腹壁-盲肠损伤粘连模型的建立及mXG温敏水凝胶的防粘连机制研究

  目的  构建腹壁-盲肠损伤粘连模型并探究改性木葡聚糖(mXG)温敏水凝胶对腹壁-盲肠损伤粘连的防治效果。  方法  选用SD大鼠构建腹壁-盲肠损伤粘连模型,随机分为空白对照组(Control)、商业化壳聚糖膜对照组(Film)和mXG温敏凝胶组(Hydrogel),每组16只。Hydrogel组,将1 mL 4%(m/V)mXG溶液涂抹至腹壁和盲肠的创面,待凝胶形成(3 min)后关腹;Film组,关腹前将2 cm×3 cm大小的壳聚糖防粘连膜覆盖于腹壁创面;Control组,关腹前将1 mL生理盐水注射于腹壁和盲肠的创面。术后7 d和14 d,开腹检查腹壁与盲肠的粘连情况,采用双盲设计进行粘连评分。取同一部位粘连组织或创面组织,进行HE、Masson和Van Gieson染色后,进行防粘连效果组织学评价,免疫组织化学染色检测转化生长因子-β1(TGF-β1)和结缔组织生长因子(CTGF)的表达情况。另取12只SD大鼠予以造模和mXG温敏水凝胶干预,术后第1周和6周取心、肝、脾、肺、肾等主要脏器使用HE染色进行组织学检查,进行体内毒性评价。  结果  动物模型大体观察发现,Hydrogel组的大鼠基本未发生粘连,Film组发生轻度粘连,Control组发生了严重的粘连,差异有统计学意义(P < 0.05)。组织学镜下观察发现,7 d时Hydrogel组创面恢复良好,未看到变异的组织,有一定程度的炎性细胞浸润;14 d时创面组织中的炎性细胞明显减少,新生间皮层下仅含有少量胶原纤维的愈合组织;而7 d、14 d,其余两组均出现不同程度粘连的病理表现。免疫组织化学染色发现,Hydrogel组TGF-β1和CTGF的阳性表达一致且较其它两组弱,差异有统计学意义(P < 0.05)。体内毒性检测发现,使用mXG凝胶的动物在不同时间点各脏器的结构均没有出现明显变化。  结论  mXG温敏水凝胶能够在粘连形成的关键时期起到良好的物理隔离作用,有效预防盲肠-腹壁粘连的发生。     

一种新的肥胖大鼠模型的制备方法

肥胖(obesity or fatty)是体内过多能量以脂肪形式积聚的状态,目前已被世界卫生组织确认为一种疾病。它包括两大类：一类肥胖无明确病因,主要由进食热量超过消耗,脂肪储存过多而引起,称为单纯性或原发性肥胖;另一类肥胖有明确病因,称为继发性肥胖。研究肥胖病及其与多种慢性疾病的关系,首先要建立肥胖动物模型。原发性肥胖动物模型的制备通常有两种方法：一种是营养性肥胖,主要靠进食高脂饲料所诱发;另一种是下丘脑性肥胖,主要靠损毁下丘脑的饱食中枢,引起摄食过量而形成。我们在制备营养性肥胖动物模型的实验中,采用了一种简便易行的方法,获得了比较满意的结果。     

复方大承气汤灌服加中药脐眼外敷对肠粘连大鼠模型腹膜粘连程度的影响

目的 研究复方大承气汤灌服和芒硝、冰片、吴茱萸适量混合后于脐眼外敷预防大鼠模型术后肠粘连的作用及机制.方法 雄性SD大鼠120只,随机分为对照组、模型组、医用几丁糖组、生长抑素组、中草药一组和中草药二组.除正常对照组外,其余各组大鼠均采用Ellis法制备肠粘连模型,造模后对照组和模型组正常喂养,其余各组分别给予相应药物:医用几丁糖组在造模关腹时局部涂抹几丁糖;生长抑素组给予皮下注射醋酸奥曲肽0.1 μg/g,1次/12 h;中草药一组给予复方大承气汤煎液0.05 mL/g灌服,2次/d;中草药二组在一组用药的基础上,用芒硝、冰片、吴茱萸适量混合后外敷于脐眼.各组于造模术后第8天下腔静脉取血后处死,ELISA法测定血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量,肉眼观察肠粘连的程度并分级,采用免疫组化法测定腹膜粘连组织转化生长因子-β1(TGF-β1)表达.结果 与模型组对比,医用几丁糖组、生长抑素组、中草药一组和中草药二组大鼠血清中TNF-α含量依次降低,局部粘连程度依次减轻,粘连组织中TGF-β1表达依次减少,中草药一组和二组与模型组、医用几丁糖组、生长抑素组相比差异有统计学意义(P<0.05),中草药二组和中草药一组之间相比差异有统计学意义(P<0.05),医用几丁糖组和生长抑素组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 联合应用复方大承气汤灌服和芒硝、冰片、吴茱萸适量混合后于脐眼外敷能显著抑制纤维结缔组织的增生,减轻造模大鼠模型局部粘连程度.     

