5-氟尿嘧啶诱导人大肠癌多药耐药细胞株及细胞凋亡的实验研究

目的:研究5-氟尿嘧啶(5-FU)诱导LOVO细胞凋亡,探讨人大肠癌多药耐药机制。方法:用噻唑蓝(MTT)法、光镜及电镜、DNA凝胶电泳和原位DNA末端转移酶标记法,分别对耐药细胞株LOVO/5-FU细胞及敏感细胞株LOVO细胞进行5-FU诱导细胞凋亡的实验研究。结果:LOVO/5-FU细胞存活率明显高于LOVO细胞,光镜和电镜观察凋亡形态学改变,凋亡细胞DNA凝胶电泳可以出现梯形(ladder)凋亡带,LOVO细胞原位DNA末端转移酶标记阳性率高于LOVO/5-FU。结论:(1)5-FU诱导人大肠癌LOVO细胞凋亡,有明显的时间和剂量效应。(2)在相同条件下,耐药细胞株LOVO/5-FU与敏感细胞株LOVO相比,前者凋亡受到抑制。(3)细胞凋亡对研究大肠癌LOVO细胞多药耐药机制,克服化疗产生的多药耐药及逆转多药耐药具有重要的临床价值。     

Fas/FasL诱导的细胞凋亡机制及其在肿瘤免疫方面研究的进展

Fas／FasL诱导的细胞凋亡机制是人体细胞自身新陈代谢进程中的一个重要环节，它是人体细胞这个“大家庭”清除衰老细胞的一个重要机制，也是机体的免疫系统清除异常细胞的一个有利武器。近年来的研究发现，Fas／FasL机制在肿瘤免疫逃逸机制中也扮演着重要的角色，因此也就成为了人们研究肿瘤免疫治疗的一个突破口。本文就近几年来在这方面研究的进展作一综述。     

Rubratoxin B 诱导人绒癌细胞株凋亡及Bcl-2 mRNA 表达的研究

目的:定量分析rubratoxin B(RB)在体外诱导人绒癌细胞株(BeWo)发生凋亡,并探讨其与抑制凋亡基因Bcl-2mRNA表达的关系。方法:利用MTT、HE染色、annexinV-FITC/PI流式细胞技术定性及定量分析经RB处理后BeWo细胞活细胞及凋亡细胞的变化情况;利用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术检测抑制凋亡基因Bcl-2与RB诱导的BeWo细胞凋亡的关系。结果:RB诱导BeWo细胞凋亡的数量与药物浓度及用药时间明显相关。RT-PCR结果显示Bcl-2mRNA的表达随着凋亡细胞的增加而减少。结论:RB能够诱导BeWo细胞发生凋亡,Bcl-2mRNA表达的下调是RB诱导BeWo细胞凋亡的重要机制。     

硒、镉对荷人肝癌裸鼠癌细胞的协同影响

目的:研究微量元素硒、镉对裸鼠人肝癌细胞的协同影响作用。方法:将SMMC-7721人肝癌细胞接种于ALB/C-nu/nu裸鼠,癌细胞成活后,分组分别每日腹腔注射同体积不同浓度的硒、镉溶液,分别于第10、20天观察肝癌细胞的变化。结果:腹腔注射镉组抑瘤率减小并变为负值,肝癌细胞的细胞凋亡率减小,且随着镉浓度的增加抑瘤率负值的绝对值逐渐加大,癌细胞的细胞凋亡率进一步减小;而腹腔注射硒组,抑瘤率和肝癌细胞的细胞凋亡率均增大,且硒的抑瘤率和肝癌细胞的细胞凋亡率均与腹腔注射硒的浓度成正相关。结论:镉可促进肝癌细胞在体内的生长,而硒可明显抑制机体肝癌细胞的生长。     

辣椒素诱导人胃癌MKN-45细胞凋亡及其分子机制的研究

目的:探讨辣椒素诱导人胃癌MKN-45细胞的凋亡作用及其分子机制。方法:用MTT法检测MKN-45细胞生长情况。荧光光镜、透射电镜、DNA凝胶电泳和流式细胞仪检测细胞凋亡。Westernblot蛋白印迹法检测细胞内Bcl-2、Bax和C-myc蛋白表达。结果:辣椒素对MKN-45细胞有明显的生长抑制及诱导凋亡作用,并呈剂量、时间依赖性。光镜与电镜下可见到明显的凋亡细胞。DNA凝胶电泳显示出特征性凋亡梯状带。蛋白印迹法表明辣椒素可使Bax表达升高,Bcl-2和C-myc表达下降。结论:辣椒素能明显抑制人胃癌MKN-45细胞生长,诱导细胞凋亡,并主要通过调节Bax、Bcl-2和C-myc等蛋白的表达来实现。     

