MSRE-qPCR法检测少弱精子症患者父源印记基因H19上游区域甲基化水平

目的建立精子中父源印记基因H19上游区域MSRE-qPCR检测方法,并分析男性少弱精子症患者精子父源印记基因H19上游区域甲基化水平。方法收集20例正常精液样本,同时筛选30例少弱精子症患者精液样本,应用甲基化敏感性限制性内切酶法并结合定量PCR对所有样本父源印记基因H19上游区域甲基化水平进行分析。结果正常精液样本父源印记基因H19上游区域平均甲基化率为（99.8±2.72）%,高于少弱精子症患者精液样本的（82.4±15.30）%,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 MSRE-qPCR法可用于父源印记基因H19上游区域甲基化水平的检测,少弱精子症者精液样本父源印记基因H19上游区域甲基化水平显著低于正常人。     

胃癌组织中p16基因甲基化水平以及mRNA表达的关系

目的探讨胃癌组织中抑癌基因p16基因甲基化水平与基因表达的关系。方法选取抚顺市中心医院2005至2008年普外切除胃癌标本50例,应用逆转录PCR(RT-PCR)方法及甲基化特异性PCR(MSP)方法分别检测胃癌标本抑癌基因p16的表达及甲基化情况,并探讨二者关系。结果①胃癌原发灶标本中p16基因甲基化率为28%(14/50)。②发生甲基化的胃癌标本mRNA表达量为(0.12±0.05),未发生甲基化的胃癌标本mRNA表达量为(0.77±0.13),下调明显(P<0.01)。结论 p16基因的异常甲基化是胃癌发生、发展过程中的频繁事件。p16基因启动子区CpG岛过甲基化是此基因在胃癌中表达缺失或下调的原因之一,在胃癌的发生发展中起一定作用,可能成为胃癌的早期诊断及治疗靶点基因之一。     

喉癌MTS1/P16基因缺失及异常甲基化的研究

目的:研究MTS1/P16基因在人喉癌组织及相应癌旁组织中的变化。方法:采用多重PCR法检测69例患者喉癌组织及相应癌旁组织中MTS1/P16基因的缺失情况;对未检出缺失的标本用甲基化敏感内切酶SmaI消化后再扩增,检测其异常甲基化。结果:在69例患者癌旁组织中未检测到MTS1/P16基因缺失及异常甲基化。69例患者喉癌组织中有17例(24.64%)标本MTS1/P16基因缺失,余52例未检测到MTS1/P16基因缺失的喉癌组织标本有8例(15.38%)检出异常甲基化。结论:MTS1/P16基因变异可能在喉癌的发生、发展中起一定作用。     

喉癌MTSl／P16基因缺失及异常甲基化的研究

目的：研究MTSl／P16基因在人喉癌组织及相应癌旁组织中的变化。方法：采用多重PCR法检测69例患者喉癌组织及相应癌旁组织中MTSl／P16基因的缺失情况；对未检出缺失的标本用甲基化敏感内切酶Smal消化后再扩增，检测其异常甲基化。结果：在69例患者癌旁组织中未检测到MTSl／P16基因缺失及异常甲基化。69例患者喉癌组织中有17例（24．64％）标本MTSl／P16基因缺失，余52例未检测到MTSl／P16基因缺失的喉癌组织标本有8例（15．38％）检出异常甲基化。结论：MTSl／P16基因变异可能在喉癌的发生、发展中起一定作用。     

白血病患者p16基因失活机制研究

目的了解白血病患者p16基因纯合性缺失、点突变及启动子区甲基化状态,探讨白血病发生中p16基因失活机制。方法采用聚合酶链反应、聚合酶链反应-单链构象多态性以及巢式甲基化特异性PCR法,对57例白血病患者进行p16基因纯合性缺失、点突变及启动子区甲基化状态研究。结果在受检的57例白血病患者中,共有6例发生p16基因纯合性缺失（10.53%）;无p16第1、2外显子缺失的51例白血病患者中均未见点突变发生;无p16基因第1、2外显子缺失、突变的51例白血病患者中共有16例发生p16基因甲基化（31.37%）,其中14例（27.45%）发生在急性白血病患者;57例白血病患者中共有22例发生p16基因失活（38.60%）。结论白血病发生过程中表观遗传学机制和遗传学机制相互作用,p16基因启动子区高甲基化可能是急性白血病发生中p16基因失活的主要机制。     

