Cyclin D1、P16及CDK4基因与胃癌相关性的研究进展

胃癌是全世界发病率和死亡率排名第二位的恶性肿瘤,而我国是世界上胃癌发病率最高的国家之一.细胞周期蛋白的调控能对肿瘤的机制研究及基因治疗提供有效依据.细胞周期中的G1/S期是调控的关键点,其中Cyclin D1、P16及CDK4基因起着重要的作用,且与胃癌之间有着较大的关联性,但上述基因与胃癌之间的关系尚不明确.为了更好地认识Cyclin D1、P16及CDK4基因在胃癌中表达的情况,就近年来相关的研究进行综述.     

S期激酶相关蛋白2与胃癌关系的研究

胃癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一,其死亡率一直居恶性肿瘤的第一位。细胞周期失控与肿瘤发生密切相关。细胞周期的调控是个复杂的过程,主要有两个调控点。一个是G1/S转折点,控制细胞进入S期(G1期检测点);另一个处于G2/M转折点,控制细胞进入M期(G2期检测点)。细胞周期是在细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂(CKI)共同调节下进行的。泛素蛋白酶体(SCF)途径具有降解细胞周期调控因子作用,而S期激酶相关蛋白2(Skp2)是泛素连接酶复合物的底物识别序列,对细胞周期关卡起调控作用。近几年…     

p16基因在肿瘤中的作用研究进展

<正>近年来,研究发现了Cyclins(周期素)-CDKs(周期素依赖性激酶)-CDKIs(CDKs抑制因子)细胞周期网络调控系统,同时亦发现肿瘤形成主要是G1/S转换失调。在肿瘤的发生机制中,CDK与Cyclin有可能作为癌基因,而CDKI有可能作为抑癌基因起作用。CDKIs是细胞周期的关键性调节因子,在许多环节中起“刹车”(brakes)作用。p16基因是CDKI基因家族中率先被克隆出来的,p16又称MTS-1、CDKN2A、INK4a,是一个G1期特异性细胞周期调节基因,当其功能丧失时,细胞生长失控导致肿瘤形成。目前发现,p16在人类肿瘤和细胞系中存在广泛而频繁的缺失和突变。     

细胞周期蛋白与胃癌

胃癌在消化道恶性肿瘤中占第一位,是严重危害健康的主要疾病之一,研究胃癌的发生机制具有重要意义.细胞增殖失控是癌症的重要特征,这表明调节细胞周期的分子机制与肿瘤的发生有关.目前,以周期素依赖性激酶(CDK)为核心的细胞周期正负调控机制在肿瘤发生中的作用受到重视,细胞周期蛋白(Cyclin)是对细胞周期进行正性调节的一类因子.下面,我们就对其在胃癌发生中的表达的研究结果做一综述.     

实时荧光定量PCR检测非小细胞肺癌中cdk4基因表达

肺癌的病死率在我国位于恶性肿瘤的前列.细胞增殖周期调控异常是恶性肿瘤的一个重要特征[1],调控细胞周期进程分子机制的核心是细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependenet kinases,CDK)的活性表达与调控,CDK与细胞周期蛋白 1(cyclin D 1)等相结合而激活蛋白激酶活性推动细胞从G1期向S期过渡[2],启动DNA合成,使细胞从G1期进入S期,使细胞分裂加速.     

细胞周期蛋白D与肿瘤

正细胞周期蛋白(Cyclin)是一类对细胞周期起关键调控作用的蛋白。这些蛋白中包含一些同源区域,例如细胞周期素盒以及细胞周期素盒之外的其它同源区域[1]。在哺乳动物细胞中,细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)结合形成复合物,参与不同细胞周期的调控过程。其中:CyclinD-CDK4/6复合物控制G1期进程,CyclinE-CDK2复合物调控G1/S期转换过程,CyclinA-CDK2复合物对S期起关键调控作用,     

消痰散结方对人胃癌细胞周期及CDK4表达影响的实验研究

[目的]观察消痰散结方(主要由半夏、胆南星、鸡内金、全蝎等组成)对胃癌细胞周期及CDK4表达的影响,以探讨其抑制胃癌增殖的机理。[方法]将人胃癌MKN-45接种于裸鼠腋部皮下,分别给予小鼠消痰散结方、环磷酰胺或生理盐水21 d后处死小鼠,取出瘤组织,用流式细胞仪检测各组胃癌组织中处于G1、S期的细胞数,用免疫组化SABC法检测胃癌组织中CDK4的表达。[结果]中药组G1期细胞数为(66.84±1.14)％,空白组为(54.66±8.72)％,二者比较有显著性差异(P<0.01),中药组、化疗组S期细胞比例均明显低于空白组(P<0.01),中药组S期细胞数也明显低于化疗组(P<0.01)。中药组胃癌组织中CDK4表达总阳性率、中度及以上阳性率均明显低于空白组和化疗组(均P<0.05)。[结论]消痰散结方可明显抑制胃癌细胞的增殖;其机理可能是通过抑制CDK4的表达来影响细胞周期的完成。     

