生物免疫制剂对鼠枯否细胞释放过氧化氢的影响

从正常Ｗｉｓｔａｒ大鼠肝中分离出大量高纯度的枯否细胞（ＫＣ），体外培养并以干扰素（ＩＦＮａ－２ｂ）、卡介苗（ＢＣＧ）或二者联用处理枯否细胞，用荧光法检测免疫制剂对枯否细胞释放Ｈ２Ｏ２的影响。结果显示，ＩＦＮａ－２ｂ或ＢＣＧ均可增强枯否细胞释放Ｈ２Ｏ２量，分别使释放量提高约１．６倍和１倍；ＩＦＮａ－２ｂ和ＢＣＧ协同作用的效果更强，使枯否细胞释放Ｈ２Ｏ２量提高２倍以上。文章讨论了免疫制剂增强枯否细胞的     

大鼠肝枯否细胞分离培养与免疫活性的研究

应用胶原酶与链霉蛋白酶消化和分解破坏大鼠肝细胞的方法,获得非肝细胞;再经贴壁培养,成功地获得大量高纯度的枯否细胞。枯否细胞获得率为8.3×10~6个/每克肝组织,胞质内均含有在体吞噬的墨汁颗粒。培养成活的枯否细胞呈典型巨噬细胞形态,电镜观察下表而有发达的伪足和微绒毛等结构,胞质内含大量溶酶体。以绵羊红细胞(SRBC)检测枯否细胞免疫活性,90%以上的细胞在特异抗体介导下形成SRBC花环,并能活跃吞噬SRBC。电镜观察了枯否细胞花环和吞噬功能。本实验国内首次分离培养成功大鼠肝枯否细胞,并证明具有良好的免疫活性,这对进一步研究枯否细胞的功能,尤其是它对肿瘤的免疫监视作用有实际意义。     

人参总皂甙对培养鼠肝枯否细胞免疫活性的影响

分离Ｗｉｓｔａｒ乳鼠肝枯否细胞并作体外培养，取细胞生长良好的培养瓶分为正常组，损伤组，实验组及阳性对照组。正常组为接种后３天定时更换培养液者，损伤组为更换５ｍｏｌ／Ｌ浓度ｃｃＩ４培养基后继续培养６０ｍｉｎ者；实验组为损伤同时加入０．５％人参总皂甙２滴者；阳性对照组为损伤同时加入ＰＨＡ１００μｇ／ｍｌ者。将各组培养瓶继续培养６０ｍｉｈ后取出细胞生长盖玻片，检测各组枯否细胞免疫活性。结果，正常组与损伤     

枯否细胞的负向免疫调节作用

目前认为肝脏是淋巴器官,它倾向于产生免疫耐受而非免疫应答。枯否细胞(KC)是肝内固有的巨噬细胞,其在发挥免疫防御的过程中可释放多种化学介质介导肝损伤并参与肝纤维化的病理改变。近来研究发现活化的KC与肝脏免疫耐受的形成和维持有关,KC能够分泌免疫抑制性细胞因子,抑制T细胞增殖并诱导T细胞凋亡,从而发挥负向免疫调节功能。对KC负向免疫调控的研究将大大拓展对致耐受性APC尤其是巨噬细胞的认识与理解,为深入研究肝脏内环境稳定和免疫耐受形成的机制开拓新的思路。     

