MiR-497对人胃癌细胞株顺铂耐药性的影响和机制

目的:通过建立人胃癌细胞SGC-7901的顺铂耐药细胞株SGC-7901/DDP,探讨miR-497对SGC-7901/DDP耐药性的影响及其机制。方法:体外研究采用顺铂体外逐步加量诱导法建立人胃癌细胞SGC-7901耐药株,并通过检测药物半抑制浓度和耐药基因MDR1、BCRP、MRP1的表达以鉴定耐药细胞株;检测在亲本及耐药细胞中miR-497、MDR1、MRP1、BCRP和凋亡相关基因Bax、Bcl-2的表达水平;miR-497模拟物分别转染SGC-7901/DDP细胞株,利用SRB法和流式细胞术检测转染miR-497模拟物后细胞对顺铂醇的敏感程度和细胞的周期、凋亡的变化,并检测耐药基因和凋亡相关基因的表达。结果:成功建立人胃癌SGC-7901/DDP耐药细胞株,耐药细胞株中耐药基因MDR1、BCRP、MRP1表达均升高,抗凋亡基因Bcl-2升高,凋亡基因Bax下降,miR-497表达下降(P<0.05);miR-497模拟物提高耐药细胞株对顺铂的药物敏感性,凋亡水平增加,细胞周期G₀/G₁期细胞增多(P<0.05),并可抑制耐药细胞中耐药基因的表达,降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05)。结论:人胃癌耐药细胞株SGC-7901/DDP的miR-497表达下调;上调miR-497的表达可逆转人胃癌SGC-7901/DDP细胞株对化疗药物顺铂的耐药性。     

基于p53介导自噬通路探讨臭椿酮对顺铂耐药胃癌细胞株耐药性的影响

目的探讨臭椿酮对顺铂(DDP)耐药胃癌细胞株SGC-7901/DDP耐药性的影响及其机制。方法采用噻唑蓝(MTT)法检测不同质量浓度臭椿酮对SGC-7901/DDP细胞活力的影响以筛选无毒作用浓度。将体外培养的SGC-7901/DDP细胞分为臭椿酮低浓度(0.2 mg/mL)+DDP(2μg/m L)组、臭椿酮中浓度(0.4 mg/mL)+DDP(2μg/m L)组、臭椿酮高浓度(0.8mg/mL)+DDP(2μg/m L)组考察臭椿酮对SGC-7901/DDP细胞DDP敏感性的影响;将体外培养的SGC-7901/DDP细胞分为对照组、DDP(2μg/m L)组、DDP(2μg/mL)+Pifithrin-α(20μmol/L)组、臭椿酮(0.8 mg/mL)+DDP组、臭椿酮+DDP(2μg/m L)+Pifithrin-α(20μmol/L)组考察p53信号通路与药物作用的关系;采用MTT法检测SGC-7901/DDP细胞活力,流式细胞仪检测SGC-7901/DDP细胞凋亡率,免疫印迹法检测SGC-7901/DDP细胞中LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Beclin1和p53蛋白表达水平。结果 0.2、0.4、0.8 mg/mL臭椿酮对SGC-7901/DDP细胞未产生明显细胞毒性。与DDP组相比,臭椿酮低浓度+DDP组、臭椿酮中浓度+DDP组、臭椿酮高浓度+DDP组细胞活力明显降低,凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值和Beclin1、p53蛋白表达水平明显升高(P0.05),且呈浓度依赖性;而DDP组和对照组之间差异无统计学意义(P0.05);给予Pifithrin-α作用后的DDP+Pifithrin-α组和臭椿酮+DDP+Pifithrin-α组细胞活力较相应对照DDP组、臭椿酮+DDP组明显升高,而细胞凋亡率、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值和Beclin1、p53蛋白表达水平较DDP组、臭椿酮+DDP组明显降低(P0.05)。结论臭椿酮可通过p53通路诱导自噬逆转SGC-7901/DDP细胞对DDP的耐药性。     

