宫颈癌中活化的蛋白激酶C受体1、低氧诱导因子1α与血管内皮生长因子的表达及病理学意义

目的 检测活化的蛋白激酶C受体1（RACK1）、低氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）在宫颈癌组织中的表达并探讨其病理学意义。方法 选取2014年6月至2018年6月于本院行手术切除并经病理确诊的85例宫颈癌组织样本及其对应的癌旁组织,通过免疫组织化学染色ABC法分别检测RACK1、HIF-1α、VEGF蛋白在宫颈癌组织及其癌旁组织中的表达。结合患者的临床病理资料,分析宫颈癌组织中RACK1、HIF-1α和VEGF蛋白表达与患者年龄及肿瘤直径、浸润深度、病理分级、淋巴结转移之间的关系,并分析三者表达之间的相关性。结果 RACK1、HIF-1α、VEGF蛋白在宫颈癌组织中的表达均高于癌旁组织（P均<0.05）,阳性表达率分别为81.2%（69/85）、63.5%（54/85）、89.4%（76/85）。RACK1表达与肿瘤浸润深度、病理分级和淋巴结是否转移有关（P均<0.05）,HIF-1α和VEGF表达均与肿瘤直径、浸润深度、病理分级及淋巴结是否转移有关（P均<0.05）。RACK1、HIF-1α、VEGF蛋白的表达两两之间呈正相关（RACK1 vs HIF-1α：r=0.523,P=0.043 9;RACK1 vs VEGF：r=0.428,P=0.033 7;HIF-1α vs VEGF：r=0.689,P=0.024 5）。结论 RACK1、HIF-1、VEGF蛋白在宫颈癌组织中高表达且三者之间的表达呈正相关,提示其可能在肿瘤的发生、发展过程中起协同作用,可作为判断肿瘤侵袭、转移及预后的重要指标。     

苦参碱对CT26荷瘤小鼠肿瘤组织中VEGF及HIF-1α水平的影响

[目的] 研究苦参碱对CT26荷瘤小鼠肿瘤组织中血管生成的影响及相关作用机制。[方法] 通过建立CT26荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、阳性药组、苦参碱低剂量组、苦参碱中剂量组、苦参碱高剂量组,造模后分别灌胃生理盐水,环磷酰胺和不同剂量的苦参碱,连续灌胃14 d,检测给药后各组小鼠肿瘤大小,计算抑瘤率,并进行肿瘤组织苏木精-伊红（HE）染色,考察苦参碱对荷瘤小鼠的治疗作用。此外通过实时荧光定量聚合酶链反应（qPCR）及免疫组化法检测各组小鼠肿瘤组织中血管内皮生长因子（VEGF）、缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）的表达,初步探究其作用机制。[结果] 造模给药后,与模型组相比,阳性药组和苦参碱低、中、高剂量组小鼠肿瘤重量均显著降低（P<0.01）。HE染色结果表明,模型组肿瘤组织中可见大量核分裂象,无明显坏死区,而阳性药组和苦参碱低、中、高剂量组肿瘤组织中核分裂象显著减少（P<0.01）,且细胞坏死更为严重。此外,qPCR结果表明,与模型组相比,阳性药组和苦参碱低、中、高剂量组肿瘤组织中VEGF、HIF-1αmRNA表达水平均显著下调（P<0.05）。各实验组免疫组化结果表明,阳性药组和苦参碱低、中、高剂量组肿瘤组织中VEGF、HIF-1α的积分光密度值（IOD）较模型组显著下调（P<0.05）。[结论] 苦参碱可能是通过降低肿瘤组织中VEGF、HIF-1α的表达水平达到抑制CT26荷瘤小鼠移植瘤生长的作用。     

