川芎嗪和肝素对原代培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响

川芎嗪和肝素对原代培养血管平滑肌细胞生长和分裂的影响唐利龙，汪丽惠，朱国英，张均华冠状动脉成形术（ＰＴＣＡ）后再狭窄的发生，严重影响这一手术的效果。血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣ）的迁移及在血管内膜的增殖不仅是动脉粥样硬化的关键因素，也是ＰＴＣＡ术后再狭窄...     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖抑制作用的探讨

目的观察川芎嗪（TMP）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的抑制作用，并探讨其作用机制。方法利用大鼠颈动脉血管内膜损伤可引起VSMC增殖、血管增厚为实验模型。行增殖细胞核抗原（PCNA）、Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原组织化学检测，纤维母细胞生长因子（FGF）、血小板源生长因子（PDGF）、Bcl-2、Pax、C—myc原位杂交检测及TUNEL染色。结果内皮损伤后VSMC增殖，血管管腔面积减少；低剂量TMP治疗组有轻度抑制VSMC增殖的作用，使管腔面积有所增加；TMP高剂量抑制作用明显增强。高剂量TMP组和假手术组PCNA、Ⅳ胶原、PDGF的表达低于模型组；TMP低剂量组与模型组相比无显著差异。高、低剂量TMP组和假手术组的Ⅰ型胶原、FGF、Bcl-2、c—myc和TUNEL的表达低于模型组。高、低剂量TMP组和假手术组的Bax表达高于模型组。结论TMP能抑制平滑肌细胞Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、FGF、PDGF表达；影响Bcl-2、c—myc、Bax基因表达，促进血管平滑肌细胞凋亡；达到抑制平滑肌细胞增殖的作用。     

川芎嗪对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞表达血小板源生长因子的影响

目的 探讨川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导血管平滑肌细胞(VSMC)中血小板源生长因子(PDGF)表达的影响.方法 培养大鼠主动脉VSMC,以 10-7mol/L AngⅡ刺激作为AngⅡ组 ,AngⅡ刺激前分别应用不同浓度川芎嗪预处理做为高、中、低剂量组,以正常的VSMC为对照组,测定VSMC增殖活度,免疫细胞化学法检测培养24h时VSMC PDGF-B的表达.结果 AngⅡ组VSMC增殖活度与 PDGF-B表达显著高于对照组(P<0.01).与AngⅡ组比较,川芎嗪中、高剂量组VSMC增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01)、PDGF-B表达水平均显著低于AngⅡ组(P<0.05或P<0.01).结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PDGF-B介导的信号转导有关.     

中药对血管平滑肌细胞增殖的影响

血管平滑肌细胞(ＶＳＭＣ)增殖是动脉粥样硬化(ＡＳ)斑块病变发生和发展的重要步骤[1],也是经皮腔内冠状动脉成形术(ＰＴＣＡ)后再狭窄的最主要形成因素之一[2]。抑制ＶＳＭＣ增殖是抗ＡＳ、防治ＰＴＣＡ术后再狭窄的重要途径之一。近几年来,中药对ＶＳＭＣ增殖影响的研究取得可喜的进展,现综述如下。1　单味中药及成分对ＶＳＭＣ增殖的影响1.1　丹参和丹参酮Ⅱａ磺酸钠(ＴＮⅡａ)　　张涛等[3]用实验性ＡＳ家兔,在髂动脉狭窄处行髂内血管成型术(ＴＡ),然后每日在普通饲料中掺入丹参粉2ｇ,饲喂30天的丹参组动物髂动脉ＶＳＭＣ增生较轻,内膜…     

