转化生长因子β1诱导人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子

目的　研究转化生长因子 β1(transforminggrowthfactorβ1,TGFβ1)对人肾小管上皮细胞 (humanproximaltubularep ithelialcells ,HTECs)表达结缔组织生长因子 (connectivetissuegrowthfactor ,CTGF)的影响。方法　体外培养的HTEC被根据随机数字表分为 3组 :对照组 (C组 ) :无血清培养基 (freeserummedium ,FSM)培养 ;TGFβ1a和TGFβ1b组 (Ta 组和Tb 组 ) :分别用含不同浓度TGFβ1(Ta 组 :2 0ng/ml,Tb 组 :40ng/ml)的FSM培养 ,96h后 ,分别用RT PCR和免疫组化方法检测HTEC表达CT GFmRNA和蛋白。结果　①C组 :CTGFmRNA和蛋白表达为阴性 ;②Tb 组和Ta 组 :CTGFmRNA和蛋白表达皆呈阳性。Tb 组和Ta 组相比 ,CTGF的mRNA和蛋白表达量皆显著增加 (P <0 .0 1)。结论　TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HTEC合成CTGF。     

人肾小管上皮细胞在转化生长因子β1诱导下桩蛋白表达研究

目的 探讨不同浓度重组人转化生长因子β1（human recombinant transforming growth factor β1,rhTGFβ1）对人近端肾小管上皮细胞株（human kidney proximal tubular epithelial cell line,HKC）表达桩蛋白（paxillin,Pax）的影响。方法 将体外培养的HKC随机分为3组：对照组（C组）：无血清培养基（free serum mudium,FSM）培养;TGFβ1培养组（T1、T2组）：分别用含不同浓度的TGFβ1（T1组：5ng／ml,T2组：10ng／ml）的FSM培养,48h后分别用逆转录多聚酶链式反应（RT-PCR）、免疫组化方法和Western blot检测HKC的Pax mRNA及蛋白表达情况。结果 ①C组：Paxillin mRNA及蛋白有基础的表达;②T1和T2组：Pax mRNA及蛋白表达均明显增加,T2组和T1组相比,Pax的mRNA及蛋白表达量增加更显著（P〈0．01）。结论 TGFβ1能呈剂量依赖性地诱导HKC合成Pax。     

E-cadherin表达下调致GSK-3β磷酸化失活的分子机制研究

目的:探讨E-cadherin表达下调在肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中诱导GSK-3β磷酸化失活信号通路的调控机制?方法:运用RNA干扰技术建立E-cadherin表达缺失的稳定细胞株?Western blot实验检测稳定株细胞(HepG2-E-cadherin-shRNA)E-cadherin的表达水平以及GSK-3β与Akt的磷酸化水平;用10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HepG2-E-cadherin-shRNA细胞,Western blot检测细胞GSK-3β磷酸化水平,RT-PCR检测HepG2-E-cadherin-shRNA细胞PTEN和Egr-1的mRNA水平,Western blot检测细胞PTEN的蛋白表达水平?结果:Western blot实验结果表明,HepG2-E-cadherin-shRNA稳定株细胞E-cadherin表达水平较空白对照组下调约82.54%,GSK-3β磷酸化水平较空白对照组上升约298.93%,Akt磷酸化水平较空白对照组上升约218.98%;LY294002作用4 h后,GSK-3β磷酸化水平与空白对照组相比下降至48.13%;RT-PCR结果显示,下调HepG2细胞E-cadherin表达水平后,细胞PTEN的mRNA水平下降至76.14%,Egr-1的mRNA水平下降至66.89%,PTEN的蛋白表达水平下降至53.77%?结论:人HCC细胞中E-cadherin抑制性表达导致细胞内GSK-3β磷酸化失活很可能是通过PI3K/Akt的信号通路实现的?     

