温阳通脉方对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响及其信号传导途径

目的研究温阳通脉方对大鼠心肌缺血-再灌注损伤的影响,探讨其可能机制。方法将36只雄性SD大鼠随机分为缺血再灌注组（IR组）,温阳通脉方组（WTF组）,温阳通脉方＋阻滞剂组（WTF＋BA组）。采用NBT染色法检测心肌梗死面积。TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数。Western blot检测Akt和磷酸化Akt（p-Akt）的表达水平。结果 WTF组的心肌梗死面积明显低于IR组以及WTF＋BA组;WTF组的心肌细胞凋亡指数明显低于IR组以及WTF＋BA组;WTF组p-Akt的蛋白表达较IR组及WTF＋BA组均明显增加。结论温阳通脉方具有心肌保护作用,能够减少心肌细胞凋亡,其作用机制可能与PI3K-Akt激酶途径激活有关。     

复方丹参滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响

目的：探讨复方丹参滴丸对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的影响。方法：30只Wistar雄性大鼠随机分3组：假手术组、缺血再灌注组、复方丹参滴丸组。采用在体结扎大鼠冠状动脉左前降支建立心肌缺血再灌注模型,以缺口末端标记（TUNEL）法检测心肌细胞凋亡程度,以链霉菌蛋白-过氧化物酶（SP）P免疫组化法检测心肌细胞凋亡相关基因Bax、Bcl-2和Caspsase-3蛋白的表达。结果：与假手术组比较,模型组心肌细胞凋亡指数、Bax、Bcl-2和Caspsase-3基因蛋白表达明显增多（P〈0.01）;与模型组比较,复方丹参滴丸组心肌细胞凋亡指数、Bax和Caspsase-3基因蛋白表达明显减少（P〈0.01）,Bcl-2基因蛋白表达显著增多（P〈0.01）。结论：复方丹参滴丸可通 过上调Bcl-2、下调BaxCmCaspsase-3基因蛋白表达,抑制大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡。     

缬沙坦对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响

目的利用大鼠建立心肌缺血再灌注模型,在检测缺血再灌注细胞凋亡变化的同时,着重观察血管紧张素Ⅱ受体（AngⅡ？R）拮抗剂缬沙坦对缺血再灌注心肌细胞凋亡及相关基因蛋白表达的影响,了解AngⅡ？R拮抗剂在心肌缺血再灌注损伤中的作用及其机制,为AngⅡ？R拮抗剂治疗缺血性心脏病提供理论依据。方法 70只Wister大鼠随机分为3组,1组：假手术组（10只）;2组：缺血再灌注组（30只）;3组：缬沙坦组（30只）。取各组不同时间心肌组织切片,分别应用常规HE染色光镜观察心肌细胞的病理形态变化,免疫组化检测诱导细胞凋亡基因Bax、Fas及抑制细胞凋亡基因bcl-2的表达。结果与假手术组相比,心肌缺血再灌注组Bax和Fas基因蛋白表达明显增加（P〈0.01）,bcl-2蛋白表达减低（P〈0.01）。且随着心肌缺血再灌注时间的延长Bax和Fas基因蛋白表达更加明显。3组经缬沙坦干预后Bax和Fas基因蛋白表达显著减低,而bcl-2蛋白表达增加。结论心肌缺血再灌注时促进心肌细胞凋亡,相关基因蛋白表达增加。AngⅡ？R拮抗剂能够抑制缺血再灌注时心肌细胞凋亡,其机制与逆转Bax、Fas及bcl-2基因蛋白的表达有关。     