川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖及胶原合成的作用机制研究

目的 研究川芎嗪抑制血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）增殖的作用机制,为中药有效预防血管再狭窄提供实验依据。方法 体外培养大鼠胸主动脉VSMCs,分为：阴性对照组、血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）组（AngⅡ10 －6 mol/L）、低剂量组（川芎嗪20 μmol/L加AngⅡ］、中剂量组（川芎嗪40 μmol/L加AngⅡ）及高剂量组（川芎嗪80 μmol/L加AngⅡ）。MTT法检测细胞增殖率;Western blot和实时荧光定量PCR法分别检测Wnt通路相关蛋白Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1及胶原Ⅰ（ColⅠ）、胶原Ⅲ（ColⅢ）蛋白、基因表达。结果 与阴性对照组比较,AngⅡ组细胞增殖率明显升高（P<0.05）。与AngⅡ组比较,中、高剂量组细胞增殖率明显降低（P<0.05）。与阴性对照组比较,AngⅡ组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显上调（P<0.05）。与AngⅡ组比较,中、高剂量组Wnt4、β-catenin、Dvl-1、CyclinD1、ColⅠ、ColⅢ蛋白和mRNA表达均明显下调（P<0.05）。上述指标在低、中、高剂量组均具有浓度依赖性。结论 川芎嗪通过下调Wnt信号通路在一定程度上抑制了AngⅡ诱导的VSMCs的增殖及胶原分泌。     

川芎嗪对血管平滑肌细胞增殖及蛋白激酶C通路的影响

目的 观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖中蛋白激酶C(PKCζ)-细胞外信号调节激酶(ERK1/2)通路的影响.方法 建立AngII诱导的VSMC增殖模型,测定细胞增殖活度,免疫细胞化学法检测PKCζ与ERK1/2表达.结果 与对照组比较,AngⅡ组细胞增殖活度显著增高,PKCζ与ERK1/2表达显著高于对照组(均P<0.01).中、高剂量川芎嗪组的细胞增殖活度明显降低(P<0.05或P<0.01),PKCζ与ERK1/2表达亦明显低于AngⅡ组(P<0.01),与低剂量川芎嗪组相比亦有显著差异,说明川芎嗪的抑制作用具有量-效关系.结论 川芎嗪对AngⅡ诱导的VSMC增殖有显著抑制作用,其机制与抑制PKCζ-ERK1/2通路有关.     

中药对血管平滑肌细胞的影响

整理和分析中药对血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)的影响。血管疾病对患者的危害较大,VSMC的表型转化、过度增殖和迁移是动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)、血管成形术后再狭窄和高血压等血管疾病形成的主要环节,故研究中药对VSMC的调节作用对血管疾病的防治意义重大。对中药促使VSMC表型转化、抑制细胞异常增殖和迁移及其分子机制、基础动物实验等方面的研究文献报道进行总结,并对血管平滑肌细胞与内皮细胞、内皮祖细胞及巨噬细胞之间的关系进行分析。结果表明,中药在AS等血管疾病的防治中具有良好的效果,但由于其成分复杂,作用机制难以明确、质量难以控制及毒副作用限制了其在临床中的应用,故结合中药血清药理学等方法,加强中药活性单体化合物对VSMC调节作用的深入研究或将给血管疾病的防治带来新的希望。     

川芎嗪抗血管紧张素Ⅱ诱导的离体培养血管平滑肌细胞增殖的实验研究

目的观察川芎嗪对血管紧张素Ⅱ(angiotensinII,AngⅡ)诱导的血管平滑肌细胞(vascu lar smooth musc le cells,VSMCs)中钙调神经磷酸酶(Calc ineunrin,CaN)活性及原癌基因c-fos表达水平的影响。方法建立AngⅡ诱导VSMCs增殖模型,应用免疫细胞化学法观察不同浓度的川芎嗪在不同时段内对血管平滑肌细胞表达c-fos的影晌;并用酶促反应定磷法测定CaN活性变化。结果与正常对照组比较,AngⅡ组能够明显刺激VSMCs增殖,细胞增殖活度明显升高(P<0.01):AngⅡ作用后VSMCs中CaN活性和c-fos表达量(A值)较正常对照组均显著增高(P<0.01)。同时加川芎嗪作用后,各组CaN活性和c fos表达水平均显著下降(P<0.01)。结论AngⅡ能显著刺激血管平滑肌细胞增殖,川芎嗪能使血管平滑肌细胞中原癌基因c-fos的表达减弱及增殖受抑。     