两种大鼠异位心脏移植模型的制备

目的探讨两种大鼠异位心脏移植模型的制备要点以及受者发生死亡与并发症的原因及预防措施。方法2004年6月至2006年3月,采用显微外科技术,施行大鼠腹部心脏移植术356例(腹部组)和颈部心脏移植术86例(颈部组)。结果腹部组和颈部组的手术成功率分别为92.98%和90.70%;手术时间分别为(58.1±9.7)min和(63.7±7.2)min;热缺血时间均为0min,冷缺血时间分别为(26.4±6.8)min和(29.3±5.6)min;血管吻合时间分别为(24.3±5.6)min和(27.7±4.2)min,心脏复跳时间为(1.1±0.4)min和(0.8±0.2)min,两组以上各指标间均无显著性差异(P>0.05)。两种术式并发症发生的原因与特点不尽相同。结论重视两种大鼠异位心移植模型的制备要点并预防并发症的发生均能使两者达到较高的成功率和稳定性。     

用电解损毁方法制备大鼠的脊髓损伤模型

目的：建立一种简便实用、稳定可靠的脊髓损伤动物模型。方法：采用电解损毁法,主要损伤大鼠第１０胸椎节段脊髓双侧皮质脊髓束纤维,在术后不同时间观察受损脊髓组织学变化及大鼠运动功能改变,并用ＨＲＰ逆行标记技术,以大脑运动皮层标记神经元计数来反映皮质脊髓束受损情况。结果：１ｍＡ,２１０ｓ的损伤电流,可在脊髓后索造成神经组织坏死,形成空腔,使双侧皮质脊髓束纤维受损;术后１周、２周、３周观察,电损毁组大鼠运动功能显著低于假手术组,表现为后肢运动评分下降,Ａｓｈｗｏｒｔｈ肌张力评分增大,斜板实验角度下降;电损毁组运动皮质标记神经元计数也显著低于假手术组。结论：电解损毁在适宜参数下能损伤双侧脊髓皮质脊髓束,引起双后肢的不完全性截瘫,结果稳定可靠,操作简便,为脊髓损伤的实验研究奠定了基础。     

一种快速建立大鼠动脉粥样硬化模型的方法

目的:探讨一种简单有效的大鼠动脉粥样硬化模型。方法:将健康雄性SD大鼠40只按照随机数字表法分为高脂维生素组、高脂组、维生素D组、对照组各10只。4周后检测血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、白介素1(IL-1)、白介素6(IL-6)、白介素17(IL-17)和C反应蛋白(CRP),并分离各组大鼠的主动脉、肝脏和心脏组织做HE染色。结果:对照组和维生素D组的大鼠体重一直处于增加状态,对照组的体重增加幅度明显高于其他各组(P0.05或P0.0001)。4周末与对照组比较,高脂维生素D组和高脂组的心脏重量均有所降低(P0.0001),维生素D组的心脏重量虽然比对照组有所降低,但两组无明显差异(P0.05)。各组间大鼠心脏与体重比有明显差异(P0.05),但两两比较,高脂维生素组与高脂组和维生素D组的大鼠心脏与体重比均有统计学意义(P0.0001)。高脂维生素组的TC、TG、LDL、HDL、IL-1、IL-6、IL-17和CRP均明显高于维生素D组和对照组(P0.05)。HE染色高脂维生素组有典型的动脉粥样硬化斑块;而高脂组有斑块但是没有高脂维生素组典型,维生素D组没有斑块但是可见平滑肌紊乱。结论:给予大鼠高脂饮食联合腹腔注射大剂量维生素D可以简单有效的建立动脉粥样硬化模型。     

