抵抗素通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大机制研究

目的探讨抵抗素激活磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路诱导H9c2心肌细胞肥大的分子机制。方法取生长状态良好的H9c2心肌细胞,使用含1 g·L~(-1)胎牛血清的高糖达尔伯克改良伊格尔培养基(DMEM)处理24 h使其细胞同步化后进行不同干预。随机将H9c2心肌细胞分为Con组、R50组、LY294002+R50组和LY294002组,Con组为空白对照;R50组细胞应用50μg·L~(-1)抵抗素处理48 h组;LY294002+R50组细胞预先应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002干预2 h后再用50μg·L~(-1)抵抗素处理46 h;LY294002组细胞应用PI3K/Akt通路抑制剂LY294002处理2 h组。4组心肌细胞加含药物DMEM培养48 h后进行细胞面积、单细胞蛋白质合成量测定,Western blot检测心肌细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、原癌基因c-myc蛋白及PI3K/Akt非磷酸化及磷酸化水平表达。观察抵抗素(50μg·L~(-1))处理细胞不同时间(0、1、2、3 h)后运用Western blot测定磷酸化(p-Akt)的蛋白表达水平,检测抵抗素处理1 h后4组心肌细胞PI3K/Akt信号通路磷酸化表达水平。结果抵抗素处理H9c2心肌细胞0、1、2、3 h组p-Akt蛋白表达水平分别为0.60±0.26、0.71±0.67、0.52±0.32、0.51±0.32;与0 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞1 h组p-Akt蛋白表达水平显著增高(P<0.01);与1 h组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞2、3 h组pAkt蛋白表达水平显著降低(P<0.01);抵抗素处理H9c2心肌细胞2 h与处理3 h后H9c2心肌细胞中p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,与Con组比较,R50组、LY294002+R50组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平显著升高(P<0.05),而LY294002组其心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05);与R50组比较,LY294002+R50组、LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05);与LY294002+R50组比较,LY294002组心肌细胞面积、单细胞蛋白含量及α-SMA蛋白表达水平均显著降低(P<0.05)。Con组、R50组、LY294002+R50组、LY294002组c-myc蛋白表达水平分别为0.45±0.30、0.68±0.32、0.56±0.33、0.16±0.20,4组间比较差异有统计学意义(F=178.91,P<0.05);与Con组比较,抵抗素处理H9c2心肌细胞48 h后,R50组c-myc蛋白表达水平显著增高(P<0.05);而LY294002+R50组c-myc蛋白表达水平较Con组、LY294002组升高但低于R50组(P<0.05)。经抵抗素处理H9c2心肌细胞3 h后,R50组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平较Con组、LY294002+R50组、LY294002组显著升高(P<0.05),其余各组PI3K/Akt信号通路磷酸化水平表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论抵抗素通过激活PI3K/Akt通路,提高Akt磷酸化水平来诱导H9c2心肌细胞肥大。     

GHRP-6对心衰模型大鼠心肌细胞PI3K/Akt/Caspase-9信号通路调节作用

目的:观察GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心脏功能的调节作用和其对PI3K/Akt/Caspase-9信号转导通路的影响。方法:建立GHRP-6对心力衰竭模型大鼠心肌细胞的保护模型,比较PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473在正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内的表达。流式细胞术(FCM)检测模型组与正常对照组和假手术组大鼠心肌细胞的凋亡率。结果:在大鼠心肌细胞左心室后壁和室间隔心肌细胞内,模型组大鼠心肌细胞的PI3K p110α、Akt p-Thr308和Akt p-Ser473阳性表达量较正常对照组和假手术组显著降低(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组大鼠心肌细胞的分别比较,GHRP-6治疗组大鼠心肌细胞的阳性表达量显著升高(P<0.05)。模型组大鼠心肌细胞的Caspase-9和Caspase-3阳性表达量较正常对照组和假手术组显著增高(P<0.05);与正常对照组、假手术组和模型组分别比较,GHRP-6治疗组阳性表达量显著降低(P<0.05)。FCM结果显示,模型组大鼠心肌细胞与正常对照组和假手术组比较,凋亡率显著升高(P<0.05);GHRP-6治疗组与模型组比较,凋亡率明显降低(P<0.05)。相关程度分析显示,PI3K p110α与Akt p-Thr308、p-Ser473蛋白阳性表达量均呈中度正相关;Akt p-Thr308、p-Ser473与Caspase-9蛋白阳性表达量均呈中度负相关;Caspase-9与Caspase-3蛋白阳性表达量呈高度正相关。结论:GHRP-6通过调控PI3K/Akt/Caspase-9/Caspase-3信号转导通路,抑制心力衰竭模型大鼠心肌细胞凋亡,是其实现心肌细胞保护作用机制之一。     