宫颈癌患者中β- 微管蛋白Ⅰ基因外显子4 突变与多西紫杉醇同步放疗疗效关系初探

目的探讨β-微管蛋白Ⅰ外显子4在宫颈癌患者中的基因突变与多西紫杉醇同步放疗疗效关系。方法采用焦磷酸测序法对16例宫颈癌患者新鲜组织标本和血标本中β-微管蛋白Ⅰ外显子4进行检测。于静脉滴注25mg/m2多西紫杉醇1小时后进行化疗。用临床妇科检查的方法评价多西紫杉醇同步放疗疗效,分析不同基因型与疗效的关系。结果 16例病人近期疗效均为完全缓解,没有复发,患者仍然生存。2病例中β-微管蛋白Ⅰ外显子4在217Leu发现纯合子和杂合子的同义突变,但与多西紫杉醇同步放疗疗效无关。结论由于病例有限,本实验中患者的基因突变与多西紫杉醇没有显示相关性,但仍需搜集更多病例进一步探讨两者之间的关系。     

DKK2基因启动子甲基化及高危HPV感染在宫颈癌中的临床意义

目的 探讨DKK2基因启动子甲基化及高危型人乳头瘤病毒（HR-HPV）感染在宫颈癌中的临床意义。方法 收集2016年5月至2017年11月该院确诊的79例宫颈癌患者（宫颈癌组）及63例宫颈癌前病变患者（癌前病变组）组织标本,其中高级别鳞状上皮内病变（HSIL）38例,低级别鳞状上皮内病变（LSIL）25例。同时选取29例子宫平滑肌瘤行子宫全切的患者作为对照组。比较3组患者DKK2基因启动子甲基化及HR-HPV感染情况。结果 癌前病变组中HSIL患者DKK2基因启动子甲基化率与宫颈癌组、对照组患者及癌前病变组中LSIL患者比较,差异有统计学意义（P<0.05）。3组患者HR-HPV感染率及感染者DKK2基因启动子甲基化率比较,差异有统计学意义（P<0.05）。宫颈癌组中,HPV16/18阳性患者DKK2基因启动子甲基化率高于非HPV16/18阳性患者,差异有统计学意义（P <0.05）。癌前病变组中,HPV16/18阳性患者DKK2基因启动子甲基化率高于非HPV16/18阳性患者,但差异无统计学意义（P>0.05）。结论 DKK2常因其启动子高甲基化而失活,与宫颈...     

脑胶质瘤中CLDN-7基因甲基化状态及蛋白表达的研究

目的探讨脑胶质瘤血浆中CLDN-7基因的甲基化状况及蛋白表达的关系。方法采用巢式PCR、亚硫酸氢盐测序PCR（BSP）及免疫组织化学技术方法,检测56例脑胶质瘤血清标本中CLDN-7基因启动子区CpG岛的甲基化状态,分析其甲基化程度、蛋白表达和临床资料之间的相关性。结果脑胶质瘤患者血清中CLDN-7基因启动子区甲基化率为35.3%（18/51）,按WHO病理分级,其中低级别（Ⅰ～Ⅱ级）组胶质瘤中基因启动子区甲基化率25.0%（9/36）低于高级别（Ⅲ～IV级）组甲基化率60.0%（9/15）,两者之间存在显著差别（P〈0.05）;甲基化蛋白表达阳性率为55.6%（10/18）,未甲基化的蛋白阳性表达率为84.8%（28/33）。结论 CLDN-7基因启动子区CpG岛中存在甲基化现象,与脑胶质瘤发生有关;基因的甲基化率与蛋白表达呈负相关关系。     

