基于转录组的新疆紫草ERF转录因子家族生物信息学分析

从新疆紫草转录组分离出27个ERF转录因子家族基因, 平均大小为1 010 bp, 每个基因平均编码了212个氨基酸。以紫草ERF基因gi261363612为参考, 对27AeERFS从基因结构、表达量、理化性质、亚细胞定位、信号肽、高级结构和保守域的预测和分析等方面做了研究, 并对新疆紫草ERF家族做了系统进化分析, 认为最合适的建树方法为最大似然法。结果显示, 该家族存在3个保守域, 高级结构以无规则卷曲为主, 聚为CBF/DREB, ERF 2个亚族。     

紫草素对IL-17诱导角质形成细胞增殖及趋化因子表达的影响

目的: 观察紫草素(shikonin)对IL-17诱导人角质形成细胞增殖及其分泌趋化因子的影响,探讨紫草素治疗银屑病的作用机制。 方法: 采用IL-17A(200 μg·L^-1)刺激体外培养的HaCaT 细胞,同时加入不同浓度紫草素(2,1mg·L^-1)共同作用24 h。CCK-8法测定细胞增殖;ELISA法测定细胞分泌炎症因子IL-23;Real-time PCR法测定细胞内趋化因子CXCL1,CXCL2和CCL20以及β-防御素4(β-defensin4,DEFB4)的表达。 结果: 紫草素2,1 mg·L^-1能显著抑制IL-17A诱导的HaCaT细胞增殖,具有统计学意义(P<0.01);紫草素各浓度组均能减少IL-23分泌,并对细胞内CXCL1,CXCL2,CCL20和DEFB4的表达有一定的抑制作用。 结论: 紫草素能抑制IL-17A诱导的HaCaT细胞增殖和相关细胞因子的分泌,并可以通过抑制趋化因子募集白细胞,从而达到对银屑病的治疗作用。     

新疆紫草PAL,HMGR,PGT基因的过表达和RNA干扰载体的构建

新疆紫草Arnebia euchroma是药用紫草的主要来源,其最重要成分紫草素类化合物具有很高的药用和工业价值。研究采用GATEWAY技术,构建新疆紫草次生代谢关键酶基因PAL, HMGR, PGT的过表达载体和RNAi载体,为相关转基因株系的构建搭建好平台。新疆紫草次生代谢关键酶基因过表达和RNA干扰载体的构建,是基于遗传物质的遗传研究平台的搭建,对于次生代谢途径上基因功能验证和功能基因的挖掘提供了极大的便利,同时也填补了新疆紫草在转基因领域研究的空白,对于培育紫草素高产株系具有重要意义。     

紫草闪式提取醇提物HPLC指纹图谱的研究

目的： 建立紫草闪式提取醇提物的HPLC指纹图谱,全面完整地反映其内在化学信息,为紫草醇提物的质量控制提供依据。 方法： 采用高效液相色谱法,色谱柱为Kromasil 100-5 C₁₈（4.6 mm×250 mm,5 μm）,以水-甲酸（300：0.5）-乙腈为流动相进行梯度洗脱,检测波长275 nm,流速1 mL·min ^-1,柱温25 ℃。 结果： 建立了10批紫草闪式提取醇提物的HPLC指纹色谱图,获得了13个共有峰,并指认了其中的3个色谱峰,4,6,10号分别被指认为左旋紫草素、乙酰紫草素和β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁。 结论： 该方法简便,精密度、重复性和稳定性良好,能有效控制紫草醇提物的质量,为进一步药效研究、制剂研发提供质量保证。     

紫草素通过调节ERK信号通路对子宫肌瘤大鼠的影响

目的 探讨紫草素对子宫肌瘤大鼠的作用及其分子机制。方法 SPF级别SD大鼠60只,雌性,体质量200~250 g,随机分为空白组、模型组、紫草素低、中、高剂量组（5,10,20 mg·kg^-1）和米非司酮组;建立子宫肌瘤大鼠模型,连续给药4周后检测子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度的变化;采用苏木素-伊红（HE）染色观察子宫组织的病理染色变化;采用酶联免疫吸附测定试验（ELISA）检测血清和子宫中雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）的含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测子宫组织中ER,PR,磷酸化细胞外调节激酶（p-ERK）和ERK的蛋白水平。结果 与空白组比较,模型组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著升高（P<0.01）;子宫发生畸变,平滑肌细胞局灶性坏死和增生,且伴有中性粒细胞浸润等病理变化;血清ER和PR含量显著升高（P<0.01）;子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达升高（P<0.01）。与模型组比较,紫草素中剂量组、高剂量组和米非司酮组大鼠的子宫湿重、子宫系数和平滑肌厚度显著降低（P<0.01）;子宫病理变化缓解,且血清ER和PR含量降低,子宫组织ER,PR和p-ERK的蛋白表达降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。紫草素低剂量组较模型组大鼠子宫湿重、平滑肌层厚度、血清中ER水平,子宫组织PR和p-ERK蛋白表达水平明显降低,差异具有统计学意义（P<0.05,P<0.01）。结论 紫草素可能通过抑制ERK信号活化,从而产生抗子宫肌瘤活性。     

