自体表皮细胞悬液在修复皮肤组织缺损创面中的作用研究

目的:探讨自体表皮细胞悬液在修复皮肤组织缺损创面的作用。方法:在20只大鼠身上分别取邮票大小自体全厚皮片进行消化,分离成单个表皮细胞的悬液;经传代培养后,使用自体表皮细胞悬液分别对20只大鼠背部表皮皮肤缺损创面进行覆盖移植,术后观察移植物成活率和植皮区收缩率,同时取移植物进行组织学观察;并与对照组20只自体愈合创面进行相互比较。结果:表皮细胞悬液移植后1周渐融合成片,伤口愈合;经6周后,伤口平整,轻度瘢痕愈合。而对照组在6周时伤口不平整,呈瘢痕愈合,色素沉着明显。结论:在表皮缺损创面上应用体外培养的自体表皮细胞悬液移植修复可达到重构皮肤的目的。     

自体表皮细胞悬液促进大鼠Ⅲ度烧伤创面愈合效果研究

目的:探讨自体表皮细胞悬液促进Ⅲ度烧伤创面愈合的机制。方法:应用切削皮法结合胰蛋白酶技术获得自体表皮细胞悬液,皮下注射到Ⅲ度烧伤创面基底后观察大鼠Ⅲ度创面愈合率和创面愈合效果。结果:实验组自体表皮细胞悬液制作整个过程约1h内即可完成。实验组2和3周创面愈合率明显高于对照组(P0.01,P0.05)。实验组4周创面愈合后颜色和质地均明显优于对照组(P0.05)。结论:改进的自体表皮细胞悬液技术可操作性强,具有快速、简便、经济等优点,是治疗Ⅲ度烧伤创面的良好方法,其主要机制是表皮细胞去分化促进皮岛形成。     

胶原在烧伤创面的应用

胶原膜可加速Ⅱ度烧伤创面及供皮区创面的愈合；促进体外培养的表皮细胞分化、增殖；与其它材料结合，用于Ⅲ度烧伤切创面，具有减轻创面愈合后的收缩和疤痕增生等优点。     

角朊细胞与创面愈合

烧伤是以皮肤及软组织损伤为主要特点的外伤 ,创面愈合的速度及质量是评价治疗水平高低的惟一可靠指标。在创面愈合过程中起主导作用的细胞是表皮细胞 ,它包括角朊细胞、黑色素细胞、朗格罕细胞及未分型树突状细胞 ,其中角朊细胞在数量上占绝大多数[1] 。因此 ,烧伤创面愈合的关键在很大程度上取决于角朊细胞的功能[2 ] 。一、角朊细胞培养1.历史 :2 0世纪 5 0年代 ,随着组织培养技术的迅速发展 ,角朊细胞的培养也进入了新阶段 ,Ｂｉｌｌｉｎｇｈａｎ和Ｒｅｙｕｏｌｄ用胰酶分离角朊细胞获得成功 ,Ｃｒａｉｃｋｓｈａｎｋ实现了在体外培养角…     

毛乳头细胞和表皮细胞构建带附属器的组织工程皮肤

目的根据毛囊形成原理,以人毛乳头细胞和表皮细胞为种子细胞,构建带附属器的组织工程皮肤替代物。方法分实验组和对照组,实验组皮肤替代物真皮层接种人毛乳头细胞和表皮细胞;对照组真皮层不接种任何细胞。在裸鼠背部作一圆形全层皮肤缺损,将两组皮肤替代物气-液界面培养5 d后移植到裸鼠背部。观察创面愈合情况,并在移植后第4、6、8周取材,进行组织学观察。结果皮肤替代物移植后2周,实验组创面已完全愈合,移植后4周对照组创面才完全愈合,并且对照组创面收缩比实验组明显。移植后6周,实验组真皮层内见到毛囊样结构和皮脂腺结构,对照组未见毛囊样结构和皮脂腺样结构。结论将人的毛乳头细胞和表皮细胞共同种植在皮肤替代物的真皮层,可以构建出带附属器的组织工程皮肤替代物,这种替代物对创面的修复能力更强。     

不同接种密度对人表皮细胞培养融合的实验研究

目的:研究不同密度接种对人表皮细胞体外培养融合的影响。方法:外科切取无菌皮肤或包皮环切手术标本,经两步酶消化处理后,制备单个表皮细胞悬液。以不同细胞密度接种于含有3T3滋养细胞的培养瓶中,实验室体外原代培养扩增。结果:观察不同接种密度表皮细胞的体外培养增殖,结果表明人表皮细胞具较高的生长、增殖、融合能力。2×106cell/75cm2培养瓶密度接种人表皮细胞于含3T3滋养细胞培养瓶中,表皮细胞贴壁良好,细胞融合时间较短。结论:鼠3T3细胞能促进人表皮细胞贴壁,仍不失为较好的表皮细胞培养滋养层。适宜的表皮细胞接种密度为2×106cell/75cm2培养瓶。     