经皮冠状动脉介入术后患者氯吡格雷相关基因多态性的临床特点

目的 探讨经皮冠状动脉介入(PCI)术后患者的氯吡格雷相关基因多态性[细胞色素P4502C19(CYP2C19)、ATP结合盒亚家族B成员1(ABCB1)和对氧磷酶1(PON1)]的临床特点。方法 318例行PCI术后的患者,常规应用氯吡格雷联合阿司匹林抗栓治疗,采用荧光染色原位杂交技术检测其CYP2C19*2、CYP2C19*3、CYP2C19*17、ABCB1和PON1共5个基因位点。术后1个月用血栓弹力图筛选出氯吡格雷抵抗组和氯吡格雷正常组,比较CYP2C19相关基因发生的情况。所有患者随访6个月,记录患者的出血情况,并比较CYP2C19相关基因发生的情况。结果 318例PCI术后患者的氯吡格雷相关基因分型：CYP2C19*2基因的AA突变型10.06%, AG杂合型30.81%;CYP2C19*3基因无突变型, AG杂合型30.81%;CYP2C19*17基因无突变型, CT杂合型6.29%;ABCB1基因突变型约占9.74%, CT杂合型52.52%;PON1基因AA突变型10.06%, AG杂合型占65.41%。氯吡格雷抵抗组携带2个功能缺失(LOF)等位基因的发生率大于氯...     

安徽省汉族人群CYP2C19基因多态性的调查研究

目的探讨CYP2C19基因型检测方法及其在安徽省汉族人群中基因多态性的分布。方法在110名汉族健康人的外周血中,应用聚合酶链反应(PCR)-限制性片段长度多态性分析(RFLP)技术,进行CYP2C19等位基因分型研究。结果应用PCR-RFLP技术可准确区分CYP2C19基因型。在110名检测标本中,CYP2C19纯合子强代谢型、杂合子强代谢型和弱代谢型的发生率分别40%、49%和11%。结论PCR-RFLP方法检测CYP2C19基因型特异性高,成熟,稳定;中国安徽汉族人群存在CYP2C19的基因多态性,其弱代谢型的发生率与中国总体发生率基本一致。     

OPCML、DAPK基因甲基化与宫颈癌CasKi细胞凋亡相关性的研究

目的研究天花粉蛋白(TCS)诱导宫颈癌CasKi细胞凋亡过程中肿瘤抑制基因OPCML、DAPK甲基化的变化情况,并探讨其在宫颈癌的发生发展中的作用及细胞凋亡和抑癌基因甲基化的相关性,寻找新型的去甲基化药物。方法①应用MTT法检测TCS对CasKi细胞增殖抑制的影响;流式细胞仪分析天花粉蛋白对宫颈癌CasKi细胞诱导凋亡作用;②应用甲基化特异性PCR(MSP)技术检测人宫颈癌细胞OPCML和DAPK基因启动子CpG岛甲基化的状况及天花粉蛋白的去甲基化作用。结果TCS对宫颈癌CasKi细胞生长有明显抑制作用,流式细胞仪检测见特征性的亚二倍体凋亡峰;MSP检测表明宫颈癌CasKi细胞OPCML、DAPK基因启动子区CpG岛呈高度的甲基化状态,TCS处理后OPCML、DAPK基因启动子区CpG岛无异常甲基化表现。结论天花粉蛋白具有抑制宫颈癌CasKi细胞生长、诱导Cas-Ki细胞凋亡和对CasKi细胞OPCML、DAPK基因明显的去甲基化作用;其抑制生长和诱导凋亡作用可能与对OPCML、DAPK基因的去甲基化作用有关。TCS有可能是一种新型的甲基化抑制剂。     

Loss of imprinting of the insulin-like growth factor 2 and the H19 gene in testicular seminomas detected by real-time PCR approach