CDK2干扰RNA对人肝癌细胞HepG_2细胞周期和增殖的影响

目的:探讨CDK2 siRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞CDK2 mRNA表达及其对HepG2细胞周期和增殖的影响.方法:利用脂质体转染法将特异性的携带绿色荧光蛋白的CDK2干扰RNA的重组质粒PGenesil-1-CDK2导入HepG2细胞,同时设立阴性对照空载体转染组PGenesil-1-HK.G418筛选稳定表达细胞株扩增培养.并用倒置荧光显微镜观察转染细胞的绿色荧光蛋白.反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和流式细胞术(FCM),分别检测转染后的HepG2细胞CDK2 mRNA和细胞周期的变化,噻唑蓝(MTT)法检测癌细胞生长增殖率.结果:经1mo的G418筛选得到稳定表达细胞株,与阴性对照组及空白对照组相比,转染组CDK2 mRNA 水平明显下降,细胞周期明显改变,细胞从G1期到S期发生阻滞.结论:RNA干扰技术可明显抑制CDK2基因的表达,引起 HepG2细胞周期阻滞及肿瘤细胞生长抑制作用,为CDK2介导的肿瘤基因沉默疗法提供实验依据.     

糖尿病肾病大鼠肾组织周期素D1与周期素依赖性激酶4的表达及意义

目的探讨周期素D1(CyclinD1)与周期素依赖性激酶4(CDK4)在糖尿病肾病发生、进展中的作用。方法通过注射链尿佐菌素建立糖尿病肾病大鼠模型,采用免疫组织化学法检测CyclinD1、CDK4的表达。结果糖尿病肾病大鼠肾组织表现为系膜细胞等中、重度增生,CyclinD1、CDK4表达水平明显上调,二者呈正相关。结论CyclinD1、CDK4参与了糖尿病肾病中肾固有细胞的增殖,是糖尿病肾病发生和进展的关键机制。     

周期素A过表达诱导S期细胞凋亡的研究

目的 探讨细胞周期S期滞留细胞凋亡的分子基础。方法 用Westernbolot法测定L－2和Br1-3pr-1两细胞株细胞周期S期进程相关分子Rb、周期素A、E、CDK2、CDC2及与细胞凋亡直接相关分子Bcl-2和Bax的表达,并用组蛋白磷酸化法测定周期素A、E、CDK2和CDC2相关激酶的活性。结果 经PALA处理后,发生S期细胞凋亡的L－2细胞与不发生S期细胞凋亡的Br1-3pr-1细胞比较,其周期素A的表达明显增加,Bcl-2的表达下降,但经PALA处理后,其他分子的表达和激酶活性在上述两种细胞之间无明显差异。结论 周期素A可能是S期检查点基因的重要候选者,并可能通过调节Bcl-2的表达来控制S期滞留细胞凋亡的发生。     

抑癌基因p14ARF、p57^KIP2与肿瘤关系研究进展

恶性肿瘤严重危害人类的健康 ,其发生系多因素、多阶段、多基因异常累计的过程。基因异常主要表现为原癌基因活化 ,抑癌基因失活和DNA损伤修复基因的突变或丢失。目前 ,抑癌基因异常与肿瘤的关系是研究的热点。真核细胞周期包括G1期、S期、G2期和M期。其控制系统由细胞周期蛋白 (Cy clin)、细胞周期蛋白依赖性激酶 (Cyclin dependentki mase,CDK)和CDK抑制因子 (cdkinhibitor ,CKI)组成。Cyclin与CDK以Cyclin CDK复合物的形式发挥作用 ,Cyclin为调节亚单位 ,CDK催化亚单位。CKI能竞争性地与CDK结合 ,抑制其活性 ,从而调整细…     