HPLC法测定新疆软紫草属4种植物根中萘醌类成分

目的采用HPLC法测定新疆软紫草属4种植物(新疆紫草、黄花软紫草、天山软紫草、硬萼软紫草)根中7种萘醌类成分(左旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β′-二甲基丙烯酰阿卡宁、2-甲基丁基酰紫草素)的含有量。方法该药材石油醚提取物的分析采用Agilent-C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.05%甲酸;体积流量1 mL/min;柱温30℃;检测波长275 nm。结果 7种成分在各自范围内线性关系良好,平均加样回收率为97.37%～99.75%,RSD为0.42%～1.94%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于软紫草的质量控制。     

紫草素抗肿瘤作用研究进展

癌症的发病率与死亡率逐年递增,严重威胁人类健康。目前,以化疗为主治疗癌症的方法虽能延长患者的生存时间,但其严重的不良反应往往使患者预后不良。故寻找高效低毒的抗癌药物已成为全世界临床共同关注的焦点。中药有效成分,具有不良反应小、多靶点调控等优势,其抗肿瘤活性受到广大科研者的热爱。紫草素为萘醌类化合物,是紫草的主要有效成分之一,具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等药理作用。研究表明,紫草素对多种肿瘤细胞显示出显著的抗肿瘤活性,能够抑制乳腺癌、肺癌、肝癌、宫颈癌、卵巢癌、结肠癌、前列腺癌等多种癌症的发生发展。紫草素抗肿瘤机制主要是通过多途径、多靶点抑制肿瘤细胞增殖,促进活性氧（ROS）生成,诱导肿瘤细胞发生凋亡,阻滞细胞周期,诱导肿瘤细胞自噬,抑制肿瘤细胞迁移与侵袭等。此外,紫草素还能增加肿瘤细胞对抗肿瘤药物的敏感性,逆转肿瘤细胞耐药性。紫草素抗肿瘤作用涉及的信号通路有磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）,PI3K/Akt/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）,丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）,丙酮酸激酶同工酶M2/信号传导与转录激活因子3（PKM2/STAT3）,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1/核因子E₂相关因子2（Keap1/Nrf2）等,但主要通过调控PI3K/Akt信号通路发挥抗肿瘤作用。笔者查阅国内外关于紫草素抗肿瘤作用及机制的相关文献,对其近3年的相关研究进行归纳总结,为紫草素的抗肿瘤作用进一步深入研究及抗肿瘤药物的新药研发提供相应参考。     

正交实验法优选紫草的提取工艺

紫草为紫草科植物新疆紫草Arnebia euchroma(Royle)、紫草Lithosper-mumerythrorhizon Sieb.et Zucc.或内蒙紫草Arnebia guttata Bunge.的干燥根.分布于东北、河北、河南、新疆、内蒙等地.紫草具有凉血、活血、消炎、止痛、解毒、透疹之功效,用于血热毒盛、斑疹紫黑、麻疹不透、疮疡、湿疹、水火烫伤.紫草中药的主要成分为萘醌类色素,主要有乙酰紫草素、紫草素等.本实验采用正交实验法,以左旋紫草为指标,优选出紫草醇提取的工艺条件,该方法简单、快速、准确,为紫草有效部位制备与生产提供了参考.     

多指标成分定量结合指纹图谱分析评价不同来源藏紫草的质量

高效液相色谱法-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)同时测定藏紫草中紫草素、乙酰紫草素、β,β'-二甲基丙烯酰紫草素的含量,结合藏紫草的HPLC指纹图谱研究,对西藏地区不同来源的藏紫草药材的质量进行初步比较和评价。采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈ (4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30℃,检测波长516 nm。利用化学计量法对色谱数据进行相似度比较和聚类分析。测定了7批不同来源藏紫草药材,发现7批药材中3种萘醌类成分的含量差异巨大。指纹图谱相似度比较显示5,6,7号样品间相似度大于0.99,2,3号样品间相似度大于0.97,3,4号样品相似度大于0.90,其余相似度均不超过0.8,7批样品可分为4类,与3种萘醌类成分的含量测定结果基本一致。说明市场上藏紫草药材来源混杂,质量参差不齐。该方法重复性好,可以为不同来源藏紫草药材的质量控制和评价提供依据。     