人表皮细胞与无细胞异种真皮复合移植的实验研究

目的 观察人表皮细胞与无细胞异种真皮复合移植全层皮肤缺损创面后的效果,寻找一种新的创面覆盖物。方法 42只裸鼠作背部全层皮肤缺损创面,分别进行复合皮移植（复合皮组）和单纯表皮细胞膜片移植（对照组）,术后定期观察创面愈合情况并进行创面愈合率及创面收缩率的计算,同时留取创面组织进行组织学检查。结果 与对照组相比较,复合皮组的创面愈合及外观情况良好,两组创面愈合率及收缩率的差异有显性意义（P＜0．05）;组织学检测提示复合皮上皮分化充分,胶原增生有序,表皮－真皮连接结构重建明显,未见明显的急性期免疫排斥反应。结论 人表皮细胞与无细胞异种真皮复合移植能改善创面愈合质量,可作为一种新的皮肤代用品。     

自体表皮细胞-纤维蛋白膜创面移植治疗大鼠烧伤

目的：观察自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植到大鼠烧伤创面治疗皮肤缺损的效果。方法：健康Wistar大鼠20只,随机分成烧伤皮肤缺损造模组和自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植治疗组,治疗后计算表皮细胞在纤维蛋白膜上最佳接种密度,观察移植后的各组创面愈合情况、创面伤口的收缩比例等。结果：在纤维蛋白膜上接种表皮细胞的最佳密度为5×10^4／cm2,烧伤皮肤缺损造模组创面完全愈合时间平均22．3d,自体表皮细胞-纤维蛋白膜移植治疗组为18．1d,造模组创面收缩率为（70±5）％,移植组为（20±5）％（均P〈0．05）。结论：自体表皮细胞-纤维蛋白膜可用于覆盖大面积烧伤造成的皮肤缺损,预防创面伤口瘢痕化的形成,减轻创面收缩率,加速皮肤缺损创面的愈合速度。     

皮肤磨削术联合表皮细胞膜片治疗稳定期白癜风疗效观察

目的:观察皮肤磨削术联合应用表皮细胞膜片治疗稳定期白癜风的疗效,探讨治疗稳定期白癜风的有效治疗方式。方法:在术前2~3周,切取稳定期白癜风患者耳沟后0.5cm2皮肤,进行表皮细胞的分离、培养,制成表皮细胞膜片,色素脱失部位行皮肤磨削术达创面呈点状渗血,覆盖表皮细胞膜片,愈邦及无菌敷料包扎固定,直至外层敷料逐渐脱落,创面愈合。结果:所有患者创面均一期愈合,无感染等并发症发生,后期色泽明显改善,接近周围正常皮肤,未出现瘢痕增生或挛缩。结论:皮肤磨削术联合应用表皮细胞膜片治疗部分稳定期白癜风创面愈合快,后期色泽等整体改善明显,瘢痕增生不明显。     

胎鼠表皮干细胞的分离培养及毛囊再生研究

目的：分离培养胎鼠的表皮干细胞及毛囊乳头层细胞，通过动物模型观察两者复合移植后，上皮形成及毛囊的再生情况。方法：采用IV型胶原分离培养胎鼠表皮干细胞，检测β1整合素及角蛋白15的表达水平，测定其细胞周期及克隆形成率（以角质细胞为对照）；分离培养毛囊乳头层细胞，并接种在纤维蛋白胶中，与表皮干细胞膜片复合形成全层皮肤等同物，移植在裸鼠全层皮肤缺损创面作为实验组，同时将胎鼠成纤维细胞替代乳头层细胞作为对照组，8－10周后观察创面及囊的组织学变化。结果：胎鼠表皮干细胞表达高水平的β1整合素及角蛋白15；细胞周期分析显示，G1期细胞百分率为94．9％，S期为3．5％，提示为慢循环细胞周期；角质细胞的G1期细胞有百分率为74．1％，S期为17．5％；表皮干细胞的克隆形成率为15．3％，明显高于对照组的6．7％；裸鼠创面愈合后8－10周，实验组可见新生毛囊形成，对照组未见到此现象。结论：能初步实现对胎鼠表皮干细胞的体外分离培养；在毛囊乳头层细胞的诱导下，胎鼠表皮干细胞可参与形成新的毛囊结构。     