IGF2 and H19 are imprinted genes in normal human tissue, but many studies have observed a loss of imprinting (LOI) of these genes in tumors as an epigenetic alteration of the DNA, that leads to a biallelic expression predisposing cells to carcinogenesis and tumor growth. The aim of this study was to test the reliability of LightCycler™-assisted Real-time PCR in detecting LOI of IGF2 and H19 in 39 patients with testicular germ cell tumors by comparing these results with the analysis generated by the golden standard restriction fragment length polymorphism (RFLP). With LightCycler™-assisted Real-time PCR for IGF2 44% and for H19 49% of the patients were found to be heterozygous. This was consistent with the results obtained by RFLP, but surprisingly RFLP failed in more than 7% of the patients. In detecting LOI (for IGF2 in 41% and for H19 in 68% of the informative patients) the approach by RFLP was superior, since the results derived from LightCycler™-assisted Real-time PCR showed reliable results in 76 and 10% of the samples concerning IGF2 and H19, respectively. Again, no discrepancy between the results obtained by the two methods occurred. In sum, LightCycler™-assisted Real-time PCR is a sufficiently working approach for the rapid and reliable detection of heterozygosity of IGF2 or H19 gene and identification of LOI of IGF2 and thus may be helpful in conducting large epidemiological studies. However, for the identification of LOI of the H19 gene in this cohort it possesses only restrictive use.Sebastian Stier and Thomas Neuhaus contributed equally to this work.     

宫颈癌细胞系中RASSF2A基因启动子区甲基化状态的研究

目的拟通过检测4株不同宫颈癌细胞系HeLa、CaSki、SiHa和C33A中RASSF2A基因启动子区甲基化水平,以及分析去甲基化前后RASSF2A基因mRNA和蛋白表达水平、甲基化状态及细胞生物活性的变化,探讨宫颈癌发生的可能机制及治疗对策。方法采用实时定量聚合酶链反应方法检测去甲基化药物5-杂氮-2′-脱氧胞苷（5-aza-dC）作用前后RASSF2A基因的表达;甲基化特异性PCR（MSP）法检测4株宫颈癌细胞系中RASSF2A启动子区甲基化状态;免疫细胞化学方法检测RASSF2A基因表达变化,并用MTT法和流式细胞术观察细胞生物活性的变化。结果宫颈癌细胞系HeLa和SiHa表现为完全甲基化状态,细胞系CaSki和C33A表现为部分甲基化状态。5-aza-dC可使宫颈癌细胞系部分去甲基化,并使RASSF2A基因在宫颈癌细胞中mRNA和蛋白水平表达均显著升高。通过对宫颈癌细胞系HeLa的生物学行为检测发现,通过5-aza-dC的诱导作用,其增殖能力和抗凋亡能力明显下降。结论甲基化是导致宫颈癌细胞中RASSF2A基因表达缺失或降低的重要原因之一。去甲基化药物5-aza-dC能够逆转宫颈癌细胞系RASSF2A基因启动子异常甲基化水平,提高RASSF2A基因的mRNA和蛋白表达水平,提示RASSF2A基因的甲基化水平可以作为评估去甲基化干预是否有效的分子学标志物,为宫颈癌的临床治疗提供新的分子靶点。     

短暂脑缺血发作内源性H2S及CBS检测的意义

目的探讨短暂脑缺血发作（TIA）患者血清内源性硫化氢（H2S）表达水平及胱硫醚-γ-合酶（CBS）活性的变化及临床意义。方法采集60名TIA患者空腹静脉血标本,采用敏感硫电极法测定H2S血清浓度,采用Elisa试剂盒测定CBS活性,与30例健康成年人所测结果进行比较,并对不同预后的患者血清H2S表达水平及CBS活性进行对比分析。结果健康成人外周血内源性H2S表达水平及CBS活性低于TIA患者（P〈0．05）,在TAT患者中,进展为脑梗死患者外周血内源性H2S表达水平及CBS活性高于未进展为脑梗死的患者（P〈0．05）,差异具有统计学意义。结论TIA患者早期即可出现内源性H2S表达水平异常,CBS活性改变,内源性H2S较早地预测、估计TIA演变趋势,对估计病情,预测预后具有重要的临床意义。     