基于网络药理学及实验验证探讨新疆紫草抗肝癌作用机制

目的 运用网络药理学方法探究新疆紫草抗肝癌的物质基础和作用机制，并通过分子对接和实验验证新疆紫草抗肝癌潜在靶点。方法 通过中国知网（CNKI）、中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）等数据库检索文献收集新疆紫草主要活性成分；根据药物的药物动力学（ADME）特性，通过FAFDrug4平台对活性成分进行筛选；利用多个数据库搜集筛选化合物和肝癌作用靶点，并绘制韦恩图分析；借助Cytoscape软件和STRING数据库构建蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络；用DAVID数据库对关键靶点进行基因本体（GO）富集分析和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析；通过Autodock对核心通路上的靶点进行分子对接；细胞增殖与活性检测（CCK-8）实验验证5种萘醌类化合物的活性；根据预测结果在H22荷瘤小鼠模型中，采用苏木素-伊红（HE）染色法、酶联免疫吸附测定法（ELISA）、蛋白免疫印迹法（Western blot）验证异戊酰紫草素抗肝癌关键靶点。结果 共筛选出55个活性成分，有效成分抗肝癌靶点34个；“药物-活性成分-靶点-疾病”中，度值较高的活性分子主要是萘醌类成分；PPI网络得到多个紫草抗肝癌核心靶点，KEGG筛选通路22条，主要作用于磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）、血管内皮生长因子（VEGF）、肿瘤坏死因子（TNF）等信号通路，分子对接结果表明，5种紫草萘醌类成分与PI3K/Akt信号通路靶点亲和力良好。CCK-8和动物实验结果说明脂溶性成分异戊酰紫草素有着较好的抗癌潜力，高剂量组可显著降低荷瘤小鼠血清中VEGF、甲胎蛋白（AFP）水平，升高干扰素-γ（IFN-γ）水平（P<0.05，P<0.01），并显著下调磷酸化（p）-Akt（Ser473）、B细胞淋巴瘤（Bcl）-2蛋白表达，上调Bcl-2家族抗凋亡因子（Bad）蛋白的表达（P<0.01）。结论 新疆紫草可以通过PI3K/Akt信号通路抑制肝癌细胞增殖、肿瘤血管生成并诱导癌细胞凋亡，为后续深入探讨其具体机制提供了思路和线索。     

探讨自噬相关基因介导乳腺癌预后及免疫浸润的潜在机制及干预中药预测

目的 利用生物信息学研究乳腺癌自噬相关分子模式和肿瘤微环境免疫细胞浸润特征,同时预测具有潜在治疗作用的中药。方法 从TCGA和GEO数据库下载乳腺癌数据,从UCSC Xena数据库获得乳腺癌拷贝数相关数据。使用R语言和Perl分析乳腺癌自噬相关基因在肿瘤组织和癌旁组织表达以及自噬相关基因的拷贝数情况。通过单因素Cox分析、Kaplan-Meier生存分析、最小绝对收缩和选择算子（logistic least absolute shrinkage and selection operator,Lasso）分析、受试者工作特征（receiver operator characteristic,ROC）、列线图构建自噬相关预后模型并评估其预后价值。利用基因集变异分析（gene set variation analysis,GSVA）、京都百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）、单样本基因集富集分析（single-sample gene set enrichment analysis,ssGSEA）和CIBERSORT算法,探索其在乳腺癌中的潜在生物学功能和免疫细胞浸润情况。在此基础上,将关键基因导入SymMap数据库获取相关中药,采用Cytocaspe构建“中药-成分-靶点”网络图,并通过体外实验验证代表性自噬相关中药对乳腺癌细胞增殖及侵袭的影响。结果 大部分自噬相关基因在乳腺癌肿瘤组织和癌旁组织中有表达差异和拷贝数变异,其中肿瘤蛋白P53（tumor protein P53,TP53）的突变频率最高。构建的自噬相关预后模型提示高风险乳腺癌患者预后更差。通过ssGSEA、ESTIMATE和CIBERSORT进一步表明,所建立的模型可能对免疫细胞丰度、免疫细胞类型等产生影响。此外,预测结果提示调控乳腺癌自噬的中药功效以清热解毒、活血化瘀、补阳类为主,药性以辛、苦、甘、寒为主,主要归肝、肺、胃经。实验验证进一步表明,清热解毒药白花蛇舌草、活血化瘀药郁金、补阳药肉苁蓉/淫羊藿可通过调控自噬活性抑制乳腺癌发展。结论 自噬指示乳腺癌不良预后,并与肿瘤免疫浸润密切相关。调控乳腺癌自噬的中药以清热解毒、活血化瘀、补阳类为主,为乳腺癌的免疫和中医药治疗提供新的方向。     

