红细胞在保护剂添加和洗涤时的非平衡渗透响应实验研究

在红细胞低温保存或冻干保存中，高浓度保护剂的添加和洗涤会使细胞体积收缩或膨胀，造成溶血损失，但其体积并非单调收缩或膨胀到最后平衡体积，而是要经历更严重的体积变化后再趋于平衡。本研究以NaCl溶液来模拟保护剂的添加与洗涤过程．将38种不同浓度的NaC;溶液，以一步直接法、4步等体积法或4步等摩尔浓度变化法添加到红细胞中，测定其溶血率。若以溶血率10％为标准，红细胞所能承受的最小渗透压在161mOsmol／k附近，而最大渗透压与溶液添加方式有关，等体积添加法效果较好（其值约为5680mOsmol／kg）。研究中还将12％、18％NaCl溶液以4步等体积法加到红细胞中，再用生理盐水以三种方式洗涤，发现等摩尔浓度变化法洗涤效果最好；洗涤后溶血率大大增加，说明很多细胞虽然在保护剂添加时未溶血，但膜脆性已改变，难以恢复到等渗时体积。     

抗碱性磷酸酶复合物加保护剂冻干保存的探讨

碱性磷酸酶－抗碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓ－ｐｈａｔａｓｅａｎｔｉ－ａｌｋａｌｉｎｅｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ，ＡＰＡＡＰ）免疫组化技术以其特异性强、敏感性高、不易受内源性酶干扰等优点，广泛应用于细胞表面标记，肿瘤抗原、微生物抗原等的研究［１］。...     

冻干红细胞复水时体积响应显微观测及复水损伤机理探讨

冻干红细胞复水时造成的细胞损伤是目前红细胞冻干复水后回收率偏低的重要原因,主要表现复水时样品吸水,细胞环境溶液渗透压变化,细胞体积变化剧烈.了解复水时细胞体积响应对于了解冻干细胞复水损伤机理非常重要.本文中利用一种研究冻干细胞复水时体积响应的方法,即在环境扫描电镜下通过调整相对湿度来控制复水速度,显微跟踪观测细胞尺寸变化.结果 表明,在复水初始阶段红细胞厚度和直径先增大后减小,厚度方向变形能力和幅度比径向大.当体积偏移到一定程度时即发生溶血.因此为减小复水时溶血率,应控制复水条件、减小复水时细胞体积变化.     

透析法去除红细胞渗透性低温保护剂的实验研究

要实现人类红细胞深低温保存,必须在冷冻前添加、复温后去除低温保护剂.本研究提出了低温保护剂的新型的透析去除法,与常规的离心洗涤法比较而言,该方法能够快速、有效、安全地去除红细胞内的低温保护剂(甘油).使用该方法冰冻.复温.洗涤后的红细胞计数回收率为(89.17±2.46)%,血红蛋白回收率为(84.93±4.64)%,上清游离血红蛋白的含量为(0.66 ±0.13)g/L,所得冰冻-复温-洗涤后的红细胞悬液的渗透压(残余甘油的含量)为(340.33±20.56)mOsm,均达到了国家对冰冻洗涤红细胞的质量标准要求.     

红细胞-固面撞击损伤的实验研究

研究不同撞击速度下,红细胞损伤情况。采用自由落体撞击法进行血液撞击实验,通过血液流变仪对撞击样本进行分析。结果表明,人体血液作为一种特殊的流体,在较高的撞击速度下红细胞有可能发生破裂导致溶血,当撞击速度达到6m/s以上时,红细胞受损破裂趋势增大。血泵的额定转速内,红细胞撞击破碎而造成的损伤并不明显。     

冻干红细胞干燥过程及冻干样品的微CT实验分析

在红细胞冷冻干燥过程中,利用微CT扫描技术进行样品升华干燥过程的定时扫描观察,并对冻干品进行内部结构扫描分析,同时计算得到各个样品的孔隙率值。对冻干后的样品,采用三步法复水,用血细胞计数板进行检测。实验结果表明,有机溶剂叔丁醇可以加速冻干过程,缩短干燥时间,并且浓度为10%的比5%的显著。在升华过程中,孔隙率呈下降的趋势。最高的孔隙率出现在含有10%叔丁醇的经甘油预处理的保护剂配方中。经过甘油预处理,细胞的恢复率得到了明显的提高,而叔丁醇的加入,导致一定程度上的恢复率下降。     

红细胞撞击损伤机理研究及仿真分析

采用薄壁球壳理论及液滴激波理论,研究了旋转叶轮血泵中红细胞-叶片撞击损伤机理,给出了红细胞撞击压力表达式及红细胞膜极限应力数值,并采用ALE有限元法对撞击过程进行仿真,分析不同撞击速度下红细胞形状及应力变化,得到了临界撞击速度数值,并进行了实验验证。     

