幽门螺杆菌vaeA cagA基因亚型与抗生素耐药的关系

[仇军文,胡家露,吴开春,彭道荣,施炳龙,季万胜,樊代明.世界华人消化杂志,2001;9(7):739-742] 目的研究幽门螺杆菌(H.pylori)cagA vacA基因亚型及其与抗生素耐药的关系.方法用琼脂稀释法测定50例H.pylori 临床分离株对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑的最低抑菌浓度(MIC),并计算MIC50和MIC90值.用多重PCR鉴定H.pylori菌株的vacA(sla,slb,s2,ml,m2)及cagA的型别.结果克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑对H.pylori的MIC52和MIC90分别为:＜0.01 6 mg@L-1,0.016 mg@L1;0.016 mg@L-1,0.047 mg@L-1;16.000 mg@L-1,52.000 mg@L :25.140 mg@L -1 ,76.800 mg@L-1.H.pylori菌株对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑,甲硝唑的耐药率分别为0%,0%,20%和38%.在对替硝唑敏感的H.pylori菌株中,vacA sla,slb和s2型分别占50.0%,42.5%和7.5%;vacA ml和m2型占60.0%和40.0%;vacA sla/ml,slb/ml,sla/m2,slb/m2和s2/m2型分别占32.5%,27.5%,17.5%,15.0%和12.5%;cagA-和cagA型为87.5%和12.5%.在对替硝唑敏感的H.pylori菌株中,vacA sla,slb和s2型分别占50.0%,40.0%和10.0:vaccAml和m2型占40.0%和60.0%;vacA sla/ml,slb/ml,sla/m2,slb/m2和s2/m2型分别占20.0%.,20.0%,30.0%.20.0%和10.0%;cagA+和cagA-型为80.0%和20.0%.结论 H.pylori菌株对甲硝唑的耐药率明显高于H.pylori 对克拉霉素,阿莫西林,替硝唑的耐药率,不同cagA vacA基因亚型的H.pylori菌株对替硝唑的耐药率无显著差异. (潘伯荣)     

海口地区胃十二指肠疾病患者幽门螺杆菌vacA基因亚型分析

目的 探讨幽门螺杆菌(H.pylori)vacA基因亚型在海口地区胃十二指肠疾病患者中的分布.方法 从176例胃十二指肠疾病患者胃黏膜标本中分离培养H.pylori,PCR法测定vacA基因亚型.结果 176例患者中的基因型vacAs1 78.98%(139/176),vacAs2 15.34%(27/176),vacAm1 28.41%(50/176),vacAm2 71.59%(126/176);vacA亚型组合形式为:vacAs1/ml 28.41%(50/176),vacAs1/m2 56.25%(99/176),vacAs2/m2 15.34%(27/176),未发现va-cAs2/ml型菌株;消化性溃疡、胃癌、慢性萎缩性胃炎患者H.pylori的vacAs1、vacAm2、vacAs1/m2基因型阳性率高于慢性浅表性胃炎患者(均P<0.01),其余基因型在不同类型疾病中的分布无统计学差异(P>0.05).结论 海口地区胃十二指肠疾病患者H.pylori菌株的优势基因型为vacAs1、vacAm2、vacAs1/m2;在消化性溃疡等严重疾病患者中多见.     

云南汉、白、纳西族人群幽门螺杆菌 vacA基因m混合亚型及iceA基因混合型的致病性研究

目的探讨云南白族、纳西族与汉族幽门螺杆菌（Hpylori）菌株含有vacA基因m混合亚型及iceA基因混合型的感染情况及其致病性。方法选取H．pylori相关慢性胃炎和消化性溃疡患者的胃黏膜,分离培养麒pylori菌株;用PCR方法检测云南白族、纳西族与汉族菌株的vacA基因亚型及iceA基因。结果云南109例Hpylori菌株的混合感染率为32．1％。iceA混合基因亚型的检出率明显高于vacA基因m混合亚型检出率（均P〈0．05）。其中白族混合感染率（67．7％）高于纳西族（20．0％）和汉族（12．1％）（均P〈0．001）;白族中iceA1＋iceA2的混合感染率（61．3％）明显高于纳西族（17.8％）和汉族（9．1％）（均P〈0.001）。云南菌株34例Hpylori混合感染患者中含vacA基因m混合亚型＋iceA混合基因型的混合感染与消化性溃疡有关;只含iceA混合基因亚型的混合感染与慢性胃炎有关。结论不同国家和地区的混合感染率差别很大,云南白族、纳西族与汉族Hpylori菌株含有vacA基因m混合亚型及iceA混合基因型者的混合感染具有多态性。汉族以vacA基因混合亚型来判断混合感染较敏感,白族、纳西族患者中以iceA基因混合亚型判断混合感染较敏感。云南Hpylori菌株含iceA基因亚型和含vacA基因m混合亚型以及白族菌株的vacA基因m区亚型的混合感染与麒pylor致病性有关;以iceA基因混合亚型判断混合感染较敏感。     

