复方861对原代培养大鼠肝细胞增殖和凋亡的作用

目的：研究中药复方861对原代培养大鼠肝细胞增殖和凋亡的干预作用。方法：分离培养大鼠原代肝细胞并进行鉴定,细胞增殖采用H^3标记胸腺嘧啶掺入法检测,细胞凋亡采用电镜观察和流式细胞仪检测。结果：一定浓度的复方861可以促进体外分离培养的大鼠肝细胞DNA合成（P＜0．05）,这种作用在一定浓度范围内呈剂量效应关系。而该药对肝细胞的凋亡无显著影响（P＞0．05）。结论：中药复方861对体外培养的大鼠肝细胞具有促进增殖的作用。     

鹿茸多肽促进肝细胞增殖及肝部分切除小鼠的肝再生

 目的研究鹿茸多肽(VAP)对细胞增殖及实验性肝再生的影响。方法培养人胚肝细胞株(L-02)和原代大鼠脾细胞,体外加入不同剂量VAP,用MTT比色法观察其对细胞增殖的影响。整体观察VAP促进肝部分切除小鼠肝再生作用。结果VAP 50和25 mg·kg^-1·d^-1能明显促进小鼠肝切除后的肝再生,与对照组比较差异显著(P<0.01和P<0.05)。VAP 5-80mg·L^-1对L-02细胞株和大鼠脾细胞均有明显的促增殖作用。结论VAP通过促进肝细胞增殖和增强免疫力的影响来加速实验性肝切除小鼠的肝再生。     

白花丹素的体外肝毒性研究

目的 观察白花丹素在体外对4种肿瘤细胞的作用及其在体外对人胚肝细胞L-O2的毒性作用.方法 采用MTT法检测不同浓度白花丹素对肿瘤细胞和人胚肝细胞L-O2的毒性,比较其IC50值;采用紫外分光光度法测定白花丹素作用后肝细胞培养上清液中SOD,MDA,LDH值的变化.结果 白花丹素在体外具有较强抗肿瘤作用,同时对人胚肝细胞L-O2有一定的毒性作用.结论 白花丹素是优良的抗肿瘤药物,对肿瘤细胞有明显毒性作用,同时具有一定肝毒性,使用时应注意监测肝功能.     

化肝煎对肝细胞和活化肝星状细胞功能的影响

目的探讨化肝煎含药血清对肝细胞和活化肝星状细胞HSC-T6的影响及机制。方法体外构建肝细胞及CCl_4肝细胞损伤模型,加入不同体积浓度的化肝煎含药血清,通过MTS法检测肝细胞存活率;采用MTS法检测化肝煎干预肝星状细胞HSC-T6后的细胞存活率,同时采用实时荧光定量核酸扩增检测系统(qPCR)和蛋白印迹法(Western blot)检测eIF3(eukaryotic initiation factor 3)家族相关因子的表达。结果在1～8%体积浓度范围内化肝煎含药血清对肝细胞无细胞毒性,并可改善CCl_4所致肝细胞存活率下降;当化肝煎含药血清体积浓度为10%、30%、50%和60%时显著抑制活化肝星状细胞的增殖,此外,化肝煎含药血清对eIF3a mRNA及蛋白表达均显著抑制。结论化肝煎含药血清能保护肝细胞,并抑制活化肝星状细胞HSC-T6的增殖,可能跟抑制eIF3a而抗肝纤维化有关。     

加味四逆散对肝星状细胞增殖的实验研究

目的:观察加味四逆散含药血清对大鼠肝星状细胞(HSC-T6)增殖的影响,探讨加味四逆散抗肝纤维化的作用机制。方法:以不同浓度的加味四逆散含药血清作用于体外培养的HSC-T6细胞,分别作用12h、24h、48h后,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各组HSC-T6的增殖。结果:加味四逆散含药血清作用于大鼠HSC-T6后,细胞增殖受到明显抑制,呈时间和浓度依赖性,各浓度组与空白对照组比较差异有极显著性(P<0.01),加味四逆散低、中、高浓度组与鳖甲软肝片组比较,除低、中浓度组作用12h、24h时无差异外(P>0.05),其余各浓度组均优于鳖甲软肝片组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:加味四逆散含药血清可明显抑制体外培养HSC-T6的增殖。     