生物免疫刺激剂对肝癌大鼠枯否细胞和单核细胞抑人肝癌细胞增殖作用的影响

以ＤＥＮ制成实验性肝癌大鼠，同时连续１２周分别给予肝癌大鼠干扰素α－２ｂ（ＩＦＮ）、卡介苗（ＢＣＧ）或两者联用，对照组给予生理盐水。于第１２周和１６周分离培养各组动物肝枯否细胞（ＫＣ）和血单核细胞（ＭＣ），并分别与人肝癌细胞联合培养，用￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定ＫＣ和ＭＣ对肝癌细胞的抑增殖作用。分离培养第１８周和２２周对照组肝癌大鼠的ＫＣ经体外ＩＦＮ、ＢＣＧ或两者联用后，同上测定ＫＣ对肝癌细胞的抑增殖作用。结果显示：１．肝癌大鼠的ＫＣ对肝癌细胞增殖仍具有一定的自然抑制作用，ＫＣ的作用明显强于ＭＣ；２．上述免疫刺激剂的在体应用或体外对ＫＣ的直接作用，均以ＩＦＮ和ＢＣＧ联用增强ＫＣ的抑肝癌细胞作用最强，最强者可增强５倍以上；３．单用免疫刺激剂者，ＢＣＧ的效果较ＩＦＮ强。讨论分析了联用免疫刺激剂增强ＫＣ抗肝癌最佳效果的机制及其实用意义。     

有机锗（Ge—132）对损伤大鼠肝枯否细胞免疫活性及酶活性的影响

材料与方法一、取日龄1～5天的Wistar 系大鼠乳鼠肝枯否细胞原代单层培养4～8天,选生长良好的细胞瓶分为正常组、损伤组(加入5mol/L 含CC(?)4的20%FCS RPMl1640培养液3ml)、实验组(同上加CC(?)4再加Ge-132 0.1mg/ml)和阳性对照组(CC(?)4加     

生物免疫刺激剂对肝癌大鼠枯否细胞和单核细胞抑人肝癌细胞增殖作…

以ＤＥＮ制成实验性肝癌大鼠，同时连续１２周分别给予肝癌大鼠干扰素α－２ｂ（ＩＦＮ）、卡介苗（ＢＣＧ）或两者联用，对照组给予生理盐水。结果显示：１．肝癌大鼠的ＫＣ对肝癌细胞增仍具有一定的自然抑制作用。ＫＣ的作用明显强于ＭＣ；２．上述免疫刺激剂的在体应用或体外对ＫＣ的直接作用，均以ＩＦＮ和ＢＣＧ联用增强ＫＣ的抑肝癌细胞作用最强，最强者可增强５倍以上；３．单用免疫刺激剂者。     

烧伤后高代谢伴多器官功能不全的大鼠枯否细胞一氧化氮的 …

目的和方法：给大鼠造成３０％体表面积的全层烧伤并延迟输液复制大鼠烧伤后高代谢伴多器官功能不全的模型，观察该模型动物血浆一氧化氮（ＮＯ）及枯否细胞产生ＮＯ的量。结果：烧伤后大鼠血浆ＮＯ含量升高，并与其中ＴＮＦα的含量呈正相关，烧伤后大鼠枯否细胞在受ＬＰＳ刺激下ＮＯ的含量明显高于对照组。结论：ＮＯ在烧伤后器官功能损伤中具有一定作用。     

血清对分离枯否细胞细菌脂多糖摄取过程的影响

本文应用单克隆抗细胞抗细菌多糖抗体，利用免疫荧光及激光共聚焦扫描技术，观察了分离培养的枯否细胞有无血清条件下对二种不内发子结构细菌脂多糖摄取过程的影响，无血清状态下，枯否细胞加入Ｓ型脂多糖（Ｓ－ＬＰＳ）及Ｒ型脂多糖（Ｒｄ－ＬＰＳ）培育５ｍｉｎ后，其胞闪内抗脂多糖荧光强度显著高于空白对照水平。且Ｓ－ＬＰＳ培育后胞浆内荧光强度增高幅度高于Ｒｄ－ＬＰＳ培养后的增高幅度，１０％小牛血清状态下，Ｓ－ＬＰＳ培     