Lack of correlation of vacA genotype, cagA gene of Helicobacter pylori and their expression products with various gastroduodenal diseases

目的　研究幽门螺杆菌vacA基因型、cagA基因 ,空泡形成细胞毒素和血清CagA抗体与胃十二指肠疾病的关系。　方法　应用多聚酶链反应方法对 6 2例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定 ;应用Hela细胞方法测定体外空泡形成细胞毒素活性 ;应用酶免疫测定方法检测同一患者的血清CagA抗体。结果　 6 2株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因 ,所有菌株的vacA基因型均为sla/m2型。cagA基因的总阳性率为5 6 4 5 % ;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为 5 5 5 6 %、5 4 17%和6 3 6 4 % (P >0 0 5 )。空泡形成细胞毒素的阳性率为 37 10 % ,慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株表达空泡形成细胞毒素的阳性率分别为 33 33%、2 9 17%和 6 3 6 4 % (P >0 0 5 )。慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者血清CagA抗体分别为 70 37%、79 17%和 4 0 0 0 % (P >0 0 5 ) ,血清CagA抗体的总阳性率为 6 8 85 %。结论　幽门螺杆菌vacA基因型、cagA基因、空泡形成细胞毒素和血清CagA抗体不能预示H pylori感染个体将更可能发生何种类型胃十二指肠疾病。     

PCR方法测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA 基因

目的：建立幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因的PCR测定方法，方法：应用多聚酶链反应方法对62例慢性胃炎，消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定，结果：62株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因，所有菌株的 vacA基因型均为sla/m2型，cagA基因的总阳性率为56．45％，慢性胃炎，消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为55．56％，54．17％和63．64％（P＞0．05），结论：本研究建立的PCR测定幽门螺杆菌vac A基因型和cagA基因方法敏感性高，特异性强。     

镇江地区胃肠病患者幽门螺杆菌vacA基因i、d区分型特点及临床关联

目的：研究镇江地区胃肠病患者感染的幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)的主要毒力因子vacA基因i、d型的分布特点、cagA基因状态,以及与临床结果的相关性。方法：选取快速尿素酶试验和(或)组织学染色H.pylori阳性患者的胃窦活检黏膜,PCR法检测H.pylori cagA基因状态、vacA基因的s、m、i、d区分型。结果: 179例H.pylori患者,2例为混合感染(1.1%,2/179),剔除后,i1、i2亚型分别为96.6%(171/177)、1.1%(2/177);d1、d2亚型分别为98.9%(175/177)、1.1%(2/177);cagA阳性率为97.7%(173/177);s1/m2/i1/d1型为优势基因型(56.5%,100/177),s1/m1/i1/d1型次之(38.4%, 68/177)。s2/m2型与i2、d2型相关(P＜0.05),s1、i1、s1/i1型及cagA阳性均与d1型相关(P均＜0.05)。比较vacA基因的s、m、i、d分型及cagA基因状态在慢性胃炎、消化性溃疡、胃癌中的分布,差异无统计学意义(P 均＞0.05)。结论: 镇江胃肠病患者感染的H.pylori菌株,96.6%表现为i1亚型、98.9%为d1亚型,vacA s1/m2/i1/d1/cagA(+)为优势基因型;幽门螺杆菌基因型之间存在关联;vacA基因型、cagA基因状态与胃肠疾病的分布无相关性。     

黑龙江省幽门螺杆菌黏附素基因babA2与其致病性研究

目的 研究黑龙江省幽门螺杆菌(H.pylori)的毒力因子血型抗原LewisB结合黏附素基因(babA2)与胃十二指肠疾病的关系.方法 自274例黑龙江省胃十二指肠疾病患者胃黏膜活检标本中分离得到64株H.pylori,采用特异引物聚合酶链反应(PCR)对各菌株babA2进行检测.用Fisher精确检验法分析不同胃十二指肠疾病患者中babA2的表达率.结果 64株H.pylori菌株中,25.0%(16/64)的babA2扩增结果为阳性.不同胃十二指肠疾病的患者H.pylori菌株babA2表达率间差别无统计学意义(P＞0.05).结论 黑龙江省H.pylori临床分离株的babA2与其致病性无关.     

