五味子乙素对过氧化氢损伤心肌细胞的保护作用

目的 探讨五味子乙素对氧化损伤心肌细胞的保护作用.方法 体外培养乳鼠心肌细胞,待细胞生长至接近汇合状态分为空白对照组、氧化损伤组、溶剂对照组、槲皮素对照组、五味子乙素低、中、高浓度组.将500 μmol/L过氧化氢(H2O2)作用于加入槲皮素及不同浓度五味子乙素(5、25、50 μmol/L)预培养6h的心肌细胞,继续培养18 h,测定乳酸脱氢酶(LDH)、谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定心肌细胞抑制率,用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率.结果 与空白对照组比较,氧化损伤组MDA、LDH含量明显升高,GSH-Px活性明显下降,细胞抑制率和凋亡率明显增加.五味子乙素呈剂量依赖性降低H2O2对心肌细胞活性的影响,降低MDA (nmol/L)、LDH (U/L)含量,提高GSH-Px (U/mg)活性,并能显著降低细胞抑制率和细胞凋亡率,且以高浓度组最为明显[MDA:6.01±0.36比13.78±0.21,LDH:61.0±5.7比168.0±6.9,GSH-Px:532.90±9.70比59.50±7.41,细胞抑制率:(22.4±5.2)％比(59.7±7.9)％,细胞凋亡率:(17.6±3.8)％比(41.6±5.1)％,均P＜0.01].结论 五味子乙素可保护和修复H2O2诱导的心肌细胞损伤,其作用可能与抗氧化、提高细胞GSH-Px活性、抑制细胞凋亡有关.     

五味子乙素对小鼠肿瘤模型多药耐药基因表达的影响

目的 观察五味子乙素对以低剂量多柔比星诱导建立的多药耐药的S180细胞的克服作用,探讨五味子乙素克服肿瘤耐药患者可能性.方法 对接种腹水型S180细胞的小鼠反复低剂量应用多柔比星,应用流式细胞术动态检测MDR表达情况,比较五味子乙素使用与否MDR表达的差异.结果 五味子乙素降低肿瘤细胞耐药基因表达产物P-gp的过度表达,增加耐药S180细胞的凋亡.结论 五味子乙素具克服肿瘤化疗后多药耐药的效应.     

五味子乙素对甲状腺功能亢进性心肌病大鼠的影响

目的 探讨五味子乙素（SchB）对甲状腺功能亢进性心脏病（HHD）大鼠心肌细胞凋亡及心肌功能的影响,为SchB对心肌细胞凋亡及心肌功能的干预机制提供理论依据。方法 30只11周龄雄性（SD）大鼠,除了对照组（CON组）,甲亢模型组（HHD组）及SchB药物干预组（HHD+SC组）建立HHD大鼠模型,SchB药物干预组以SchB稀释剂[80 mg/（kg·d）]灌胃。对各组行速度向量成像技术（VVI）分析;ELISA检测血清TT3、TT4、NT-proBNP和NF-κB水平;TUNEL染色观察心肌细胞凋亡情况;利用Western blot法检测样本中NF-κB的表达,电子显微镜观察左室心肌样本的组织细胞。结果 与CON组相比,HHD组收缩、舒张期峰值速度（Vs、Vd）、峰值应变（Smax）及收缩、舒张期峰值应变率（sSRr、dSRr）均降低（P <0.01）;血清TT3(P <0.01)、TT4(P <0.01)、NT-proBNP(P <0.05)及NF-κB(P <0.01)含量增高;TUNEL阳性颗粒数目显著增多;Western blotting检测N...     

不同浓度五味子乙素对脑胶质瘤SHG-44细胞增殖的影响

脑肿瘤发病率目前在全球范围内呈上升趋势,脑肿瘤中以胶质瘤最为常见,恶性胶质瘤是肿瘤患者的第4位死亡原因,具有发病率、复发率、死亡率高和治愈率低＂三高一低＂的特点。研究表明,五味子具有保肝、抗肿瘤、抗氧化与抗衰老等作用,但目前对于五味子的研究都主要集中在保肝作用方面,     