一种大鼠异体肾移植模型的建立

目的:建立一种稳定,操作简便的肾移植模型.方法:以SD大鼠和Wistar大鼠分别作为供、受体.静脉用临时支架管,将供肾的下腔静脉与受体左肾静脉作端端吻合,供肾腹主动脉与受体腹主动脉端侧吻合,以及输尿管带膀胱瓣与膀胱吻合.结果:建立并改进了大鼠肾移植模型,手术总时间(130±16)min,热缺血时间小于20 s,冷缺血时间小于50 min,手术成功率90.77%.结论:此模型稳定、可靠,易于掌握.     

子宫肌瘤大鼠模型制备方法之比较

目的比较两种子宫肌瘤大鼠模型的制备方法。方法采用单用己烯雌酚肌注（单模法）和己烯雌酚与黄体酮共同肌注（双模法）的方法制备子宫肌瘤大鼠模型。结果两种方法均能制备子宫肌瘤大鼠模型，子宫肌瘤大鼠出现血清性激素水平升高、免疫功能低下及肌细胞高度增生活跃的病理状态，综合评价双模法优于单模法。结论两种方法均能成功制备子宫肌瘤大鼠模型。     

一种新型实用的大鼠肾缺血再灌注损伤模型的建立

目的建立一种简单实用的大鼠肾缺血再灌注损伤模型。方法 48只雄性SD大鼠随机分成2组:对照组(C组)、缺血再灌注组(Ir组),每组各4个时相(6、12、24、72 h)。采用切除右肾,夹闭左肾动脉45 min后恢复灌流建立缺血再灌注损伤模型。检测血清肌酐(Scr)水平,观察肾组织病理学改变及超微结构变化。结果缺血再灌注后,Scr水平显著升高,肾组织形态学和超微结构出现明显的损伤和破坏,表明动物模型建立成功。结论该方法建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型简单实用。     

一种症状性大鼠脑损伤模型的建立

使撞击锤从一定高度下落通过撞杆损毁大脑皮层后肢运动区域，在TBI后的28d内采用钉板平衡木行走实验检测大鼠行为学变化，行为学测试结束后取脑组织检查组织结构的变化。结果：TBI组大鼠在TBI28d内的钉板平衡木行走测试中受损后肢功能障碍表现明显（与对照组比较，P〈0．05）；挫伤处大脑皮层坏死明显。结果表明：通过落体撞击法损伤大脑皮层后肢运动区域可成功建立一种症状性大鼠脑损伤模型。     

一种稳定、有效的表皮细胞基因导入方法的确立

目的：探索一种表皮细胞基因转染的稳定有效方法。方法：我们用五种方法将报告基因ｐＳＶ－β转染培养的表皮细胞,用原位染色方法检测并结合图像分析比较这五种方法的转染后表达情况。结果 转染后２４ｈ表皮细胞开始表达报告基因,７２ｈ达到高峰,脂质体结合１０％甘油休克法的转染效率达到４．２％。结论 表皮细胞难于转染,脂质体结合１０％甘油休克法是一种稳定、有效的转染方法。     

5/6肾切除联合ISO制备心肾综合征大鼠模型方法初探

[目的]查阅已有的心肾综合征大鼠模型文献报道,将“5/6肾切除术制备心肾综合征大鼠模型”方法适当改进,评价其方案造模效果,探讨简捷高效的心肾综合征造模方法。[方法]将20只雄性SD大鼠随机分为两组,即空白组与手术组,空白组大鼠不做处理,手术组大鼠均按“两次手术法”行5/6肾切除,手术1周后连续2 d(间隔24 h)皮下注射异丙肾上腺素(2.5、1.5 mg/kg)制备心肾综合征模型。分别检测两组大鼠造模后的血肌酐(Cr)、血尿素氮(BUN)、脑钠肽(BNP)水平,比较造模前、造模后、造模6周大鼠体质量,并在造模6周后处杀两组大鼠,称取心脏质量,计算心脏质量指数(心脏质量/大鼠体质量),观察两组大鼠心、肾病理组织变化。[结果]大鼠经5/6肾切除联合异丙肾皮下注射方法造模后,空白组与手术组BNP、Cr水平差异有统计学意义(P<0.05),手术组大鼠活动后喘息明显、耳廓苍白、被毛稀疏干枯且生长缓慢,体质量较空白组明显降低(P<0.05),心、肾组织病理均较空白组有明显改变。[结论]5/6肾切除联合ISO皮下注射制备心肾综合征大鼠模型方法有效,是一种简捷高效的心肾综合征造模方法,可以为心肾综合征动物实验提供模型基础。但该法由于不完全模拟慢性肾功能衰竭导致心力衰竭的自然病程,可能不适用于研究该病早期发展变化规律,而对于心肾综合征的药物治疗评价及机制研究较为合适。     