西安地区幽门螺杆菌vacA基因型与致病性研究

目的:探讨幽门螺杆菌菌株vacA基因型与上消化道疾病的关系。方法:从胃十二指肠疾病患者的胃粘膜活检组织中分离培养到幽门螺杆菌88株。按标准酚-氯仿抽提法提HP基因组DNA。用PCR扩增反应及鉴定,用卡方检验分析vacA在不同胃十二指肠疾病中幽门螺杆菌的差异。结果:88株幽门螺杆菌中vacA s1/m-的阳性率为17.0%,vacA s1/m2的阳性率为55.7%,vacA s1/m1a+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1a的阳性率为2.3%,vacA s1/m1a+m1b的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b+m2的阳性率为1.1%,vacA s1/m1b的阳性率为17.0%,vacA s2/m2的阳性率为2.3%。结论:西安地区幽门螺杆菌菌株的vacA基因型以s1/m2为主,但vacA各基因亚型均与临床结局无相关性。     

幽门螺杆菌VacA基因型与胃疾病

目的:探讨幽门螺杆菌(H.pylori)VacA基因型在各种胃肠疾病中的分布及关系.方法:从胃十二指肠疾病患者胃粘膜标本中分离培养H.pylori,PCR测定VacA基因型.结果:108株H.pylori菌株,VacA s1a阳性为85株(79%),VacA s1b阳性22株(20%),VacA m1阳性29株(27%),VacA m2阳性77株(71%),VacA s1a/m2阳性66株(61.1%),未发现s2型菌株.其中,慢性胃炎患者VacA s1a阳性率为65.4%(34/52),消化性溃疡患者VacA s1a阳性率为90%(36/40),胃癌患者VacA s1a阳性率为94%(15/16).结论:H.pylori菌株VacA基因型绝大多数为s1a/m2型,该型菌株存在于各种胃肠疾病中,无s2型.     

山西省地区儿童幽门螺杆菌相关毒素的检测及临床意义

目的 探讨不同H．pylori菌株类型与小儿胃十二指肠粘膜疾病的关系，了解本地区儿童感染的H．pylori菌株类型。方法 胃镜下活检及快速尿素酶试验诊断H．pylori感染及观察胃十二指肠粘膜病理变化，用免疫印迹法测定153例H．pylori阳性患儿血清多种H．pylori毒素抗体。结果胃炎患儿Ⅰ型H．pylori菌株为14例（27％），十二指肠球部溃疡患儿Ⅰ型H．pylori菌株为43例（74％），两组检出率比较差异有显著性。CagA抗体阳性者粘膜中重度炎症58例（92％），CagA抗体阳性者粘膜轻度炎症21例（35％），两组检出率比较差异有显著性。结论本地区儿童感染的H．pylori为Ⅰ型和Ⅱ型毒力菌株，CagA抗体阳性能引起胃十二指肠粘膜较重的炎症。     