海藻糖和蛋黄在人类精子冻于保存中的保护作用

人类精子冻干保存中损伤除了来自环境溶液对精子生理活性的损伤外，还会来自于冷冻和干燥过程。目前精子冻干保存中保护剂选取基本上都从生理化学角度考虑，目的为抑制精子内酶活性，没有考虑对冷冻和干燥损伤的抑制。大量文献表明蛋黄能减小冷冻对精子的损伤，而二糖（特别是海藻糖）在细胞干燥中具有特殊保护作用。本研究在前人一般使用的精子冻干保护剂中加入海藻糖，或同时加入海藻糖和蛋黄，通过伊红Y染色、低渗膨胀和电镜显微观测实验，比较不同组成的保护剂对精子结构和膜的保护作用。结果表明，通过加入海藻糖修正的保护剂能提高对精子结构的保护效果，当同时加入海藻糖和蛋黄时效果更好。     

糖尿病大鼠红细胞对脑组织损伤的影响

研究糖尿病时红细胞的变化对脑组织损伤的影响。方法：用链脲佐菌素（ＳＴＺ,５０ｍｇ／ｋｇ）诱发大鼠糖尿病,分离红细胞,输注给正常大鼠（８×１０９个红细胞／只）,测定脑组织ＭＤＡ和亚硝酸盐含量,同时将分离红细胞在体外用异硫氰酸荧光黄（ＦＩＴＣ）标记,荧光显微镜观察输入的红细胞在脑微血管中的流动。结果：ＳＴＺ大鼠血糖持续高于正常,病程达一年的大鼠糖基化血红蛋白（％）明显高于正常大鼠（Ｐ<０．０１）。将糖尿病１年大鼠红细胞输给正常大鼠,４ｈ后,糖尿病红细胞组大鼠脑组织ＭＤＡ和亚硝酸盐含量明显高于对照红细胞组（ＭＤＡＰ＝０．０３２;亚硝酸盐Ｐ＝０．０２７）。软脑膜微循环的活体观察发现有ＦＩＴＣ标记的糖尿病红细胞粘附于微血管壁。结论：糖尿病的红细胞可以直接引起正常脑组织自由基代谢产物的变化,其作用可能与红细胞对内皮细胞的粘附有关。     

改良保存液处理红细胞对糖尿病小鼠创面愈合的影响

目的研究改良处理红细胞回输对糖尿病小鼠伤口愈合的影响,并探讨其可能的作用机制。方法建立糖尿病小鼠模型,随机分为献血组和实验组。采集献血组小鼠血液,分别用标准和改良保存液保存,在7、14、21和28 d检测红细胞(RBC)携氧能力及变形能力。在实验组小鼠背部制作伤口愈合模型,并将保存7 d的血液回输给实验组小鼠,再分为标准组及改良组,每组6只,在0、1、4、7和14 d观察小鼠伤口愈合情况,第14天处死小鼠,取创面皮肤组织进行HE、Masson染色,免疫组化方法对伤口组织的纤维化程度进行分析,Western blot检测伤口组织PI3K/AKT、MEK/ERK及其磷酸化蛋白水平。结果与标准组比较,改良组游离血红蛋白(fHb)含量降低,而P50、pH、2,3-二磷酸甘油酸(2,3-DPG)和红细胞变形性(RCD)升高(P0.05);改良组创面面积显著减小、皮肤组织和血管面积增加、胶原纤维的表达和纤维化程度升高(P0.05)。小鼠伤口组织中HIF-1α、VEGF和EGF浓度水平增加(P0.05)。PI3K/AKT、MEK/ERK表达增加,PI3K/AKT和MEK/ERK磷酸化显著增强(P0.05)。结论改良保存液处理的红细胞可能通过激活HIF-1α信号通路促进糖尿病小鼠的伤口愈合。     

生物羊膜冷冻干燥工艺优化研究

为探索羊膜冷冻干燥保存的最佳工艺条件,取健康剖宫产产妇胎盘,钝性剥离羊膜。以保存羊膜组织形态变化、胶原蛋白酶降解速度、生物力学特征、细胞因子含量为考察指标,对羊膜冷冻干燥工艺中的关键因素进行优化。结果显示,改良冷冻干燥羊膜上皮细胞、纤维基质层形态结构与新鲜羊膜基本相同,但纤维基质厚度略有增加,上皮细胞表面微绒毛略有减少;Ⅳ型胶原酶在溶液中降解速度有所加快;生物力学特征与新鲜羊膜无明显差别;6种细胞因子含量明显低于新鲜羊膜。结合前期工作,与常规冷冻干燥法比较,改良冷冻干燥工艺对保存羊膜组织结构和生物学活性因子影响较小,并能使保存羊膜具有更好的生物力学特性。     

糖尿病患者红细胞形态和渗透脆性的初步研究

应用扫描电镜观察了22例糖尿病人4400个红细胞形态的异常百分比，并测定红细胞的渗透脆性。结果表明随着糖尿病病程延长、糖化血红蛋白升高，口形、嵴形红细胞的百分比明显升高（2．64±1．27比4．29±1．03，P＜0.001），细胞渗透脆性明显上升（0．17±0．04比0．33±0．17，P＜0.05）。提示，糖尿病人异常形态红细胞的出现不仅与红细胞的能量代谢障碍外，还可能与红细胞所处的高血糖、高血脂、高血液粘度的环境有关。而影响红细胞的渗透脆性的因素较为复杂，红细胞的圆形隆起在降低其渗透脆性方面起了重要作用。     

循环温差法测定生物组织活性的实验研究

如何测定低温损伤后的生物材料活性是低温保存和低温医疗领域中的重要课题.本文提出了循环温差法测定生物组织活性的新方法,并进行了初步的实验研究,给出了定量评价生物组织活性的数学关联式.实验证明,该方法所采用的测试装置简单,易于操作,结果稳定可靠,重复性较好.本文最后指出了进一步的改进方法.     