曲尼司特对TGF-β1刺激的人肾小管上皮细胞表达结缔组织生长因子的影响

目的 研究曲尼司特(tranilast,Tran)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激人肾小管上皮细胞(HKCs)表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响,以探讨其抗肾小管间质纤维化的机制.方法 将培养的HKCs,按随机化分为:①对照组,②TGF-β1(5 ng/m1)干预组,③TGF-β1(5 ng/ml)+Tran(100μmol/L)干预组.免疫荧光检测爬片细胞的磷酸化Smad2(PSmad2)蛋白的表达,用RT-PCR方法评价CTGF mRNA的表达,Western blot方法评价CTGF和胶原Ⅵα蛋白的表达.结果 TGF-β1刺激30 min时,HKCs的细胞核PSmad2蛋白的表达明显增强,TGF-β1+Tran干预组PSmad2蛋白的表达明显下降(P<0.05),对照组细胞核未见明显PSmad2蛋白的表达.在48 h时,TGF-β1干预组HKCs的CT-GF mRNA、CTGF和胶原Ⅵα蛋白表达明显高于对照组(均P<0.05),而TGF-β1+Tran干预组则明显下降(均P<0.05).结论 曲尼司特可能是一个很有潜力的抗肾间质纤维化的药物,其机制是通过抑制TGF-β1诱导的CTGF的表达及其下游的Smad2信号通路的激活而发挥作用.     

人肾小管上皮细胞转分化过程中血管内皮细胞生长因子及其受体表达的变化

目的探讨转化生长因子β1(TGFβ1)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)转分化过程中,血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体表达的变化.方法用不同浓度的TGFβ1诱导HK-2转分化,细胞免疫化学方法检测血管平滑肌肌动蛋白(α-SMA),反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-SMA和VEGF mRNA表达,酶联免疫分析(ELISA)检测上清中的VEGF,免疫印迹检测细胞裂解物中的VEGF及其受体.结果(1)HK-2细胞在TGFβ1(5、8 ng/ml)刺激后,α-SMA免疫染色均为阳性,以8 ng/ml时最强;TGFβ1呈剂量和时间依赖诱导α-SMA mRNA表达(P＜0.001).(2)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF从基因到蛋白水平呈双相改变:0.1和1 ng/mlTGFβ1刺激后VEGF mRNA和蛋白表达强度均高于对照组(P＜0.001);而3、5和8 ng/ml TGFβ1刺激后表达强度则低于对照组(P＜0.001).8 ng/mlTGFβ1刺激较短时间(12和24h),VEGF mRNA和蛋白表达强度高于对照组(P＜0.001);而刺激较长时间(36、48和72 h),mRNA和蛋白表达强度均低于对照组(P＜0.001).(3)TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,以浓度和时间依赖性方式诱导VEGF受体表达增强(P＜0.001).结论TGFβ1诱导HK-2细胞转分化过程中,VEGF受体表达增强,而VEGF表达出现双相变化,高浓度的TGFβ1刺激可引起VEGF表达下调.     

TGFβ1及其受体TGFβ RⅡ在宫颈鳞状上皮癌组织中的表达

目的观察转化生长因子β1(TGFβ1)及其Ⅱ型受体(TGFβ RⅡ)在宫颈鳞状上皮癌中的表达情况,探讨其与宫颈癌发生发展的关系.方法应用免疫组化SP法检测40例宫颈鳞状上皮癌(病理分级Ⅰ-Ⅲ级)中TGFβ1和TGFβ RⅡ的蛋白表达,并与正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织作半定量比较.结果 (1)正常宫颈组织及慢性宫颈炎组织中TGFβ1和TGFβ RⅡ表达于上皮细胞的胞浆内,两组表达水平差异无显著性(P>0.05);宫颈鳞状上皮癌组织中TGFβ1和TGFβ RⅡ蛋白表达位于癌细胞的胞浆内;(2)宫颈鳞状上皮癌组织中TGFβ1蛋白表达水平明显上升,与前二组比较差异有显著性(P<0.01);(3)宫颈鳞状上皮癌组织中TGFβ RⅡ蛋白表达明显下降,与前二组比较差异有显著性(P<0.01);(4)随着宫颈癌病理分级的增加,TGFβ1表达水平上升,其差异也有显著性(P<0.05),但TGFβ RⅡ表达无显著性差异.结论宫颈鳞状上皮癌的发生发展可能与TGFβ1蛋白的高表达和TGFβ RⅡ蛋白的低表达有关.     

