miR-140-5p靶向HDAC4调控人骨肉瘤细胞MG-63增殖

目的探讨microRNA-140-5p (miR-140-5p)能否通过抑制组蛋白脱乙酰基酶4(Histone deacetylase 4,HDAC4)基因调控人骨肉瘤细胞MG-63增殖。方法 qRT-PCR法检测miR-140-5p在骨肉瘤细胞系MG-63及成骨细胞系hFOB1.19中的差异表达;Western blot和qRT-PCR法检测miR-140-5p对HDAC4蛋白和mRNA表达的影响;CCK8法检测miR-140-5p对人骨肉瘤细胞MG-63增殖的变化;荧光素酶报告基因实验检测miR-140-5p能否特异性结合于HDAC4基因的3′非翻译区(3′untranslated region,3′UTR)。结果荧光素酶报告基因实验结果显示,miR-140-5p可特异性结合于HDAC4基因的3′UTR;Western blot及qRT-PCR检测结果显示,miR-140-5p能抑制HDAC4的蛋白及mRNA表达;CCK8法结果显示,过表达miR140-5p可明显抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖。结论 miR-140-5p可抑制人骨肉瘤细胞MG-63增殖,且这种抑制效应与其特异性结合于HDAC4基因的3′UTR,下调HDAC4的表达有关。     

外源高表达miR-133b抑制骨肉瘤的增殖与转移

目的分析miR-133b对骨肉瘤细胞增殖与转移的影响。方法q RT-PCR检测人骨肉瘤细胞系(MG-63)与人正常成骨细胞系(h FOB)中miR-133b的表达水平;运用MTT实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的生长能力的作用;运用划痕实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力的作用;Transwell侵袭实验检测miR-133b对人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力作用。结果qRT-PCR检测结果显示,MG-63细胞中miR-133b的表达水平明显低于h FOB细胞的表达水平(P<0.01);MTT检测发现,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的生长(P<0.01);划痕实验检测发现,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的迁移能力(P<0.01);Transwell侵袭实验显示,外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论外源高表达miR-133b可抑制人骨肉瘤MG-63细胞的增殖与转移。     

miRNA-183下调Ezrin蛋白表达抑制成骨肉瘤细胞的侵袭和转移

目的 探讨miRNA-183下调Ezrin蛋白表达对人成骨肉瘤细胞系MG-63细胞侵袭转移能力的影响.方法 以qRT-PCR和Western blot技术检测人成骨肉瘤细胞系MG-63细胞在转染miRNA-183模拟物前后miRNA-183和Ezrin蛋白的相对表达量.同时以划痕实验和transwell实验分析转染rniRNA-183模拟物对MG-63细胞迁移、侵袭能力的影响.结果 与正常人胚成骨细胞hFOB细胞相比,人成骨肉瘤细胞MG-63存在miRNA-183的低表达和Ezrin蛋白的表达上调(P＜0.05).在稳定转染miRNA-183模拟物后,MG-63细胞miRNA-183丰度显著上调,并明显抑制Ezrin蛋白的表达(P＜0.05).而转染后的MG-63细胞与转染前相比,其迁移和侵袭能力也显著降低(P＜0.05).结论 MiRNA-183可以通过下调靶蛋白Ezrin表达抑制人成骨肉瘤细胞系MG-63细胞的侵袭转移能力.     

MicroRNA-93在骨肉瘤组织中的表达及其意义

目的:分析MicroRNA-93(miR-93)在骨肉瘤组织中的表达,探讨其对骨肉瘤细胞的增殖及细胞周期的影响。方法:采用TagManMGB探针法定量分析38例骨肉瘤组织及对应软骨组织中miR-93的表达;构建miR-93过表达载体,并合成miR-93的反义核苷酸序列,分别转染骨肉瘤细胞U2-OS和MG-63。采用MTT比色法检测骨肉瘤细胞增殖的改变情况,利用流式细胞仪检测骨肉瘤细胞周期的变化情况。结果:在38例骨肉瘤标本中,65.8%(25/38)的骨肉瘤组织miR-93表达明显高于对应软骨组织(P<0.05)。miR-93过表达载体可以促进骨肉瘤细胞的生长,使细胞周期G0/G1期明显降低,而S期比例明显增加;反义miR-93转染骨肉瘤细胞U2-OS和MG-63后,miR-93的表达明显降低,U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降。结论:miR-93在骨肉瘤组织中表达明显上调,其可以通过调节细胞周期中G1/S期的转换而影响骨肉瘤细胞生长。     