糖基化终产物通过PI3k/Akt信号通路诱导肾小管上皮细胞转分化

目的:观察PI3k/Akt信号通路在糖基化终产物(AGEs)诱导的肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法:大鼠肾小管上皮细胞随机分为对照组(C组),糖基化终产物组(D组)和PI3K抑制剂组(W组)。D、W组加入AGE-BSA(100mg·L-1);W组在AGE-BSA处理前用PI3K抑制剂预处理1h。加AGE-BSA1,6,12,24,48h时用免疫细胞化学和Westernblot检测α-SMA和p-Akt的表达。结果:D组α-SMA在6h时出现阳性表达,24h达高峰;p-Akt在1h出现阳性表达,12h达高峰,48h开始下降。结论:PI3k/Akt信号转导系统触发了糖基化终产物诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

丹参酮IIA通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压

目的 探究丹参酮IIA治疗野百合碱所致大鼠肺动脉高压（PAH）的作用机制。方法 选取100只SD雄性大鼠,按随机数字表法分为5组（20只/组）：模型组（MCT）、丹参酮IIA组（TIIA）、丹参酮IIA+PI3K抑制剂组（TP）、PI3K抑制剂组（PI）、对照组。除对照组颈背部注射等体积生理盐水外,剩余大鼠均颈背部注射野百合碱（MCT）诱导肺动脉高压模型。2周后,丹参酮IIA组腹腔注射丹参酮IIA10 mg/kg进行治疗,丹参酮IIA+PI3K抑制剂组注射丹参酮IIA10 mg/kg+PI3K抑制剂1 mg/kg,PI3K抑制剂组注射PI3K抑制剂1 mg/kg,对照组和模型组均腹腔注射等体积生理盐水。治疗2周后,采用苏木精-伊红（HE）染色实验和α-SMA免疫荧光染色实验评估大鼠肺血管形态;Western blot实验评估大鼠肺组织中磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、蛋白激酶B（PKB/Akt）、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）的磷酸化水平;ELISA法测定eNOS、NO水平。结果 HE染色实验和α-SMA免疫荧光染色证实丹参酮IIA能有效抑制PAH大鼠肺血管中膜厚度和血管肌化水平（P<0.01）;Western blot实验结果显示丹参酮IIA能够显著提高PAH大鼠肺组织中PI3K、Akt和eNOS蛋白的磷酸化水平;ELISA 实验结果显示模型组eNOS、NO水平降低（P<0.01）。结论 丹参酮IIA能够通过介导PI3K/Akt-eNOS信号通路改善野百合碱所致大鼠肺动脉高压。     

脱氟烷诱导神经元HO-1mRNA表达信号通路的研究

目的 研究脱氟烷(desflurane)诱导氧糖剥夺损伤神经元血红素氧合酶-1表达的信号转导通路,探讨脱氟烷脑保护机制.方法 将96孔和6孔培养板上培养7d的大鼠海马神经元随机分为6组(n=12):正常培养组(C组),神经元按正常培养方法培养;氧糖剥夺组(I/R组),神经元缺糖缺氧后复糖复氧处理;氧糖剥夺 6% desflurane组(Des组),神经元缺糖缺氧的同时接受6% desflurane麻醉;氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L tin-protoporphyrin (HO-1抑制剂)组(Tin组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L LY 294002 (PI3-K抑制剂)组(LY组)、氧糖剥夺 6% desflurane 10μmol/L Triciribin (Akt抑制剂)组(Tri组)神经元进行缺糖同时分别加入tin-protoporphyrin、 LY 294002或Triciribin使其终浓度均为10μmol/L后同D组处理.96孔培养板的神经元进行细胞存活率的检测.6孔培养板的神经元进行神经元纯度鉴定、神经元凋亡、HO-1mRNA表达、PI3-K和Akt蛋白表达的检测.结果 Des组PI3K和Akt蛋白表达增加,HO-1mRNA表达增加,神经元存活率增加、凋亡率降低(vs I/R组,P<0.01).Tin组PI3K和Akt蛋白表达变化不明显(vs Des组,P0.05), HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加 (vs Des组,P<0.01). LY组PI3K和Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01). Tri组PI3K表达变化不明显(vs Des组,P0.05), Akt表达降低,HO-1mRNA表达降低,神经元存活率降低、凋亡率增加(vs Des组,P<0.05或P<0.01).结论 Desflurane通过PI3-K/Akt信号转导通路诱导大鼠海马神经元HO-1表达,保护了神经元.     