非小细胞肺癌组织中HIF-1α、EGFR、IGF-1的表达及临床意义

目的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）组织中缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）、胰岛素样生长因子（IGF-1）、表皮生长因子受体（EGFR）的表达水平及临床意义。方法 采用蛋白免疫印迹法检测NSCLC组织及癌旁非肿瘤组织中HIF-1α、EGFR、IGF-1的表达情况,并与临床病理特征及预后做相关分析。结果 NSCLC组织中HIF-1α、IGF-1、EGFR的蛋白表达均显著高于癌旁非肿瘤组织（P<0.05）。HIF-1α与IGF-1表达在鳞癌和腺癌中的差异均无统计学意义（P>0.05）,EGFR在鳞癌中的表达显著高于腺癌（P<0.05）。低分化癌组织中HIF-1α、IGF-1、EGFR的表达水平均显著高于中、高分化癌组织（P<0.05）,Ⅰ、Ⅱ期肿瘤组织中HIF-1α、IGF-1、EGFR的表达水平显著低于Ⅲ、Ⅳ期肿瘤组织（P<0.05）,且有淋巴结转移组织中的HIF-1α、IGF-1、EGFR表达水平显著高于无淋巴结转移组织（P<0.05）。HIF-1α与EGFR表达水平呈显著正相关（r²=0.301,P<0.05）,且与IGF-1表达水平呈显著正相关（r²=0.611,P<0.05）。HIF-1α、EGFR及IGF-1的表达水平与患者预后无明显相关性（P>0.05）。结论 HIF-1、EGFR、IGF-1在NSCLC组织中表达均显著增加,HIF-1与EGFR及EGF-1均呈正相关,且HIF-1α、IGF-1、EGFR的表达水平与分化程度、TNM分期、淋巴结转移密切相关,且EGFR与病理类型密切相关,在NSCLC的发生、发展过程中起重要作用。     

缺氧诱导因子1α和血管内皮生长因子在子宫内膜癌中的表达及临床意义

目的 分析缺氧诱导因子1α（HIF-1α）和血管内皮生长因子（VEGF）在子宫内膜癌和癌旁组织中的表达差异,探讨缺氧状态以及这2种蛋白在子宫内膜癌发生、发展中的临床意义。方法 选择2011年1月至2012年12月在同济大学附属同济医院接受手术治疗的子宫内膜癌患者128例,采用免疫组织化学法检测术后癌组织和配对癌旁组织中HIF1-α和VEGF蛋白表达,并对患者进行定期随访,分析这2种蛋白表达与患者预后的关系。构建人子宫内膜癌细胞缺氧模型,检测细胞中HIF1-α和VEGF蛋白表达,并观察细胞增殖、侵袭及凋亡情况。结果 子宫内膜癌组织中HIF-1α和VEGF蛋白阳性表达率均高于癌旁组织（P均<0.05）,HIF-1α蛋白在淋巴结转移阳性、高组织学分级、肿瘤最大径≥4 cm和孕激素受体阳性的患者中阳性率较高（P均<0.05）,VEGF蛋白在淋巴结转移阳性、高组织学分级、肌层浸润较深、肿瘤最大径≥4 cm、雌激素受体阳性、孕激素受体阳性和高病理分期的患者中阳性率较高（P均<0.05）;HIF-1α阴性患者的5年总生存率高于阳性患者（P<0.05）,VEGF阴性患者5年总生存率与阳性患者相比差异无统计学意义（P>0.05）。人子宫内膜癌细胞缺氧模型中,HIF-1α和VEGF蛋白表达均增加（P均<0.05）,细胞增殖和侵袭能力均增强（P均<0.05）,凋亡减少（P<0.05）。结论 HIF-1α和VEGF蛋白与子宫内膜癌的发展有关,HIF-1α蛋白表达阳性提示预后不良。     

舒肝明目汤含药血清调节HIF1α-VEGF-Notch1通路活性影响脉络膜血管新生作用的研究

[目的] 探讨舒肝明目汤含药血清对大鼠脉络膜血管内皮细胞（CECs）增殖的影响及与HIF1α-VEGF-Notch1通路相关的调节机制。[方法] CECs细胞在常氧和低氧条件下进行培养,检测低氧条件下舒肝明目汤含药血清对CECs增殖移行能力的影响;并采用实时荧光定量PCR法（RT-PCR）和免疫印迹法（Western blot）技术检测细胞中低氧诱导因子1α（HIF1α）、血管内皮生长因子（VEGF）和Notch1 mRNA和蛋白表达的水平。[结果] 与正常组相比,低氧组CECs的增殖移行能力明显提高（P<0.01）,CECs中HIF1α、VEGF和Notch1 mRNA及蛋白表达明显增多（P<0.01）.经含药血清处理后,CECs增殖移行能力较低氧组显着下降（P<0.01）,同时HIF1α和VEGF mRNA及蛋白表达降低（P<0.01,P<0.05）,而Notch1表达进一步增高（P<0.01）.[结论] 舒肝明目汤含药血清通过上调Notch1表达及下调HIF1α-VEGF通路活性抑制CECs增殖迁移,从而减少脉络膜新生血管生成。     