Linc00891通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p在骨肉瘤中发挥抑癌作用#br#

摘要：目的　探讨Linc00891在骨肉瘤（OS）中发挥的作用并初步分析其机制。方法　实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（qPCR）检测Linc00891在不同OS细胞系U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353及人成骨细胞系hFOB 1.19中的表达,选择Saos-2和MG-63 OS细胞系转染过表达Linc00891载体。CCK-8法、平板克隆法和Transwell小室检测过表达Linc00891对人OS细胞系Saos-2和MG-63增殖、克隆形成能力和迁移能力的影响。Western blot法检测上皮间质转化相关蛋白钙黏着蛋白E（E-cad）、钙黏着蛋白N（N-cad）的表达。RNA pulldown实验检测Linc00891和miR-27a-3p在OS细胞中的结合关系。TCF/LEF报告试剂盒检测过表达Linc00891和上调miR-27a-3p对不同OS细胞系中 Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果　不同OS细胞系U-2 OS、Saos-2、MG-63、SW 1353中Linc00891的表达水平显著低于正常成骨细胞系hFOB 1.19（P＜0.05）。过表达Linc00891可抑制人OS细胞系Saos-2和MG-63的增殖、克隆形成能力、迁移能力及上皮间质转化（P＜0.05）。Linc00891和miR-27a-3p在OS细胞中存在结合关系。过表达Linc00891能够逆转miR-27a-3p对Wnt/β-catenin信号通路的激活（P＜0.05）。结论　Linc00891通过竞争性结合并抑制miR-27a-3p,在OS中发挥抑癌作用。     

微小 218?5p调控 Wnt家族成员 2B抑制骨肉瘤细胞 143B的增殖、迁移和侵袭

目的 探讨微小RNA-218-5p(miR-218-5p)对骨肉瘤细胞增殖,侵袭和迁移能力的影响及其作用机制.方法 2016年1月至2019年1月,实时荧光定量PCR检测miR-218-5p在骨肉瘤与正常骨组织及正常成骨细胞株与骨肉瘤细胞株的表达差异.应用CCK-8法检测过表达miR-218-5p对人骨肉瘤细胞株143B增殖的影响;细胞划痕实验检测和Transwell小室实验检测过表达miR-218-5p对骨肉瘤细胞143B迁移能力的影响.同时,应用在线miRNA靶基因预测软件预测miR-218-5p的靶基因,并应用荧光素酶报告实验进行结合位点验证.蛋白质印迹法验证靶基因的蛋白表达水平.结果 miR-218-5p在骨肉瘤组织中的表达水平(0.59±0.21)％明显低于正常骨组织,骨肉瘤细胞系中的表达水平(0.712±0.015)％、(0.685±0.016)％、(0.542±0.021)％、(0.524±0.011)％明显低于正常成骨细胞,P<0.05.同时,与对照组相比,过表达miR-218-5p(miR-218-5p mimic)的骨肉瘤细胞143B的细胞活力t6h(0.274±0.011),t24h(0.514±0.04),t48h(0.828±0.16),t72h(1.212±0.013),侵袭(164±12)个和迁移距离(26±2.4)％明显减弱,P<0.05.应用TargetScan网站进行预测,结果显示Wnt家族成员2B(WNT2B)为miR-218-5p的潜在靶基因之一;荧光素酶报告实验结果表明miR-218-5p直接靶向WNT2B;蛋白质印迹法证实miR-218-5p过表达组细胞中WNT2B蛋白的表达水平较对照组明显减少.结论 miR-218-5p在人骨肉瘤组织和癌细胞中低表达,其可能通过靶向WNT2B抑制骨肉瘤细胞143B的增殖、迁移和侵袭.     

