聚合酶链反应检测老年人肝硬化及肝癌患者血清中HCV－RNA和HBV－DNA

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）对１３５例老年人肝硬化，６９例老年原发性肝癌患者血清中乙型和丙型肝炎病毒进行了检测。检测结果：乙型肝炎病毒检出率在肝硬化和肝癌中均高于丙型肝炎病毒检出率，但在两种疾病之间，乙型、丙型肝炎病毒检出率差异均无显著性（Ｐ＞０．０５）．提示乙型、丙型肝炎病毒与肝硬化、肝癌相关，但以乙型肝炎病毒为主。     

HBsAg阴性肝癌组织中HCV RNA的 原位聚合酶链反应检测

一、资料与方法1. 临床资料：收集1992年６月至1999年７月,经病理证实为HCC且血清HBsAg ELISA法检测为阴性的病例32例,其中男26例,女87例,年龄22～73岁,平均年龄46.8岁,肝脏标本包括肝癌组织及癌周组织,其中６例为肝穿组织,27例为手术标本,标本以液氮冷冻和石蜡包埋二种方式保存,患者血清保存于-30℃冰箱。2. 试剂：HCV内外引物选自HCV基因组5′端NC区的nt序列,产物大小256bp,委托上海Sangon公司合成。引物序列如下,Sense（引物）5′AAC TAC TGT CTT CAC GCA GA 3′;Anti-sense（引物２）5′CGC AGC ACC…     

逆转录－套式－聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞癌的关系

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链；用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ。结果发现：５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清、癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性；１例三者均阴性；１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性的癌组织和癌旁组织均检出了ＨＣＶＲＮＡ负链，但血清中未检出负链。在２２例ＨＣＣ中１３例血清、８例癌组织和１５例癌旁组织中检出ＨＢＶＤＮＡ。５例有ＨＣＶＲＮＡ和／或抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者血清、和／或癌组织、和／或癌旁组织中均伴随ＨＢＶＤＮＡ和／或ＨＢ－ＶＭ阳性。提示ＨＣＶ可在癌旁肝细胞或肝癌细胞中感染并复制；ＨＢＶ感染与肝癌发生的关系比ＨＣＶ感染更密切。     

原位杂交法检测外周血单个核细胞中HCV RNA

目的比较慢性丙型肝炎患者用干扰素治疗前以及治疗后３个月ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。方法应用地高辛素标记ＨＣＶＲＮＡ正链及负链探针，建立原位杂交方法检测外周血单个核细胞（ＰＭＢＣ）中的ＨＣＶＲＮＡ。结果治疗前１９例患者正链ＨＣＶＲＮＡ阳性，８例负链ＨＣＶＲＮＡ阳性，用正链探针杂交在较多的细胞中出现杂交信号，负链探针杂交仅在少数细胞中出现杂交信号，ＨＣＶＲＮＡ在ＰＢＭＣ胞浆中呈均质性分布。用干扰素治疗结束后３个月２０例患者中９例ＨＣＶＲＮＡ转阴性，近期治愈率４５％。结论原位杂交技术的敏感性及特异性较高，且重复性较好，是研究ＨＣＶＲＮＡ在组织中定位分布和病毒复制场所一种切实可行的方法     

聚合酶链原位扩增法检测肺石蜡切片结核菌DNA

应用并改进聚合酶链反应检测肺石蜡片组织中的微量结核菌，既提高了灵敏性和特异性，又可定位观察病灶及其与周围组织的关系，并可避免放射性污染。适用于尸检，活检（支气管镜检）和涂片标本。     

HCV RNA链扩增反应（PCR）检测及其基因分型方法的建立

我们用选自ＨＣＶ５’ＮＣＲ和Ｃ区引物建立了检测血清中ＨＣＶＲＮＡ及其基因型的ＲＴ／ＰＣＲ方法，可以敏感而特异地检出血清中ＨＣＶＲＮＡ及其４种基因型。５０例抗ＨＣＶ阳性献血员ＨＣＶＲＮＡ检出率为８４％（４２／５０），４２例ＨＣＶＲＮＡ阳性者中ＨＣＶⅡ型占５９．５％（２５／４２），Ｉ型和混合型（包括Ⅰ／Ⅱ、Ⅱ／Ⅲ、Ⅰ／Ⅲ和Ⅰ／Ⅱ／Ⅲ各２例）分别占１１．９％和１９％，另有４例Ｃ区分型结果阴性，为未定型，占９．５％，没有发现Ⅳ型。上述结果说明我国献血员中存在无症状ＨＣＶ携带者，ＨＣＶ基因型则以Ⅱ型为主，Ⅰ型次之，Ⅲ型较少。     