抗肝纤维化有效中药复方血清药理学方法探讨

扶正化瘀方灌胃正常大鼠制备血清，温育大鼠肝细胞及星状细胞，将含药血清及冻干粉直接添加于培养细胞，通过观察细胞形态及功能变化，探讨复方抗肝纤维化的血清药理试验方法。结果表明冻干粉抑制细胞增殖及活力。二次给药１ｈ后同种灭活血清抑制星状细胞增殖、促进肝细胞增殖，能较好地用于抗肝纤维化的体外药理试验。     

肝复康滴丸对四氯化碳损伤大鼠原代肝细胞的保护作用

目的:研究肝复康滴丸含药大鼠血清对CCl₄损伤原代肝细胞的保护作用。方法:采用酶消化法分离大鼠肝实质细胞进行体外培养并建立CCl₄肝损伤模型,以AST和ALT为指标,并采用MTT法对细胞活性和增殖进行检测,观察肝复康滴丸含药血清对肝损伤原代细胞的保护作用。结果:肝复康滴丸含药血清可使肝损伤大鼠原代细胞的增殖率明显提高,AST和ALT的含量明显降低。结论:肝复康滴丸具有很好的肝细胞保护作用。     

中医药抗肝纤维化实验研究的现状与展望

目的：探讨中医药抗肝纤维化的实验研究现状。方法：对近10年来发表的中医药抗肝纤维化的实验研究方面的论文进行整理、研究。结果：中医药可减轻肝细胞坏死,促进肝细胞再生;抑制肝星状细胞活化增殖,诱导肝星状细胞凋亡;促进ECM及胶原纤维的降解。结论：实验研究证明,中药有良好的抗肝纤维化作用。     

黄芪刺激体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的作用

目的探讨黄芪对体外培养的大鼠肝卵圆细胞生长的影响。方法从喂饲含0．1%乙硫氨酸的胆碱缺乏性饮食4～6周的大鼠肝脏中分离出肝卵圆细胞,用RT-PCR、免疫组化、Westem blot等方法对培养的细胞进行鉴定。MIT法观察不同浓度黄芪对肝卵圆细胞生长的影响；Giemsa染色法观察细胞表型的改变情况；碘化丙啶染色流式细胞仪测定细胞周期的变化。结果所分出的细胞既表达干细胞标志物c-kit,也表达胚胎肝细胞标志物甲胎蛋白、胆管细胞标志物OV6和CK19,此外还表达成熟肝细胞标志物白蛋白,认为它们是大鼠肝卵圆细胞。从0．125mg/ml～4mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后都有促进其生长的作用,其中2mg/ml黄芪刺激生长作用最明显(P＜0．05)。2 mg/ml黄芪处理肝卵圆细胞48h后既出现了一些增殖能力强的细胞,也出现了一些核质比低的细胞,此时细胞周期测定结果显示处G_2-S和M期的细胞比未用黄芪处理的对照细胞增多。结论黄芪具有明显的刺激体外培养的肝卵圆细胞生长的作用。     

扶正化瘀中药体外对大鼠纤维肝肝细胞蛋白合成、分泌的影响

目的：观察扶正化瘀中药体外对大鼠纤维肝肝细胞白蛋白合成、分泌的影响。方法：苦杏仁甙,丹参水溶性提取物,冬虫夏草,秋水仙碱作用于体外原代单层培养的大鼠纤维肝肝细胞,用ELISA方法检测。结果：除水仙碱外,苦杏仁甙＋冬虫夏草,冬虫夏草,丹参水溶性提取物具明显提高大鼠纤维肝肝细胞合成、分泌白蛋白的作用（P＜0．05）,以苦杏仁甙＋冬虫夏草作用最明显。病因是否去除,对大鼠纤维肝肝细胞合成、分泌白蛋白功能和药物对其作用有明显影响（P＜0．05－0．01）。结论：苦杏仁甙＋冬虫夏草,冬虫夏草,丹参水溶性提取物能促进大鼠纤维肝肝细胞合成、分泌白蛋白。     