细胞凋亡抑制蛋白家族与神经损伤

细胞凋亡抑制蛋白（IAP蛋白）是细胞凋亡过程中重要的调节因子，它通过阻断调亡蛋白酶的激活表达来抑制细胞凋亡的发生。大量的研究显示，细胞凋亡是许多神经损伤后神经细胞死亡的主要方式，而细胞凋亡抑制蛋白可以通过抑制细胞凋亡的发生来发挥神经保护作用，并且这种内源性的神经保护作用具有重要的临床指导意义。本文就IAP家族蛋白的基本结构，抑制细胞凋亡的机制及其在神经损伤中的作用加以综述。     

核转录因子-κB在肝细胞生长因子介导的肝干细胞抗凋亡效应中的作用

目的:研究核转录因子-κB(NF-κB)在肝细胞生长因子(HGF)介导WBF-344细胞凋亡信号转导调控中的作用。方法:为明确HGF对肝干细胞的抗凋亡作用,在加或不加HGF情况下WBF-344细胞用放线菌素D(ActD)20ng/mL、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导细胞凋亡,DNA电泳及流式细胞仪检测细胞凋亡。为检测NF-κB的活性,用NF-κB报告基因质粒BD Great EscA PeTMSEAP vector瞬时转染WBF-344细胞,通过BD Great EscAPeTMSEAP荧光检测系统检测NF-κB的转录活性。为明确NF-κB活化在HGF介导抗凋亡效应中的作用,我们用NF-κB抑制剂如BAY-11-7082和aspirin(ASA)预处理WBF-344细胞,然后用HGF刺激,再通过ActD20ng/mLTNF-α诱导细胞凋亡效应。为证实这一结论,我们用NF-κB抑制质粒转染WBF-344细胞,筛选稳定表达株。转染细胞用HGF刺激48h,然后检测抗凋亡效应。结果:TNF-α可以诱导ActD致敏的WBF-344细胞凋亡。HGF对WBF-344细胞的凋亡具有保护作用。HGF能够明显促进NF-κB活...     

EVn-50对人宫颈癌Hela细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究EVn-50体外对人宫颈癌Hela细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外培养Hela细胞,台盼蓝拒染法检测细胞活力;AO/EB染色荧光显微镜观察EVn-50诱导Hela细胞凋亡形态学改变;DNA凝胶电泳确证EVn-50诱导Hela细胞凋亡作用;PI染色流式细胞仪检测EVn-50诱导Hela细胞凋亡率。结果:EVn-50体外对人宫颈癌Hela细胞的增殖具有显著抑制作用,呈浓度依赖性。EVn-50可诱导Hela细胞凋亡,AO/EB染色可见典型凋亡小体;DNA凝胶电泳在EVn-50浓度100μg/mL作用48h出现典型"梯形"DNA条带;PI染色流式法显示EVn-50在10、100μg/mL作用Hela细胞48h后,凋亡率分别为(8.80±0.16)%及(20.93±0.62)%,呈浓度依赖性。结论:EVn-50具有抑制人宫颈癌Hela细胞增殖并诱导细胞凋亡作用。     

9-顺式-维甲酸联合8-cl-cAMP对人肺癌细胞生长和凋亡的影响

目的:探讨9-顺式-维甲酸(9-cis-RA)联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导作用。方法:应用MTT法检测9-cis-RA和8-cl-cAMP分别以及联合对H460和H292细胞的生长抑制作用;应用流式细胞术分析9-cis-RA和8-cl-cAMP对H460和H292细胞的凋亡诱导作用;应用RT-PCR法检测Fas、FasL基因的表达以及应用比色法测定caspase-3的活性。结果:9-cis-RA明显抑制H460细胞的生长并诱导其凋亡,H292细胞对9-cis-RA不敏感。9-cis-RA联合8-cl-cAMP明显抑制H292细胞生长,且诱导其凋亡。9-cis-RA联合8-cl-cAMP作用后,H460细胞FasmRNA表达水平较单药组提高;H292细胞FasmRNA的表达也有提高,说明二者联合对Fas的转录具有协同作用。在FasmRNA表达水平提高时,caspase-3的活性明显提高,二者具有显著相关性。结论:H460和H292细胞对9-cis-RA的敏感性不同,9-cis-RA联合8-cl-cAMP对H460和H292细胞的生长抑制和凋亡诱导具有协同作用;且Fas参与了...     