尼莫地平对颅脑损伤模型大鼠早期血管生成的影响及其机制研究

目的 探究尼莫地平通过Akt/ERK通路对颅脑损伤模型大鼠早期血管生成的影响及其作用机制。方法 25只SD雄性大鼠随机取8只作为对照组,其余大鼠复制颅脑损伤模型,1只模型复制失败,其余分为模型组和尼莫地平组,每组8只。尼莫地平组给予1 mg/（kg·d）尼莫地平,对照组和模型组均给予等量生理盐水。治疗7 d后,检测血管内皮细胞数及微血管密度（MVD）,血清低氧诱导因子lα（HIF-lα）、促血管生成素2(Ang-2)水平,比较脑组织病理学变化及Akt/ERK通路蛋白相对表达量。结果 模型组、尼莫地平组大鼠神经功能评分高于对照组（P <0.05）;且模型组高于尼莫地平组（P <0.05）。模型组、尼莫地平组大鼠血管内皮细胞数和MVD多于对照组（P <0.05）;且模型组均少于尼莫地平组（P <0.05）。模型组、尼莫地平组大鼠PI3K、pAkt/Akt、（pERK1/2）/（ERK1/2）蛋白相对表达量高于对照组（P <0.05）;且模型组均低于尼莫地平组（P <0.05）。结论 尼莫地平能够促进颅脑损伤模型大鼠早期血管生成,其作用机制可能与Akt/E...     

右美托咪定通过α2AR/PI3K/Akt通路对大鼠肾缺血再灌注后心肌细胞凋亡的调控作用

目的 探讨α₂AR/PI3K/Akt通路在大鼠肾缺血再灌注后心肌细胞凋亡中的作用以及右美托咪定器官保护作用的机制。方法 选取40只雄性、10周龄,体重250～300 g, Wistar大鼠按随机数字表法分为5组：假手术组(Sham组)、缺血再灌注组(I/R组)、右美托咪定组(Dex组)、右美托咪定+I/R组(Dex+I/R组)、阿替哌唑+右美托咪定+I/R组(Atip+Dex+I/R组),各8只,分别按相应处理方式。对大鼠采取肾缺血45 min再灌注4 h处理,留取心肌组织,采用HE染色、TUNEL染色观察各组大鼠心肌组织损伤及凋亡情况;Western Blot法检测PI3K、Akt、p-Akt、Bcl-2、Bax蛋白表达分析α₂AR/PI3K/Akt通路在心肌凋亡中的作用。结果 与Sham组比较,右美托咪定预处理组大鼠心肌纤维排列较整齐,心肌纤维间散在部分慢性炎细胞浸润;部分心肌细胞可见空泡变性;可观察到小部分心肌纤维溶解坏死;心肌的凋亡率明显降低。与Sham组比较,Akt蛋白表达水平在各组差异无统计学意义(P>0.05);I/R组P...     

磷脂酰肌醇3激酶/Akt通路参与TGF-β1诱导人肾小管上皮细胞间质转分化过程

目的：探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）／Akt通路在转化生长因子β1（TGF-β1）体外诱导的人肾小管上皮细胞（HKC）间质转分化（EMT）过程中的作用及意义。方法：将HKC细胞株细胞分成正常对照组、TGF-β1组及TGF-β1＋PI3K特异性抑制剂Wortmannin组，选取不同时相，免疫印迹（Western blot）测定总．Akt、磷酸化Akt（p-Akt）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达的变化；Akt磷酸化水平用磷酸化Akt和总Akt水平的比值表示。结果：正常体外培养的HKC有微量的p-Akt、α-SMA表达，加入10ng／ml TGF-β1刺激0．5h后p-Akt水平显著升高，1h升至顶峰后逐渐减弱；α-SMA在10ng／mlTGF-β1诱导48h后表达显著升高。同时加用Wortmannin 10nmol／L组p-Akt、α-SMA表达明显抑制。结论：PI3K／Akt信号系统参与TGF-β1介导的EMT过程，PI3K特异性抑制剂wo永mannin可有效抑制TGF-β1介导的HKC的EMT过程。     