回阳生肌拆方对糖尿病小鼠慢性皮肤溃疡创面愈合及巨噬细胞表型转化的影响

目的 研究回阳生肌拆方（益气温阳拆方和活血通络拆方）对糖尿病小鼠慢性皮肤溃疡创面愈合及创面巨噬细胞表型转化的影响。方法 db/m小鼠10只为正常组,db/db小鼠30只,随机分为模型组、益气温阳组、活血通络组,每组10只。制备背部创面,外用药物贴敷,隔天换药,创面拍照并测定创面面积;创伤后7天处死小鼠背部取创面组织。采用苏木素-伊红（HE）和马松（Masson）染色法对创面组织染色并观察病理学改变;采用实时定量PCR法检测创面局部M1型与M2型细胞因子mRNA相对表达。结果 模型组创面面积明显大于正常组（P<0.05）;回阳生肌益气温阳拆方与活血通络拆方组创面面积均明显小于模型组（P<0.05）。模型组IL-12、TNF-α mRNA表达水平高于正常组（P<0.05）,VEGF、TGF-β mRNA表达水平低于正常组（P<0.05）;益气温阳与活血通络组IL-12、TNF-α mRNA表达水平低于模型组（P<0.05）,VEGF、TGF-β mRNA表达水平高于模型组（P<0.05）。益气温阳组IL-12、TNF-α mRNA表达水平低于活血通络组（P<0.05）,TGF-β mRNA表达水平高于活血通络组（P<0.05）。结论 db/db小鼠存在创面愈合迟缓;回阳生肌拆方可促进db/db小鼠创面愈合;减少M1型巨噬细胞含量,升高M2型巨噬细胞含量,可能是其作用机制之一;对于糖尿病慢性皮肤溃疡小鼠,益气温阳拆方促进巨噬细胞表型转化作用优于活血通络拆方。     

红豆杉多糖对Beagle犬心肌缺血再灌注损伤模型心肌NADPH氧化酶mRNA及SOD、MDA的影响

目的 观察红豆杉多糖对心肌缺血-再灌注损伤（MIRI）模型心肌损伤及心肌还原型辅酶II（NADPH）氧化酶mRNA、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的影响。方法 将30只Beagle犬随机分为假手术组、模型组、红豆杉多糖低剂量组与高剂量组、卡维地洛对照组,每组6只,给药7 d后,建立MIRI模型。HE染色,光镜观察心肌组织病理改变;原位杂交检测NADPH氧化酶 p47^phox（NCF-47K）mRNA表达;比色法检测心肌SOD活性和MDA水平。结果 光镜下可见,模型组心肌严重紊乱、断裂,核固缩及胞浆嗜酸性变明显,轻至中度充血、水肿,炎细胞浸润;红豆杉多糖高剂量组心肌细胞紊乱、断裂程度较轻,核固缩及胞浆嗜酸性变明显减少,部分组织仍有轻度充血、水肿。模型组、红豆杉多糖低剂量组心肌NCF-47K mRNA表达较假手术组显著升高（P＜0.01）,红豆杉多糖高剂量组NCF-47K mRNA表达显著低于模型组（P＜0.05）。除红豆杉多糖高剂量组心肌SOD活性显著高于模型组（P＜0.01）外,模型组及各治疗组心肌组织SOD活性较假手术组显著降低（P＜0.01）。模型组及红豆杉多糖低剂量组心肌组织MDA水平较假手术组显著增加（P＜0.05）,红豆杉多糖高剂量组心肌MDA水平显著低于模型组（P＜0.05）。结论 红豆杉多糖可能通过降低心肌组织NADPH氧化酶NCF-47K mRNA表达,升高SOD活性,减少O₂^÷等氧自由基对心肌细胞的损伤,减轻缺血再灌注导致的心肌损伤。     

苓桂术甘汤对慢性心衰模型大鼠心肌组织TNF-α及血清NF-κB和IL-1β的影响

目的 观察苓桂术甘汤对慢性心力衰竭模型大鼠心肌组织肿瘤坏死因子-α（TNF-α）蛋白及mRNA表达、血清核因子-κB（NF-κB）、白细胞介素-1β（IL-1β）水平的影响,探讨苓桂术甘汤防治慢性心衰的作用机制。方法 采用冠状动脉结扎法制备慢性心衰大鼠模型,造模4周后将模型大鼠随机分为模型组,卡托普利（4.375 mg/kg）阳性对照组,苓桂术甘汤低、中、高剂量（生药2.1、4.2、8.4 g/kg）组,另设假手术组,每天给药1次,连续给药4周。Western blotting、RT-PCR法分别检测各组大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA的表达,ELISA法检测血清中NF-κB、IL-1β水平。结果 与假手术组相比,模型组大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA表达增强,血清NF-κB、IL-1β水平显著升高（P＜0.01）;与模型组相比,苓桂术甘汤及卡托普利均能显著抑制模型大鼠心肌组织TNF-α蛋白及mRNA表达、降低模型大鼠血清NF-κB、IL-1β水平（P＜0.05、0.01）。结论 苓桂术甘汤干预慢性心衰的机制与其调节细胞因子网络有关。     