伊马替尼联合高三尖杉酯碱或阿糖胞苷对K562细胞作用的研究

伊马替尼是一种ber／abl酪氨酸激酶活性抑制剂^[1]。近年来研究表明，伊马替尼能够选择性地抑制K562细胞的增殖、诱导K652细胞凋亡。临床和实验研究揭示高三尖杉酯碱治疗慢性粒细胞白血病（CML）有确切的疗效，可以明显地抑制K562细胞增殖、诱导K562细胞凋亡。阿糖胞苷是治疗CML的常用药物，对K562细胞的增殖有一定的抑制作用，亦可诱导K562细胞的凋亡。我们在本研究中探索伊马替尼与高三尖杉酯碱或阿糖胞苷联合应用是否有协同和增强抑制K562细胞增殖、影响K562细胞凋亡的作用，以及对ber／ablmRNA水平的作用。     

三氧化二砷诱导淋巴瘤Raji细胞凋亡与细胞周期阻滞

本研究探讨研究三氧化二砷（As2O3）对人淋巴瘤Raji细胞株凋亡诱导的作用特点及其机制。用MTT比色法观察不同浓度As2O3对Raji细胞的增殖抑制效应，电子显微镜观察不同浓度As2O3作用不同时间后细胞的凋亡形态，DNA-ladder琼脂糖凝胶电泳观察凋亡条带，流式细胞术检测Raji细胞凋亡、细胞周期分布。结果表明：1—8μmol／LAs2O3能明显抑制Raji细胞的活力，并存在一定的量效、时效关系。2—8μmol／L浓度的As2O3可以诱导Raji细胞周期阻滞及凋亡，而1μmol／LAs2O3不诱导细胞凋亡，只是通过细胞周期阻滞作用抑制细胞增殖。结论一定浓度三氧化二砷可以抑制Raji细胞的增殖，阻滞细胞周期，诱导细胞凋亡。细胞周期阻滞伴随细胞凋亡而发生。     

Bcl—2与细胞凋亡

Ｂｃｌ－２是基因是一原癌基因，能抑制细胞凋亡。但近年研究发现，存在有Ｂｃｌ－２敏感和不敏感的细胞凋亡现象。Ｂｃｌ－２抑制细胞凋亡的机制目前仍然不清，大多认为与Ｂｃｌ－２的细胞内抗氧化作用及抑制钙离子的跨膜运动有关。     

蛋白激酶与细胞凋亡信号及凋亡抑制信号的转导

蛋白激酶主要有蛋白激酶A(PKA)，蛋白激酶C(PKC)，钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaM激酶)，酪氨酸蛋白激酶(TPK)等。近年来的研究表明，蛋白激酶参与了多种多样细胞凋亡的信号转导，并戏剧性地调节着细胞凋亡，有时加速凋亡，有时却可延迟凋亡。本文就蛋白激酶在细胞凋亡及凋亡抑制信号转导中的作用，以及转导凋亡信号和转导凋亡抑制信号的两类不同途径与Caspase家族的关系加以综述。     

苦参碱诱导骨肉瘤细胞凋亡的实验研究

目的：探讨苦参碱对人骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。方法：将不同浓度的苦参碱作用于培养的OS732骨肉瘤细胞，通过MTT比色法、流式细胞仪和DNA凝胶电泳、电子显微镜技术观察检测细胞凋亡，研究分析其对骨肉瘤细胞的生长抑制和诱导凋亡作用。结果：苦参碱浓度为0．5、1．0、1．5g／l时，细胞毒性指数分别为12．1％、21．6％、39．5％；流式细胞术示骨肉瘤细胞的凋亡率分别为9．8％、16．9％、25．5％；DNA电泳见DNA“梯形”图谱；电镜显示细胞的凋亡形态。结论：苦参碱能显著抑制OS732细胞增殖、促进其凋亡。     