五味子乙素增强乳腺癌小鼠对紫杉醇敏感性的实验研究

目的:探讨五味子乙素能否增强乳腺癌小鼠对紫杉醇(PTX)的敏感性.方法:将BALB/c小鼠50只随机分为5组:正常(NC)组、模型对照(MC)组、紫杉醇(PTX)组、五味子乙素(Sch B)组、五味子乙素+紫杉醇(Sch B+PTX)组.Sch B 10 mg/kg,腹腔注射,每日1次;PTX 10 mg/kg,腹腔注射,隔日1次.给药22 d,以体重、肿瘤体积、肿瘤生长抑制率及脏器指数为观察指标.结果:PTX组、Sch B+PTX组的体重,与MC组比较,均从给药第7天开始下降且均具有统计学差异;Sch B+PTX组与PTX组比较,体重略有增长,但无统计学差异.PTX组的肿瘤生长抑制率为15.7％,Sch B+PTX组为25.9％.PTX组和Sch B+PTX组,与MC组比较,脾脏指数均降低(P=0.008;0.000);Sch B+PTX组与PTX组比较,脾脏指数有降低趋势,但无统计学差异.Sch B+PTX组与PTX组比较,胸腺指数和肾上腺指数均较大(P=0.000;0.011).结论:Sch B和PTX联用,可增强PTX抗肿瘤作用,并减轻PTX对小鼠的副作用.     

五味子乙素对顺铂所致小鼠急性肾损伤的干预作用

目的 观察五味子乙素(Sch B)对顺铂所致急性肾损伤(AKI)小鼠的干预作用及可能机制.方法 将25只BALB/c小鼠按随机数字表法分为空白对照组、模型组以及高、低剂量Sch B干预组和Sch B对照组.高、低剂量Sch B干预组灌胃Sch B橄榄油20 mg/kg或100 mg/kg;Sch B对照组灌胃Sch B橄榄油 100 mg/kg;空白对照组和模型组灌胃等体积橄榄油;各组均连用5 d.实验第3天模型组和高、低剂量Sch B干预组单次腹腔注射顺铂 20 mg/kg复制小鼠AKI模型;空白对照组与Sch B对照组腹腔注射1 mL/kg生理盐水.实验结束后测定血肌酐(SCr)水平;用原位末端缺刻标记法(TUNEL)检测肾小管上皮细胞凋亡情况;苏木素-伊红(HE)染色观察肾小管上皮细胞形态变化,并进行肾小管损伤评分;用免疫组化法检测肾组织中p53蛋白含量;蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测肾组织p53蛋白表达.结果 与空白对照组比较,模型组SCr (μmol/L:86.77±10.97比14.37±0.81)、肾小管损伤评分(分:9.67±1.20比1.00±0.45)、肾小管上皮细胞凋亡数(个/200倍视野:20.00±2.13比2.30±0.40)均升高(P<0.05或P<0.01),p53蛋白含量(个/400倍视野:13.40±2.66比57.30±3.82)、p53蛋白表达〔吸光度(A值)比值:0.79±0.09比1.42±0.09〕均降低(均P<0.01).与模型组比较,高、低剂量Sch B干预组SCr(μmol/L:21.98±5.52、37.45±5.04)、肾小管损伤评分(分:5.67±0.76、6.17±0.65)、肾小管上皮细胞凋亡数(个/200倍视野:10.60±1.05、11.60±1.45)均下降(均P<0.01),p53蛋白含量(个/400倍视野:42.40±3.67、45.90±2.31)、p53蛋白表达(A值比值:1.36±0.16、1.25±0.11)均升高(均P<0.01).HE染色显示:模型组肾小管上皮细胞出现融合、空泡变性、蛋白管型,肾小管腔萎缩或扩张等病理表现;高、低剂量Sch B干预组肾组织病理改变较模型组减轻.结论 Sch B对顺铂所致AKI有保护作用,其机制可能与其降低SCr和p53蛋白表达水平,抑制肾小管上皮细胞凋亡有关.     

冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及β-catenin表达水平的影响

目的:探讨冬凌草乙素对U937细胞的生长抑制作用及其作用机制.方法:以不同浓度的冬凌草乙素作用于体外培养的U937细胞,MTF法检测细胞生长抑制率,应用hoechst 33258荧光染色法观察细胞凋亡;采用RT-PCR对细胞凋亡前后β-catenin的表达水平进行检测.结果:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.在冬凌草乙素抑制细胞增殖过程中β-catenin的表达水平显著下降.结论:冬凌草乙素能抑制U937细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,降低β-catenin的表达水平可能是其重要作用机制之一.这为冬凌草乙素抗白血病的进一步研究提供了有力的实验依据.     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的：观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢（H2O2）PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法：实验于2005—08／2006—07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中，加入2．5，5，10，20μmoL／L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲，与细胞培养24h，然后加入0．1，0．2，0．3，0．5mmol/L不同浓度过氧化氢（H2O2）溶液，37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2；正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化，四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率，用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性，按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果：①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响：倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后，细胞形态学发生变化，表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞，状态明显改善，细胞数目较多，而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响：PC12细胞经0．1，0．2，0．3，0．5mmol／L不同浓度H2O2处理30min后，与正常对照组相比，四甲基偶氮唑盐法测定其生存率，分别降低了4％，13％，40％，57％，（P〈0．05或P〈0．01）。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲（25～20mnoL／L）均能提高细胞的生存率，并呈浓度依赖关系．浓度为5，10，20μmol／L时，与模型组比较，具有明显的差异（P〈0．05或P〈0．01），特别是10μmol／L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响：用0．3mmol／LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组（P〈0．01）。大量的DNA被损伤，与正常对照组比较，差异有显著性（P〈0．01）。细胞与10．0μmol／L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组（P均〈0．01）。DNA损伤明显抑制，与模型组比较，差异有显著性（P均〈0．01）。结论：五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基．减轻其对DNA的损伤等方面实现的。     

内毒素血症小鼠巨噬细胞膜脂质改变对炎症介质产生的影响

目的 研究LPS及磷脂脂质体对小鼠腹腔巨噬细胞膜脂质成分，膜流动性及细胞分泌炎症因子的影响。方法 以小鼠内毒素血症为模型目的。结果 发现LPS作用lh，巨噬细胞膜主要的磷脂成分显降解；细胞膜荧光偏振度(ρ)、微粘度(η)和分子排列有序性系数(γ)显增加；培养细胞上清中炎症因子TXB2，6—κ—PGHlα含量明显增加。且随时间延长，各损伤程度加重。结论 经磷脂脂质体预处理后，膜损伤及炎症损伤减轻。     

五味子乙素和五味子醇甲对PC12细胞氧化损伤的保护作用

目的:观察五味子乙素和五味子醇甲对过氧化氢(H2O2)PC12细胞氧化损伤的保护作用。方法:实验于2005-08/2006-07在首都医科大学附属北京中医医院中心实验室完成。①PC12细胞培养在RPMI1640培养液中,加入2.5,5,10,20μmol/L等不同浓度的五味子乙素和五味子醇甲,与细胞培养24h,然后加入0.1,0.2,0.3,0.5mmol/L不同浓度过氧化氢(H2O2)溶液,37℃作用30min。模型组细胞只加入H2O2;正常对照组只加入等量的培养基。②采用倒置显微镜观察PC12细胞形态学变化,四甲基偶氮唑盐比色法测定细胞生存率,用自动生化分析仪测定乳酸脱氢酶的活性,按试剂盒说明书用慧星法测定细胞内DNA损伤。结果:①五味子乙素及五味子醇甲对PC12细胞形态学的影响:倒置相差显微镜观察到PC12细胞被H2O2损伤后,细胞形态学发生变化,表现为胞体肿胀、突起断裂、细胞膜溶解等。经五味子乙素及五味子醇甲处理后细胞,状态明显改善,细胞数目较多,而且细胞形态较完整。②五味子乙素及五味子醇甲对细胞生存率的影响:PC12细胞经0.1,0.2,0.3,0.5mmol/L不同浓度H2O2处理30min后,与正常对照组相比,四甲基偶氮唑盐法测定其生存率,分别降低了4%,13%,40%,57%,(P<0.05或P<0.01)。不同浓度的五味子乙素及五味子醇甲(2.5～20μmol/L)均能提高细胞的生存率,并呈浓度依赖关系,浓度为5,10,20μmol/L时,与模型组比较,具有明显的差异(P<0.05或P<0.01),特别是10μmol/L五味子乙素及五味子醇甲的作用较强。③五味子乙素及五味子醇甲对细胞内乳酸脱氢酶和DNA损伤的影响:用0.3mmol/LH2O2处理细胞后细胞内乳酸脱氢酶漏出率高于正常对照组(P<0.01)。大量的DNA被损伤,与正常对照组比较,差异有显著性(P<0.01)。细胞与10.0μmol/L五味子乙素及五味子醇甲作用后发现细胞内乳酸脱氢酶漏出率低于模型组(P均<0.01)。DNA损伤明显抑制,与模型组比较,差异有显著性(P均<0.01)。结论:五味子乙素及五味子醇甲均能有效地减轻H2O2对神经细胞的氧化损伤作用。推测保护作用机制是通过清除氧自由基,减轻其对DNA的损伤等方面实现的。     