雷公藤多苷通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病大鼠热休克蛋白90及PGC-1α表达的影响

目的 探究雷公藤多甙（TG）通过PI3K/Akt通路对糖尿病肾病（DN）大鼠热休克蛋白90（HPS90）及过氧化物酶体增殖物激活受体-γ共激活因子-1α（PGC-1α）水平的影响。方法 通过腹腔注射链脲佐菌素复制DN大鼠模型，并将其随机分为DN组、DN+TG组和DN+TG+SC79组（每组15只），另取15只健康大鼠作为对照组。TG灌胃剂量为20 mg/kg。大鼠腹膜内注射SC79（0.04 mg/g）以激活PI3K/Akt通路。通过HE染色验证模型复制结果和TG对肾组织的保护作用。生化检测大鼠24 h尿蛋白和肌酐，酶联免疫吸附试验检测炎症因子水平，HE染色观察各组大鼠肾损伤情况，Masson染色观察各组大鼠肾纤维化情况，qRT-PCR和Western blotting 分别检测HPS90和PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量。结果 DN组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于对照组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量低于对照组（P <0.05）；DN+TG组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6低于DN组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量高于DN组（P <0.05）。DN+TG+SC79组24 h尿蛋白、肌酐、肾组织纤维化面积百分比、p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、HSP90 mRNA和蛋白相对表达量、IL-1β及IL-6高于DN+TG组（P <0.05），PGC-1α mRNA和蛋白相对表达量低于DN+TG组（P <0.05）。结论 TG可以通过抑制PI3K/Akt通路抑制HSP90的转录和翻译，从而促进PGC-1α的表达，并发挥抗炎和抗纤维化作用，从而缓解DN。     

补阳还五汤对缺氧心脏成纤维细胞旁分泌MMP-2/9、TIMP-1、TNF-α的影响

[目的] 探讨补阳还五汤对缺氧诱导心脏成纤维细胞旁分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响,并从基因和蛋白水平探讨其保护心肌细胞、预防心肌纤维化的机制。[方法] 培养小鼠乳鼠心脏成纤维细胞,将其分为对照组、模型组、补阳还五汤组。采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)法和酶联免疫吸附测定(ELISA)法分别检测各组成纤维细胞和细胞培养上清液中MMP-2、MMP-9、TIMP-1及TNF-α mRNA表达和蛋白分泌。[结果] 与对照组比较,模型组MMP-2、MMP-9及TNF-α mRNA表达上调,蛋白旁分泌增加,TIMP-1表达下调(P<0.05);与模型组比较,补阳还五汤组MMP-2、MMP-9 mRNA表达下调,蛋白旁分泌减少,TIMP-1则上调(P<0.05),而TNF-α仅有下调趋势,无统计学差异(P>0.05)。[结论] 补阳还五汤可保护缺氧心肌,预防心肌纤维化。其机制可能与抑制缺氧成纤维细胞的旁分泌,调节MMP-2、MMP-9、TIMP-1的表达平衡有关。     

