎病毒、支原体、泰泽病原体、螺杆菌抗体检出,其检出率分别为6.7%、3.3%、100.0%、6.7%、10.0%、6.7%、6.7%和56.7%,同时检出嗜肺巴斯德杆菌感染率为3.3%,金黄色葡萄球菌感染率为10.0%,大肠埃希菌O115 a,C,K(B)感染率为6.7%,鼠三毛滴虫感染率为100.0%,鞭毛虫感染率为100.0%。结论本研究为制定长爪沙鼠等级标准提供了参考数据。     

ELISA检测法对石家庄地区大、小鼠病毒感染的调查

用间接ELISA方法对石家庄地区三个单位一、二级大、小鼠病毒感染情况进行了调查。所用抗原来源为:淋巴细胞性脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、痘苗病毒[抗原性与鼠痘病毒(POXV)类似]和仙台病毒(SendaiV)用BHK_(21)细胞培养;鼠肝炎病毒(MHV)用DBT细胞培养;流行性出血热病毒(EHFV)ELISA抗原购自卫生部生物制品检定所。实验方法是用病毒抗原包被微孔板,冲洗后加入1:40稀释的待     

抗小鼠白血病病毒单克隆抗体的研制及其初步应用

用密度梯度离心提纯的小鼠白血病病毒(Murine Leukemia Virus，MuLv)免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术获得6株分泌抗MuLv单克隆抗体的杂交瘤细胞。经检测，它们所分泌的抗体类型分别为IgM(F10，D6，C12，A8)和IgG1(A9，B6)。腹水效价为10^-8～10^-5。相对亲和力分别为1．25ug／ml(F10)，1．30μtg／ml(D6)，1．20μg／ml(C12)，1．0μg／ml(As)，0．07μg／ml(A9)，0．001μg／ml(B6)。F10,D6,C12，和A8能识别相同或相近的抗原表位，A9和B6识别不同的抗原位点。特异性测定结果表明：6株MeAb与11种鼠源性病毒抗原脑膜炎病毒(LCM)；流行性出血热病毒(EHF)；鼠痘病毒(Ect．)；鼠肝炎病毒(MHV)；仙台病毒(Sendai)；呼肠孤癌病毒(Reo3)；鼠肺炎病毒(PVM)；细小病毒(MVM)；鼠腺病毒(MAd)；多瘤病毒(Polyoma)；脑脊髓炎病毒(GDVII)均无反应。将MuLv MeAb标记荧光素应用于实际检测，取得较好的实验结果。     

胃肠道腺癌患者血清抗癌胚抗原抗体的检测

目的：探讨胃肠道腺癌患者血清中IgG和IgM抗癌胚抗原(CEA)抗体的情况，评价CEA及IgG和IgM抗CEA抗体的联合检测在胃肠道腺癌诊断中的意义。方法：用放免法检测血清中CEA含量，酶联免疫吸附法(EuSA)检测血清中IgG和IgM抗CEA抗体，用竞争抑制法检测抗体的特异性。结果：胃肠道腺癌患者血清CEA含量升高者(≥15ng／ml)占30．9％(21／68)，IgG抗CEA抗体阳性者占35．3％(2，4／68)，IgM抗CEA抗体阳性者占26．5％(18／68)，CEA及抗CEA抗体的联合检测可使胃肠道腺癌的阳性率提高到60．3％(41／68)；健康对照组血清CEA升高者为0，IgG和IgM抗CEA抗体阳性者占3.3%，(1／30)。结论：胃肠道腺癌患者血清中IgG和IgM抗CEA抗体的检出率较高，这些抗体与血清CEA水平的联合检测可提高胃肠道腺癌的诊断率。     

兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体的制备及初步鉴定

目的狨猴血清中纯化IgG抗体,制备兔抗狨猴抗血清,并纯化抗血清中IgG,HRP(辣根过氧化物酶)标记兔抗狨猴IgG。方法 Hi TrapTMProtein G亲和层析纯化狨猴和兔抗狨猴血清IgG,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)进行纯度鉴定,免疫琼脂双扩散法(double immunodiffusion assay)测定制备的兔抗狨猴抗血清效价,改良"简易过碘酸钠标记法"制备兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体,酶联免疫吸附测定法(ELISA)及蛋白免疫印迹法(Western blotting)对兔抗狨猴IgG-HRP标记抗体进行工作浓度测定及特异性鉴定。结果狨猴和兔抗狨猴血清纯化IgG纯度分别大于95%、97%;兔抗狨猴IgG抗血清的效价为1∶64。ELISA和Western blotting鉴定了兔抗狨猴IgG-HRP酶标抗体参考工作浓度为1∶256 000、1∶15 000,特异性明显。结论制备狨猴IgG-HRP标记抗体并初步鉴定,包括ELISA及Western blotting的特异性及使用浓度,为狨猴病原体免疫学检测体系及分子免疫学检测体系储备了资源。     