miR-105-5p靶向SIRT1调控脂肪酸代谢影响胃癌细胞生物学行为的研究

目的 探讨miR-105-5p对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及脂肪酸代谢的影响,阐明miR-105-5p与沉默信息调节因子1(SIRT1)基因的靶向关系。方法 选取人胃黏膜上皮细胞GES-1、人胃癌HepG2细胞,将不同质粒转染到HepG2细胞,分为miR-105-5p组(转染miR-105-5p mimic)、si-miR-105-5p组(转染miR-105-5p inhibitor)、miR-NC组(转染mimic NC)、NC组(转染inhibitor NC)、Scramble组(转染Scramble)、miR-105-5p+Scramble组(转染miR-105-5p mimic、Scramble)及miR-105-5p+sh-SIRT1组(转染miR-105-5p mimic、sh-SIRT1)。MTT检测细胞增殖能力,Transwell小室实验检测细胞迁移、侵袭能力,ELISA检测细胞磷脂、三酰甘油含量,实时荧光定量PCR检测细胞中miR-105-5p、SIRT1 mRNA表达水平;Western blot检测细胞SIRT1、FASN、ACC1及FABP5表达水平。生物信息预测...     

微小 RNA-490-3p靶向 FK506相关蛋白 14表达抑制骨肉瘤 MG63细胞侵袭和迁移的实验研究

目的探讨微小 RNA-490-3p(miR-490-3p)对骨肉瘤 MG63细胞侵袭、迁移的影响及其机制。方法 2019年 9月至 2020年 4月,从中科院上海细胞库购买人骨肉瘤细胞株 MG63进行体外培养,分为对照组(未转染)miR-NC组(转染 miR-NC)、 miR-490-3p组(转染 miR-490-3p mimics),miR-490-3p+pcDNA组(共转染 miR-490-3p mimics与空载体、)和 miR-490-3p+FKBP14组(共转染 miR-490-3p mimics与 FKBP14过表达载体),采用 RT-PCR检测 miR-490-3p表达, Transwell小室法检测细胞侵袭、迁移,蛋白质印迹法检测钙黏蛋白 E(E-cadherin)、基质金属蛋白酶 -2(MMP-2)、上皮间质转化因子 Twist转录因子( Twist)和 FK506相关蛋白 14(FKBP14)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验检测 miR-490-3p和 FKBP14的靶向关系。结果与对照组比较, miR-490-3p组细胞中 miR-490-3p表达水平明显升高( 3.68±0.37比 1.02±0.10,P<0.05),而侵袭细胞数( 33.25±2.02比     

微小RNA-143-3p对胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响北大核心CSCD

目的研究微小RNA-143-3p(microRNA-143-3p,miR-143-3p)通过调节基质金属蛋白酶2(Matrix metalloproteinase-2,MMP2)对胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭的影响。方法体外培养胶质瘤U87 MG细胞,并随机分为miR-NC组和miR-143-3p mimic组;miR-NC组为转染阴性对照寡核苷酸的U87 MG细胞,miR-143-3p mimic组为转染miR-143-3p模拟物的U87 MG细胞。以细胞计数试剂盒-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)检测胶质瘤U87 MG细胞存活率,以划痕实验检测胶质瘤U87 MG细胞迁移能力,以Transwell实验检测胶质瘤U87 MG细胞侵袭能力,以蛋白质印迹(Western blot)法检测胶质瘤U87 MG细胞中MMP2表达水平。结果48 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(94.33±7.59)%和(71.43±7.01)%;72 h时,miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞增殖率分别为(93.45±8.11)%和(68.31±6.51)%;miR-NC组和miR-143-3p mimic组的细胞迁移率分别为(42.03±5.72)%和(21.33±1.98)%;细胞侵袭数目为62.09±8.35和41.46±6.27;MMP2的表达量分别为1.01±0.10和0.68±0.07;以上指标,miR-143-3p mimic组与miR-NC组相比,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论miR-143-3p通过MMP2抑制胶质瘤细胞增殖,迁移和侵袭。     