促红细胞生成素对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护性作用

目的：研究促红细胞生成素（EPO）缺血后给药对在体大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并对其机制进行初步探讨.方法：以左冠状动脉前降支穿线结扎法制备SD大鼠心肌缺血模型,松开结扎线造成再灌注.将大鼠随机分成假手术（SHAM）组、缺血再灌注（IR）组、促红细胞生成素（EPO）组和促红细胞生成素＋磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/Akt途径的高选择性阻断剂LY294002（EPO＋LY）组.观察心电图Ⅱ导联心律失常发生情况;电镜观察心肌细胞超微结构;以TUNEL法检测细胞凋亡;RT-PCR测定bc1-2,bax及caspase3 mRNA含量.结果：EPO组心肌细胞超微结构损伤较轻,细胞凋亡减少,再灌注心律失常发生率降低,bax及caspase-3mR-NA降低,bcl-2mRNA增高.结论：EPO对大鼠心肌缺血再灌注损伤具保护作用,LY294002可以减弱EPO的作用,其作用机制与抑制心肌细胞的凋亡作用有关,PI3K/Akt通路参与了其信号转导.     

刺五加叶皂苷对大鼠心肌缺血-再灌注损伤细胞凋亡及p-ERK1/2表达的影响

目的：研究刺五加叶皂苷（acanthopanax senticosus,ASS）对大鼠心肌缺血-再灌注损伤（myocardial ischemia reperfusion injury,MI/RI）的影响。方法选用60只SD雄性大鼠分为假手术组（C组）、缺血再灌注（ischemia reperfusion,IR）组（IR组）、刺五加叶皂苷加阻滞剂组（ASS＋Z组）及刺五加叶皂苷组（ASS组）,采用结扎大鼠冠状动脉左前降支建立大鼠心肌缺血再灌注损伤模型。采用NBT染色法检测心肌梗死面积及血清肌钙蛋白T（cardiac troponin T,cTnT）,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数（apoptotic index,AI）,用Western blot法检测细胞外调解蛋白激酶（extracelluar regulated protein kinases,ERK）1/2及磷酸化ERK 1/2（p-ERK1/2）表达情况。结果 ASS组的cTnT、心肌梗死面积及AI明显低于IR组及ASS＋Z组（P＜0.05）;ASS组p-ERK1/2表达明显高于C组、IR组及ASS＋Z组（P＜0.05）。结论刺五加叶皂苷对大鼠MI/RI有保护作用,能够减少心肌细胞凋亡,其机制与ERK 1/2激酶途径激活有关。     

超极化停搏对大鼠离体缺血再灌注心脏功能和心肌细胞凋亡的影响

目的研究ATP敏感性钾通道（KATP）开放剂心脏超极化停搏对大鼠缺血再灌注时离体心脏功能及心肌细胞凋亡的影响。方法SD大鼠108只，随机分为对照组（CON组）、去极化停搏组（D组）、超极化停搏组（H组）、5-羟葵酸（选择性线粒体ATP敏感性钾通道阻滞剂）＋超极化停搏组（5-HD＋H组）、HMR-1098（选择性膜ATP敏感性钾通道阻滞剂）＋超极化停搏组（HMK-1098＋H组）、5-羟葵酸＋HMK-1098＋超极化停搏组（5-HD＋HMR-1098＋H组）。每组18只。每组再分为缺血前、缺血40min、再灌注60min3个亚组（n=6）。取心脏建立Langendorff灌注模型，平衡15min。除对照组心脏不停搏持续灌注外，其余各组分别灌注各自的停搏液，心脏停搏缺血40min，再灌注60min。持续测定心功能指标[心率（HK）、左心室发展压（LVDP）、左心室舒张末压（LVEDP）、冠脉流量（CF）]，计算率压双乘积（DP）；各组于缺血前、缺血40min、再灌注60min时分别取心肌组织，运用原位末端TUNEL法检测心肌细胞凋亡指数。结果与各停搏组比较，CON组心功能指标最好，心肌细胞凋亡指数最少（P〈O．01）；与其余停搏组比较，超极化停搏组能明显提高再灌注期间LVDP及DP，降低LVEDP,减少心肌细胞凋亡率（P〈O．01）。5-羟葵酸及HMR-1098能拮抗超极化停搏对缺血再灌注损伤的保护作用。结论超极化停搏对心肌缺血再灌注损伤的保护作用与保护心功能及抑制心肌细胞凋亡有关。这也是通过共同开放两类ATP敏感性钾通道实现的。     