过表达锌指蛋白A20可抑制肺泡巨噬细胞炎症反应

目的:通过建立A20过表达肺泡巨噬细胞株,研究A20对肺泡巨噬细胞炎症反应的影响及调控机制。方法:构建携带A20基因的慢病毒载体,转染大鼠肺泡巨噬细胞(NR8383),筛选出稳定过表达A20基因的细胞株并行体外培养。向培养基中加入脂多糖(LPS,1μg/mL)进行干预,并于刺激后0.5、1、2、4h收集上清液及细胞。ELISA法测定上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)及核因子κB(NF-κB)活性。Western印迹方法检测A20蛋白及核内p65含量。实时荧光定量PCR法测定A20mRNA含量。结果:LPS刺激后,A20过表达组(A20组)及正常对照组(VEC组)A20蛋白及mRNA含量都升高,并于1h达高峰,之后逐渐下降;且A20组较VEC组A20水平明显升高(P0.05)。与VEC组相比,A20组培养上清液中细胞因子(TNF-α、IL-1β)水平明显降低(P0.05);NF-κB DNA结合活性及核内p65含量也降低(P0.05)。结论:A20能够抑制肺泡巨噬细胞NF-κB活性及TNF-α、IL-1β分泌,进而抑制肺泡巨噬细胞炎症反应活性。     

Lipid-laden macrophage index in healthy canines

BACKGROUND: The quantity of lipids in alveolar macrophages is used clinically as an indicator of aspiration, which is associated with increased lung inflammation. This is determined in the macrophages obtained from bronchoalveolar lavage (BAL) and is expressed as lipid-laden macrophage index (LLMI). Although there is ample data on LLMI in human subjects, there is no published data pertaining to the baseline measures of the LLMI in canines, which are extensively used for experimental studies on gastroesophageal reflex (GER) and airway diseases. Primary aim of the present study was to collect data pertaining to the cytology and LLMI in BAL fluids obtained from healthy dogs. MATERIALS AND METHODS: Eight dogs underwent a bronchoscopy with BAL collection, and esophageal pH monitoring to determine the reflux index (RI). The BAL fluid was processed and reviewed under a microscope to determine the proportions of the various cell types and the LLMI. RESULTS: The median RI among the subjects was found to be 0.6 (0.0, 1.2). The BAL cytology analysis showed 77.5% (71.0, 83.5) macrophages, 21.0 (13.0, 24.5) lymphocytes and 2.5 (1.5, 5.0) neutrophils. The median LLMI was found to be 156 (111, 208). CONCLUSIONS: Although the differential cell counts in the dogs' BAL fluid was comparable to that of other experimental animals and humans, the LLMI was distinctly higher than the corresponding value reported for other species. As LLMI is a valuable modality for evaluation of intrapulmonary pathophysiology, these data on LLMI can be used as a species-specific standard for canine subjects used for experimental studies on GER and airway diseases.     

恶性细胞中巨噬细胞集落刺激因子及其受体的异源表达

业已证明血清M-CSF(可溶性M-CSF)水平在白血病前期、白血病、淋巴瘤、乳腺癌和肝癌患者明显升高,但机制不明。为探讨细胞内M-CSF及其受体表达在病态造血,肿瘤和白血病中的作用,采用RT-PCR和ABC免疫酶标技术,对12名正常人静脉血,21例初诊血液病患者骨髓和6株血源细胞系的M-CSF/M-CSF-R mRNA及抗原表达进行了分析。结果表明M-CSF及其受体的表达呈多态性分布,无论是因子还是受体在白血病患者的粒、单、红、巨核系的细胞膜、质、核呈不同程度的反应,提示其在不同状态和病种作用中的复杂性,值得深入研究。     