人脐带间充质干细胞对糖尿病肾病大鼠肾脏HIF-1α表达的影响

目的 观察人脐带间充质干细胞（HUMSC）对糖尿病肾病大鼠肾脏缺氧诱导因子（HIF-1α）表达的影响。方法 50只健康清洁级8周龄雄性SD大鼠,随机选取20只为健康对照组,其余30只采用链脲菌素复制糖尿病肾病大鼠模型（模型组）,两组大鼠饲养12周。第12周,随机选取两组大鼠各3只分别尾静脉注射DiR-HUMSCs,代谢12～16 h后在小动物活体光学3D成像系统下观察DiR-HUMSCs在大鼠体内的分布。随机选取9只模型组大鼠进行HUMSCs移植（HUMSCs移植组）。HUMSCs移植采用尾静脉注射方式移植浓度为1×10⁶个/mL HUMSCs 500 μL至大鼠体内,每周1次,连续4周,共28 d。检测3组大鼠的24 h尿蛋白定量（24 h UPro）、血清肌酐（Scr）、血尿素氮（BUN）、尿肌酐（Ucr）、尿白蛋白与肌酐比值（UACR）水平;酶联免疫吸附试验（ELISA）检测3组大鼠血清HIF-1α水平;采用PAS和Masson染色进行肾脏组织病理检测;免疫荧光法检测3组大鼠肾组织HIF-1α、Slc12A3和Aquaporin1蛋白的表达。结果 移植HUMSCs治疗4周后,与健康对照组比较,模型组和HUMSCs移植组大鼠Ucr水平降低（P <0.05）,Scr、24 h UPro、BUN、UCAR均升高（P <0.05）;与模型组比较,HUMSCs移植组大鼠Ucr水平差异无统计学意义（P >0.05）,Scr、24 h UPro、BUN、UCAR均降低（P <0.05）。糖尿病肾病大鼠病理损伤缓解,系膜增生和基底膜增厚改善,小管空泡变性减少,间质纤维化减轻。模型组大鼠血清HIF-1α水平较健康对照组升高（P <0.05）,HUMSCs移植组血清HIF-1α水平较模型组下降（P <0.05）。与健康对照组比较,模型组大鼠肾脏远端小管中HIF-1α蛋白水平增加（P <0.05）;HUMSCs移植组的HIF-1α蛋白水平较模型组降低（P <0.05）。模型组远端小管标记蛋白Slc12A3水平低于健康对照组（P <0.05）,HUMSCs移植组Slc12A3水平较模型组升高（P <0.05）。HUMSCs移植组的Aquaporin1蛋白水平较模型组和健康对照组均降低（P <0.05）。糖尿病肾病大鼠近端小管中无HIF-1α表达。结论 HIF-1α主要在糖尿病肾病大鼠肾脏远端小管表达,且HUMSCs可通过抑制HIF-1α的表达修复肾小管的损伤。     

柞蚕雄蛾提取液改善W256荷瘤大鼠放疗后免疫功能的实验研究

摘要：目的观察柞蚕雄蛾提取液对荷W256癌肉瘤大鼠放疗后免疫功能的影响。方法60只Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型组、单纯放疗组和实验组（放疗与柞蚕蛾提取液联合治疗组）,每组15只。建立W256荷瘤大鼠模型,分离脾脏和胸腺,并计算脏器指数;采用流式细胞术（FCM）及酶联免疫吸附试验（ELISA）分别检测外周血T淋巴细胞亚群变化和血清中细胞因子INF-γ和IL-4含量。结果与放疗组相比较,柞蚕雄蛾提取液可以升高放疗后荷瘤大鼠脾脏和胸腺指数,增加放疗后荷瘤大鼠外周血中CD4⁺T细胞比例与CD4⁺T/CD8⁺T值（P＜0.05）;实验组荷瘤大鼠血清中细胞因子INF-γ含量明显升高,而IL-4含量显著降低（P＜0.05）。结论柞蚕雄蛾提取液可以逆转荷瘤大鼠放疗后免疫功能抑制状态,改变荷瘤机体免疫功能,可作为恶性肿瘤传统放疗中的辅助用药。     