福辛普利对心肌缺血再灌注损伤心肌细胞的作用和对Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨福辛普利对大鼠心肌缺血再灌注模型心肌细胞凋亡及相关调控基因Bcl-2、Bax表达的影响及相关机制。方法24只动物随机分成假手术组（n=8），缺血再灌注损伤组（n=8）和福辛普利预处理组（n=8），再灌注24h后处死动物。用透射电镜观察大鼠心肌超微结构的变化，TUNEL法检测心肌细胞凋亡，RT-PCR检测Bcl-2及Bax基因表达。结果电镜结果显示福辛普利的应用促使缺血再灌注大鼠心肌组织肌原纤维排列趋于恢复正常、线粒体肿大好转、细胞核和核仁显示良好，无细胞核变形，无胞核空洞样变及核固缩等现象。TUNEL显示福辛普利组细胞凋亡明显减少。缺血再灌注损伤24h后心肌组织Bcl-2基因表达较假手术组显著降低，而Bax基因表达则显著增高，福辛普利则可以逆转这种趋势。结论应用福辛普利能抑制心肌缺血再灌注损伤导致的心肌细胞凋亡，发挥心肌保护作用，从而缓解缺血再灌注损伤的发生发展。     

灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响

目的探讨灵芝对大鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡率及线粒体跨膜电位的影响。方法采用线栓阻断大脑中动脉闭塞法（MCAO）建立大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型。动物随机分为假手术组（Sham）、脑缺血再灌注组（IR）、灵芝组（GA）;于再灌注后3h、12h、24h、48h处死动物取材,流式细胞仪检测脑细胞凋亡率和线粒体跨膜电位。结果（1）IR组和GA组与Sham组比较,脑细胞凋亡率明显增高（P〈0．01）;再灌注3hGA组与IR组比较,脑细胞凋亡率没有明显差异（P〉0．05）;再灌注12h、24h、48hGA组与IR组比较,脑细胞凋亡率降低,有明显差异（P〈0．01）。（2）IR组脑细胞线粒体跨膜电位在再灌注3h、12h、48h较Sham组显著下降（P〈0．05）,其中3h值最低,其后逐渐升高,至48h又出现后续性降低;GA组细胞线粒体跨膜电位在再灌注3h较Sham显著下降（P〈0．01）;GA组线粒体跨膜电位在再灌注12h、48h较IR组显著升高（P〈0．05）。结论急性局灶性脑缺血再灌注后大鼠脑细胞凋亡率升高,线粒体跨膜电位显著降低,灵芝具有降低凋亡发生率、改善脑组织细胞线粒体跨膜电位水平的作用。     

缺血再灌注后兔心肌c-fos基因的表达

目的：研究缺血再灌注下家免心肌细胞c-fos基因的表达。方法：新西兰大白兔18只，随机分为三组：缺血15分钟再灌注0分钟组（Ⅰ组，n=6）；缺血15分钟再灌注15分钟组（11组，n=6）；缺血15分钟再灌注30分钟组（Ⅲ组，n=6），分别取缺血再灌注区域及对照区域心肌组织进行免疫组织化学检测。结果：Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组心肌细胞均有Fos阳性染色出现，三组在不同再灌注时点c-fos表达差异显著（P〈0．05），且随着再灌注时间延长阳性率逐渐增高。对照区的心肌细胞也有Fos阳性染色出现，但Fos染色率显著低于缺血再灌注区心肌（P〈0．05）。不同再灌注时点三组对照区心肌细胞c-fos表达差异显著（P〈0．05），且随着再灌注时间延长阳性率逐渐增高。结论：1．心肌缺血再灌注后显著诱导c-fos的表达；2．c-fos表达增加与心肌损伤有关；3．Fos蛋白表达有可能为早期心肌缺血再灌注辅助诊断的形态学指标。     