木通属植物提取物抗肿瘤作用的研究进展

木通属AkebiaDecne.目前发现5种,其植物在中医药治疗上应用广泛,药用品种主要是木通（五叶木通）Akebia quinate、三叶木通A. trifoliata和白木通A. trifoliate subsp. australis;主要药用部位为其藤茎和果实,具有利尿通淋和疏肝理气等功效。近年来木通属植物也常用于中医药的肿瘤防治,许多研究表明其提取物对胃癌、肝癌等肿瘤细胞的增殖产生抑制作用,而来自木通属植物不同部位提取物的抗癌作用也不尽相同,其抗肿瘤机制包括诱导凋亡、抑制侵袭与转移、阻滞细胞周期、抑制肿瘤细胞血管生成等。对木通属植物的藤茎、果实、种子提取物和其天然产物的抗肿瘤作用研究进行归纳综述,为木通属植物在中医药肿瘤防治方面的应用提供新思路。     

从“阴阳不和”理论角度探讨肠癌的发病机制、病机演变及临床治疗

中医认为肝脾不调、脾胃不和、肝胃不和等脏腑不和及气血津液不和、寒热不调等均归属于“阴阳不和”,与肠癌的发生和发展密切相关。基于此,提出“阴阳不和”是肠癌的核心发病机制。肠癌各期病机变化各异,是虚、实及虚实夹杂的动态演变,而非本虚标实一言概之,但皆因“阴阳不和”所致。故肠癌的中医治则当以“和法”为主,和其不和,“和法”应贯彻肠癌各期临床治疗始终,使其达到阴平阳秘。因此,文章从“阴阳不和”理论角度出发,探讨肠癌的发病机制、病机演变及临床治疗,以期为肠癌的中医临床诊疗提供思路。     

紫草素及其衍生物抗妇科肿瘤作用研究进展

紫草素是从传统中药紫草中提取的萘醌类化合物,具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤、促进伤口愈合等作用。近年来,紫草素及其衍生物的抗肿瘤作用得到广泛研究。多项体外和体内研究表明紫草素及其衍生物可有效抑制乳腺癌、宫颈癌等妇科恶性肿瘤的发生与发展。从阻滞细胞周期、促进肿瘤细胞凋亡、抑制癌细胞转移和侵袭、诱导自噬和坏死等方面综述近几年紫草素及衍生物在抗妇科肿瘤领域的研究进展,为紫草素类化合物在妇科肿瘤中的临床研究提供参考。     

蟾毒灵体内外抗肿瘤作用及制剂研究进展

蟾毒灵是中药蟾酥中的一种活性单体,能抑制多种实体瘤及白血病肿瘤细胞增殖,诱导肿瘤细胞凋亡,逆转肿瘤细胞耐药,抑制肿瘤细胞迁移和浸润。该文就蟾毒灵对肝癌、肺癌、肠癌、胃癌、膀胱癌等多种肿瘤的体内外抑制作用及机制的最新研究成果进行了详尽综述,并综括了其新型制剂的研究进展,以期为其更深入的研究和应用提供参考。     

雷公藤甲素抗卵巢癌的研究进展

雷公藤甲素是从雷公藤中提取的环氧化二萜内酯化合物,对卵巢癌体外培养细胞及体内实体瘤均有显著的抑制作用,并可有效抑制耐顺铂卵巢癌细胞的生长。综合近年来国内外对雷公藤甲素抗卵巢癌的最新研究结果,对雷公藤甲素抗卵巢癌的作用及其诱导卵巢癌细胞凋亡、干预细胞周期、抑制癌细胞转移等方面的机制进行综述。     

从气论治乳腺癌术后虚劳特色理论探讨

随着人们生活方式及饮食结构的改变,乳腺癌在女性中的发病率越来越高。手术在乳腺癌治疗中占有重要地位,但手术严重耗伤人体正气,且因治疗造成的外形改变常会进一步加重患者心理负担,使患者术后出现一系列不适症状。中医药在改善患者术后症状方面疗效显著。贾英杰教授认为,乳腺癌属本虚标实,其发病机理为“正气内虚,毒瘀并存”,然手术多耗伤正气,因此术后患者多以气虚血瘀多见。贾英杰教授从气论治乳腺癌术后虚劳,以补气培本为主,同时配合使用调气助本法、调气导邪法、调气运中法,四法通用,使补气固本,气机调畅,有效缓解患者术后不良反应,同时提高患者免疫力,防止肿瘤的转移及复发。     