红细胞衰老过程中渗透脆性的变化

作者在用抗体诱发红细胞溶血清建立的红细胞在体衰老模型的基础上，研究了红细胞衰老过程中渗透脆性的变化。结果显示，随着红细胞年龄的增加，其渗透脆性增加，推论其渗透脆性的变化可能与红细胞膜结构及红细胞几何形状（即红细胞表面积与体积之比）的变化有关。     

微流体装置线性去除猪MII期卵母细胞冷冻保护剂的实验研究

低温保存后的卵母细胞在使用前必须要去除冷冻保护剂,目前常用的分步法去除步骤繁琐,容易丢失细胞,而且会对细胞造成致命的渗透损伤。为减小细胞渗透损伤,设计制作适合卵母细胞保护剂去除的微流体装置,研究微流控线性法去除猪MII期卵母细胞低温保护剂时在不同时间(6、8、10 min)下卵母细胞的体积变化,以及对卵母细胞存活率与发育率的影响;并与传统的去除方法(一步法和分步法)进行比较。结果表明,采用微流体装置线性去除冷冻保护剂,8 min为实验中的最优去除时间;线性法能够明显减小细胞的渗透损伤,其最大归一化渗透膨胀体积为1.12±0.07,卵母细胞的存活率、卵裂率及囊胚率分别达到83.6%、72.4%、21.5%,均显著高于一步法和分步法(P<0.05)。因此,微流控线性去除冷冻保护剂能够显著减小细胞的渗透损伤,为卵母细胞低温保存技术提供新思路。     

Morphological Characteristics of Peripheral Blood Erythrocytes in Rats Subjected to Chronic Inhalation of Ultradispersed Piezoelectric Ceramic Powder

In albino rats subjected to chronic inhalation of ultradispersed piezoceramic powder, scanning electron microscopy revealed changes in membrane surface of peripheral blood erythrocytes manifested as decreased number of diskocytes and increased number of transitional, prehemolytic, and degenerating forms. These parameters returned to normal 1 month after termination of inhalations.     

缬草提取物抗心肌缺血再灌注损伤的实验研究

了解缬草提取物对心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法：大耳白种家兔２０只,分为实验组和对照组。结扎冠状动脉左室支１ｈ后松解,观察１．５ ｈ。实验组手术前１ｈ,结扎前１０ｍｉｎ给予缬草提取物１００ｍｇ／ｋｇ（体重）腹腔注射。观察体表标测心电图、心肌ＳＯＤ：ＭＤＡ、ＴＸＢ_２、６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ_１α、ＴＮＦ－α、ＩＬ－β等指标。结果：心电图：结扎后１ｈ,实验组Ｎ－ＳＴ、ΣＳＴ、Ｎ．Ｒ明显低于对照组（ Ｐ＜ ０ ．０５）;松解复灌后１．５ｈ,实验组Ｎ－ＳＴ、ΣＳＴ明显低于对照组（ Ｐ＜ ０．０５）。心肌匀浆：实验组ＸＯＤ、ＭＤＡ、ＴＮＦ－α均低于对照组（ Ｐ＜ ０．０５）;实验组６－Ｋｅｔｏ－ＰＧＦ_(１α)／ＴＸＢ_２高于对照组（Ｐ＜０．０５）。实验组ＩＬ－１β略低于对照组,但统计学上无显著差异。结论：缬草提取物有抗心肌缺血再灌注损伤的作用。     

牡蛎粉对化学性肝损伤保护作用的实验研究

目的　探讨牡蛎粉对化学性肝损伤的保护作用 .方法　对NIH种小鼠每日经口灌胃给予 0 .15g/kg、0 .75g/kg和 3.0 0g/kg的牡蛎粉 . 4周后 ,以 0 .1ml/ 10g的剂量一次性经腹腔注射给予 0 .1?l4.结果　 3.0 0g/kg剂量组的血清丙氨酸氨基转移酶 (ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶 (AST) )水平降低 ,与CCl4对照组比较 (p <0 .0 1) ;0 .75g/kg和 3.0 0g/kg剂量组发生肝细胞气球样变的动物例数明显减少 ,病变程度减轻 ,气球样变评分低于CCl4对照组 (p <0 .0 1) .结论　牡蛎粉对CCl4化学性肝损伤具有保护作用