缺血预处理抑制缺血再灌注所致兔在体心肌细胞凋亡

目的：为探讨缺血预处理对缺血再灌注过程中心肌细胞凋亡的影响。方法：将24只新西兰白兔制成在体心肌缺血／再灌注模型,并随机分成假手术对照组（P组）,缺血／再灌注对照组（IR组）,缺血预处理组（IP组）,结果：IP组心肌梗死面积与缺血面积的比率比IR组显著减少（P＜0．05）;凋亡指数IP组亦比IR组小（P＜0．01）,IR组心肌DNA Ladder形成明显,IP组DNA Ladder模糊不清,结论：缺血预处理对缺血／再灌注损伤中心肌细胞凋亡具有抑制作用。     

自噬在缺血预处理减轻大鼠肢体缺血再灌注心肌损伤中的作用

目的 探讨自噬在缺血预处理减轻大鼠肢体缺血再灌注心肌损伤中的作用。 方法 雄性SD大鼠28只,8周龄,体重200~250 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n_i=7):假手术组(S组)、肢体缺血再灌注组(IR组)、肢体缺血预处理组(IPR组)、自噬抑制剂处理组(3-MA组)。采用夹闭双侧股动脉缺血4 h后恢复灌注4 h的方法建立肢体缺血再灌注模型;采用股动脉夹闭前30 min实施缺血5 min,再灌注5 min,循环3次后建立肢体缺血预处理模型;3-MA组于缺血预处理前30 min腹腔注射3-甲基腺嘌呤1.5 ml/kg。再灌注4 h后处死大鼠取心肌组织,电镜下观察自噬小体形成情况和病理学结果,采用HE染色和TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况,采用Western blot法检测LC3-Ⅱ的表达情况。 结果 与S组相比,IR组、IPR组、3-MA组心肌细胞凋亡比例明显升高,LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达上调(P<0.05);与IR组相比,IPR组细胞凋亡降低、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达下调(P<0.05);与IPR组相比,3-MA组细胞凋亡比例升高、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ表达下调(P<0.05)。 结论 自噬参与了肢体缺血预处理减轻大鼠肢体缺血再灌注心肌损伤的作用。      

大鼠心肌缺血再灌注时心肌细胞凋亡caspase-3活性变化规律及药物对其影响

目的　探讨大鼠心肌缺血再灌注 (Ischemiareperfusion ,IR)不同时相的心肌细胞凋亡、caspase 3活性变化规律及caspase 3抑制剂Ac DEVD CHO的影响。方法　Wistar大鼠 12 2只 ,设立IR组 ,IR +Ac DEVD CHO组和假手术对照组并分设缺血 3 0min后再灌注 1、3、6、12、2 4h 5个时相点 ;以缺口末端标记法 (TUNEL)标记凋亡细胞 ,用荧光分析法检测caspase 3活性 ,行TTC染色测定心肌梗死范围。结果　心肌细胞凋亡与caspase 3活性随心肌再灌注不同时相而变化 ,心肌细胞凋亡指数 (Apoptosisindex ,AI)与caspase 3活性于再灌注 12h最高 [AI :( 3 4 83± 9 3 5 ) % ;caspase 3活性 :( 1 3 4±0 2 ) ] ,其后基本维持在平台状态 ;心肌梗死范围随IR时间逐渐增加 ,至 2 4h仍未见下降趋势 ,三者间呈显著正相关 (P <0 0 5 )。IR +Ac DEVD CHO组上述指标虽也明显增高 ,但比IR组明显减小 (P <0 0 5 )。结论　Caspase 3激活及心肌细胞凋亡参与了心肌缺血再灌注损伤过程 ,Ac DEVD CHO减轻心肌缺血再灌注损伤可能部分与其抑制心肌细胞凋亡有关。     