周期素A过表达诱导S期细胞凋亡的研究

目的　探讨细胞周期 S期滞留细胞凋亡的分子基础。方法　用 Westernblot法测定 L- 2和 Br1-3pr- 1两细胞株细胞周期 S期进程相关分子 Rb、周期素 A、E、CDK2、CDC2及与细胞凋亡直接相关分子 Bcl- 2和Bax的表达 ,并用组蛋白磷酸化法测定周期素 A、E、CDK2和 CDC2相关激酶的活性。结果　经 PAL A处理后 ,发生 S期细胞凋亡的 L- 2细胞与不发生 S期细胞凋亡的 Br1- 3pr- 1细胞比较 ,其周期素 A的表达明显增加 ,Bcl- 2的表达下降。但经 PAL A处理后 ,其他分子的表达和激酶活性在上述两种细胞之间无明显差异。结论　周期素 A可能是 S期检查点基因的重要候选者 ,并可能通过调节 Bcl- 2的表达来控制 S期滞留细胞凋亡的发生。     

抗肿瘤新靶点CDK9及其抑制剂的研究进展

细胞周期蛋白依赖性激酶9(CDK9)是细胞周期蛋白依赖性激酶家族中的一员。与其他CDKs不同,CDK9主要在转录延伸的调控中发挥作用,而不影响细胞周期过程。目前已有多种CDK9抑制剂进入了临床研究。本文介绍了CDK9的结构特征和作用机制,比较了CDK9与其他CDKs的蛋白结构差异,综述了CDK9非选择性抑制剂和选择性抑制剂的构效关系及研究进展。     

细胞周期蛋白cyclinD1与乳腺癌

一、细胞周期及G1-S期调控细胞增殖呈周期性变化,正常一个周期完成一次有丝分裂,真核细胞周期可分为G1、S、G2、M四期,每个时期均有一个调控点(check point),受调控因子(cell-cycle regulatolrs)的调控,调控因子包括周期蛋白(cyclins),周期蛋白依赖激酶(cy-cle-dependent kinases CDKs)和周期蛋白依赖激酶抑制因子(cycle-dependent kinases inhibitors CKIs),以CDK为中心,cyclins起正调节作用,促进细胞增殖;CKIs发挥负调节作用,抑制细胞增殖。增殖周期中有多个调控点,其中最重要的是起始调控点即G1-S间的前期调控点,细胞在该点上对复杂的内外信号进行整合与传递,决定细胞是进入分裂程序还是进入静止的GO期,此点主要由cyclin D1-3决定的,其中cyclin D1最重要,当受生长因子刺激cyclin D1增多,与CDK4/CDK6结合使其活化为蛋白激醇,使Rb蛋白磷酸化,Rb蛋白磷酸化后构象改     

HPV16E7通过调控 miR-29a-CDK6信号通路 促进肿瘤细胞增殖

摘要:目的 探究人乳头瘤病毒16E7(HPV16E7)通过调控细胞内 miR-29a表达促进细胞增殖的分子机制,从 miRNA 的视角探讨高危型 HPV 的致癌机制。方法 将 HPV16E7基因构建到真核表达载体pcDNA3.1(-),将重组质 粒及空载质粒分别转 染 人 前 列 腺 癌 细 胞 PC3;通 过 半 定 量 RT-PCR 检 测 细 胞 周 期 相 关 基 因 及 miR-29a潜 在 靶 基 因 CDK6、HBP1的表达水平,通过荧光素酶报告实验确定 miR-29a的靶基因;将 miR-29amimic及inhibitor分别瞬时转染 PC3-E7和 PC3-3.1细胞,Westernblot检测 CDK6蛋白表达,流式细胞术检测细胞周期分布。结果 与对照组相比,克 隆细胞株 PC3-E7中 CDK4、CDK6、CyclinE2、E2F1等细胞周期相关调节因子及 miR-29a的潜在靶基因 HBP1、CDK6等 表达均有不同程度的上调(均P<0.01);而 PC3-E7细胞中 CDK6蛋白表达水平亦明显高于对照组(P<0.01);miR-29a 通过靶向3'-UTR区域调控 CDK6基因转录和蛋白表达,E7高表达后下调了 miR-29a的表达水平,使得 CDK6表达升 高,而加速细胞周期 G1期向S期进展。上调 miR-29a后可以抑制 CDK6的表达,并调控下游细胞周期,部分逆转 E7的 促增殖效应。结论 miR-29a与 CDK6mRNA3'UTR结合并下调其表达,从而抑制细胞的增殖,E7-miR-29a-CDK6信 号通路可能是高危型 HPV 致细胞发生恶性增殖的重要途径。     