TNF-α/HIF-1α/VASP途径在肺癌A549细胞增殖和粘附中的作用研究

【目的】 肺癌是目前世界癌症导致死亡排名第一的肿瘤,其中肿瘤细胞的增殖和转移与肺癌的死亡率密切相关。最近的调查显示肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与肿瘤的侵袭和转移相关,但是具体的机制仍不清楚。本实验旨在以肺癌A549细胞作为模型,研究TNF-α/HIF-1α/VASP途径在肺癌A549细胞的增殖和粘附中的作用。 【方法】 常规培养A549细胞,用MTT法和adhesion assay分别检测不同浓度的TNF-α对A549细胞增殖和粘附的影响。在随后的实验中采用高浓度的TNF-α刺激(120 ng/mL)作为刺激因素,分别用sh-RNA和pEGFP-C1-VASP敲除或过表达VASP、用siRNA和pEGFP-C1敲除或过表达HIF-1α,MTT法和adhesion assay分别检测细胞增殖和粘附水平,PCR检测HIF-1α和VASP在mRNA表达水平,蛋白质印迹法检测HIF-1α和VASP蛋白的表达。同时采用Luciferase assay 的方法检测HIF-1α与VASP启动子区域结合的状态。 【结果】 (1)高剂量TNF-α可以促进HIF-1α表达,从而下调VASP表达水平,抑制肺癌A549细胞增殖和粘附。(2)与空载质粒pEGFP-C1组相比,瞬时转染VASP过表达质粒pEGFP-C1-VASP后,A549细胞的增殖能力显著增加(P<0.05),粘附能力显著增加(P<0.05)。相反,与Scrambled-shRNA组比较,通过转染VASP shRNA特异性敲降VASP后,A549细胞的增殖能力显著降低(P<0.05),粘附能力显著降低(P<0.05)。(3)选择高浓度TNF-α(120 ng/mL)处理A549细胞24小时后,与空载质粒pEGFP-C1组相比,瞬时转染HIF-1α过表达质粒pEGFP-C1-HIF后,HIF-1α的表达在mRNA 和蛋白水平都显著增加(P<0.05),与此同时VASP的表达在mRNA和蛋白的水平显著降低(P<0.05)。相反,与Scrambled-siRNA组比较,通过转染HIF siRNA特异性敲降HIF-1α后, HIF-1α的表达在mRNA 和蛋白水平都显著降低(P<0.05),与此同时VASP的表达在mRNA和蛋白的水平显著增高(P<0.05)。(4)在给予肿瘤坏死因子-α诱导的细胞中,通过转染HIF siRNA特异性敲降HIF-1α表达后,TNF-α带来的HIF-1α的升高被部分抵消了(P<0.05)。(5)Luciferase assay 的检测结果提示HIF-1α可以与VASP启动子区域结合从而在转录水平上抑制VASP的表达。 【结论】 高浓度TNF-α通过增加HIF-1α的表达,调控并抑制VASP蛋白的表达,从而降低肺癌A549细胞增殖和粘附,从而发挥抗肿瘤的作用。     

糖肾1号方含药血清对高糖环境下培养的HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白水平的影响

[目的]观察糖肾1号方含药血清干预高糖环境下培养的人肾小管上皮细胞（HK-2）中转化生长因子-β1（TGF-β1）、α-平滑肌蛋白（α-SMA）、纤维连接蛋白（FN）mRNA和蛋白水平,初步探索糖肾1号方治疗糖尿病肾病可能的作用机制。[方法]选用HK-2细胞,分为空白组、高糖组、空白血清组、糖肾1号方含药血清低剂量组、糖肾1号方含药血清高剂量组。高糖环境下培养24 h后,进行血清干预24 h,培养48 h后收集细胞,通过逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白免疫印迹（Western Blot）法检测HK-2细胞中TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平。[结果]1）与空白组相比,高糖组的TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和蛋白表达水平明显增多,差异具有统计学意义（P<0.05）。2）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组、糖肾1号方高剂量组TGF-β1、α-SMA、FN mRNA表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。3）与高糖组相比,糖肾1号方低剂量组FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）,糖肾1号方高剂量组α-SMA、FN蛋白表达水平减少,差异具有统计学意义（P<0.05）。4）与糖肾1号方低剂量组相比,糖肾1号方高剂量组TGF-β1、FN mRNA降低,差异具有统计学意义（P<0.05）。[结论]糖肾1号方含药血清可抑制TGF-β1、α-SMA、FN mRNA和α-SMA、FN蛋白表达水平,糖肾1号方高剂量组效果优于糖肾1号方低剂量组。     

TNF-α下调大鼠肺微血管内皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-5的表达

目的 研究肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）对大鼠肺微血管内皮细胞紧密连接蛋白1（zonula occludens-1,ZO-1）、Claudin-5表达的影响,探讨TNF-α对大鼠肺血管屏障的损伤机制。方法 将体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞分为对照组、TNF-α 24 h、48 h和72 h组（TNF-α 10 mg/L）。透射电镜观察大鼠肺微血管内皮细胞超微结构。MTT法及流式细胞仪分别测定各组细胞的增殖抑制率及凋亡率。免疫荧光法测定ZO-1及Claudin-5的分布。RT-qPCR及Western blot测定各组细胞ZO-1及Claudin-5的mRNA及蛋白表达。结果 对照组内皮细胞含有大量的线粒体及内质网等结构,结构正常。TNF-α各组细胞线粒体数量减少,线粒体肿胀,嵴溶解,核固缩,凋亡细胞增多,细胞增殖抑制率及凋亡率较对照组增加（均P<0.05）,呈时间依赖性。ZO-1及Claudin-5呈线状荧光分布于内皮细胞间连接部位。与对照组比较,TNF-α各组细胞ZO-1的转录及表达水平均降低（均P<0.05）。TNF-α各组Claudin-5的转录水平较对照组明显降低（均P<0.05）,TNF-α 48 h、72 h组Claudin-5的蛋白表达水平较对照组降低（均P<0.05）,TNF-α 24 h组与对照组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 TNF-α下调大鼠微血管内皮细胞ZO-1及Claudin-5的表达,诱导细胞损伤及凋亡,破坏肺屏障,导致肺损伤。     

