二仙汤及其拆方对老年大鼠部分抗氧化酶活性及其基因表达水平的影响

采用分子生物学实验技术对二仙汤及其拆方影响老年大鼠肝组织超氧化物歧化酶（ＳＯＤ），过氧化氢酶（ＣＡＴ）活性及其基因表达水平的作用进行了观察。结果显示：老龄大鼠过氧化脂质（ＬＰＯ）含量明显增高；ＳＯＤ、ＣＡＴ，活性降低；而且酶活性降低与这类酶蛋白的基因（ｍＲＮＡ）表达水平减弱密切相关。用二仙汤及其拆方治疗后，能明显降低老龄大鼠肝组织ＬＰＯ含量；提高ＳＯＤ和ＣＡＴ活性；并观察到这些酶活性的提高又与编码相应酶蛋白的ｍＲＮＡ表达水平增强有关。提示二仙汤可在基因水平上，通过调控、增强编码酶蛋白的基因表达水平而增强抗氧化酶活性，减少自由基产物的作用，从而具有延缓衰老的疗效。     

二仙汤及其拆方对老龄大鼠下丘脑GnRH基因转录与表达的调节作用

本文报道了二仙汤（仙茅、淫羊藿、巴戟天，当归、知母、黄柏）及其温（前４味药）和寒（后２味药）两个拆方对２４月龄雌、雄ＳＤ大鼠下丘脑ＧｎＲＨｍＲＮＡ含量和垂体ＧｎＲＨ含量的调节作用。结果表明：２４月龄雌、雄老年大鼠下丘脑ＧｎＲＨ基因转录与表达水平下降。表明该龄大鼠下丘脑ＧｎＲＨ神经元的活动能力减退，加重了生殖系统的衰老。二仙汤及其拆方有提高雌、雄老年大鼠下丘脑ＧｎＲＨ基因的转录水平，提高腺垂体ＧｎＲＨ的单位含量，提示二仙汤治疗更年期综合征取效的部分机制与该方延缓下丘脑衰老，提高其ＧｎＲＨ转录与表达水平有关     

二仙汤及其拆方对老龄大鼠下丘脑GnRH基因转录与表达的调节作用

二仙汤（仙茅、淫羊囊、巴戴天、当归、知母、黄柏）及其温（前4味药）和寒（后2味药）两个拆方对24月龄雌、雄SD大鼠下丘脑GuRH mRNA含量和垂体GnRH含量的调节作用。结果表明：24月龄雌、雄老年大鼠下丘脑GuRH基因转录与表达水平下降。表明该龄大鼠下丘脑GnRH神经元的活动能力减退，加重了生殖系统的衰老。二仙汤及其拆方有提高雌、雄老年大鼠下丘脑GuRH基因的转录水平，提高腺垂体GuRH的单位含量，提示二仙汤治疗更年期综合症取效的部分机制与该方延缓下丘脑衰老，提高其GuRH转录与表达水平有关。     

二仙汤及其拆方对老年大鼠自由基代谢作用的实验研究

报告了动物实验结果：老龄大鼠ＬＰＯ含量明显增高，ＳＯＤ、ＣＡＴ等抗氧化酶活性降低，而且酶活性降低与相应酶蛋白的基因表达水平减弱密切相关。用二仙汤及其拆方）温肾益精方和滋阴泻火方）治疗后，能明显降低老龄大鼠ＬＰＯ含量，提高ＳＯＤ、ＣＡＴ酶活性，并观察到这些酶活性的提高作用又与编码这些酶蛋白的基因表达水平增强有关。提示二仙汤及其两拆方通过调控、增强酶蛋白的基因表达水平而起到提高抗氧化酶活性、减少自由基     