巨噬细胞集落刺激因子对巨噬细胞极化及卵巢癌细胞侵袭、转移的影响

目的探讨卵巢癌微环境中巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)促进M2型巨噬细胞的极化和浸润,及其对于癌细胞侵袭、转移的影响。方法选取卵巢癌细胞系A2780和SKOV3与THP-1来源巨噬细胞,在体外构建共培养模型,ELISA和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测培养基中M-CSF含量及其mRNA的表达水平。流式细胞术分析CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞的极化比例。Transwell迁移试验检测2种卵巢癌细胞系与M2型巨噬细胞共培养后侵袭、转移能力的变化。免疫组化染色法检测卵巢癌(52例)及同期卵巢良性肿瘤(18例)石蜡组织切片中M-CSF、CD68~+、CD163~+和E-钙黏蛋白(E-cad)的表达及其相关性,并分析M-CSF与卵巢癌患者临床病理特征的关系。结果 A2780和SKOV3细胞与巨噬细胞共培养后,其上清中M-CSF浓度明显高于2种癌细胞单独培养组(t分别为14.315、12.338,P均0.01)。荧光定量PCR结果显示,升高的M-CSF来源于共培养后卵巢癌细胞的分泌(t分别为29.915、36.826,P均0.01)。CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞在A2780和SKOV3共培养组的极化比例分别为(6.14±0.50)%和(7.32±0.67)%,明显高于单独培养组(1.82±0.34)%,差异有统计学意义(t分别为12.289、12.711,P均0.01)。Transwell试验结果显示,2种卵巢癌细胞共培养后其侵袭能力增强(24.00±4.81 vs 75.20±6.42,t=11.058;18.40±2.31 vs 61.60±9.66,t=7.537,P均0.01)。卵巢癌组织中M-CSF的表达与CD68~+、CD163~+阳性细胞数正相关且均高于对照组(r分别为0.690、0.596,P均0.01),而E-cad阳性表达则与之呈负相关且低于对照组(r=-0.566,P0.01)。M-CSF表达在不同肿瘤FIGO分期、分化程度和淋巴结转移情况组间差异有统计学意义(χ~2分别为6.240、6.612、4.544,P均0.05)。结论卵巢癌微环境中M-CSF的表达升高诱导CD68~+CD163~+M2型巨噬细胞的极化和浸润,进而促进癌细胞的侵袭、转移。     

巨噬细胞炎症蛋白—2在内毒素性急性肺损伤中的作用

目的：探讨巨噬细胞炎症蛋白２（ＭＩＰ２）在内毒素性急性肺损伤（ＡＬＩ）中的可能作用。方法：采用斑点杂交及原位杂交技术对ＡＬＩ大鼠肺组织中ＭＩＰ２ｍＲＮＡ的表达进行定量和定位研究。结果：内毒素性ＡＬＩ时大鼠各时点肺组织ＭＩＰ２ｍＲＮＡ表达量显著高于对照组，且与血浆及肺组织匀浆髓过氧化酶（ＭＰＯ）活性呈正相关（ｒ＝０．７２９，０．８８５，Ｐ均＜０．０５）。原位杂交发现，在ＡＬＩ早期，肺内巨噬细胞是ＭＩＰ２的主要分泌细胞。结论：在ＡＬＩ早期，巨噬细胞释放的ＭＩＰ２可能是ＡＬＩ时多形核白细胞（ＰＭＮ）在肺内大量浸润并激活的原因之一。     

烟雾吸入性损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能与炎症消散关系研究

目的 :探讨烟雾吸入性损伤大鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能与炎症消散关系。方法 :建立大鼠烟雾吸入损伤模型后于伤后 2、6、12、2 4h及 2、3、4、5d各时相点动态观察 (1)肺泡巨噬细胞体外对鸡红细胞吞噬功能 ;(2 )肺泡巨噬细胞体内对凋亡中性粒细胞吞噬功能。结果 :(1)致伤后 2～ 6h肺泡巨噬细胞对鸡红细胞吞噬率、吞噬指数下降 ,12h后逐渐恢复正常 ,2～ 5d仍保持较高的吞噬功能。 (2 )肺泡巨噬细胞对凋亡中性粒细胞吞噬在伤后 2h即开始逐渐升高 ,2 4h达峰值 ,然后逐渐下降。结论 :(1)烟雾吸入伤早期 (2～ 6h)肺泡巨噬细胞吞噬功能受损害 ,然后逐渐恢复正常 ,并保持较高吞噬活性 ,它有利于清除异物、细菌等。 (2 )肺内中性粒细胞发生凋亡 ,然后被巨噬细胞吞噬参与了恢复期肺内炎症消散的过程