川芎嗪抑制血管平滑肌细胞增殖的分子机制研究

目的:观察川芎嗪注射液对PDGF诱导的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖过程中增殖相关基因表达变化的影响,为探讨川芎嗪活血化瘀作用的分子机制提供实验依据。方法:采用贴块法培养VSMC,建立PDGF诱导的细胞增殖模型,用细胞计数法观察不同浓度川芎嗪对VSMC增殖的影响。采用Western blotting方法分别检测各组细胞中增殖相关基因AP-1及PCNA的表达变化及川芎嗪对它们的影响。结果:川芎嗪呈剂量依赖性地抑制PDGF诱导的细胞增生,与刺激组相比,川芎嗪可显著抑制增殖相关基因AP-1及PCNA的表达。结论:川芎嗪可能是通过抑制增殖相关基因的表达而发挥抗血管内膜增生的作用。     

通冠胶囊对球囊血管成形术后血管平滑肌细胞凋亡的影响

目的：探讨通冠胶囊对兔球囊血管成形术后再狭窄血管平滑肌细胞细胞凋亡的影响。方法：建立兔髂动脉粥样硬化模型，病变血管行球囊血管成形术，2周后处死动物，目的血管段行病理组织学分析。结果：与对照组比较，治疗组血管最终管腔面积较大、内膜／中膜厚度较小，P〈0．05；血管平滑肌细胞增殖（PCNA）降低，细胞凋亡（TUNEL）增加，P〈0．05。动脉粥样硬化组血管平滑肌增殖与细胞凋亡均较血管成形术后组降低，P〈0．01。结论：通冠胶囊防治球囊成形术后再狭窄，机制抑制血管新生内膜增殖、促进细胞凋亡以及调节细胞增殖／细胞凋亡的平衡。     

糖通方对体外培养糖尿病大鼠髂动脉血管平滑肌细胞增殖的影响

目的 用血清药理学与分子生物学相结合的方法,探讨糖通方对糖尿病大鼠模型血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。     

益气健脾中药对血管平滑肌细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的：探讨益气健脾中药血清体外诱导血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法：采用缺口末端标记（terminal deoxynucleotidyl transferase mediated dUTP nicked labeling,TUNEL)分析、透射电镜、流式细胞仪分析、DNA电泳分析检测细胞凋亡；应用Northern印迹检测bcl-2、c-myc和p53基因表达活性。结果：经中药血清处理的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cell,VSMC)，可出现典型的凋亡特征，DNA电泳呈梯状图谱；流式细胞仪分析显示G0／G1期细胞阻滞现象，亚二倍体凋亡细胞增多，出现典型的凋亡峰，细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示，30％中药血清可抑制抗凋亡基因bcl-2的表达，上调促凋亡基因c-myc和p3 mRNA水平。结论：益气健脾中药通过影响凋亡相关基因bcl-2、c-myc和p53的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

大鼠胸主动脉平滑肌细胞的培养与鉴定

目的改进大鼠血管平滑肌细胞（VSMC）的培莽方法。方法采用机械刮除、差异贴壁等手段进行组织贴块法原代培养,胰蛋白酶消化传代,并应用相差显微镜和即用型SABC免疫组化染色试剂盒对细胞进行形态学和免疫组化鉴定。结果镜下培养细胞呈典型的“谷-峰状”生长,免疫组化染色显示胞浆内α—actin阳性表达。结论拳法可获纯度高、结构和功能良好的VSMCs。     

雷公藤红素对血管平滑肌细胞内游离Ca2+和H+浓度的影响

目的；观察雷公藤红素对血管平滑肌细胞内游离Ｃａ＾２＋和Ｈ＾＋浓度的影响。方法：采用荧光染色法，参激光扫描焦显微镜动态研究了不同浓度的胎牛血清对单个血管平滑肌内游离Ｃａ＾２＋和Ｈ＾＋浓度变化的影响效应。结果：３０％胎牛血清可以引起细胞内一快速的，持续的游离Ｃａ＾２＋浓度升高，而３０％胎牛血清加０．３ｍｇ／Ｌ雷公藤红素则可以产生抑制细胞内游离Ｃａ＾２＋浓度升高的效应；     