二仙汤及其拆方对大鼠卵泡颗粒细胞分泌功能的影响

目的观察二仙汤及其温肾、滋阴、调理冲任3个拆方组对原代培养的雌性大鼠卵泡颗粒细胞分泌功能的作用。方法运用直接加药法观察二仙汤及其温肾、滋阴、调理冲任3个拆方组、6个单味药以及温肾药淫羊藿、仙茅的主要成分淫羊藿苷和仙茅苷对原代培养卵泡颗粒细胞分泌雌二醇(E_2)的作用。结果二仙汤及其拆方能一定程度促进颗粒细胞分泌E_2,作用以温肾组为好(P＜0．05)；各单味中药均有促进颗粒细胞分泌E_2的作用,其中以温肾药仙茅、巴戟天、淫羊藿和当归作用强(P＜0．01)。结论二仙汤调节下丘脑-垂体-性腺轴的作用可能与其促进卵泡颗粒细胞分泌E_2有关,温肾组拆方对促进卵泡颗粒细胞分泌E_2的作用较好。     

二仙汤及其拆方对去势大鼠子宫,精囊腺作用的形态学研究

二仙汤是治疗妇女更年期综合征的代表方,其疗效在临床应用中已得到充分的肯定。全方由温肾益精养血药(温肾方)仙茅、仙灵脾、巴戟天、当归和滋阴泻相火药(泻火方)知母与黄柏二部份共6味中药组成。对于二仙汤能改善老年大鼠丘脑—垂体—性腺轴的功能已有报道,为探讨其作用的机理,本文观察了3月龄大鼠去势后饲以二仙汤及其拆方的60d后子宫、精囊腺的变化。1 材料和方法1.1 动物分组及处理Wistar品系大鼠(3月龄)购自上海医科大学。手术切除雌性动物双侧卵巢及雄性动     

二仙汤及其拆方对大鼠性腺细胞分泌功能的影响

目的:观察二仙汤及其温肾、滋阴、调理冲任3个拆方对性腺细胞分泌功能的影响,比较二仙汤3个组成部分对性腺细胞的作用、差异和协同,从细胞水平揭示其配伍组方的原理。方法:按方剂组成原理进行拆方,用放射免疫方法观察二仙汤及其拆方对原代培养雄性大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮(T)、原代培养雌性大鼠黄体细胞孕酮(P)及卵泡颗粒细胞分泌雌二醇(E2)的影响。结果:①对睾丸间质细胞分泌T的作用,以二仙汤全方组促进作用最明显,而滋阴组有降低T的趋势,温肾组和当归组作用不明显;②对黄体细胞分泌P的作用,以全方组促进作用最好,其次为温肾组,当归组和滋阴组的作用不明显;③对促进颗粒细胞分泌E₂的作用,以全方组效果最好,其次为温肾组、滋阴组,而当归有提高E₂的趋势。结论:二仙汤能直接促进睾丸间质细胞分泌T,黄体细胞分泌P以及促进颗粒细胞分泌E₂,综合来看,全方组作用最好,拆方组作用有异同。     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响

目的:通过观察龟鹿二仙胶汤及其拆方对SD大鼠软骨细胞凋亡基因表达的影响,比较龟鹿二仙胶汤中各药物组成在全方中的作用。方法:取1月龄SD大鼠膝关节软骨建立软骨细胞体外培养体系,采用实时荧光定量PCR检测Bax、Bcl-2、Caspase-3、p53mRNA表达。结果:龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角、人参、枸杞、盐酸氨基葡萄糖均可显著抑制大鼠软骨细胞Bax、Caspase-3、P53的表达;龟鹿二仙胶、龟甲、鹿角与盐酸氨基葡萄糖效果相当,人参、枸杞弱于盐酸氨基葡萄糖。结论:龟甲和鹿角是龟鹿二仙胶抑制凋亡的主要物质。龟甲、鹿角峻补阴阳以生气血精髓的作用可以一定程度上从抑制软骨细胞凋亡来体现。人参大补元气、枸杞滋补肾阴,抑制凋亡有效,但效果明显不如龟鹿二仙胶;而4味药共同作用,具有填补精髓、益气壮阳之功,人参、枸杞可以在一定程度上加强龟甲、鹿角抑制软骨细胞凋亡基因的表达。     