表皮干细胞活性复合皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损

目的用表皮干细胞和成纤维细胞作为种子细胞，研制一种增殖能力强具有表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法从幼儿包皮中分离表皮干细胞，用胶原Ⅳ纯化、富集表皮干细胞，接种在3T3细胞滋养层上，将体外传代培养的表皮干细胞和真皮成纤维细胞分别接种在经冷冻干燥及戊二醛交联的I型胶原基质网架的两侧，在液面下培养2周后，改为气-液界面培养，构建复合皮肤，移植到裸鼠全层皮肤缺损处，以表皮细胞胶原海绵复合皮肤和无细胞接种的胶原海绵膜作为对照。术后进行大体观察，在第7、14、21天取材行组织学、免疫组织化学及电镜观察。结果用表皮干细胞构建的复合人工皮肤增殖能力强，新生的皮肤瘢痕轻，形态满意，创面愈合的速度和质量均优于对照组。结论在胶原海绵上用表皮干细胞构建的复合人工皮肤增殖能力强，较好地解决了种子细胞的老化问题，可望成为一种较为理想的皮肤替代物。     

EndoA基因真核表达载体构建及其对皮肤表皮细胞的作用

瘢痕组织是人体创伤修复过程中的一种自然产物。然而，胚胎皮肤却具有创伤后无瘢痕愈合的能力。近年来研究发现无瘢痕愈合是胚胎皮肤固有的特性。我们通过构建真核表达载体pcDNA3．1／EndoA,并转染小鼠皮肤表皮细胞，研究EndoA对成鼠皮肤表皮细胞的作用。     

人表皮干细胞的体外分离和培养

目的:建立人表皮干细胞的体外分离和培养体系的方法,探索表皮干细胞体外大量扩增的途径.方法:采用0.375%的DispaseⅡ和0.05%胰蛋白酶二步酶消化法从小儿包皮中分离表皮细胞,采用MTF法筛选表皮细胞基础培养基和表皮细胞生长因子(epidermal growthfactor,EGF)的最适浓度,建立表皮干细胞培养的干预体系.逐日观察培养的细胞呈表皮干细胞样的形态,免疫组化方法检测β1整合素和角蛋白19的表达.结果:以表皮细胞数量和活性作指标,不同浓度EGF干预条件细胞活性不同,以15 ng/mL EGF的无血清SFM培养液为最适培养液,可使细胞呈表皮干细胞克隆样生长,β1整合素和角蛋白19表皮干细胞活性表达呈阳性.结论:采用0.375%的Dispase Ⅱ和0.05%胰蛋白酶二步酶消化法从小儿包皮中分离表皮细胞,以15 ng/mL EGF的无血清SFM培养液培养,此方法是一种简便、快速、经济的表皮干细胞分离和培养的方法.     

毛囊干细胞与创面愈合研究进展

目前临床上广泛借助各种技术,包括自异体皮,培养的皮肤细胞和胶原基质制作组织工程皮肤等,用以治疗溃疡、创伤以及大面积烧伤.创面愈合除表皮覆盖外,另一问题就是皮肤附件结构的重建.     

以胶原海绵为载体培养的人表皮细胞移植

目的：将体外培养的人表皮细胞接种到胶原海绵上,构建一种表皮替代物,移植到鼠创面后研究观察皮肤的再生,方法：将手术切下的包皮经中性蛋白酶分离表皮,真皮,再经胰蛋白酶消化制成表皮细胞悬液,移入培养瓶中培养,将处于对数生长期的人表皮细胞直接接种到培养皿中的胶原海绵 ,再加上表皮细胞液培养3天后,移植到裸鼠全层皮肤缺损的创面上,以单纯无接种细胞的胶原海绵作为对照,并进行组织学,免疫组织化学及电子显微镜观察。结果：这种表皮替代物移植到创面后,表皮细胞继续增殖分化,形成一层新生表皮,与对照组相比,创面闭合早且收缩程度小,表皮成熟早且分层较多,基底膜形成较早,表皮下胶原纤维较少。结论：体外培养的表皮细胞能在胶原海绵上生长,移植到创面上后,该细胞可自动移行到创面并形成多层表皮结构,抑制创面收缩,可用于修复皮肤缺损。     

皮肤 γδT细胞各亚群在创面再上皮化过程中的调控作用及其相关机制

再上皮化过程是决定皮肤创面愈合进程的核心环节之一。表皮干细胞增殖分化形成新生表皮组织是再上皮化的组织学基础,而表皮干细胞—前体细胞—终末细胞这一细胞分化过程顺利进行是新生表皮组织不断形成的细胞学基础。表皮干细胞增殖及分化为前体细胞是新生表皮组织增殖潜力的决定因素,而前体细胞扩增及分化为终末细胞是决定新生表皮组织形成速度...     