大豆苷元对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及TSC-36基因表达的影响

 目的通过观察大豆苷元对血管平滑肌细胞的抑制及其对转化生长因子β诱导蛋白36(TSC-36)基因表达的影响,探讨该药对血管平滑肌细胞的作用机制。方法分离培养人新生儿脐动脉平滑肌细胞,不同浓度的大豆苷元与细胞共孵育,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活性,并通过竞争性PCR定量分析TSC-36基因在脐动脉平滑肌细胞中的表达。结果与对照组相比,大豆苷元组脐动脉平滑肌细胞活性比率显著降低(P<0.05);大豆苷元组细胞中TSC-36基因表达量显著高于对照组(P<0.01),且TSC-36基因含量增加与大豆苷元浓度呈剂量依赖性。结论大豆苷元在抑制培养的人脐动脉平滑肌细胞增殖的同时,TSC-36基因表达上调,推测调控TSC-36基因表达可能是大豆苷元抑制平滑肌细胞增殖的作用途径之一。     

心脑宁诱导增生VSMC凋亡及对相关基因表达的影响

目的 :探讨活血化瘀中药血清体外诱导增生血管平滑肌细胞凋亡的作用及其分子机制。方法 :采用流式细胞仪分析 ,DNA电泳分析检测细胞凋亡 ;应用Northen印迹检测bcl- 2、c-myc基因表达活性。结果 :经中药血清处理的血管平滑肌细胞 (vascularsmoothmuclecell,VSMC) ,可出现典型的凋亡特征 ,DNA电泳呈梯状图谱 ;流式细胞仪分析显示G0 /G1期细胞阻滞现象 ,亚二倍体凋亡细胞增多 ,出现典型的凋亡峰 ,细胞凋亡率与中药血清浓度具有量效关系。杂交结果提示 ,2 0 %中药血清可抑制抗凋亡基因bcl- 2的表达 ,上调促凋亡基因c -myc的mR NA水平。结论 :活血化瘀中药可通过影响凋亡相关基因bcl- 2、c -myc的表达活性而诱导VSMC凋亡。     

补脾益气中药对脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3表达的影响

目的:探究脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3表达的变化及补脾益气方药对这种变化的调节作用。方法:将实验动物分成空白组、模型组、四君子汤组、六君子汤组、归脾汤组,用免疫组化法检测血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3的表达。结果:与空白组比较,其他各组PDGF、Caspase-3的灰度值低,表达增强(P<0.05),与模型组比较,其他各组的PDGF、Caspase-3灰度值高,表达减弱(P<0.05)。结论:脾气虚证大鼠血管平滑肌细胞内PDGF、Caspase-3表达增强,而补脾益气中药能改善这种情况,从而为补脾益气中药防治心血管系统疾病提供实验室依据。     

昆明山海棠提取物对血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的探讨昆明山海棠提取物(THW-4)对离体血管平滑肌细胞(VSMC)增殖及凋亡的影响。方法培养家兔主动脉平滑肌细胞,加入不同浓度的THW-4进行处理,用MTT法测定细胞生长曲线,以Annexin V-FITC／PI双标记、透射电镜、原位末端标记法检测细胞凋亡。结果THW-4可以明显抑制VSMC增殖,呈剂量和时间依赖性,作用48h的半有效抑制浓度(IC50)为15．6μg／L;VSMC在含10～100μg／L THW-4的培养液中孵育56h,可检测到细胞早期凋亡,且凋亡率随THW-4浓度增加而升高;延长孵育时间至72h,透射电镜下可观察到典型的凋亡细胞形态学改变,原位末端标记法显示DNA片段化增多,有核碎裂、固缩等改变;细胞周期时相分布显示THW-4主要阻滞VSMC于G2/M期。结论THW-4能有效抑制体外培养的VSMC增殖及诱导其凋亡,提示THW-4可能会作为防治血管成形术后再狭窄的候选药物。     

消斑通脉合剂对PDGF-BB诱导血管平滑肌细胞增殖的影响

[目的]观察中药复方消斑通脉合剂药物血清对体外培养的VSMCs细胞周期的作用。[方法]体外培养VSMCs,取对数生长期细胞用作实验,MTT法检测不同浓度药物血清对体外培养的VSMCs增殖活力;应用流式细胞仪分析各组细胞周期分布。[结果] MTT法显示药物血清呈剂量依赖性抑制VSMCs增值,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.05),流式细胞仪显示药物血清可明显阻滞VSMCs细胞进程,高剂量与低剂量比较有统计学差异(P<0.01)。[结论]中药复方消斑通脉合剂药物血清可以阻滞VSMCs的细胞周期进程,达到抑制VSMCs增殖的作用。