二仙汤及其拆方对才龄大鼠胸腺及细胞免疫功能的影响

本研究观察了二仙汤及其拆方对此龄（２０月龄）大鼠胸腺及细胞免疫功能的影响。结果表明，该方能降低老龄大鼠胸腺过氧化脂质（ＬＰＯ）含量，改善胸腺显微和超结构，并相应使胸重量有所提高。该法还能延长脾淋巴细胞体外存活时间，提高ＰＨＡ淋转。     

二仙汤及其拆方对老龄大鼠血浆性激素和促性腺激素含量的影响

20月龄的老龄大鼠血浆性激素含量减少(p<0.01),促性腺激素含量增加。二仙汤及其温肾益精养血和滋阴泻相火两个拆方均能分别提高老龄雄性大鼠血浆睾酮(p<0.05)和老龄雌性大鼠血浆雌二醇(p<0.01、p<0.05)的含量,降低两者血浆黄体生成激素的含量。认为二仙汤及其拆方对更年期综合征的疗效可能与提高血浆性激素水平有关。本文还就二仙汤及其两个拆方的作用差异进行了探讨。     

不同浓度的二仙汤及其拆方对大鼠卵泡颗粒细胞凋亡因子影响的比较研究

目的:观察不同浓度的二仙汤及其拆方温补肾阳组、滋阴泻火组、补血组对原代培养的雌性大鼠卵巢颗粒细胞凋亡因子Bcl-2、Bax蛋白表达及Caspase-3蛋白活性的影响。方法:采用氯化镉复制的大鼠卵泡颗粒细胞凋亡模型,加入不同浓度二仙汤及其拆方,作用24 h后,酶联免疫吸附法检测卵泡颗粒细胞内Bcl-2、Bax蛋白表达及Caspase-3活性。结果:1二仙汤及其拆方均可抑制卵泡颗粒细胞的凋亡;2二仙汤及其拆方抑制卵泡颗粒细胞凋亡的作用靶点与其浓度相关:高浓度(1 mg/m L)二仙汤主要降低卵泡颗粒细胞中Bax蛋白表达;高浓度(1 mg/m L)二仙汤、低浓度(0.01 mg/m L)补肾阳组主要上调卵泡颗粒细胞中Bcl-2蛋白表达,二者比较无差异;低浓度(0.01 mg/m L)补血组主要抑制卵泡颗粒细胞内Caspase-3活性。结论:二仙汤主要是通过补肾阳组上调卵泡颗粒细胞Bcl-2蛋白表达而发挥君药的"扶正"作用,通过补血组抑制Caspase-3蛋白活性发挥使药的调和作用,初步证明了二仙汤配伍的合理性。     

三仙汤及其拆方对老龄大鼠胸腺及细胞免疫功能的影响

本研究观察了二仙汤及其拆方对老龄(20月龄)大鼠胸腺及细胞免疫功能的影响。结果表明,该方能降低老龄大鼠胸腺过氧化脂质(LPO)含量,改善胸腺显微和超微结构,并相应使胸腺重量有所提高。该法还能延长脾淋巴细胞体外存活时间,提高PHA淋转。     

二仙汤及其组方中药对幼年大鼠卵巢形态学影响

目的:通过二仙汤及其组方中药对幼年大鼠卵巢的形态学观察,探讨其对卵巢功能的影响机制。方法:幼年SD大鼠54只,分为正常对照组、阳性对照组、二仙汤组、淫羊藿组、仙茅组、巴戟天组、当归组、黄柏组和知母组9组。各组给药6d后麻醉大鼠,取血清测量卵泡刺激素(FSH)和雌二醇(E2)的含量,分离摘取双侧卵巢,称重后常规石蜡包埋切片,行HE染色和免疫组织化学染色。结果:阳性对照组、仙茅组和黄柏组卵巢系数与正常组对比增加明显,差异有统计学意义(P<0.05)。仅阳性对照组E2含量升高。HE染色发现阳性对照组、二仙汤组、淫羊藿组、仙茅组、当归组和黄柏组卵泡数量明显增多,其中阳性对照组、仙茅组和黄柏组可见黄体形成。免疫组织化学染色发现雌激素受体α(ERα)在各组大鼠的卵巢颗粒细胞中未见表达,雌激素受体β(ERβ)主要表达于各组大鼠的卵巢颗粒细胞的细胞核中;二仙汤组、淫羊藿组、仙茅组、当归组和黄柏组ERβ表达显著增强(P<0.05)。结论:二仙汤及其方中温肾药(淫羊藿、仙茅),滋阴药(黄柏)和调理冲任药(当归)通过上调卵泡颗粒细胞ERβ表达,促进卵泡发育成熟和排卵。     