灵芪胶囊含药血清对人红白血病K562细胞增殖抑制作用的影响

目的：观察灵芪胶囊（LQC）含药血清在体外对K562白血病细胞增殖抑制作用的影响。方法：采用血清药理学方法制备灵芪胶囊含药血清,以不同浓度的含药血清处理体外培养的K562白血病细胞,并测定抑制率、分裂指数以及克隆形成能力,观察灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的抑制作用;用W right-G iemsa染色方法观察肿瘤细胞形态的变化。结果：不同浓度灵芪胶囊含药血清对K562细胞的增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系;灵芪胶囊含药血清对肿瘤细胞的分裂指数和克隆形成能力均具有显著的降低作用,在一定的时间内与剂量呈正相关,同时亦使肿瘤细胞的形态结构发生改变。结论：灵芪胶囊含药血清对K562白血病细胞具有细胞毒作用,其直接杀伤和破坏肿瘤细胞的作用是灵芪胶囊抗肿瘤的主要机理之一。     

降糖防聋方对体外高糖培养成骨细胞骨钙素分泌的影响

目的:探讨降糖防聋方对体外高糖培养成骨细胞骨钙素的影响.方法:采用改良的组织块法分离培养新生大鼠颅骨成骨细胞,用不同浓度的降糖防聋方含药血清及不含降糖防聋方含药血清的α-MEM培养液加入到成骨细胞高糖(糖终浓度为300 kg·L-1)培养体系,作用不同时间,应用放免法测定细胞骨钙素(BGP)的水平.结果:100,50,10 mg·L-1的降糖防聋方含药血清对体外高糖培养成骨细胞具有明显的促进作用(P＜0.05),在较高浓度对对成骨细胞增殖无明显抑制效应.结论:降糖防聋方含药血清对高糖培养成骨细胞骨钙素有不同程度调节改善作用.     

调肝益气通络方药物血清对骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的:通过观察调肝益气通络方对大鼠间充质干细胞增殖能力的影响,从而评价该方的促增殖能力。方法:腹腔注射"CCl4-橄榄油"混悬液制备Wistar小写大鼠(35只)肝纤维化模型;其中30只灌胃给予调肝益气通络方(低、中、高3个剂量)1个月,制备含药血清;另外5只用于MSC细胞的分离与培养;用含药血清诱导MSC向肝细胞的分化连续7 d;在各检测点进行形态学观察及通过MTT对细胞增殖情况进行评价。结果:各浓度含药血清在加入1⁷ d后,其细胞数量均比常规培养组增多,并同用药剂量呈正比,浓度越大细胞数量越多,细胞数随着时间的推移而不断增大。结论:调肝益气通络方对大鼠骨髓里的间充质肝细胞的增殖能力具有显著的促进作用。     