三氧化二砷对宫颈癌Hela细胞体外生长的影响

目的研究三氧化二砷(AsO3)对人宫颈癌Hela细胞的体外生长的影响，初步探讨其作用机制。方法MTT比色法检测细胞生长抑制作用。光镜下观察细胞凋亡形态学的变化。流式细胞术检测各期细胞分布及细胞凋亡率。结果三氧化二砷能以浓度依赖和时间依赖方式显著抑制Hela细胞生长，阻滞Hela细胞于C2／M期，并诱导凋亡。结论三氧化二砷可显著抑制Hela细胞的体外生长，诱导凋亡可能是其作用机制之一。     

酪氨酸激酶抑制剂STI571治疗慢性粒细胞白血病的研究

目的:研究特异性酪氨酸激酶抑制剂STI571对慢性粒细胞白血病(简称慢粒)细胞增殖、凋亡、周期调控及bcr-abl融合基因表达的影响,为慢粒的基因治疗提供理论依据。方法:细胞培养慢粒急变细胞系K562细胞株,通过MTT检测STI571作用下细胞存活率,流式细胞仪检测周期变化,电镜及DNA电泳检测细胞凋亡,半定量RT-PCR检测STI571对bcr-abl融合基因表达的影响。结果:STI571作用后K562细胞中G1期细胞明显增加,S期细胞明显减少。流式细胞图中的二倍体峰前可见一明显亚二倍体峰———凋亡峰(apoptosispeak),提示STI571能明显诱导K562细胞凋亡。电镜发现STI571作用于K562细胞12～72h后,诱导出各期凋亡细胞及凋亡小体。半定量PCR灰度扫描结果显示bcr-abl基因的mRNA表达下降,电泳检测扩增产物,荧光亮度减弱。结论:STI571能明显抑制白血病细胞增殖,细胞阻滞于G0/G1期,且具有明显的诱导凋亡作用,反馈抑制bcr-abl融合基因的表达。     

细胞凋亡与中毒关系的研究近况

1972年，Kerr等首先提出厂细胞凋亡（apoptosis）的概念，从此以后，人们对细胞凋亡现象进行了广泛深入研究。近年来，随着分子生物医学的不断发展，细胞凋亡已成为医学界研究的热点之一。国内外很多研究报道仆实了细胞捌亡参与疾病的发生与发展过程，这与细胞凋亡增多或细胞凋亡抑制有父。在全身炎症反应（SIRS）、多脏器功能障碍综合征（MODS）、细胞、组织及器官的损伤和毒物中毒中均存在细胞凋亡的情况。     

青藤碱对THP-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察中药单体青藤碱(SIN)对脂多糖(LPS)刺激的THP-1细胞增殖、凋亡的影响。方法:培养的THP-1细胞经LPS1mg/L刺激2h后,分为SIN高(0.3mmol/L)、中(0.15mmol/L)、低(0.075mmol/L)剂量组及空白对照组,干预24h。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞的增殖情况,碘化丙啶染色流式细胞检测凋亡指数,吖啶橙(AO)/溴乙锭(EB)荧光显微镜观察细胞凋亡水平。结果:与空白对照组相比,SIN高(P<0.01)、中(P<0.05)剂量组细胞增殖明显降低,流式细胞检测SIN3个剂量组细胞凋亡率增高,AO/EB染色示SIN处理的细胞出现不同程度的核裂解和胞膜受损等凋亡现象。结论:SIN可能通过抑制单核细胞的增殖,促进其凋亡来达到免疫抑制和治疗类风湿关节炎的作用。     

细胞凋亡与心脑血管疾病的关系

细胞凋亡是一种不同于细胞坏死的生理性死亡方式，对生物机体的正常发育及自身稳定具有极其重要的作用。细胞凋亡功能的失控，抑制或增加，均会引起机体平衡失调，导致疾病，如与凋亡抑制有关的疾病：肿瘤、自身免疫性疾病等；与凋亡增加有关的疾病：神经系统脑缺血缺氧性疾病、老年性痴呆症、心肌梗死、心力衰竭、动脉粥样硬化等，其中心脑血管疾病是危害人类健康最主要的原因。因此，了解细胞凋亡途径及其调控因素，研究细胞凋亡与疾病发生、发展的关系，以细胞凋亡为切入点，探讨细胞凋亡相关疾病的预防措施及康复治疗方法成为近年来人们关注的热点之一。