二仙汤及其组方中药对幼年大鼠子宫作用的研究

目的:通过对二仙汤及其组方中药对幼年大鼠子宫作用的定量分析,探讨其对子宫功能的影响机制。方法:幼年SD大鼠54只,分为正常对照、己烯雌酚、二仙汤、淫羊藿、仙茅、巴戟天、当归、黄柏和知母9组,各组给药6 d后麻醉大鼠,取血清测量雌二醇(E2)的含量,分离摘取双侧子宫,称重后常规石蜡包埋切片,行HE染色和免疫组织化学染色。结果:己烯雌酚组、二仙汤组、淫羊藿组和仙茅组子宫系数与正常组对比增加明显,有统计学意义(P0.05)。仅己烯雌酚组E2增高。HE染色发现己烯雌酚组子宫内膜厚度和上皮细胞高度明显增加(P0.01)。免疫组织化学染色发现己烯雌酚可明显下调雌激素受体α(ERα)和雌激素受体β(ERβ)在大鼠子宫中的表达,而二仙汤及方中君药淫羊藿和仙茅则上调ERα和ERβ的表达(P0.01)。结论:二仙汤及其方中温肾药(淫羊藿、仙茅)通过调节雌激素受体ERα和ERβ在子宫中的表达而发挥植物雌激素的功能。     

从二仙汤拆方对大鼠卵泡颗粒细胞分泌功能的影响探讨方剂组成原理

 目的观察二仙汤及其拆方对大鼠卵泡颗粒细胞分泌雌二醇(estradiol,E₂)的影响,以期阐述二仙汤中各单味药的作用地位和相互间的配伍关系,从细胞水平揭示其配伍组方的原理。方法采用单味药研究法、药物组间关系研究法、撤药研究法等拆方法,用放射免疫法观察二仙汤各拆方直接加药法对颗粒细胞分泌E₂的影响。结果①二仙汤中单味药黄柏、仙茅刺激颗粒细胞分泌E₂的作用大于其他各单味药。②全方去知母组E₂的分泌的作用强于全方组。③淫羊藿与巴戟天的合煎液比其两者分煎液再共同作用于颗粒细胞更能提高E₂水平。结论二仙汤中黄柏和仙茅对颗粒细胞分泌E₂有直接的促进作用。淫羊藿协同作用明显,淫羊藿与巴戟天合煎促进颗粒细胞分泌E₂的作用大于分煎。知母对颗粒细胞分泌E₂有一定的抑制作用。体外实验与体内实验结果的关系有待进一步研究。     

龟鹿二仙胶汤及其拆方对关节软骨细胞增殖的作用

目的:分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞药理血清对大鼠关节软骨细胞的调节作用,探讨中药治疗骨性关节炎的机理。方法:使用酶消化法,建立大鼠关节软骨细胞培养体系;采用MTT法,筛选出龟鹿二仙胶汤、鹿茸、龟板、人参和枸杞作用软骨细胞的最佳药理血清浓度。通过形态学、细胞超微结构观察、MTT法、流式细胞仪细胞增殖指数测定,分析龟鹿二仙胶汤方、鹿茸、龟板、人参和枸杞含药血清以及IGF-I对照组对软骨细胞增殖的影响。结果:建立了大鼠关节软骨细胞培养体系。通过MTT法筛选了龟鹿二仙胶汤及其拆方最佳药效的药理血清。龟鹿二仙胶汤药物血清组、IGF-I对照组能显著促进软骨细胞的增殖,其余各拆方组与正常组比较,无显著性差异,药效低于全方组。结论:证实了药物血清的制备与获得应通过实验筛选得出。龟鹿二仙胶汤能显著促进软骨细胞的增殖,全方药效优于拆方各组,体现了中药复方配伍的优越性。深化了中医"肾主骨"理论与软骨细胞增殖的关系的认识,进一步丰富了中医"肾主骨"理论的现代科学内涵。     

