慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌感染与NLRP3、IL-1β、IL-18在牙周膜细胞中的表达研究

目的 探讨慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌(porphyromonas gingivalis,Pg)感染与NLRP3、L-1β及IL-18在牙周膜细胞中的表达。 方法 选取诊治慢性牙周炎需进行拔牙治疗的患者50例及50例牙周健康人群,实时荧光PCR技术检测龈下菌斑Pg,慢性牙周炎患者拔牙后取得牙周膜组织进行牙周膜细胞培养,取部分细胞用Pg标准株感染,部分不做感染处理,采用蛋白印迹法检测NLRPS蛋白表达,以免疫酶联吸附法检测IL-1β及IL-18表达。 结果 慢性牙周炎患者Pg阳性率为84.00%,高于牙周健康者的22.00%,探诊深度5、6、7 mm慢性牙周炎患者Pg浓度分别为4.38±0.81、4.79±0.76、5.47±0.63,高于牙周健康者0.38±0.12、0.46±0.15、0.72±0.20(P<0.05);Pg感染牙周膜细胞中NLRP3及IL-1β、IL-18表达量分别为(1.25±0.12)、(1 820.42±425.57) pg/ml、(311.55±45.70) pg/ml,明显高于未人工Pg感染牙周膜细胞(0.74±0.08)、(1 138.65±350.76) pg/ml、(124.70±42.54) pg/ml (P<0.05)。 结论 慢性牙周炎患者Pg感染率及感染菌量均较高,Pg感染可引起牙周膜细胞中NLRP3、IL-1β、IL-18表达的上调,这可能是Pg引起慢性牙周炎发生的原因之一。      

慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性

目的研究慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌感染患者NLRP3炎症小体与炎症反应及焦亡指标的相关性。 方法选择300例慢性牙周炎患者,按照牙龈卟啉单胞菌感染情况分为阳性组和阴性组。比较两组牙周健康指标、牙周组织NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、Caspase-1 mRNA和GSDMD-N蛋白表达水平,以及龈沟液白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平。采用Pearson检验进行相关性分析。 结果阳性组菌斑指数(PLI)、牙龈指数(GI)、附着丧失(AL)、牙周袋深度(PD)、牙周组织NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA、GSDMD-N蛋白,以及龈沟液IL-1β、IL-18、TNF-α水平均高于阴性组(P＜0.05)。NLRP3、ASC、Caspase-1 mRNA表达水平与PLI、GI、AL、PD、GSDMD-N蛋白、IL-1β、IL-18、TNF-α水平均呈正相关(P＜0.05)。 结论慢性牙周炎患者牙龈卟啉单胞菌感染加重病情、炎症反应及细胞焦亡,其作用可能与激活NLRP3炎症小体有关。     

吸烟对慢性牙周炎患者牙龈组织中EA、NOS表达量及ET-1、NO含量的影响

目的:研究吸烟对慢性牙周炎患者牙龈组织中EA、NOS表达量及ET-1、NO含量的影响。方法:选择2013年5月~2016年3月期间在陕西省西安市第九医院诊断为牙周炎的患者并筛选吸烟者72例和非吸烟者80例,分别作为吸烟组和非吸烟组,采集牙周组织并检测EA、NOS、NLRP3炎性小体的表达量,采集龈沟液并检测ET-1、NO、炎性因子、MMPs的含量。结果:吸烟组患者牙龈组织中EA的表达量以及ET-1的含量均显著高于非吸烟组,牙龈组织中NOS的表达量及NO的含量均显著低于非吸烟组;吸烟组患者牙龈组织中NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18的表达量均显著高于非吸烟组,龈沟液中IL-1β、IL-18、TNF-α、IFN-γ、MMP1、MMP8、MMP13的含量显著高于非吸烟组;NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β、IL-18表达量以及IL-1β、IL-18、TNF-α、IFN-γ、MMP1、MMP8、MMP13含量与EA、ET-1呈正相关,与NOS、NO呈负相关。结论:吸烟会造成慢性牙周炎患者牙龈组织中EA和ET-1增多、NOS和NO减少,进而通过调节NLRP3炎性小体以及MMPs的表达量来造成牙周组织的炎症反应及结构破坏。     