槲皮素诱导肝星状细胞凋亡:基于调控miR-146影响PI3K/Akt信号通路

目的 探讨槲皮素(Que)通过调控肝星状细胞内miR-146水平影响PI3K/Akt信号通路诱导细胞凋亡的作用机制。方法 以大鼠肝星状细胞系(HSC-T6)为研究对象,设计实验分组：空白对照组、TGF-β组、TGF-β+Que-L(40μmol/L)、TGF-β+Que-M(60μmol/L)和TGF-β+Que-H(80μmol/L)为药物治疗部分;各组阴性对照组、miR-146模拟剂(mimic)和抑制剂(inhibitor)为细胞转染部分。CCK-8法检测不同浓度的Que对细胞抑制情况,选出低、中、高3个剂量浓度用于后续细胞实验;细胞凋亡流式细胞术检测Que对HSCs细胞凋亡的影响;RT-qPCR法检测HSC-T6细胞药物治疗以及细胞转染后miR-146、α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K和Akt mRNA表达情况;Western blot法检测以上各组中α-SMA、CollagenⅠ、TRAF6、PI3K、Akt和p-Akt蛋白表达情况;免疫荧光实验检测HSC-T6细胞药物治疗中α-SMA、CollagenⅠ蛋白表达强弱。结果 CCK-8实验结果显示,相同时间...     

富氢液通过PI3K通路减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的探讨富氢液对大鼠脑缺血再灌注致海马神经元凋亡及PI3K/Akt/FoxO1信号通路表达的影响。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉,建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注(I/R)模型,SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)和富氢液处理组(HRS组),每组10只;各组于再灌注后24 h,ELISA检测血清中炎症因子IL-6、TNF-α及IL-1β的变化;HE染色观察海马变化,TUNEL法观察脑组织细胞凋亡情况;Western blot法检测海马p-PI3K、Akt、caspase-3和FoxO1蛋白表达变化。结果与Sham组相比,I/R组锥体细胞排列疏松,大量锥体细胞死亡,海马凋亡细胞增多,血清炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、表达显著增加(P0.05),脑组织中pPI3K、Akt、caspase-3表达显著升高,FoxO1蛋白降低,两组间比较均具有统计学差异(P0.05);与I/R组相比,HRS组炎症因子显著降低;p-PI3K、Akt、caspase-3表达水平均显著降低,,FoxO1蛋白升高(P0.05)。结论富氢液可以减轻缺血再灌注导致的脑损伤,其机制可能与PI3K/Akt/FoxO1信号通路相关。     

2001年我国医药研究的若干进展

随着国内外生命科学和生物技术等的飞速发展,我国医药技术在2001年取得了长足的进步。提前完成了我国所承担的人类基因组汁划中的1％测序任务,到2000年,中国科学家在功能基因研究和基因组多样性领域共完成研究论文1850篇,遍及医药各领域,研究手段和水平可于国际先进水平媲美,中国完全有条件在“后基因时代”成为主角之一。     

小儿耳鼻喉手术麻醉的新进展

因小儿耳鼻喉手术刺激强,时间短,且常与气道相关,故麻醉的控制有一定难度,现对国内外现阶段小儿耳鼻喉手术麻醉的改良方法及新观点进行评述,以期对临床工作有较好的指导意义。     

成都市属医院1，175例儿童支气管肺炎住院费用分析

为探讨成都市不同级别医疗机构儿童支气管肺炎单病种费用水平以及不同收费项目占总费用的比例特点及控制医疗费用的有效途径,为患者自主选择就诊医疗机构提供参考指导,对成都市卫生局所属不同级别医院儿童支气管肺炎住院医疗费用分析如下。1资料与方法1.1资料来自成都市卫生局2     

Malaria in children in Birmingham in the 1970s

Thirty-two children with malaria were admitted to Dudley Road Hospital, Birmingham, in the 1970s. None was admitted before 1974 and there was a rapid increase after that. All the infections were due to Plasmodium vivax and occurred in children of Asian immigrant families who had been born in or had visited India or Pakistan apart from one infant born in England who acquired the disease transplacentally. All presented within 12 months of entering or re-entering the United Kingdom. The clinical features of the 32 patients have been analysed and it is suggested that more effort should be made to educate travellers about the need for anti-malarial chemoprophylaxis and the necessity to continue it for one month after return.     

2005年广西流动人口疟疾监测结果分析

目的了解广西流动人员疟疾流行现状,进而提出针对性防治措施。方法收集全区网络直报疫情资料和各级疾病预防控制机构疟疾监测数据进行分析。结果2005年广西流动人口发热病人平均疟原虫阳性率为0·33%。80·62%的病人为本地居民外出到疟疾流行区务工感染所致。以从事护林/砍伐比例最高,占44·19%。结论加强返乡流动人口疟疾监测是巩固广西疟疾防治的关键所在。