浙江地区幽门螺杆菌临床菌株vacA优势基因型及其核苷酸序列分析

目的 :了解浙江地区消化性溃疡和慢性胃炎患者感染的幽门螺杆菌 (Hp) vac A优势基因型及其序列特点。方法 :分别从 2 9例消化性溃疡和 34例慢性胃炎患者的胃窦、胃体粘膜组织中分离出 12 6株 Hp。采用聚合酶链反应检测 vac A基因的信号区 (s)和中间区 (m)亚型 ,部分优势基因型的扩增产物 T- A克隆后进行核苷酸序列测定。结果 :所有菌株均扩增出 vac A s区和 m区基因片段 ,发现 s1a/ m1、s1a/ m2、s1a/ m1b、s1a/ m1b- m2 4种基因型 ,其比例分别为 7.1% (9/ 12 6)、61.9% (78/ 12 6)、2 9.4 % (37/ 12 6)、1.6% (2 / 12 6)。 17.5 %患者 (11/ 63)存在不同 vac A基因型Hp菌株混合感染 ,但在胃炎组和溃疡组中的分布差异无显著性 (P>0 .0 5 )。 6株 s1a型 Hp菌株的 s区扩增产物与报道的 s1a型 60 190株核苷酸序列同源性为 93.15～ 94 .86% ,4株 m2型 Hp菌株的 m区扩增产物与报道的 m2型 87-2 0 3株核苷酸序列之间同源性为 93.63～ 97.61%。结论 :s1a/ m2和 s1a/ m1b均是浙江地区消化性溃疡或慢性胃炎患者感染的 Hp菌株的 vac A优势基因型 ,部分优势 vac A基因型菌株的核苷酸序列与国外报道的参考菌株有较高的同源性 ;部分患者同时感染多株不同 vac A基因型 Hp。     

Dominant cagA/vacA genotypes and coinfection frequency of H. pylori in peptic ulcer or chronic gastritis patients in Zhejiang Province and correlations among different genotypes, coinfection and severity of the diseases

Background Almost half of the world’s population suffer from the Helicobacter pylori (H. pylori) infection, but only some individuals develop gastric diseases with clinical symptoms. One reason for the phenomenon may be the different pathogenicity of infected H. pylori strains. The presence of cytotoxin-associated gene A (cagA) and expression of vacuolating cytotoxin activity encoded by vacuolating cytotoxin gene A (vacA) are considered the two major virulent markers of H. pylori. The aim of this study was to detect dominant cagA/vacA genotypes and coinfection frequency of H. pylori in patients with peptic ulceration (PU) or chronic gastritis (CG), and to determine correlations among different cagA/vacA genotypes, coinfection and severity of the diseases. Methods For each of 139 patients in Zhejiang Province who had been diagnosed as PU or CG based on clinical symptoms and gastroscopy, two gastric biopsy specimens (one from antrum and the other from corpus) for H. pylori isolation were taken by two different disinfected biopsy forceps. One hundred and fifty-six H. pylori strains were isolated from both the antrum and corpus biopsy specimens of 78 patients (36 PU and 42 CG). PCRs were performed to detect cagA genes, and signal (s) and middle (m) regions of vacA genes in the H. pylori isolates. The amplified fragments of dominant vacA gene s and m subtypes from representative H. pylori isolates were sequenced after TA cloning. Dominant cagA/vacA genotypes of the H. pylori isolates, coinfection frequency and correlations among the different genotypes, coinfection and severity of the diseases were determined.Results Of the H. pylori strains isolated from the antrum specimens, 96.2% were cagA gene positive, as were 97.4% of the H. pylori strains isolated from the corpus specimens. Only one s region subtype (s1a) and four m region subtypes m1, m2, m1b and m1b-m2 of vacA gene were found. The proportions of vacA gene subtypes s1a/m1, s1a/m2, s1a/m1b and s1a/m1b-m2 in the 83 strains isolated from the antrum specimens were 7.2%, 61.5%, 30.1% and 1.2%, respectively, while those in the other 84 strains isolated from the corpus specimens were 9.5%, 58.3%, 28.6% and 3.6%, respectively. s1a/m2 (58.3% vs 30.1%, χ2=13.47, P&lt;0.01) and then s1a/m1b (28.6% vs 9.5 %, χ2=9.88, P&lt;0.01) were the dominant vacA gene subtypes in the H. pylori isolates. The dominant H. pylori genotype was cagA+s1a/m2 (59.0% from antrum specimens and 57.1% from corpus specimens), and followed by cagA+s1a/m1b (28.9% from antrum specimens and 27.4% from corpus specimens). Sixteen of 78 patients (20.5%) were infected with two or three H. pylori strains with different genotypes. However, no statistically significant differences among cagA occurrence, the different vacA subtypes and PU or CG could be found (each P&gt;0.05). Similarities of the nucleotide sequences from vacA gene s region PCR products of six isolates and from vacA gene m region PCR products of four isolates were 93.2% to 98.3% and 93.8% to 97.6%, respectively, compared to the reported corresponding sequences.Conclusions The dominant genotypes of H. pylori in PU or CG patients in Zhejiang area may be cagA+ s1a/m2 and cagA+ s1a/m1b. Numerous coinfections with different H. pylori strains in PU or CG patients indicate diversity of the infected H. pylori origins. s and m regions of vacA gene from different H. pylori isolates show high nucleotide sequence similarities. cagA gene positive rate, different vacA gene subtypes and coinfection with different H. pylori strains are not closely associated with severity of the diseases.     