结扎诱导牙周炎大鼠脑内炎性及β淀粉样蛋白变化的实验研究

目的 探讨结扎诱导的实验性牙周炎大鼠脑内的炎性变化及β淀粉样蛋白的变化。方法 18只SD大鼠随机分为3组(n=6):空白对照组、慢性牙周炎组和慢性牙周炎+腹腔注射TAK-242组,通过结扎大鼠双侧上颌第一磨牙牙颈部辅以接种牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)的方法建立大鼠牙周炎模型。在建模成功后的第2个月行标本取材,通过Micro-CT分析大鼠牙槽骨破坏的情况;通过实时荧光定量PCR检测大鼠牙龈组织和海马组织中白介素(IL)-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及大鼠海马组织中Toll样受体4(TLR4)、白细胞分化抗原14(CD14)和NF-κB的mRNA表达;通过ELISA评估大鼠海马组织中IL-6、IL-1β和TNF-α及β淀粉样蛋白-40(Aβ₄₀)和Aβ₄₂的蛋白表达。结果 结扎大鼠双侧上颌第一磨牙牙颈部辅以接种牙龈卟啉单胞菌可成功建立大鼠实验性牙周炎模型,PCR和ELISA结果显示实验性牙周炎可上调大鼠海马组织中炎症因子(IL-6、IL-1β和TNF-α)的表达水平,ELISA结果显示实验性牙周炎大鼠海马组织中Aβ...     

慢性牙周炎患者中牙龈卟啉单胞菌的检测及致病岛Rag基因的初步研究

目的 探讨牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因与慢性牙周炎的关系.方法 收集慢性牙周炎患者的134个龈沟液样本,另选牙龈健康者的28个龈沟液样本作为对照组,采用PCR技术检测牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因,分析牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因在不同病变位点的分布.结果 经16S rDNA聚合酶链式反应(PCR)法检测,病变位点牙龈卟啉单胞菌检出率为73.13％,对照组阳性率为46.43％,牙周炎组明显高于对照组,两者之间比较差异有显著性(P＜0.01).经多重PCR检测,111个P.gingivalis阳性的龈沟液样本中,共扩增出Rag基因的有88例,阳性率为79.27％.结论 牙龈卟啉单胞菌及致病岛Rag基因与慢性牙周炎的发生、发展密切相关.     

慢性牙周炎与卟啉单胞菌、IL-1β和IL-6的关系

目的 了解不同程度的慢性牙周炎牙龈卟啉单胞菌(Pg)检出率、龈沟液白细胞介素(IL)-1β和IL-6的含量,探讨其与慢性牙周炎发病机制的关系.方法 分别用PCR技术和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测113例慢性牙周炎患者龈下菌斑中的牙龈Pg和龈沟液中IL-1β、IL-6含量.结果 轻度、中度和重度牙周炎患者的Pg检出率分别为40.6%、66.7%和87.2%,龈沟液中IL-1β含量分别为(13.08±6.7)、(38.25±18.5)、(45.25±21.3)pg/sample;IL-6含量分别为(14.16±7.6)、(40.25±20.8)、(46.30±19.4)pg/sample.中度和重度牙周炎患者的Pg检出率和龈沟液中IL-1β、IL-6含量与轻度牙周炎患者组存在统计学差异(P均＜0.05).结论 Pg检出率和龈沟液中IL-1β,IL-6的含量能够反映慢性牙周炎的严重程度.Pg可能通过IL-1β、IL-6等炎性因子在慢性牙周炎中发挥作用.     

NLRP3炎症体分子与AECOPD患者的相关性研究

[目的]探讨NLRP3炎性体信号通路相关分子在慢性阻塞性肺疾病急性加重(AECOPD)患者中的表达水平及其临床意义。[方法]选取河南大学淮河医院AECOPD患者48例作为实验组,对照组为我院体检中心的同期健康体检人员46例,用PCR法检测NLRP3炎性小体在实验组及对照组外周血单个核细胞(PBMC)的mRNA表达水平,比较NLRP3基因在两组中的表达差异性,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测下游炎症因子IL-1β和IL-18在两组中的表达水平。用肺功能仪测定两组研究对象的肺功能情况。[结果]AECOPD患者PBMC中的NLRP3 mRNA表达水平明显高于健康对照组水平,且二者差异具有统计学意义(P<0.05)。AECOPD患者血清IL-1β、IL-18和NLRP3水平明显高于健康对照组血清蛋白水平,且二者差异具有统计学意义(P<0.05)。AECOPD患者血清IL-1β、IL-18和NLRP3含量与肺功能指标FEV1/FVC、FEV1%呈负相关(P<0.05)。[结论]AECOPD患者NLRP3炎性小体水平升高,且与肺功能负相关,可能是评价患者病情轻重的重要指标。     