达格列净对糖尿病大鼠血管内皮功能及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响

目的 探究达格列净对糖尿病大鼠血管内皮功能及PTEN/PI3K/Akt信号通路的影响。方法 将30只SPF级SD雄性大鼠随机分为对照组、模型组、达格列净组，各10只。模型组、达格列净组成功复制糖尿病模型后，达格列净组给予1 mg/（kg·d）达格列净灌胃处理，连续4周；模型组、对照组分别同时间灌胃等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液。采用酶联免疫吸附试验检测血清内皮素1（ET-1）、缺氧诱导因子1α（HIF-1α）、血管内皮生长因子（VEGF）水平；苏木精-伊红染色观察大鼠主动脉血管组织病理学变化；Western blotting检测大鼠血管内皮组织PTEN/PI3K/Akt信号通路蛋白的表达。结果 达格列净组大鼠一般情况好于模型组。达格列净组大鼠主动脉病理变化较模型组改善。与对照组比较，模型组、达格列净组大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF水平升高（P <0.05），但达格列净组大鼠血清ET-1、HIF-1α、VEGF水平低于模型组（P <0.05）。与对照组比较，模型组、达格列净组大鼠血管内皮组织PTEN蛋白相对表达量降低（P <0.05），p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量升高（P <0.05）；但达格列净组较模型组大鼠血管内皮组织PTEN蛋白相对表达量升高（P <0.05），p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白相对表达量降低（P <0.05）。结论 达格列净可能通过促进PTEN/PI3K/Akt信号通路活化，改善糖尿病大鼠血管内皮功能损伤，从而防治糖尿病及其并发症的发生。     

RA患者血清TNF-α和外周血单个核细胞TIPE2表达的意义

目的 探讨类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）患者血清中肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor,TNF-α）和外周血单个核细胞中肿瘤坏死因子α诱导蛋白家族8样蛋白2（tumor necrosis factor-α induced protein 8 like 2,TIPE2）的表达在RA的诊断及疗效评价中的价值。方法 选取开封市第二人民医院风湿科近两年收治的RA患者86例,包括活动期患者42例,缓解期患者44例,门诊健康对照40例,用酶联免疫吸附法检测3组的血清中TNF-α的浓度,无菌抽取各组外周血,提取外周血单个核细胞,用荧光定量PCR及Western blot法检测TIPE2在mRNA及蛋白水平的表达。结果 RA活动组和缓解组患者血清中的TNF-α浓度高于健康对照组,RA活动组血清中TNF-α明显高于缓解组,差异有统计学意义（P<0.05）。TNF-α和RF联合检测的敏感度和特异性分别为75.5%和90%,特异性与单独检测RF相比,差异有统计学意义（P<0.05）。RA活动期患者血清中TNF-α的浓度及TIPE2在mRNA表达水平和DAS28评分呈正相关（P<0.01）,RA患者血清中TNF-α的浓度和TIPE2在mRNA表达水平呈正相关（P<0.01）。RA患者外周血TIPE2在mRNA及蛋白水平均高于对照组,而且活动组高于缓解组（P<0.01）。结论 联合检测RA患者血清中的TNF-α对患者的诊断和病情的监测有重要临床价值,TIPE2参与了RA的发病过程,可以和TNF-α一起作为判断疾病严重程度的指标。     

miRNA-467b在痛性糖尿病神经病变中对TNF-α的调节作用

目的 探讨miRNA-467b在痛性糖尿病神经病变中对TNF-α的调节作用。方法 SD大鼠腹腔内注射链脲佐菌素建立痛性糖尿病神经病变（模型组,n=20）,空白组（n=20）注射生理盐水;模型组在建模完成后1周分为两组-实验组与对照组,每组10只大鼠,实验组注射人工合成的miRNA-467b,对照组注射等量的生理盐水,检测所有大鼠神经痛性状况与miRNA-467b、TNF-α表达水平。结果 模型组大鼠的机械痛和热痛的反应潜伏期相比空白组都减少（P<0.05）,并且实验组的机械痛和热痛的反应潜伏期也高于对照组（P<0.05）。模型组大鼠的miRNA-467b表达量相比空白组减少,TNF-α表达量上升,差异有统计学意义（P<0.05）;并且实验组的miRNA-467b、TNF-α mRNA表达水平与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）。实验组大鼠的TNF-α蛋白表达量下降,与对照组比较差异有统计学意义（P<0.05）;同时模型组的TNF-α蛋白表达量高于空白组（P<0.05）。结论 痛性糖尿病神经病变中miRNA-467b呈现下调表达状况,可导致TNF-α表达上升,从而引起机械痛和热痛的产生。     