细胞周期蛋白G1、G2与恶性肿瘤的研究进展

肿瘤的形成是细胞增殖、凋亡和分化异常的结果。基于细胞分子生物学的现代医学研究表明细胞周期与细胞癌变已不是两个独立的事件,肿瘤是一种细胞周期紊乱性疾病。细胞周期蛋白目前分Cyclin A、B、C、D、E、F、G、H、I、K十大类。除Cyclin G以外,细胞周期蛋白多数通过在细胞周期时相性地合成与降解,调节对其依赖的蛋白激酶（CDK）活性,从而调控细胞周期进程。细胞周期人为分为DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）和分裂期（M期）。     

G2／M 期阻滞因素及常用诱导方法

细胞周期检查点（ checkpoint ）是真核细胞为保证染色体数目的完整性及细胞周期正常运转而存在的重要控制机制。虽然正常细胞存在多个周期检查点,但肿瘤细胞普遍存在G1期检查点缺陷,并且肿瘤细胞在DNA损伤后,都有选择性地滞留于G2期的趋势。因此G2／M期检查点成为肿瘤治疗的一个诱人靶标［1］。当把肿瘤细胞长时间阻滞于G2／M期,一方面能够抑制肿瘤的生长,另一方面使肿瘤细胞累积DNA损伤而触发凋亡［2］,起到治疗肿瘤的效果,而采用此种治疗策略的前提就是要用有效的方法把肿瘤细胞阻滞于G2／M期。当前,国内外对G2／M期阻滞的研究主要集中于周期素依赖激酶1（CDK 1）和细胞周期素B（Cyclin B）的信号调控和细胞骨架对有丝分裂的影响,本文就G2／M阻滞的因素及常用的G2／M阻滞方法作一回顾,为发现G2／M期阻滞的新机制和方法奠定基础。     

葛根素对人小细胞肺癌H446细胞周期和相关周期蛋白表达的影响

目的观察葛根素诱导人小细胞肺癌H446细胞周期的阻滞作用,进一步探讨其作用机制。方法采用MTT法测定葛根素对H446细胞生长的影响;采用流式细胞术检测处理后H446细胞周期分布和周期蛋白cyclinD1、CDK4和P27表达水平。结果MTT法表明葛根素对H446细胞生长有较强的抑制作用;流式细胞仪检测结果发现细胞周期阻滞在G0/G1期,量效关系良好,并检测到细胞周期蛋白cyclin D1、CDK4表达减弱,P27表达增强。结论葛根素可通过诱导细胞周期阻滞而发挥体外抗肺癌作用,其机制可能涉及细胞周期相关蛋白cyclin D1、CDK4和P27表达的调控。     

P^16基因的研究进展

恶性肿瘤的发生 ,目前认为是细胞内癌基因的激活与抑癌基因的缺失和 (或 )失活所致 ,其中已发现的癌基因有 1 0 0多种 ,而抑癌基因的发现很少 ,目前已肯定的抑癌基因包括 Rb、P53、nm2 3、P16等 ,其中 P16基因是最近研究的热点( 1) 。 P16基因 ,又称MTS1(Multiple Tumor Suppressor1 )或 CDKN2 基因 ,是人们发现的第一个直接参与细胞周期调控的抑癌基因 ,位于染色体 9P2 1( 2 ) ,其编码蛋白质是周期素依赖激酶 4(CDK4,Cyclin Dependent Kinase4)的抑制剂 ,周期素与 CDK结合 ,能使 Rb1蛋白磷酸化 ,解除其对 DNA合成必需的—酶表…     

苦参素注射液对Eca-109细胞周期及CyclinD1、CDK4蛋白表达的影响

目的:探讨苦参素对人食管癌Eca-109细胞增殖周期的影响及其机制.方法:将体外培养的人食管癌Eca-109细胞分为苦参素组(1、2 mg/L)、阳性对照组(氟尿嘧啶)和阴性对照组(等体积的培养液),分别培养24 h后收集细胞,运用流式细胞术检测细胞周期变化和调控细胞增殖周期的相关蛋白CyclinD1和CDK4的表达.结果:苦参素对Eca-109细胞持续作用24 h后,细胞周期结果显示,G0/G1期细胞增多,S期细胞减少,CyclinD1和CDK4蛋白表达量降低,与阴性对照组比较,差异均有统计学意义(P均＜0.05).结论:苦参素可以将Eca-109细胞阻滞于G0/G1期,其主要机制可能与CyclinD、CDK4的低表达有关.