CIK细胞联合顺铂对胃癌SGC-7901/DDP细胞的体外杀伤作用

目的 探讨细胞因子诱导的杀伤(CIK)细胞联合顺铂(DDP)对胃癌耐顺铂细胞株SGC7901/DDP及亲代敏感细胞株SGC-7901的体外杀伤作用.方法 体外培养SGC-7901/DDP及SGC-7901细胞,分为对照(A)组、DDP作用(B)组、CIK细胞作用(C)组和CIK细胞联合DDP(D)组.MTT法、RT-PCR法和Western blot法分别检测肿瘤细胞增殖、mdr-1基因mRNA表达和P-糖蛋白(P-gp)蛋白表达.结果 与SGC-7901细胞相比,DDP对SGC-7901/DDP细胞的杀伤率明显降低(P＜0.05),耐药指数为1.73.在SGC-7901/DDP细胞中,C、D组杀伤作用明显高于A组,且与SGC-7901细胞比较差异有统计学意义(P＜0.05).与B、C组相比,D组对SGC-7901/DDP细胞的体外杀伤活性明显升高,逆转倍数为1.41.C、D组SGC-7901/DDP细胞中mdr-1基因mRNA、P-gp蛋白表达均明显低于A组(P＜0.05).结论 CIK细胞与DDP的联合应用使SGC-7901/DDP细胞的生长受到明显抑制,其可能与CIK细胞下调mdr-1基因mRNA、P-gp蛋白表达及增加SGC-7901/DDP细胞对DDP的敏感性有关.     

miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平及其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响

目的 检测miR-1915-3p在胃癌细胞中的表达水平,探讨其对胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法 实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测胃癌细胞MGC-803、SGC-7901、MKN-45和永生化胃上皮细胞GES-1中miR-1915-3p的相对表达水平;转染实验将miR-1915-3p质粒和对照质粒（miR-NC）转染至MGC-803和SGC-7901中,分别设置MGC-803细胞miR-1915-3p组和miR-NC组及SGC-7901细胞miR-1915-3p组和miR-NC组;细胞增殖实验和凋亡实验分别检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的光密度（OD）值和凋亡率;蛋白免疫印迹（Western blot）实验检测miR-1915-3p组和miR-NC组细胞的Bcl-2蛋白表达情况。结果 MGC-803、SGC-7901、MKN-45细胞中miR-1915-3p的相对表达水平分别为（0.46±0.06）、（0.42±0.05）、（0.33±0.04）,均低于GES-1细胞中miR-1915-3p的相对表达水平（P<0.05）。MGC-803细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）;SGC-7901细胞中,miR-1915-3p组与miR-NC组相比,OD值降低、细胞凋亡率增加、Bcl-2蛋白表达减弱（P均<0.05）。结论 miR-1915-3p在胃癌细胞系中表达降低,上调miR-1915-3p的表达可抑制胃癌细胞增殖,减弱Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡。     

平胃汤诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的研究

目的探讨不同浓度复方平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及可能的机制。方法以细胞超微结构和细胞凋亡情况评价不同浓度(120、240或480 mg/ml)平胃汤对人胃癌SGC-7901细胞的影响。结果 1与空白组比较,平胃汤组细胞超微结构变化显著(细胞内线粒体数目增加且体积增大、细胞膜较完整),细胞增殖抑制率和凋亡率明显增高,且具有一定的时间及剂量依赖性(P<0.05);2与空白组比较,平胃汤组Bax蛋白表达量增加,Bcl-2蛋白表达量下调,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论平胃汤能促进人胃癌SGC-7901细胞凋亡,其机制可能与Bax表达增高以及Bcl-2表达降低有关。     

DAB2IP过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对E-cad-herin、Snail、Twist表达的影响