益气解毒中药对肝卵圆细胞系WB—F344作用机制的研究

目的研究具有益气解毒功效的牛黄参（牛黄、西洋参）含药血清对大鼠肝卵圆细胞系WB-F344诱导分化及增殖的影响,探讨其作用机制。方法用不同浓度的牛黄参含药血清（5%、10%、20%）作用于WB-F344细胞,以正常大鼠血清（5%、10%、20%）处理的WB-F344为空白组,以单纯培养体系处理的WB-F344为正常组。四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测细胞的增殖情况,反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测WB-F344肝干细胞表面标志物甲胎蛋白（AFP）和肝白蛋白（ALB）mRNA表达情况。结果经具有益气解毒功效的牛黄参含药血清干预后,MTT结果显示,10%、20%浓度的牛黄参含药血清能促进WB-F344的增殖（P〈0.01）,且10%为增殖的最佳浓度梯度;RT-PCR结果显示,经10%牛黄参含药血清处理的WB-F344细胞AFP mRNA的表达随时间的延长逐渐下降（P〈0.01）,而ALB mRNA的表达则逐渐升高（P〈0.01）。结论益气解毒中药可诱导WB-F344细胞向肝细胞特性方向的分化,可促进WB-F344细胞的增殖,这可能是其抗肝损伤、促进肝再生的机制之一。     

补气活血类中药对血管内皮细胞增殖的影响

目的：观察补气活血类中药含药血清对体外培养的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）增殖的影响,并初步筛选出对HUVEC 增殖能力具有较明显促进、抑制作用的药物。方法：建立HUVEC 的体外培养的细胞模型,采用血清药理学方法,将10 种活血化瘀药分别与3 种补气药按照1:2、1:1、2:1 三种不同的配比两两配伍组合,组成90 对补气活血药药对,制备90 对补气活血药药对和10 种活血化瘀药的含药血清。应用MTT 比色法观察不同活血化瘀药和补气活血药药对的含药血清对HUVEC 增殖能力的影响。结果：与空白血清组相比较,大部分的活血化瘀药、补气活血药对含药血清对HUVEC 的增殖能力都有较为显著的影响（促进或者抑制）,其中丹参组、川芎组、赤芍组,丹参黄芪（1:2）组、丹参黄芪（1:1）组、川芎黄芪（1:2）组可明显促进HUVEC 增殖能力（P＜0.05 或P＜0.01）;三棱组、莪术组、丹皮组、莪术黄芪（2:1）组、三棱人参（2:1）组、莪术黄芪（1:1）组可明显抑制HUVEC 增殖（P＜0.05 或P＜0.01）。结论：不同的活血化瘀药和补气活血药配伍组成对HUVEC 的增殖能力具有不同的促进或抑制作用,这可能为这些药物在细胞层面上促进或抑制血管生成的作用机制。     

蛇床子总香豆素对新生大鼠成骨细胞的作用

目的：研究蛇床子总香豆素（TCFC）在体外对新生大鼠颅盖骨成骨细胞增殖及成骨作用的影响。方法：酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞;^3H-胸腺嘧啶和^3H-脯氨酸掺入法分别测定细胞增殖和胶原合成;磷酸苯二钠法测定细胞内骨碱性磷酸酶（ALP）活性;并以抗骨质疏松药物异丙黄酮（ipriflavone,IP)作为阳性对照药物。结果：TCFC对新生大鼠成骨细胞的增殖,ALP活性,骨胶原合成具有显的促进作用。结论：TCFC抗骨质惊讶松的作用与其增加成骨细胞的数量,促进细胞胶魇蛋白及ALP的活性有关。     

固本化痰通脉方含药血清对大鼠血管平滑肌细胞增殖及细胞周期素D1的影响

目的：观察固本化痰通脉方对大鼠血管平滑肌细胞生长增殖、细胞周期及细胞周期素D1表达的影响，以探讨其作用机制。方法：血小板源生长因子BB（PDGF-BB）刺激体外培养的大鼠血管平滑肌细胞使其快速增殖生长，加入不同浓度的固本化痰通脉方含药血清作用一定时间后，通过MTT法测定其对血管平滑肌细胞生长的抑制率，流式细胞技术测定细胞周期及细胞周期素D1的表达。结果：固本化痰通脉方能明显抑制PDGF-BB刺激的血管平滑肌细胞增殖，还以浓度依赖方式减少S期细胞、阻滞细胞于G0／G1期，并下调细胞周期素D1的表达。结论：固本化痰通脉方能抑制血管平滑肌细胞的增殖生长，阻滞细胞周期的进行，因而可能具有抗动脉粥样硬化的作用，其作用机理可能与调控血管平滑肌细胞细胞周期素D1的活性有关。     