逆转录—套式—聚合酶链反应检测HCV RNA正链和负链及与肝细胞…

为了解ＨＣＶ与肝癌的关系，采用ＨＣＶ５′－ＮＣＲ正相引物和反相引物逆转录－套式－聚合酶链反应（ＲＴ－Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ）检测了２２例肝癌手术患者血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链和负链，用ＨＢＶＣ保守区引物ＰＣＲ法检测了ＨＢＶＤＮＡ，结果发现，５例抗－ＨＣＶ阳性的肝癌患者中，３例血清，癌组织和癌旁组织ＨＣＶＲＮＡ正链扩增试验均阳性，１例三者均阴性，１例血清和癌旁组织阳性。３例正链扩增试验阳性     

慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中负链HCV RNA的检测及意义

19例临床诊断慢性丙型肝炎患者,检测其外周血单个核细胞中丙型肝炎病毒(HCV)RNA的存在及复制状态。所选检测对象血清标本抗-HCV及HCV RNA均为阳性。采用逆转录-套式PCR法检测其外周血单个核细胞中HCV正、负链RNA,结果19例患者外周血单个核细胞中14例HCV正链RNA阳性;6例HCV负链RNA阳性。实验结果证实部分慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中存在HCV复制,表明肝细胞并非为HCV感染与复制的唯一场所。HCV感染慢性化与其外周血单个核细胞中存在HCV复制可能有一定关系。     

原位反转录PCR检测慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞中HCV

目的研究慢性丙型肝炎患者外周血单个核细胞（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌｂｌｏｏｄｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒｃｅｌ，ＰＢＭＣ）中丙型肝炎病毒的定位分布及复制。方法直接原位反转录－ＰＣＲ（标记引物）对２０例慢性丙型肝炎患者的ＰＢＭＣ内丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）的分布、定位及存在形式进行研究。结果１６例患者外周血单个核细胞的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ阳性信号，并有一例患者的胞浆内发现ＨＣＶＲＮＡ负链信号。结论ＨＣＶ可感染ＰＢＭＣ并在其中复制。原位ＲＴ－ＰＣＲ为进一步研究ＨＣＶ进入人体内的分布、潜伏、复制状况以及丙型肝炎治疗、药物研究奠定了基础。     

地高辛标记原位杂交技术检测骨髓单个细胞中HCV RNA

为探讨丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）肝外感染、复制场所与肝损害的关系，应用地高辛标记ＨＣＶ ＲＮＡ探针原位杂交技术，对２０例慢性丙型肝炎患者骨髓单个核细胞中的ＨＣＶ ＲＮＡ（包括正边ＲＮＡ和负链ＲＮＡ）进行了检测。结果有１８例骨髓单个核细胞用正链ＨＣＶ ＲＮＡ探针杂交在较多细胞中出现杂交信号（９０％），而所有患者骨髓竟单个核细胞用负链ＨＣＶ ＲＮＡ探针杂交无杂交信号出现。结果提示：慢性丙肝患者骨髓中存在的     

套式PCR法检测HIV感染者血清中HCV RNA

用套式ＰＣＲ法对２５例人类免疫缺陷病毒Ｉ型（ＨＩＶ－Ｉ）感染者和１７例对照组血清作了ＨＣＶ－ＲＮＡ检测。ＨＣＶＲＮＡ阳性者９例，其中４例有输血或接受过血制品史，３例为静脉药瘾者（ＩＶＤＵＳ），另２例与ＨＩＶ阳性患者有ＩＶＤＵＳ和性接触史，对照组无１例阳性。有输血／血制品和ＩＶＤＵＳ危险因素的患者的ＨＣＶＲＮＡ检测的阳性率最高（８０％和５０％）。在ＨＩＶ伴ＨＣＶ感染的全部病例中，仅２例曾有ＡＳＴ和ＡＬＴ轻度升高。本研究表明，这两种病毒伴随感染率之高是与其相同的传播途径危险因素有关，而未发现此两种病毒间可能相互影响的证据。     

地高辛标记原位杂交技术检测骨髓单个核细胞中HCV RNA

为探讨丙型肝炎病毒(HCV)肝外感染、复制场所与肝损害的关系,应用地高辛标记HCV RNA 探针原位杂交技术,对20例慢性丙型肝炎患者骨髓单个核细胞中的 HCV RNA(包括正链 RNA 和负链 RNA)进行了检测。结果有18例骨髓单个核细胞用正链 HCV RNA 探针杂交在较多细胞中出现杂交信号(90%),而所有患者骨髓单个核细胞用负链 HCV RNA 探针杂交无杂交信号出现。结果提示:慢性丙肝患者骨髓中存在 HCV RNA,即骨髓可受到丙肝病毒感染.但骨髓单个核细胞负链 RNA 阴性表明骨髓细胞并非 HCV 的复制场所。本研究对阐明 HCV 在人体中的致病作用以及丙肝的慢性化有一定的意义。     