微小 RNA-301b-3p靶向第 10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(anti-miR-301b-3p)组、anti-miR-301b-3p+小干扰RNA阴性对照(si-NC)组、anti-miR-301b-3p+第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)小干扰RNA(si-PTEN)组;实时荧光定量PCR(RT-qP-CR)检测miR-301b-3p表达水平;四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告实验检测miR-301b-3p和PTEN的靶向关系.结果 与hFOB细胞相比,U2OS、MG63中miR-301b-3p表达水平[(0.89±0.09),(0.70±0.07)比(0.20±0.02)]显著升高.与anti-miR-NC组比较,anti-miR-301b-3p组U2OS细胞活性[(0.59±0.06)比(1.33±0.13)]显著降低,而凋亡率[(22.06±2.31)％比(7.48±0.78)％]、PTEN蛋白表达[(0.69±0.07)比(0.35±0.03)]显著升高.PTEN是miR-301b-3p的直接靶基因.与anti-miR-301b-3p+si-NC组比较,anti-miR-301b-3p+si-PTEN组U2OS细胞活性[(1.16±0.12)比(0.56±0.06)]显著升高,而凋亡率[(10.28±1.16)比(22.12±2.34)]显著降低.结论 抑制miR-301b-3p表达可通过调控PTEN抑制骨肉瘤细胞增殖,促进细胞凋亡.     

Treatment of osteosarcoma.

Hippocrates has been credited with the statement 'for extreme diseases, extreme methods of care are most suitable'. This statement is very applicable to the disease osteosarcoma and especially to its treatment with high dose methotrexate. This paper will present the experience of the Department of Clinical Haematology and Oncology in the treatment of osteosarcoma with high dose methotrexate and summarize other groups' experiences with various chemotherapy regimes.     

Cardiac metastasis of osteosarcoma

Cardiac osteosarcoma metastasis is extremely rare and is documented in several case reports in the literature. The behaviour of osteosarcoma metastases is similar to the primary tumour. Thoracic non-enhanced computed tomography (CT) examination is beneficial in the detection of calcific cardiac metastases. In this case report, we describe a 29-year-old woman with cardiac osteosarcoma metastasis after 7 years of follow-up, compare the demographic features with previous cases and discuss the imaging findings.     

毛细血管扩张型骨肉瘤的早期诊断与治疗

目的 探讨毛细胞血管扩张型骨肉瘤(TOS)的早期诊断及规范化治疗.方法 4例毛细胞血管扩张型骨肉瘤患者,骨干2例,干骺端2例;3例行截肢手术治疗,1例保肢治疗;3例行系统的术后化疗,1例行术前化疗.结果 经3～30个月(平均11.5个月)的随访,无局部复发,3例发生肺转移死亡,1例无瘤存活.结论 毛细胞血管扩张型骨肉瘤预后差,应重视其早期诊断和规范化治疗.     

骨膜骨肉瘤的临床病理分析

目的：分析研究骨膜骨肉瘤（ periosteal osteosarcoma,POOS）的临床病理特征、影像学特点、诊断及鉴别诊断要点。方法对1例骨膜骨肉瘤（ POOS）进行常规病理观察及影像学分析。结果该例POOS临床表现为局部肿块伴有疼痛;影像学显示骨皮质表面软组织阴影,不侵犯骨髓腔。镜下由中等分化的软骨母细胞构成,呈分叶状排列,小叶被有一定异型性的梭形细胞分割,细胞间可见少量肿瘤性骨样基质形成。结论骨膜骨肉瘤是发生于骨表面的罕见骨肉瘤,伴发髓腔浸润者极少见,诊断时需结合临床病理特征及影像学特点做综合判断,需要与骨膜软骨肉瘤、普通骨肉瘤、高级别骨表面骨肉瘤、骨旁骨肉瘤等进行鉴别。     

热休克蛋白HSPgp96在骨肉瘤中的表达及意义

目的 观察热休克蛋白(HSP)gp96在骨肉瘤中的表达及其临床意义.方法 30例骨肉瘤患者为观察对象(骨肉瘤组),10例骨软骨瘤患者切除肿瘤后的基底部周围正常骨组织为对照组.用SP法免疫组织化学标记HSPgp96及C-erbB2基因.结果 各组织学类型的骨肉瘤细胞均有HSPgp96阳性表达.骨肉瘤组HSPgp96及C-erbB2的表达均明显高于对照组(P＜0.05).分化较差的骨肉瘤HSPgp96的表达强度明显高于分化较好者(P＜0.01).结论 HSPgp96在骨肉瘤的增殖过程中发挥重要作用.     