黄芪有效组分对神经干细胞增殖作用的实验研究

目的:观察黄芪有效组分(黄芪黄酮、黄芪多糖、黄芪甲苷)对体外培养的神经干细胞的增殖作用。方法:①筛选黄芪黄酮、黄芪甲苷、黄芪多糖对神经干细胞有增殖作用的最佳浓度。③神经干细胞分为对照组、黄芪甲苷、黄芪黄酮组,分别用普通培养基及上述筛选的最佳浓度的黄芪甲苷、黄芪多糖、黄芪黄酮含药培养基进行神经干细胞培养,分别于第7天、第14天进行免疫细胞化学法染色,观察神经干细胞增殖标志物BRDU表达。结果:②浓度为0.002mg/ml的黄芪甲苷、0.02mg/ml黄芪黄酮对体外培养的神经干细胞有明显的增殖作用(P<0.05),黄芪多糖对体外培养的神经干细胞无明显增殖作用。②神经干细胞用最佳浓度的黄芪甲苷及黄芪黄酮培养7天及14天后BRDU阳性表达均较对照组显著(P<0.05)。结论:黄芪甲苷、黄芪黄酮有显著促进神经干细胞增殖的作用。     

人参二醇、三醇皂苷对人骨髓造血祖细胞增殖作用的研究

目的：探讨人参二醇皂苷(panaxadiol saponin,PDS)和三醇皂苷(panaxtrol saponin,PTS)对骨髓造血祖细胞增殖的作用。方法：从人参总皂苷进一步分离纯化出PDS和PTS,用体外造血祖细胞集落形成技术,观察PDS、PTS对小鼠骨髓红系祖细胞(CFU—E、BFU—E)、粒单系祖细胞(CFU—GM)和多向祖细胞(CFU—Mix)的刺激增殖作用。结果：不同浓度的PDS(2．5～200μg／m1)可促进造血祖细胞增殖;CFU—E,BFU—E,CFU—GM和CFU—Mix集落产率均显著高于对照组(P<0．05),提高率(％)分别达54．9±6．3、48．8±5．1、27．6±4．2和48．9±3．9。而PTS在同样浓度时,CFU—E、BFU—E产率均显著低于对照组(P<0．05)：终浓度为200μg／ml时,CFU—E、BFU—E集落产率为零。在CFU—GM培养中,12．5μg／ml浓度的PTS使集落产率提高(29．7±2．2)％(P<0．05);而100μg／ml和200μg／ml的PTS却出现对CFU—GM的抑制作用,抑制率分别为(48．6±3．9)％和100％,、结论：PDS是总皂苷内促进造血的有效成分,而PTS对红系祖细胞具有抑制作用,对粒-单系祖细胞的作用呈剂量依赖关系。     

丹参多酚酸盐对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及血管内皮生长因子表达的影响

目的观察中药丹参多酚酸盐对SD大鼠骨髓间充质干细胞的增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响,以探讨其对促骨折愈合的可能机制。方法将0.5 mg/ml浓度丹参多酚酸盐与大鼠骨髓间充质干细胞共培养,对照组为无药物单位培养的大鼠骨髓间充质干细胞。培养48小时镜下观察细胞情况,1、3、5、7天行MTT检测细胞增殖情况。行实时荧光定量PCR检测方法,对培养7天的两组细胞的VEGF mRNA水平进行检测分析。结果共培养48小时后骨髓间充质干细胞生长密集程度明显优于对照组;MTT检测也显示实验组细胞增殖情况优于对照组;实验组VEGF mRNA表达高于对照组。结论丹参多酚酸盐能促大鼠骨髓间充质干细胞增殖,并提高其VEGF的表达。可能是其促骨折愈合的作用机制之一。