二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠血常规的影响

目的探讨二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠血常规的影响,并比较各个拆方作用的差异。方法实验SD大鼠分为假手术组、模型组和二仙汤整方及其4个拆方组,共7个组,除假手术组行假手术外,其余均行手术彻底摘除卵巢,连续给药90 d,考察血常规的变化。结果假手术组的HCT,HGB,RBC,LYMPH,PLT,WBC与模型组相比均有差异性,C方能明显降低HGB、HCT,D方可显著降低WBC,B方和E方可使PLT明显升高。结论各个拆方对去卵巢大鼠的血液成分起着不同的调节作用,具有临床指导意义。     

二仙汤及其拆方对去卵巢大鼠骨质疏松症的影响

目的:探讨二仙汤及其拆方防治骨质疏松症的作用及初步机制,为临床用药加减提供理论依据。方法:实验采用去卵巢骨质疏松大鼠模型,以二仙汤整方为标准,根据君、臣、佐、使药进行拆分原方,在二仙汤君药基础上,共分为8组,即假手术组、模型组、福善美组(0.1 mg·kg~(-1)·d~(-1))、二仙汤整方(A方)、淫羊藿+仙茅(B方)、淫羊藿+仙茅+巴戟天(C方)、淫羊藿+仙茅+当归(D方)和淫羊藿+仙茅+知母+黄柏(E方),动物依据分组分别给药,连续90 d后,收集样本,分别检测骨密度、骨微细结构、骨生物力学及血清ACP5、OPG变化。结果:二仙汤及其拆方能增加骨密度,改善骨微细结构,增加骨小梁数量,增加股骨三点弯曲应力等,且能抑制血清ACP5水平,A方和E方的作用尤为明显。结论:二仙汤整方能有效防治骨质疏松,君药是防治骨质疏松的基础,配伍佐药知母、黄柏能明显增加骨量、防止骨微细结构破坏。二仙汤及其拆方防治骨质疏松的作用可能与抑制骨吸收有关。     

二仙汤对去卵巢大鼠认知障碍的影响

目的:观察二仙汤对去卵巢大鼠引起的认知障碍作用及初步机制探讨。方法:将雌性SD大鼠按体质量随机分成假手术组,模型组,阳性药戊酸雌二醇组(0.8 mg·kg~(-1)·d~(-1)),二仙汤高、中、低剂量组(相当生药量12,8,4 g·kg~(-1)·d~(-1))。除假手术组外,其他组动物均以去卵巢复制认知障碍模型,经阴道涂片筛选后,每日1次给药,连续90 d后,以Mirrors水迷宫实验检测大鼠认知能力,比色法检测大鼠大脑皮质乙酰胆碱酯酶(Ach E),乙酰胆碱转移酶(Ch AT),总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测海马和大脑皮质区域的雌激素α受体蛋白表达。结果:与假手术组比较,模型组逃避潜伏期随着试验次数显著增多(P0.01),在原平台象限停留时间减少(P0.05),Ch AT活性降低(P0.01)且Ach E活性升高(P0.05),大脑皮质区域的雌激素α受体表达显著减少(P0.01);与模型组比较,二仙汤能缩短模型大鼠逃避潜伏期,增加空间探索试验时穿过原目标平台的次数和原目标平台象限停留时间比例,以及增加Ch AT活性,降低Ach E活性,雌激素α受体表达显著增加(P0.01)。结论:二仙汤能改善去卵巢致大鼠认知障碍,其机制可能与中枢胆碱活性和雌激素等有关。