用原位杂交和RNA斑点杂交法检测人原发性肝癌层粘蛋白mRNA

用原位分子杂交和RNA斑点杂交方法检测了正常肝、原发性肝癌及癌旁肝组织中层粘蛋白(Laminin,LN)mRNA。结果发现人原发性肝癌组织中间质细胞、肿瘤细胞均有杂交信号。肿瘤细胞信号较强。认为肿瘤细胞LN基因过度表达与瘤细胞的固有特性有关,瘤细胞是癌组织中LN的主要来源。     

用RT/PCR检测HCV RNA的负链:显示HCV在感染组织中复制

逆转录和聚合酶链反应的结合(RT/PCR)对于检测丙型肝炎病毒(HCV)感染患者血清中的 HCV RNA 是非常有用的工具。然而由于PCR 的高度敏感性,用于研究肝等组织中 HCV的存在时,难以区分病毒核酸是来自肝细胞内,还是来自可能污染肝标本的血液。鉴于 HCV 是与黄病毒有远缘的单股正链 RNA 病毒,推测在     

同步检测血浆和外周血单个核细胞中HCV RNA的临床研究

目的探讨联合检测对提高HCV RNA在慢性丙型肝炎患者中检出率的临床意义.方法利用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对583例ALT升高持续1年以上的患者进行同步检测血浆和外周血单个核细胞(PBMC)中的HCV RNA.结果血浆中HCV RNA总检出率为19.2%.PBMC中HCV RNA总检出率为24.5%,HCV RNA在PBMC中的检出率明显高于血浆中的检出率.结论两种方法同时应用能够提高HCV RNA在慢性丙型肝炎患者中的检出率.     

长链非编码RNA对原发性肝癌中糖酵解途径的影响机制

原发性肝癌发病机制复杂,具有起病隐匿、恶性程度高、预后差等特点。而肿瘤细胞与正常细胞的区别之一在于糖代谢途径的改变,肿瘤细胞优先选择糖酵解途径提供能量。有氧糖酵解则常与原发性肝癌的进展及预后不良有关。长链非编码RNA在众多肿瘤中通过调节糖摄取率、糖酵解酶的表达及活性,影响糖酵解途径,并在原发性肝癌的发生及进展中起着重要的调节作用,提示其可以作为肝癌的治疗靶点。总结了长链非编码RNA对原发性肝癌及糖代谢的影响机制,旨在为原发性肝癌寻找潜在有效的靶向治疗。     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

目的 了解丙肝患者血清和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＨＣＶＲＮＡ存在情况及有其临床意义，方法 应用套式ＰＣＲ检测４６例急性丙型肝炎（丙型肝炎以下简称丙肝）和４２例慢性丙型肝炎患者血清和ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ。结果 慢性丙型肝炎患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶＲＮＡ检出率显著高于急性丙型患者（Ｐ〈０．００１），急，慢性丙型肝患者血清和慢性丙肝患者ＰＢＭＣ中ＨＣＶ ＲＮＡ检出率显著高于ＡＬＴ正常的抗－ＨＣＶ阳性     

丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞中HCV RNA检测及意义

采用套式PCR检测38例急性丙型肝炎和36例慢性丙型肝炎患者血清和外周血单个核细胞(PBMC)中HCV RNA。结果显示74例丙型肝炎患者血清HCV RNA阳性68例,PBMC阳性44例;急性丙型肝炎患者PBMC中HCV RNA阳性15例(39.5％),慢性丙型肝炎患者PBMC中阳性29例(80.5％);3例血清HCV RNA阴性,而PBMC中HCV RNA阳性;8例患者血清抗-HCV阴性,而血清HCV RNA阳性。结果显示,在部分丙型肝炎患者的PBMC中存在HCV RNA,慢性丙型肝炎患者PMBC中HCV RNA检出率显著高于急性丙型肝炎患者(P<0.01)。提示PBMC可能为HCV肝外贮存和复制场所,PBMC中的HCV感染在丙型肝炎慢性化和慢性肝损害中可能起一定作用,血清HCV RNA检测可能有助于抗-HCV阴性丙型肝炎的诊断。     

丙型肝炎病人骨髓单个核细胞中HCV—RNA的检测及其意义

采用逆转录套式ＰＣＲ法，对２０例慢丙型肝炎患者骨髓单个核细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ进行了检测，在２０例血清抗ＨＣＶ阳性及ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性的患者中，１６例骨髓单个核细胞ＨＣＶ－ＲＮＡ呈阳性反应，４例为阴性反应，阳性率达８０％。结果表明，骨髓单个核细胞中存在ＨＣＶ，提示骨髓可甬ＨＣＶ肝外又一感染复制及贮存的民。并对肝外ＨＣＶ感染、复制与内肝慢性化的致病关系，以及临床治疗进行了讨论。