五种国产与进口小鼠病毒ELISA抗体检测试剂盒的比较研究

目的评价国产小鼠病毒抗体ELISA检测试剂盒。方法选择国产与进口小鼠淋巴细胞脉络丛脑膜炎病毒(LCMV)、肝炎病毒(MHV)、仙台病毒(SV)、腺病毒(MAV)、细小病毒(MPV)ELISA抗体检测试剂盒,进行敏感性、特异性、精密性、稳定性、可信度试验比较。结果国产与进口试剂盒:同种试剂盒之间灵敏度相差最低为2倍,差异显著(P<0.05),最高为16倍,差异极显著(P<0.01);特异性试验显示每种试剂盒,与其他4种病毒均无交叉反应;精密性试验显示5种试剂盒批内平均变异系数均小于10%;稳定性试验显示5种试剂盒相对偏差均小于25%;分别选择已知36份小鼠血清进行检测,国产和进口LCMV、MHV、SV、MPV符合率均为100%;国产MAV符合率为86.1%,进口MAV符合率均为100%,二者之间差异极显著(P<0.01)。结论除国产MAV试剂盒敏感性、可信度低于进口外,国产LCMV、MHV、SV、MPV试剂盒与进口同种试剂盒相比,在敏感性、特异性、精密性、稳定性和可信度方面均良好。     

母婴ABO血型不合母体高效价IgG的低温分离与纯化

目的 分离和纯化母婴血型不合母体的特异性高效价的IgG抗体。方法 采用半饱和硫酸铵低温沉淀法分离IgG抗体，SephedexA50层析柱纯化，然后用B型红细胞(RBC)吸收放散IgG，用聚乙二醇(PEG)沉淀，真空泵脱水回收IgO。结果 200ml血浆经半饱和硫酸铵低温沉淀后得IgG粗制品2．26g，Sephedex A50层析柱纯化后得纯制品1．84g，经B型RBC吸收放散后得特异性IgG 0．55g，回收率达29．89％(0．55／1．84)。结论 采用半饱和硫酸铵低温沉淀法分离高效价IgG抗体，可以获得高纯度的IgG。     

定边县鼠疫疫区周围地区宿主动物及媒介蚤调查

目的了解定边县鼠疫疫区周围地区宿主动物及媒介蚤分布现状。方法以村为单位,通过走访群众和实地考察,了解鼠类分布概况;采用公顷夹日法在长爪沙鼠分布区调查鼠密度;采用5米夹笼法调查夜行鼠密度;采集捕获鼠体表寄生蚤进行种类鉴定;采集鼠血清检测F1抗体。结果石洞沟、贺圈、白泥井3乡(镇)局部地区有长爪沙鼠分布,平均密度为10.00只/公顷,最高密度为66只/公顷;长爪沙鼠染蚤率为19.90%,蚤指数为0.31,秃病蚤为优势种。结论定边县鼠疫疫区周围地区有可能发生动物鼠疫流行,应加强该地区监测工作。     

扩张型心肌病患者血清抗β1肾上腺素受体自身抗体生物学效应

目的研究扩张型心肌病(DCM)患者血清中抗β1肾上腺素能受体(β1-AR)自身抗体的生物学效应及其作用机制。方法采用酶联免疫吸附测定(SA-ELISA)技术,检测39例DCM患者和97例正常人血清标本中的抗β1-AR自身抗体;利用亲和层析法纯化抗体阳性和阴性血清中的IgG,观察抗β1-AR自身抗体对乳鼠心肌细胞搏动频率和成年大鼠心肌细胞腺苷酸环化酶活性的影响。结果DCM患者血清中抗β1-AR自身抗体的阳性率和抗体滴度明显高于正常人;纯化的抗β1-AR自身抗体IgG既可增加乳鼠心肌细胞的搏动频率,又可增强成鼠心肌细胞腺苷酸环化酶的活性,使cAMP产生量增加。结论DCM患者血清中的抗β1-AR自身抗体对心脏的β1-AR具有激动剂样正性变时效应,该自身抗体可能通过β1AR-Gs-AC-cAMP-PKA信号通路起作用。     