LPS 刺激诱导大鼠原代枯否细胞基因表达谱变化分析

目的:研究脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)刺激原代大鼠枯否细胞(Kupffer cell,KC)基因表达谱的变化情况。方法:胶原酶灌注消化和不连续密度梯度离心分离培养大鼠原代肝脏KC,采用LPS 刺激细胞。OneArray 基因表达谱芯片检测LPS 刺激后,细胞内基因表达谱的变化。采用实时荧光定量PCR 法对表达上调最显著的基因进行验证。结果:基因芯片结果显示LPS 刺激后,原代KC 内基因表达谱发生了明显变化。与正常对照组相比,LPS 刺激组基因表达上调27 个(包括Ces1f、Slc17a3、Slc21a4、Hsd17b2、Sorbs2、Ccdc116、Mgam、Myo5b、Etl4、Fabp1、Kif4b、Fosl1、Cyp4a1、Penk、Tmem221、Rpl5、Nr2f1、Hoxb1、Gpr165、Fam90a13p、Kpna6、Irak1bp1、Kcnh1 和4 个尚未命名基因),表达下调4 个(包括Oc90、Tagln、Arxes2 和Olr830)。其中Ces1f 为上调最显著的基因。实时荧光定量PCR 验证结果显示,LPS 刺激诱导KC 对Ces1f 基因表达水平上调达23.88倍。结论:LPS 刺激可诱导大鼠原代KC 基因表达谱发生变化。其中,Ces1f 基因的上调表达最为显著。     

生物免疫刺激剂对大鼠肝大颗粒淋巴细胞抑肝癌细胞增殖的影响

为从大鼠肝分离出高纯度的大颗粒淋巴细胞，以干扰素、卡介苗或二者联合处理ＬＧＬ，用＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定期对ＬＧＬ抑人肝癌细胞增殖作用的影响。结果显示：（１）分离肝ＬＧＬ电镜观察，细胞直径１０－１６μｍ，细胞表面有少量微绒毛，核多呈肾形或有切迹，胞质内可见数量不等的高电子密度颗粒。（２）ＬＧＬ对人肝癌细胞有自然抑增作用，抑制率为２７．３％，免疫刺激剂可增强ＬＧＬ的抑肝癌细胞增殖作     

GDNF和HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞Bcl-2表达的影响

为了进一步探索治疗神经系统损伤的新途径 ,本研究用传代培养的骨骼肌卫星细胞加入胶质细胞源性神经营养因子(GDNF )和单纯疱疹病毒介导的 GDNF(HSV-GDNF) ,取培养 2、4、8、16、2 4、48、72 h的细胞进行 Bcl-2单克隆抗体的免疫组织化学反应 ,观察了 GDNF和 HSV-GDNF对体外培养发育的大鼠骨骼肌卫星细胞 Bcl-2表达的影响。结果发现 :GDNF、HSV-GDNF组的肌卫星细胞 Bcl-2表达较对照组明显增强 ,细胞存活数量高于对照组 ,但 GDNF组、HSV-GDNF组两组之间无显著性差异。提示 :GDNF、HSV-GDNF可促进骨骼肌卫星细胞的增殖、分化 ,并对其发育有保护作用     

大鼠脑组织细胞培养的形态学观察

为观察原代培养 SD大鼠大脑组织 ,包括神经干细胞在内的各种细胞的形态 ,取新生大鼠 ,无菌操作下取出整个大脑 ,制备成单细胞悬液 ,接种培养 ,免疫细胞化学鉴定各类细胞的同时用光镜和扫描电镜对不同阶段和种类的细胞进行形态学观察。结果显示 :在体外培养出神经元、胶质细胞和神经干细胞 ;神经细胞在体外的发育时程跟体内基本一致 ,神经干细胞在体外 2 0 d左右分化成熟 ,获取了神经细胞和干细胞体外培养的光镜和扫描电镜形态。结果提示 ,成体神经细胞体外分离、培养的条件关键点在于尽可能贴近自然 ,由此可保证细胞培养的质量 ,获得可靠的神经干细胞、神经元和胶质细胞。为各类神经细胞提供了形态学资料。     

移植新生大鼠顶盖或坐骨神经对受损视网膜节细胞影响的研究

实验将新生大鼠脑顶盖或坐骨段分别移植到成年大鼠受损的视神经断端或眼玻璃体内，动物存活率４周后取视网膜，切片，Ｎｉｓｓｌ染色，显微镜观察，并用计算机图像分析仪部分视网膜节细胞体截面积进行测量和统计学处理。     