一种改良的静脉吻合技术用于大鼠肾移植模型的建立

目的 建立一种简便，可靠的大鼠肾移植静脉吻合方法。方法 以封闭群Wistar大鼠作为供，受体，将供体左肾与远近下腔静脉一并摘取，从腔静脉远端向近端插入支架管并伸入受体左肾静脉内，在支架管支撑下缝合供体下腔静脉与受体肾静脉；按常规行动脉吻合及尿路重建。结果 26例静脉吻合均在5.5-6min内顺利完成，肾静脉吻合口即时通畅率达100％。术后病理检查未发现吻合口血栓形成，结论 新的静脉吻合方法简便，可靠，解决了大鼠肾移植中静脉缝合困难的问题。     

大鼠在体单向肠灌流模型研究肉桂酸肠道吸收特性

目的 研究肉桂酸在大鼠肠道的吸收部位和吸收机制,以及转运蛋白对肉桂酸肠道吸收的影响.方法 建立在体单向肠灌流模型,采用HPLC法测定肉桂酸在肠道中的浓度变化,通过吸收速度常数(Ka)和表观吸收系数(Peff)来研究肉桂酸的吸收动力学特征.结果 肉桂酸在各个肠段的Ka和Peff结果为十二指肠＞空肠＞回肠,十二指肠和空肠的Ka和Peff值显著性高于回肠(P＜0.05),不同浓度肉桂酸在同一肠段的Ka和Peff值差异无统计学意义,加入MRP2抑制剂(吲哚美辛)后Ka和Peff值差异亦无统计学意义,但加入Pgp抑制剂(盐酸维拉帕米)后其值则显著性增加.结论 十二指肠、空肠是肉桂酸吸收的主要部位,吸收机制为被动转运,肠道转运受Pgp转运蛋白的影响,但不受MRP2转运蛋白的影响.     

稳定大鼠原位肝移植模型的建立

目的：建立稳定大鼠原位肝移植模型,探讨其方法与技术。方法：用改进的二袖套法行140例SD→LEW大鼠原位肝移植,术中门静脉、肝下下腔静脉用袖套法吻合,肝上下腔静脉用缝合法吻合,胆管内支架法完成胆道重建。结果：供体手术时间为（27．0&;#177;3．1）min;供肝修整时间为（11．0&;#177;2．1）min;受体手术时间为（30．0&;#177;2．5）min;无肝期为（15．0&;#177;2．6）min。手术成功率（术后存活2d以上）为87％,1周存活率为81％,1个月存活率为72％。结论：提高手术技巧,熟悉各种并发症的原因和预防处理措施,可以减少并发症的发生,提高手术成功率,延长大鼠术后存活时间。     

能全素在结肠镜检查前肠道准备中的临床应用

目的：观察能全素在结肠镜检查前肠道准备的效果。 方法：观察组为拟行结肠镜检查患者60例,分为单纯能全素组20例和能全素加泻药组40例,所有患者均在结肠镜检查前3 d开始服用能全素,能全素加泻药组则在检查当日服用小剂量的泻药。对照组50例为随机选取的进行常规肠道准备的患者。 结果:观察组中无一例出现头晕、乏力、饥饿感及精神萎靡等症状,结肠镜检查过程中肠腔黏膜无充血、水肿和苍白;肠道清洁程度能全素加泻药组明显好于其他两组（P<0.01）,对照组好于单纯能全素组(P<0.05)。 结论：能全素配合小剂量泻药在结肠镜检查前的肠道准备中具有较为满意的效果。     