西红花的资源分布及抗肿瘤研究进展＊

西红花为鸢尾科番红花属植物番红花的干燥柱头，是中医临床常用的活血化瘀药，主产于伊朗、印度、希腊和摩洛哥等国家。现代药理研究表明，西红花不仅具有抗惊厥、抗抑郁、抗炎和抗氧化等药理活性，近年来其抗肿瘤活性也逐渐受到了国内外学者的关注。西红花中具有抗肿瘤作用的活性成分主要为西红花苷、西红花酸、西红花醛和西红花苦素，对乳腺癌、肺癌、肝癌、白血病、皮肤癌等多种恶性肿瘤均具有抑制作用，其作用机理包括：诱导细胞凋亡和细胞周期阻滞，增加化疗药敏感度及抑制肿瘤转移等。本文将从西红花的资源分布、抗肿瘤活性成分及作用机制方面进行总结和归纳，以期为西红花未来在抗肿瘤方面的开发及应用提供参考。     

基于生物信息学探讨胃癌相关基底膜基因及中药预测

目的 探究胃癌患者的基底膜差异基因之间以及与预后的相关性,并预测调控差异基因表达的中药,通过统计分析中药的性味归经、药物分类为中医药治疗胃癌提供理论支持,有利于后续中医药开发及中西医联合治疗策略的制定。方法 下载TCGA数据库中胃癌患者的转录组数据,通过检索文献获取基底膜相关基因并筛选、分析其在胃癌的表达量及共表达情况,并对差异基因进行基因本体（gene ontology,GO）功能富集分析、京都基因与基因组百科全书（Kyoto encyclopedia of genes and genomes,KEGG）通路富集分析和疾病本体（disease ontology,DO）富集分析。通过GEPIA数据库对差异倍数大的基底膜差异基因进行预后分析,再通过CTD数据库查找对基因有调控作用的化学成分。应用COREMINE数据库查找相关中药,并通过古今医案云平台统计高频中药的性味归经、药物分类。结果 共筛选出15个与预后相关的基底膜基因,根据参考文献筛选出45种化学成分,得到高频中药为茶树根、姜皮、干姜、丹参、人参等;药性以平、温为主;药味以甘、苦为主;归经以脾、肺、肝经居多;以补虚药、收涩药、清热药、活血化瘀药、理气药、化痰止咳平喘药为主。结论 通过生物信息学分析得出胃癌相关基底膜基因及对应的高频中药,为治疗胃癌的中药新药开发及中医药理论的微观挖掘提供思路。     

消岩颗粒联合低分子肝素钠改善气虚血瘀型晚期非小细胞肺癌患者血液高凝状态的临床观察

[目的] 观察消岩颗粒联合低分子肝素钠对气虚血瘀型晚期非小细胞肺癌患者血液高凝状态的临床疗效。[方法] 收集2017年7月-2019年9月60例符合纳入标准的晚期气虚血瘀型非小细胞肺癌合并血液高凝状态患者，采取统计学随机分组方法分为治疗组与对照组，治疗组（消岩颗粒联合低分子肝素钠治疗）30例，对照组（低分子肝素钠治疗）30例。两组患者均采用抗凝治疗，即皮下注射低分子肝素钠5 000 U（每日1次），治疗组加用天津中医药大学第一附属医院院内制剂消岩颗粒（口服，每日两次），连续服用14 d，观察周期21 d为1个疗程，共观察2个疗程。观察两组治疗周期前后血清学D-二聚体定量、凝血指标[凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APTT）、纤维蛋白原（FIB）]、血小板（PLT）数量、中性粒-淋巴细胞比值（NLR）、中医症状积分、生活质量评分，以及血常规、肝肾功能等安全性指标，所得数据采用SPSS 19.0统计软件进行统计学分析并记录。[结果] 针对气虚血瘀型晚期非小细胞肺癌合并血液高凝状态患者，消岩颗粒联合低分子肝素钠可降低其血清学D-二聚体定量、NLR，改善乏力、肢体麻木症状，提高生活质量。[结论] 消岩颗粒联合低分子肝素钠可显著改善气虚血瘀型晚期非小细胞肺癌合并血液高凝状态患者的血液高凝状态，提高其生活质量，安全性较好。