摘要：目的:研究失活蛋白-2相互作用蛋白基因(DAB2IP)过表达对人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移及对上皮间质转化(EMT)相关上皮细胞-钙黏蛋白基因(E-cadherin)、Snail、Twist蛋白表达的影响。方法:采用慢病毒介导DAB2IP过表达转染并筛选稳定人胃癌细胞SGC7901细胞株(过表达组),另设慢病组对照液转染的人胃癌细胞SGC7901作为慢病毒对照组,无转染人胃癌细胞SGC7901为空白对照组,采用实时定量PCR(RT-qPCR)检测各组人胃癌细胞SGC7901 DAB2IP基因表达水平,采用噻唑蓝法(MTT)及平板克隆形成试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901增殖的影响采用细胞划痕试验检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901迁移的影响,采用免疫印迹(Western Blot,WB)法检测过表达DAB2IP对人胃癌细胞SGC7901中EMT相关蛋白表达水平。结果:同一时间及不同时间,空白对照组和慢病毒对照组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,24,48,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率均显著升高(P<0.05)。与24 h比较,48和72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增值抑制率显著升高(P<0.05),与48 h比较,72 h过表达组人胃癌细胞SGC7901中DAB2IP mRNA表达水平、细胞增殖抑制率差异无统计学意义(P>0.05)。提示48 h过表达效果最佳,可用于下游试验。空白对照组和慢病毒对照组平板克隆形成率、细胞迁移距离、E-cadherin、Snail、Twist蛋白水平比较差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和慢病毒对照组比较,过表达组人胃癌细胞SGC7901平板克隆形成率、细胞迁移距离、Snail、Twist蛋白水平显著降低(P<0.05),E-cadherin蛋白水平显著增加(P<0.05)。结论:DAB2IP过表达可抑制人胃癌细胞SGC7901增殖、迁移,可能与上调E-cadherin蛋白表达,下调Snail、Twist蛋白表达有关。     

抑制miR-186的表达促进子宫内膜癌细胞对顺铂的敏感性的探讨

探讨miR-186的表达对Ishikawa/DDP细胞顺铂耐药作用的影响。通过RT-qPCR检测Ishikawa/DDP细胞和Ishikawa细胞中miR-186表达水平。将Ishikawa/DDP细胞分为miR-186 inhibitor组、Inhibitor-NC组和对照组。MTT及克隆形成实验检测细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;MTT法检测细胞半数抑制浓度;Western-blot检测细胞Cleaved-caspase-3、Ki-67、多药耐药1(MDR1)蛋白表达。miR-186在Ishikawa细胞中的相对表达量为1.00±0.05,在Ishikawa/DDP细胞中的相对表达量为4.94±0.37,与Ishikawa细胞比,miR-186在Ishikawa/DDP细胞中高表达(t=18.291,P<0.001)。对照组miR-186相对表达量为1.00±0.05,Inhibitor-NC组miR-186相对表达量为1.00±0.02,miR-186 inhibitor组miR-186相对表达量为0.26±0.05,三组间miR-186相对表达量差异具有统计学意...     

三七总皂苷对人胃癌SGC-7901细胞增殖、侵袭及凋亡的影响

目的探讨三七总皂苷(Panax notoginseng,PNS)治疗胃癌(gastric cancer,GC)的潜在分子机制,为临床PNS治疗GC奠定理论基础。方法将培养的人胃癌SGC-7901细胞随机分为4组:对照组(C组,只加入生理盐水),低质量浓度组(L组,PNS:200μg·mL~(-1)),中质量浓度组(M组,PNS:50μg·mL~(-1))和高质量浓度组(H组,PNS:100μg·mL~(-1))。PNS给药24,48,72和96 h后,采用CCK-8法检测人胃癌SGC-7901细胞活力。使用流式细胞仪检测PNS对胃癌SGC-7901细胞周期的影响。在给PNS 48 h后,通过Hoechst-33342荧光染色探索胃癌SGC-7901细胞凋亡情况。通过Transwell试验,检测不同质量浓度PNS对SGC-7901细胞侵袭的影响。同时,利用蛋白免疫印迹实验检测PNS对胃癌SGC-7901细胞Bax、Bcl-2蛋白表达的影响。结果 PNS能够抑制体外人胃癌SGC-7901细胞的增殖活力。给药24 h后,H组细胞活力明显低于C组(P<0.05);给药48和72 h后,3个实验组细胞活力均明显低于C组(P<0.05);给药48和72 h后,H组细胞活力均明显低于L组和M组;给药72 h后,M组细胞活力明显低于L组(P<0.05)。流式细胞仪结果显示,与C组比较,3个组G0/G1期细胞数量均明显增加,而S期细胞数量均明显减少(P<0.05);与L组比较,H组G0/G1期细胞数量均明显增加,而S期细胞数量均明显减少(P<0.05)。细胞凋亡实验结果表明,与C组比较,3个组细胞凋亡率均明显提高(P<0.05);与L组比较,M组、H组细胞凋亡率明显提高(P<0.05);与M组比较,H组细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,PNS能以质量浓度依赖方式抑制胃癌SGC-7901细胞的侵袭。与C组比较,3个组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05);与L组和M组比较,H组细胞穿膜数量明显减少(P<0.05)。蛋白免疫印迹实验结果显示,与C组比较,3个组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与L组比较,M组和H组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05);与M组比较,H组Bax蛋白表达明显增加(P<0.05)。与C组比较,3个组Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05);与L组比较,M组和H组Bcl-2蛋白表达明显减少(P<0.05)。结论 PNS能抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭,促进其凋亡。     