长爪沙鼠线粒体DNA控制区全序列测定及分析

目的对长爪沙鼠线粒体DNA控制区全序列进行测定,并对其进行鉴定及进化分析。方法根据长爪沙鼠已知基因序列设计引物,采用PCR产物测序法,对所得的片段进行测序鉴定。结合已公布啮齿类动物D-loop区序列,分析其碱基组成、遗传距离、并基于最小进化法和UPGMA法构建系统进化树。结果获得长爪沙鼠D-loop区序列,其与家鼠、小家鼠和仓鼠平均同源性为58%;碱基组成分析显示,长爪沙鼠与啮齿类动物有相似的碱基组成和碱基偏离,其A-skew和G-skew分别为0.0047和-0.28。进化分析结果显示,长爪沙鼠与家鼠(0.35)、黑家鼠(0.38)和仓鼠(0.39)具有较近的遗传距离,其分化顺序为跳鼠、蔗鼠、长爪沙鼠、仓鼠、家鼠和小家鼠。结论本研究获得长爪沙鼠D-loop区全序列,确定了长爪沙鼠与仓鼠、家鼠、小家鼠及其它啮齿动物的进化关系,为长爪沙鼠进化研究、线粒体的结构和功能研究奠定基础。     

链球菌G蛋白在检测实验动物特异性抗体中的应用

用卫生部武汉生物制品研究所研制的酶联链球菌Ｇ蛋白（ＨＲＰ－ＳＰＧ），配以自制的检测鼠肝炎病毒和仙台病毒抗体的试剂盒，测定小鼠、仓鼠、大鼠、豚鼠和沙鼠血清中的相应抗体，并与ＨＲＰ－ＳＰＡ对比。动物经病毒感染后，产生以ＩｇＧ为主的抗体。以ＨＲＰ－ＳＰＧ作为酶结合物，其结合谱比ＳＰＡ大。用于检测病毒特异抗体时，对大鼠和仓鼠的检出率，明显高于ＨＲＰ－ＳＰＡ，对小鼠和豚鼠则结果近似。用两种酶结合物均未查出沙     

普通环境和清洁级环境中长爪沙鼠寄生虫感染状况观察

目的　了解两种不同环境中饲养的长爪沙鼠寄生虫感染状况。方法　根据 2 0 0 1年中华人民共和国国家标准GB 1 4 92 2 1— 2 0 0 1《实验动物寄生虫学等级及监测》和GB T1 84 4 8 1～ 1 84 4 8 1 0— 2 0 0 1《实验动物寄生虫学检测方法》 ,参考实验动物小鼠、大鼠、豚鼠和地鼠寄生虫等级及检测办法进行检测。结果　饲养于普通环境的 1 5笼 80只长爪沙鼠体表寄生虫感染率为 3 75 % (3 80 ) ,体内寄生虫中卡氏肺孢子虫感染率为 6 2 34% (4 8 77) ,鼠三毛滴虫感染率为 86 2 5 % (6 9 80 ) ;饲养于清洁级环境的 7笼 2 3只长爪沙鼠中 ,卡氏肺孢子虫的感染率为 6 9 5 6 % (1 6 2 3) ,鼠三毛滴虫感染率为 6 9 5 6 % (1 6 2 3)。结论　净化后饲养于普通环境中的长爪沙鼠与净化后饲养于清洁级中的个体相比 ,二者体表寄生虫感染的状况有一定差别。但是 ,卡氏肺孢子虫和鼠三毛滴虫的感染情况似乎无明显差别。     

酶标SpA免疫酶法检测宫颈癌患者血清中单纯疱疹病毒抗体

许多报告认为单纯疱疹病毒Ⅱ型(HSV-2)感染与宫颈癌的发生有关。应用免疫酶法和免疫荧光法检测 HSV/IgG 抗体已有报道。前者需用荧光显微镜,应用受到限制。免疫酶法检测患者体液中病毒特异性抗体比其它方法简便易行,且敏感性和特异性较好,应用日广。用它检测病毒 IgG 抗体,通常以酶标抗人 IgG(简称酶标抗体)作为第二抗体。本文将辣根过氧化物酶标记葡萄球菌 A 蛋白(简称酶标 SpA)用于免疫酶法