无细胞异种真皮与表皮细胞悬液复合移植的研究

目的　研究用无细胞异种真皮与表皮细胞悬液复合移植的效果及组织学变化。方法　将 4 2只裸鼠分为实验组及对照组 ,实验组于背部全层皮肤缺损创面移植无细胞异种真皮及人表皮细胞悬液 ,对照组单纯移植人表皮细胞悬液。于术后 2、3和 5周计算创面愈合率 ,术后 3、6和 12周计算创面收缩率 ,并取活检行组织学检测。结果　实验组创面愈合率高 ,分别为 79.1%± 4 .5 % ,89.6 %± 4 .4 % ,98.1%± 3.4 % ,收缩程度轻为 16 .3%± 5 .2 % ,2 5 .5 %±7.2 % ,32 .5 %± 7.1% ,外观平整 ,质地良好 ,胶原纤维排列整齐 ,基底细胞桥粒 -半桥粒结构及基底膜等结构重建明显 ,未见明显的急性排斥反应 ;对照组创面愈合率分别为 6 9.2 %± 4 .9% ,78.2 %± 7.6 % ,90 .6 %± 5 .0 % ,收缩率为2 0 .5 %± 6 .0 % ,31.3%± 6 .9% ,4 4 .6 %± 7.2 % ,与实验组相比 ,均有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,愈合后的表皮质地薄 ,易破溃 ,胶原纤维紊乱 ,表皮 -真皮连接结构重建不明显。结论　无细胞异种真皮与表皮细胞悬液复合移植修复创面 ,可改善创面愈合质量。     

正常皮肤和瘢痕组织表达β1整和素与系列角蛋白特征的比较性研究

目的采用特殊染色法研究幼儿与成人大面积重度烧伤后瘢痕组织表皮细胞表达β1整和素和角蛋白19、14以及10的特征与规律,并在此基础上确定表皮干细胞及短暂扩充细胞分布、数量的差异以及这些改变与瘢痕愈合关系.方法分别取幼儿及成人健康皮肤与大面积深度烧伤后瘢痕组织.采用免疫组化方法检测表皮干细胞、短暂扩充细胞特异表达β1整和素和角蛋白19(K19)以及分化表皮细胞表达的角蛋白14与10(K14、K10).结果瘢痕组织表皮基底层表达β1整和素与K19的阳性细胞数较健康皮肤明显减少,阳性强度降低.瘢痕组织表皮中表达K14的阳性细胞仅位于表皮底部2～3层,明显少于健康皮肤,而K10表达阳性细胞则较健康皮肤分布广泛.结论实验结果提示,瘢痕组织表皮基底层具有增殖能力的表皮干细胞和短暂扩充细胞明显少于健康皮肤,且瘢痕组织表皮干细胞的分化过程与健康皮肤不同,处于有丝分裂后细胞阶段的细胞比例降低,而终末分化细胞的比例明显增高.提示瘢痕组织表皮的增殖能力下降,细胞的分化行为紊乱,这可能是瘢痕组织表皮结构与功能改变、愈合能力下降的原因之一.     

人表皮细胞无血清培养的实验研究

以ＩＭＤＭ为基础，补充戴氏无血清培养基血清代用品、表皮生长因子（ＥＧＦ）、牛垂体提取物（ＢＰＥ）、乙醇胺（Ｅｔｈａ），组成ＣＳＦＭ无血清培养系统培养人表皮细胞。动态观察人表皮细胞在该培养体系中的生长增殖过程和特点，用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定人表皮细胞代谢活性，同时观察过氧化氢酶对表皮细胞ＤＮＡ合成的影响。结果表明：人表皮细胞生长良好，增殖稳定，其生长增殖过程和特点与有血清培养方法相近似。透射电镜观察证实有张力原纤维和桥粒结构。过氧化氢酶对表皮细胞的ＤＮＡ合成具有明显的促进作用（Ｐ＜０．０１），呈剂量效应关系。认为本培养体系适用于对表皮细胞生物学特性的精细研究，但仍需进一步改进和提高。     

大鼠浅Ⅱ度烫伤创面表皮生长因子受体的表达

浅Ⅱ度烫伤创面愈合主要涉及表皮角质细胞迁移、增殖和分化。生长因子等多种因素调控着上皮细胞的生物学行为 ,从而完成创面修复 ,其中以表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor ,EGF)尤为重要。EGF是表皮角质细胞的化学性趋化因子和特异性促有丝分裂原 ,必须通过与相应受体———表皮生长因子受体 (EGFR)结合 ,才能在愈合过程中发挥其生物学活性。目前关于创面愈合过程中内源性EGF表达水平及其促愈作用的报道较多 ,但关于内源性EGFR表达水平的研究却鲜见报道。本文采用免疫组化技术和图像分析技术 ,从蛋白质水平上动态观察了浅Ⅱ度烫…