紫正地黄汤对颈深间隙感染大鼠炎性小体NLRP3的影响

目的:观察紫正地黄汤对颈深间隙感染大鼠炎性小体NLRP3的影响,探析紫正地黄汤治疗感染性疾病的作用机制。方法:取15月龄SD雄性大鼠60只,按随机数字表法分为空白组,模型组,对照组,紫正地黄汤低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只。除空白组外,各组均参照毛氏方法制作颈深间隙感染模型,建模成功后连续用药5 d。观察大鼠一般情况及颈部感染灶的改变,分别用ELISA测定大鼠血清中IL-1β和IL-18水平,Western blot检测大鼠病灶局部组织的NLRP3及casepase-1蛋白的表达量,并观察病灶局部组织病理学变化。结果:造模后大鼠出现发热、精神不振、呼吸困难、局部红肿化脓,病灶局部组织NLRP3、casepase-1的表达及血清IL-1β和IL-18水平较空白组明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗5 d后,对照组和紫正地黄汤高、中、低剂量组大鼠的全身症状及局部红肿化脓等表现均明显改善,与模型组比较有统计学意义,并且各治疗组NLRP3、casepase-1、IL-1β和IL-18水平均明显低于模型组,差异均有统计学意义(P<0.01)。紫正地黄汤中剂量组大鼠NLRP3、casepase-1、IL-1β和IL-18水平与对照组比较无统计学意义(P> 0.05),而紫正地黄汤高剂量组对NLRP3及其下游炎性因子的调控明显优于对照组(P<0.05),紫正地黄汤低剂量组对NLRP3、casepase-1、IL-1β和IL-18的下调作用弱于对照组(P<0.05);紫正地黄汤高、中、低剂量组大鼠NLRP3、casepase-1、IL-1β和IL-18的表达呈递增趋势(P<0.05)。结论:紫正地黄汤对颈深间隙感染大鼠具有较好的治疗作用,其机制可能与其调控NLR径路实现抗炎作用有一定相关性。     

牙周炎患者自身组织核酸对小鼠巨噬细胞中NLRP3 mRNA表达的影响及其意义

目的：检测牙周炎患者自身组织核酸刺激小鼠巨噬细胞后炎性相关因子NOD样受体蛋白3（NLRP3）、半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶1（caspase-1）、白细胞介素1β（IL-1β）和白细胞介素18（IL-18） mRNA表达水平,探讨牙周炎患者自身组织核酸对小鼠巨噬细胞中炎性相关因子的作用。方法：于慢性牙周炎患者翻瓣术中采集炎性牙周组织、于牙周组织健康患者冠延长术中采集健康牙周组织,分别提取组织总RNA逆转录成cDNA （cDNA质量浓度为1 mg·L^-1）。培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,分为对照组和实验组,分别加入上述提取的健康牙周组织cDNA （健康牙周组织）和炎症牙周组织cDNA （炎症牙周组织）共孵育。共孵育4、6和8h后,实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）法检测各组RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平。结果：显微镜下观察,小鼠巨噬细胞RAW264.7生长状态良好,细胞形态似圆形和多边形,胞浆透明,胞体丰满。与对照组比较,实验组在4、6和8h时RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）,6 h时实验组RAW264.7细胞中NLRP3、caspase-1、IL-1β和IL-18 mRNA表达水平最高。结论：牙周炎患者自身组织核酸可促进小鼠巨噬细胞中炎性相关因子mRNA表达,牙周炎患者自身组织核酸对小鼠巨噬细胞的活化具有免疫调节作用。     

慢性牙周炎患者病损局部Th 1和Th 17细胞表达

目的:研究慢性牙周炎患者病损局部的Th1细胞及Th17细胞表达情况,为临床诊治牙周炎提供参考。方法:选择2013年2月至2015年7月本院收治慢性牙周炎患者70例作为实验组,同期在本院进行体检的健康者70例作为对照组,对两组被检者均给予龈沟液标本采集,观察Th细胞相关因子IFN-γ、TNF及IL-17表达情况并进行对比。结果:慢性牙周炎患者中,Th1细胞IFN-γ表达为(0.19±0.05),高于对照组(P<0.05);TNF表达为(0.33±0.05),高于对照组(P<0.05);Th17细胞中IL-17为(0.58±0.12)pg/μL,高于对照组(P<0.05),差异有统计学意义。结论:慢性牙周炎患者病损局部均有Th1和Th17细胞高表达,提示Th1细胞及Th17细胞可能是导致牙周炎发生的关键因子,共同发挥致病作用。