缺血预处理经抑制线粒体释放细胞色素C减轻大鼠海马神经元缺血再灌注损伤

目的：探讨线粒体细胞色素C的释放在缺血预处理（IPC）保护大鼠海马神经元缺血再灌注损伤中的作用。方法：动物随机分为单纯缺血再灌组（IR组）、IPC加缺血再灌组（IPC+IR组）和对照组。HE染色观察海马CA1区神经元的组织形态学变化;TUNEL染色检测该区神经元凋亡;免疫组化测定该区神经元细胞色素C的表达。结果：IPC+IR组海马CA1区神经元存活数显著多于IR组,凋亡细胞数显著低于IR组,细胞色素C 的释放明显少于IR组(P均＜0.001)。结论：IPC可经阻止线粒体释放细胞色素C抑制凋亡的发生,对海马CA1区神经元缺血再灌损伤起保护作用。     

缺血预适应对未成熟大鼠心肌线粒体及能量代谢的影响

目的研究内源性心肌保护机制一缺血预适应（Ｉｓｃｈｅｍｉｃ－ｐｒｅｃｏｎｄｉｔｉｏｎｉｎｇ,ＩＰＣ）对未成熟心肌线粒体及能量代谢的 影响,并探讨其作用机制。方法采用改良Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆｆ－Ｎｅｅｌｙ离体鼠心灌流装置,建立未成年大鼠（４周龄）离体心脏顺 行灌注左心作功模型。３６只大鼠随机等分为缺血对照组（ＮＣ）、Ｓｔ．ＴｈｏｍａｓⅡ晶体停搏液组（ＳＴ）、预缺血加停搏液组 （ＰＩ）。比较再灌注后各组心功能（ＬＷＳＰ,ＬＶＥＤＰ,±ｄｐ／ｄｔｍａｘ,ＣＯ）的恢复率;测定缺血前、再灌注后线粒体游离钙（Ｃａ２＋）、 丙二醛（ＭＤＡ）、超氧化物歧化酶（ＳＯＤ）及心肌ＡＴＰ含量;观察再灌注后心肌及线粒体超微结构的变化。结果 ＩＰ组心 功能指标的恢复率明显好于ＳＴ组和ＮＣ组（Ｐ＜０．０５）;再灌注后ＳＴ组、ＮＣ组心肌线粒体Ｃａ２＋、ＭＤＡ含量明显增高, ＳＯＤ含量明显减少（Ｐ＜０．０５）,而 ＩＰ组则无明显变化;ＩＰ组、ＳＴ组 ＡＴＰ含量无显著差别,均明显高于 ＮＣ组;ＳＴ组、ＮＣ 组心肌及线粒体超微结构破坏明显,ＩＰ组则仅有轻微改变。结论Ｓｔ．ＴｈｏｍａｓⅡ晶体停搏液能减轻未成熟心肌能量损耗, 但对心肌线粒体的保护作用较小,影响了     

缺血预处理对高血脂大鼠心肌线粒体酶及氧自由基的影响

目的观察缺血预处理对高血脂大鼠心肌线粒体ATP酶及氧自由基的影响。　方法建立高血脂大鼠离体心肌缺血预处理模型 ,观察预处理对缺血再灌注心肌Na+ -K+ -ATP酶、Ca2 + -ATP酶、Ca2 + -Mg2 + -ATP酶、胱甘肽过氧化物酶 (GSH -Px)、超氧化物歧化酶 (SOD)及丙二酰二醛 (MDA)的影响。　结果与单纯缺血再灌注组相比 ,预处理组心肌线粒体Na+ -K+ -ATP酶、Ca2 + -ATP酶、Ca2 + -Mg2 + -ATP酶及GSH -Px降低幅度减小 (P <0 .0 5 ) ,SOD活性上升 ,MDA含量下降。　结论高血脂大鼠经心肌缺血预处理后 ,可减少再次长时间缺血后复灌对心肌的损伤 ,具心肌保护作用     