血浆RUNX3基因启动子甲基化检测对宫颈癌早期诊断的价值研究

目的探究血浆人类Runt相关转录因子3(RUNX3)基因启动子甲基化对早期宫颈癌的诊断价值。方法选取80例宫颈癌患者作为A组,选取同期80例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者作为B组,另选取80例正常宫颈组织切除者作为C组。对三组研究对象的宫颈癌组织、CIN组织、正常宫颈组织及血浆RUNX3启动子甲基化应用甲基化特异性聚合酶链反应(MCP)进行检测。比较三组组织、血浆RUNX3启动子甲基化异常率,分析宫颈癌病理特征与RUNX3启动子甲基化表达及RUNX3蛋白表达的关系。结果A组组织RUNX3启动子甲基化异常率为86.25%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为73.75%;B组组织RUNX3启动子甲基化异常率为33.75%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为26.25%;C组组织RUNX3启动子甲基化异常率为3.75%,血浆RUNX3启动子甲基化异常率为0;A组组织RUNX3启动子甲基化异常率和血浆RUNX3启动子甲基化异常率均高于B组和C组,差异有统计学意义(P<0.05)。血浆、组织RUNX3启动子甲基化异常与临床分期、肿瘤分化程度、病理类型、淋巴转移存在相关性(P<0.05)。宫颈癌患者RUNX3蛋白异常表达与淋巴转移、肿瘤分化程度、临床分期存在相关性(P<0.05)。结论血浆RUNX3基因启动子甲基化异常可提示宫颈癌的发生发展,为早期诊断宫颈癌提供新方法。     

荧光原位杂交检测宫颈细胞hTERC基因扩增及其临床意义

目的探讨端粒酶基因(hTERC)扩增与宫颈上皮内肿瘤(CIN)和宫颈癌发生发展的关系及临床意义。方法应用荧光原位杂交技术检测100例存在宫颈病变患者的宫颈脱落细胞中hTERC基因的扩增情况。结果 100例各类宫颈细胞病变中,hTERC基因扩增比例分别为:CIN1组13.3%(4/30),CIN2组71.0%(22/31),CIN3组和宫颈癌组均为100%(19/19,20/20),各组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论宫颈CIN和宫颈癌细胞hTERC基因均有扩增,且扩增率随病变的进展而增加;高级别CIN和癌的扩增率明显高于低级别CIN;检测hTERC基因扩增可以作为宫颈CIN和宫颈癌筛查及预后评估的重要指标。     

肺癌患者CDH13基因启动子甲基化状态研究

目的 应用甲基化特异性PCR(MSP)方法检测非小细胞肺癌(NSCLC) CDH13基因启动子甲基化情况.方法 留取44例非小细胞肺癌患者手术标本及12例非肺癌患者正常肺组织,MSP分析CDH 13基因启动子甲基化情况.结果 44例非小细胞肺癌中CDH 13基因启动子甲基化阳性率为54.5%(24/44),12例正常肺组织中未检测到此基因的甲基化(0/12).CDH13基因甲基化与患者性别及吸烟与否无关;肿瘤分期越晚甲基化的发生率越高.结论 原发性非小细胞肺癌中存在着较高比例的CDH13启动子甲基化,提示CDH13在非小细胞肺癌的发生中起着重要作用.     

DNA hypermethylation of promoter of gene p53 and p16 in arsenic-exposed people with and without malignancy.

Chronic arsenic exposure is known to produce arsenicosis and cancer. To ascertain whether perturbation of methylation plays a role in such carcinogenesis, the degree of methylation of p53 and p16 gene in DNA obtained from blood samples of people chronically exposed to arsenic and skin cancer subjects was studied. Methylation-specific restriction endonuclease digestion followed by polymerase chain reaction (PCR) of gene p53 and bisulfite treatment followed by methylation-sensitive PCR of gene p16 have been carried out to analyze the methylation status of the samples studied. Significant DNA hypermethylation of promoter region of p53 gene was observed in DNA of arsenic-exposed people compared to control subjects. This hypermethylation showed a dose-response relationship. Further, hypermethylation of p53 gene was also observed in arsenic-induced skin cancer patients compared to subjects having skin cancer unrelated to arsenic, though not at significant level. However, a small subgroup of cases showed hypomethylation with high arsenic exposure. Significant hypermethylation of gene p16 was also observed in cases of arsenicosis exposed to high level of arsenic. In man, arsenic has the ability to alter DNA methylation patterns in gene p53 and p16, which are important in carcinogenesis.