PCR方法测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因

目的建立幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因的PCR测定方法.方法应用多聚酶链反应方法对62例慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌菌株的vacA基因型和cagA基因进行测定.结果62株幽门螺杆菌菌株均具有vacA基因,所有菌株的vacA基因型均为sla/m2型.cagA基因的总阳性率为56.45%;慢性胃炎、消化性溃疡和胃癌患者分离获得幽门螺杆菌的cagA基因阳性率分别为55.56%、54.17%和63.64%(P＞0.05).结论本研究建立的PCR测定幽门螺杆菌vacA基因型和cagA基因方法敏感性高、特异性强.     

幽门螺杆菌vacA 基因表型与体外空泡毒性的关系

目的：研究不同vacA基因表型的幽门螺杆菌（HP）对HeLA细胞,RK－13细胞,SGC－7901细胞的空泡毒性作用,方法：分离培养30株临床胃粘膜标本中的HP菌株,抽提其总RNA和浓缩含空泡毒素（VacA)的培养上清,应用RT－PCR方法分析vacA基因表型,应用体外细胞空泡毒性试验观察其空泡毒性作用,结果：全部菌株的信号序列均为sla;vacA基因中区表型为m1型3株（10％）,m2型27株（90％）,m1型菌株对3种细胞均有空泡毒作用,m2型对HeLa细胞无空泡毒作用,但其中20株（（74％）对RK－13细胞,SGC7901细胞株有泡毒作用,结论：HP菌株vacA基因m区是与靶细胞结合的亚单位,不同m型菌株对同一种细胞产生不同的空泡毒性作用,表明靶细胞膜上可能存在不同的受体。     

慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌babA2和cagA及vacA基因型分析

目的 :研究慢性胃炎和消化性溃疡中幽门螺杆菌 (Hp) bab A2、cag A、vac A基因型的分布 ,探讨 Hpbab A2、cag A、vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。方法 :用聚合酶链反应测定 5 8株从浙江省慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2基因、cag A基因和 vac A基因亚型。结果 :5 8株 Hp中 bab A2、cag A、vac A s1a、vac A m1、vac A m2基因的阳性率分别为 87.9%、10 0 %、93.1%、1.7%、65 .5 %。慢性胃炎和消化性溃疡患者感染的Hp bab A2、vac A s1a、vac A m2基因阳性率差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :从浙江地区慢性胃炎和消化性溃疡患者中分离的 Hp bab A2、cag A、vac A基因型均以 bab A2阳性、cag A阳性和 vac A s1a/ m2型为主 ,未发现 Hp bab A2、cag A和 vac A基因型与慢性胃炎和消化性溃疡的关系。     

中国幽门螺杆菌vacA基因型标签序列与VacA活性关系的分子系统发育分析

目的探讨中国幽门螺杆菌vacA基因s、m和i区氨基酸序列分子系统发育关系及其对VacA活性的影响。方法从GenBank数据库中下载所有中国幽门螺杆菌VacA全长氨基酸序列,利用ClustalX 2.0和MEGA 5.05软件对vacA基因s、m和i区氨基酸序列及VacA全长氨基酸序列进行生物信息学分析,构建分子系统发育树。结果中国幽门螺杆菌无毒弱毒株vacA基因型全为s1/m2/i1型,而强毒株除Ch2菌株为m1-m2杂合型之外,全为s1/m1/i1型,s1型和i1型强相关。分子系统发育分析显示,中国幽门螺杆菌vacA基因s、m和i区氨基酸序列都呈现明显的地理特异性,其中m区分子系统发育树能够将VacA强毒株和无毒弱毒株分开,而s和i区分子系统发育树则不能将两者完全分开。结论 vacA基因m区氨基酸序列更适合作为中国幽门螺杆菌VacA的毒力标志。