Mifamurtide: osteosarcoma: ineffective and harmful

The standard treatment for children and young adults with osteosarcoma consists of surgery, preceded and followed by methotrexate-based chemotherapy. Mifamurtide is an immunostimulant derived from a bacterial cell wall component. It is authorised in the European Union as an adjunct to combination chemotherapy after complete excision of non-metastatic osteosarcoma. Only one comparative, unblinded trial has been published, and its design was particularly complex. In a study population of 678 patients, adding mifamurtide to chemotherapy after tumour excision did not prolong the overall 6-year survival rate, which was about 75% with both treatments. Only serious adverse effects were collected, and they were not systematically recorded. Hypersensitivity reactions occurred in clinical trials, along with pleural and pericardial effusions, seizures, and muscle spasms. Severe hearing loss occurred in 12% of the patients treated with mifamurtide in the comparative trial, versus 7% of the other patients. In practice, given the lack of any survival benefit and the risk of serious adverse effects, it is better not to add mifamurtide to chemotherapy regimens used for treatment of osteosarcoma.     

Samarium for osteoblastic bone metastases and osteosarcoma

Samarium-153 lexidronam (153Sm-EDTMP) is FDA approved for painful osteoblastic bone metastases that image on bone scan. 153Sm-EDTMP decay has a therapeutic beta-emission and a gamma-photon for bone scan imaging. Monitoring of osteosarcoma radiation treatment effectiveness was performed with bone, CT, MRI and PET/CT fusion imaging. Bone scan and PET/CT improved in 5 out of 9 and 16 out of 18 osteosarcoma sites, respectively. 153Sm-EDTMP targets multiple sites of disease, with a single administration. Side effects of 153Sm-EDTMP (0.5-2.5 mCi/kg) have been minimal and include transient thrombocytopenia and neutropenia. 153Sm-EDTMP can be combined with radiation therapy, bisphosphonates and/or chemotherapy to synergistically improve palliation. This article reviews the rationale, indications and monitoring of standard-dose samarium and investigational high-dose 153Sm-EDTMP treatment of cancer involving bone.     

Samarium for osteoblastic bone metastases and osteosarcoma

Samarium-153 lexidronam (¹⁵³Sm-EDTMP) is FDA approved for painful osteoblastic bone metastases that image on bone scan. ¹⁵³Sm-EDTMP decay has a therapeutic β-emission and a γ-photon for bone scan imaging. Monitoring of osteosarcoma radiation treatment effectiveness was performed with bone, CT, MRI and PET/CT fusion imaging. Bone scan and PET/CT improved in 5 out of 9 and 16 out of 18 osteosarcoma sites, respectively. ¹⁵³Sm-EDTMP targets multiple sites of disease, with a single administration. Side effects of ¹⁵³Sm-EDTMP (0.5 – 2.5 mCi/kg) have been minimal and include transient thrombocytopenia and neutropenia. ¹⁵³Sm-EDTMP can be combined with radiation therapy, bisphosphonates and/or chemotherapy to synergistically improve palliation. This article reviews the rationale, indications and monitoring of standard-dose samarium and investigational high-dose ¹⁵³Sm-EDTMP treatment of cancer involving bone.     

骨肉瘤中Fas、FasL的表达和意义

目的 检测Fas、FasL在骨肉瘤中的表达,探讨其生物学意义。方法 免疫组化法（SP法）检测41例骨肉瘤和15例正常骨组织中Fas、FasL的表达。结果 Fas在骨肉瘤中阳性表达率为53．66％,显著低于正常骨组织中的86．67％（P〈0．05）;骨肉瘤的病理分级、临床分期较高者Fas表达水平低于较低者（P〈0．05）。FasL在骨肉瘤中呈高表达,阳性率为82．93％,高于正常骨组织中的20％（P〈0．01）。FasL在骨肉瘤中的表达与其病理分级、临床分期无关（P〉0．05）。结论 骨肉瘤中Fas／FasL的异常表达可能参与了骨肉瘤细胞的免疫逃避机制。     

20例儿童骨肉瘤的临床治疗

目的探讨儿童骨肉瘤的临床治疗方法。方法对20例儿童骨肉瘤进行手术及化疗。结果12例随访患儿3年生存率达76%。结论儿童骨肉瘤的治疗一般采用手术疗法,但化疗应贯穿于治疗的全过程。