PEG3、STMN1基因在非小细胞肺癌的表达及其与临床病理特征、血管生成相关性研究

目的 探讨父系表达基因3（PEG3）、抑微管装配蛋白1（STMN1）基因在非小细胞肺癌（NSCLC）的表达及其与临床病理特征和血管生成的关系。方法 收集宁夏医科大学总医院肿瘤医院2021年1月—2023年1月经病理证实的96例NSCLC患者癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测和免疫组织化学检测癌组织与癌旁组织PEG3、STMN1、VEGF及CD105 mRNA的表达;比较不同临床病理特征NSCLC患者癌组织PEG3、STMN1的阳性表达率;采用Pearson法分析PEG3、STMN1与VEGF及CD105关系;采用受试者工作特征（ROC）曲线分析PEG3、STMN1对NSCLC的诊断价值。结果 与癌旁组织比较,PEG3在NSCLC组织中表达降低（P <0.05）,STMN1、VEGF及CD105在NSCLC组织中表达升高（P <0.05）;NSCLC组织中STMN1、VEGF及CD105阳性率分别为62.50%、69.79%和72.92%,分别高于癌旁组织5.21%、10.42%和13.54% （P <0.05）,NSCLC组织中PEG3阳性率为8.33%低于癌旁组织73.96%（P <0.05）;不同年龄、性别及肿瘤类型NSCLC患者的PEG3及STMN1表达水平比较,差异无统计学意义（P >0.05）,不同TNM分期、淋巴结转移及分化程度NSCLC患者的PEG3及STMN1表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）;NSCLC组织的PEG3与STMN1、VEGF及CD105均呈负相关（P <0.05）,NSCLC组织的STMN1与PEG3呈负相关（P <0.05）,与VEGF及CD105均呈正相关（P <0.05）;PEG3诊断NSCLC的曲线下面积为0.750（95% CI：0.453,0.936）、敏感性为73.66%（95% CI：0.650,0.937）、特异性为79.62%（95% CI：0.590,0.956）;STMN1诊断NSCLC的曲线下面积为0.796（95% CI：0.540,0.942）、敏感性为80.30%（95% CI：0.744,0.978）、特异性为81.12%（95% CI：0.612,0.996）;PEG3+STMN1联合诊断的曲线下面积为0.935（95% CI：0.753,0.995）、敏感性为92.33%（95% CI：0.751,0.930）、特异性为77.12%（95% CI：0.735,0.948）。结论 NSCLC组织PEG3降低、STMN1升高,与肺癌TNM分期、分化程度相关,其可以加快肿瘤血管生成,能够一定程度提高疾病诊断价值。     

星状神经节阻滞术对大鼠急性心肌梗死后炎症反应的影响

目的 探讨星状神经节阻滞术（SGB）对大鼠急性心肌梗死（AMI）后心肌细胞炎症的保护作用。方法 选取8周龄雄性SPF级Wistar大鼠60只,体重200～250 g,随机分为假手术组、AMI组和SGB组,每组20只。假手术组只打开胸腔暴露心脏,不结扎冠状动脉;AMI组结扎冠状动脉左前降支复制AMI模型;SGB组在AMI模型复制成功后行SGB。模型复制成功后1周采集各组大鼠血清及心脏组织,qRT-PCR检测各组大鼠心肌组织中炎症因子（IL-6、IL-1β及TNF-α）mRNA;酶联免疫吸附试验检测各组大鼠血清中炎症因子（IL-6、IL-1β及TNF-α）,全自动生化分析仪检测各组大鼠血清中心肌酶（AST、LDH和CK-MB）。结果 各组大鼠心肌组织中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）,SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α mRNA的相对表达量均较AMI组降低（P <0.05）。各组大鼠血清中炎症因子IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,AMI组、SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平较假手术组升高（P <0.05）,SGB组IL-6、IL-1β及TNF-α表达水平较AMI组降低（P <0.05）。各组大鼠血清AST、LDH及CK-MB表达水平比较,差异有统计学意义（P <0.05）,AMI组、SGB组AST、LDH及CK-MB表达水平较假手术组升高（P <0.05）,SGB组AST、LDH和CK-MB表达水平较AMI组降低（P <0.05）。结论 SGB对大鼠AMI后心肌细胞炎症有一定的保护作用。