缺血预适应对心肌缺血／再灌注损伤中细胞凋亡的作用

目的：探讨心肌缺血/再灌注损伤早期细胞凋亡的分布情况及缺血预适应的心肌保护作用是否与减少缺血区凋亡的发生有关。方法：将新西兰兔制成急性心肌缺血/再灌注损伤动物模型，随机分为两组：IR组和IP组。分区取心肌组织标本进行梗死面积大小及凋亡指数的检测。结果：IP组的梗死面积大小及凋亡指数均明显低于IR组。结论：心肌缺血/再灌注损伤早期细胞凋亡主要发生在缺血区的心肌组织中，缺血预适应可明显减少其发生。     

缺血后处理对缺血再灌注大鼠心肌梗死和心肌细胞凋亡的作用

目的观察在体情况下缺血后处理(IPC)对兔心肌梗死范围及缺血心肌细胞凋亡的影响,并与缺血预处理(IP)心脏保护作用比较. 方法采用兔心肌缺血/再灌注模型,在缺血后、再灌注前多次短暂再灌/停灌处理. 以Even's blue-TTC法检测心肌梗死范围,TUNEL方法检测缺血心肌细胞凋亡. 结果与对照组相比,缺血后处理明显减小心肌梗死范围(12.5±5.4% vs对照组26.7±6.7%, P<0.01),缺血区心肌凋亡指数明显下降(14.6±7.4 vs对照组30.4±12.3, P<0.05). 结论对于已缺血心肌,再灌前予多次短暂复灌、停灌处理具有与IP类似缩小心梗范围作用,IPC对缺血心肌的保护效应可能与其抑制缺血心肌细胞凋亡有关.     

缓激肽对大鼠心肌缺血预处理的保护作用

目的：研究缓激肽（BK）是否参与了大鼠心肌缺血预处理（IP）的心肌保护。方法：将成年SD大鼠随机分成缺血再灌注（IR）组、缺血预处理（IP）组和缺血预处理时加缓激肽B2受体拮抗剂B1650（BKA＋IP）组,观察各组缺血再灌注前后心功能变化,并且检测再灌注末丙二醛（MDA）和超氧化物歧化酶（SOD）的变化。结果：与IR组相比,IP组明显减轻了再灌注损伤,使心脏收缩及舒张功能明显提高,MDA生成下降,SOD活性增加;加缓激肽B2受体拮抗剂,这种保护作用消失。结论：缓激肽参与IP的心肌保护作用是通过激活缓激肽B2受体介导的。     

生长激素对大鼠阿霉素心肌病心肌细胞凋亡及Fas的影响

目的：观察生长激素（Growth hormone．GH）对阿霉素（Adriamycin，ADR）心肌病大鼠心肌细胞凋亡的影响及凋亡相关基因Fas蛋白表达的影响。方法：30只雄性Wistar大鼠，体重200～250g．随机分为3组：对照组、ADR组和GH＋ADR组。用原位末端标记法（TUNEL）标记凋亡的心肌细胞，用免疫组织化学方法检测Fas蛋白的表达。结果：与对照组比较，ADR组心肌细胞凋亡指数明显升高（P〈0．05）．GH＋ADR组细胞凋亡指数低于ADR组（P〈0．05）。ADR组Fas蛋白表达明显高于对照组（P〈0．05）。GH＋ADR组Fas蛋白表达明显低于ADR组（P〈0．05）。结论：心肌细胞凋亡是阿霉素心肌病的重要发病机制，Fas蛋白表达升高是诱发凋亡的机制之一。GH干预治疗可减少阿霉素心肌病的心肌细胞凋亡．Fas基因蛋白表达的减少是其抑制凋亡的可能机制之一。