稳定的大鼠大脑中动脉栓塞脑梗死模型的建立

目的 探讨使用激光多普勒血流监测技术制作稳定的大鼠脑梗死模型（middle cerebral artery occlusion, MCAO）的可行性。方法 16只SD雄性大鼠随机分成2组：实验组和对照组各8只。实验组将模型制作过程中脑血流下降至基础值的30%判定为模型制作成功;对照组不监测脑血流,将尼龙栓线插入深度为1.8 cm判定为模型制作成功。模型前和模型后24 h分别行神经损伤严重程度评分（modified neurological severity scores, mNSS）;模型后24 h处死大鼠行2,3,5-三苯氯化四氮唑（TTC）染色并计算脑梗死体积。结果 实验组8只大鼠模型后24 h均出现典型偏瘫症状,mNSS评分稳定在10分～13分,梗死体积稳定性和均一性好,为37.5?.9%。对照组8只大鼠mNSS评分稳定性较差,其中5只大鼠的mNSS评分为10分～13分,5只大鼠的脑梗死灶和实验组相似,但有3只大鼠的脑梗死体积明显小于实验组（P < 0.05）。实验组的模型成功率为100%,对照组的模型成功率为62.5%（P < 0.05）。结论 激光多普勒血流监测技术可以显著提高大鼠MCAO模型的成功率、稳定性和均一性。     

基于解剖结构和动作电位的心室电活动仿真方法

组成心脏的心肌细胞具有自身的电活动特点,心脏通过传导系统协调全心脏心肌细胞的电活动,引起心脏的功能性机械运动。传统的医学实验方法难以复制心脏的电活动模型和直接观察心脏电活动的演变过程．而心电活动的仿真可以模拟心脏电兴奋的传播演变过程,对复杂生物系统进行直接观测。本文在分析心脏解剖结构的基础上．通过算法仿真兴奋在心肌细胞之间的传递过程,计算出各心肌细胞的电活动。本文设计了一个体现心肌纤维走向和心室细胞分层结构的几何结构模型,对不同层的心肌细胞赋予不同动作电位模型,实现了兴奋在心室肌细胞之间的传递和各心室肌细胞的电活动,并以剖切三维显示来观察兴奋过程。本文中的方法兼顾了计算量和效率,使得高分辨率的基于解剖结构和细胞电生理的心室电活动仿真在普通PC机上实现,取得了较好的仿真效果。     

一种高效稳定的磷酸钙转染293T细胞方法的建立及评价

目的：探讨2种磷酸钙转染法转染293T细胞的效果,建立一种实现高效稳定磷酸钙转染293T细胞的方法。方法：荧光显微镜观察采用2种磷酸钙转染方法（传统磷酸钙转染法和改良磷酸钙转染法）转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞的转染效率。采用Real-time PCR法和Western blotting法分别检测2种磷酸钙转染方法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞后,肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6） mRNA和flag蛋白表达水平。结果：荧光显微镜下观察,与传统磷酸钙转染法比较,改良磷酸钙转染法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后的转染效率明显升高（P<0.01）;Real-time PCR法和Western blotting法检测,与传统转染方法比较,磷酸钙转染改良法转染pCDH-GFP-3xflag-TRAF6质粒进入293T细胞24和48 h后,TRAF6 mRNA和flag蛋白表达水平均明显升高（P<0.01）。结论：本研究建立的改良磷酸钙转染方法是一种高效、稳定的DNA转染方法。     

槲皮素制备方法的改进

[目的]对槐花米中槲皮素传统的制备方法进行改进,从而提高槲皮素的产率和提取效率。[方法]利用碱提取-酸沉淀法从槐花米中提取芦丁粗品,采用：①间接酸水解法（传统方法）,将粗制芦丁通过重结晶纯化得到精制芦丁,再用酸水解制得槲皮素;②直接酸水解法（改进方法）,将粗制芦丁的重结晶滤液直接加酸水解制得槲皮素;并用HPLC等技术对两种方法所得产品与槲皮素标准品进行鉴定和分析。[结果]改进方法制备的槲皮素与传统方法相比,二者纯度均与标准品接近,但前者反应时间至少缩短120 min,产率却提高19.45%。[结论]改进方法显著地提高了槲皮素的提取产率和效率,为槲皮素的实验室制备和工业生产提供借鉴。