卡培他滨联合阿司匹林对SGC-7901细胞增殖的体外抑制作用

目的探讨卡培他滨联合阿司匹林对SGC-7901细胞增殖和凋亡的体外抑制作用及其作用机制。方法体外培养SGC-7901细胞,MTT法检测卡培他滨1.0μmol/L与阿司匹林0.5、1.0、3.0 mmol/L单用和联用对SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用;倒置相差显微镜观察卡培他滨1.0μmol/L与阿司匹林3.0 mmol/L单独及联合用药对SGC-7901细胞形态的影响;PI/Annexin V-FITC双染色流式细胞术分析卡培他滨1.0μmol/L与阿司匹林3.0 mmol/L单独及联合用药诱导SGC-7901的细胞凋亡率;Western blotting分析卡培他滨1.0 mmol/L与阿司匹林3.0 mmol/L单独及联合用药对COX-2、VEGF表达的影响。结果卡培他滨与阿司匹林对SGC-7901细胞均有生长抑制作用,且联合组的抑制率高于卡培他滨组和阿司匹林组,两组间比较差异具有统计学意义(P0.05)。用药处理24 h后,在显微镜下可观察到SGC-7901细胞发生细胞凋亡的形态学改变,联合组相对于卡培他滨、阿司匹林单独用药组的变化更明显。PI/Annexin V双染分析表明,卡培他滨1.0μmol/L+阿司匹林3.0 mmol/L联合组的细胞凋亡率明显高于阿司匹林3.0 mmol/L组或卡培他滨1.0μmol/L组。阿司匹林3.0 mmol/L、卡培他滨1μmol/L以及卡培他滨1.0μmol/L+阿司匹林3.0 mmol/L联合组电泳可以检测出环氧合酶-2(COX-2)、血管内皮生长因子(VEGF)的特异蛋白条带。阿司匹林单用时,COX-2表达量受到抑制(P0.01),蛋白表达下调,而VEGF表达无明显抑制;卡培他滨单用时,VEGF表达量受到抑制(P0.01),蛋白表达下调,而COX-2表达无明显抑制;卡培他滨联合阿司匹林处理时,SGC-7901细胞的COX-2、VEGF表达量均受到抑制(P0.01),同时下调COX-2及VEGF蛋白表达。结论卡培他滨联合阿司匹林能够明显抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,并促进其凋亡,其作用机制与COX-2、VEGF蛋白表达的调控有关。     

鼻咽癌组织中miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin的表达及调控作用

目的：观察鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)组织中miR-200c、潜伏期膜蛋白1(LMP1)、E盒结合锌指蛋白2(zinc finger E-box-binding protein 2,ZEB2)和E-cadherin的表达变化，并探讨其调控作用。方法：选取2021-05～2022-06于广州市花都区人民医院住院的NPC患者62例和鼻咽炎患者41例为研究对象。分别采用RT-PCR法检测两组患者组织中的miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达和免疫印迹的方法检测两组组织中LMP1、ZEB2和E-cadherin蛋白表达，并对miR-200c、LMP1、ZEB2和E-cadherin mRNA的表达进行Pearson线性相关分析。结果：NPC组织中miR-200c的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05),LMP1和ZEB2 mRNA和蛋白的表达水平均高于鼻咽炎组(P<0.05),E-cadherin mRNA和蛋白的表达水平低于鼻咽炎组(P<0.05);NPC组织中LMP1 mRNA与miR-200c的表...