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养大鼠脊髓运动神经元划伤后Bcl-2表达的影响

为检测大鼠肌源神经营养因子对体外培养大鼠脊髓运动神经元划痕损伤后 Bcl-2表达的影响 ,本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取出肌源神经营养因子。在胎鼠脊髓运动神经元培养第 7d时将其随机分成对照组和实验组 (成鼠组和乳鼠组 ) ,取 10 0μl肌源神经营养因子 ( 0 .1μg/ ml)加入实验组 ,对照组加入等量的 PBS,同时进行划痕损伤。损伤后第 3d计数各组存活的运动神经元 ,行 Nissl染色和免疫组化反应 ,计数 Bcl-2免疫反应 ( Bcl-2 -IR)阳性神经元数量 ,并在图像分析仪上对 Bcl-2 -IR阳性神经元作光密度分析。结果发现 ,损伤后第 3d,实验组运动神经元存活数 ,Bcl-2 -IR阳性神经元数和平均光密度均明显高于同期对照组 ,而乳鼠肌源神经营养因子组功效优于成鼠肌源神经营养因子组。结果提示 ,大鼠肌源神经营养因子对体外培养的受损运动神经元具有增强 Bcl-2表达、减少凋亡和损伤修复等作用 ,且乳鼠的此因子效能尤佳     

肌源性神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时Bcl-2表达的影响

为证明大鼠肌源性神经营养因子对损伤神经的保护作用 ,本文观察了此因子对缺氧时体外培养的大鼠脊髓运动神经元Bcl-2表达的影响。本实验从成鼠和乳鼠骨骼肌中提取肌源性神经营养因子 ,取 10 0μl (0 .1μg/ml)加入培养的胚胎大鼠脊髓运动神经元的培养液中 ,对照组加入等量的 PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤 ,3 d后行 Nissl染色和免疫组化反应 ,观察和计数大鼠脊髓运动神经元存活数以及 Bcl-2免疫反应阳性神经元数 ,并对 Bcl-2阳性神经元作平均光密度分析。结果发现 :经成鼠和乳鼠肌源性神经营养因子孵育的脊髓运动神经元缺氧后的神经元存活数、Bcl-2阳性神经元数以及平均光密度均明显高于对照组 ,但乳鼠肌源性神经营养因子的效果更好。提示 :大鼠肌源性神经营养因子能增强缺氧时脊髓运动神经元 Bcl-2的表达 ,抑制缺氧后运动神经元的死亡 ,以乳鼠肌源性神经营养因子的效果为最好     

肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧时p53表达的影响

本研究目的是观察缺氧时肌源神经营养因子(MDNF)对体外培养的大鼠脊髓运动神经元p53蛋白表达的影响。从成鼠和胎鼠骨骼肌中提取MDNF。在胎鼠脊髓运动神经元培养第7 d时将其分成对照组和实验组(包括成鼠MDNF组和胎鼠MDNF组),取100μl MDNF(0.1μg/ml)加入培养大鼠脊髓运动神经元的培养液中,对照组加入等量的PBS。然后用液体石蜡封闭液面造成神经元缺氧损伤,缺氧3 d后,应用Nissl染色、原位末端标记、免疫组化方法,对损伤的大鼠脊髓运动神经元进行检测。结果表明:培养的大鼠脊髓运动神经元缺氧3 d后,经MDNF孵育可使脊髓运动神经元TUNEL、p53表达均较对照组明显减弱,神经元损伤程度减轻,神经元存活数明显高于对照组,且胎鼠MDNF的效果更好。提示:大鼠脊髓运动神经元缺氧后可出现神经细胞凋亡,但胎鼠MDNF较成鼠MDNF更能减弱缺氧时脊髓运动神经元p53的表达,抑制缺氧后神经元的死亡。