转化生长因子β1通过Smad2途径调节足细胞结缔组织生长因子表达

目的　研究肾脏足细胞是否表达结缔组织生长因子 (CTGF)以及TGFβ1对CTGF表达调控的信号途径。方法　以肾小球足细胞为对象 ,应用Western印迹分析技术 ,观察了 3种促进肾脏纤维化的蛋白因子 ,转化生长因子 β1(TGFβ1)、血小板源生长因子 (PDGF)和血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )对体外培养的足细胞CTGF蛋白表达的影响 ,以及ERK、Smad两条信号途径在TGFβ1调节CTGF蛋白表达中的影响 ;逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测CTGFmRNA的变化。结果　体外培养的足细胞表达基础水平CTGF蛋白 ,2 0ng/mlPDGF和 10 -6mol/LAngII刺激 2 4小时后细胞内CTGF蛋白水平与对照相比差异无显著意义 (P >0 0 5 ) ,而 1ng/mlTGFβ1刺激 2 4h足细胞CTGF蛋白水平显著高于对照 (P <0 0 5 ) ,且增加呈TGFβ1剂量依赖趋势 ;1ng/mlTGFβ1刺激 12h可以使细胞CTGFmRNA表达增加。1ng/mlTGFβ1使足细胞Smad2 和细胞外信号调节激酶 (ERK1/ 2 )磷酸化 ,在刺激 30min达高峰 ;应用丝 /苏氨酸激酶抑制剂Staurosporine抑制Smad2 磷酸化可以消减TGFβ1刺激的CTGF蛋白增加 ,但ERK1/ 2 活化抑制剂PD 980 5 9阻断ERK1/ 2 磷酸化不能减弱TGFβ1刺激CTGF蛋白表达的效应。结论　在足细胞上 ,TGFβ1刺激CTGF表达依赖于Smad2 信号通路的活化 ,而不依赖于ERK1/     

TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化

目的:探讨TGFβ1-Smad信号通路在IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化中的作用。方法:体外培养人肺泡上皮细胞来源的A549细胞株,将传代培养的细胞分为对照组、TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组、IL-33组、IL-33+TGFβ受体抑制剂(LY2109761)组。给予相应处理,24h后收集各处理组细胞。RT-PCR和Western blot检测转化生长因子β1(TGFβ1)、上皮细胞标志物E钙黏素(E-cad)和间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。Western-blot检测Smad信号通路Smad3、p-Smad3的表达水平。结果:与对照组比较,TGFβ受体抑制剂组Smad3蛋白,p-Smad3蛋白,TGFβ1、E-cad、α-SMA的mRNA及蛋白表达表达水平均未见明显变化(P>0.05);与对照组比较,IL-33组Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显升高(P<0.05),TGFβ1mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),E-cad mRNA及蛋白表达明显降低(P<0.05),α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05);IL-33+TGFβ受体抑制剂组与IL-33组比较,Smad3蛋白表达水平无明显变化(P>0.05),但p-Smad3蛋白表达水平明显降低(P<0.05),TGFβ1的mRNA及蛋白表达未见明显改变(P>0.05),E-cad的mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05),α-SMA的mRNA及蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:TGFβ1-Smad信号通路参与IL-33诱导的A549细胞上皮间质转化。     

慢性肺源性心脏病患者血清GSK-3β、β-catenin mRNA表达水平与病情严重程度及预后的关系

目的 分析慢性肺源性心脏病(CPHD)患者血清中糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)、β-连环蛋白(β-catenin)信使RNA(mRNA)表达水平与病情严重程度及预后的关系。方法 选取2020年1月—2021年10月汉中市三二〇一医院收治的CPHD患者108例作为CPHD组,根据肺心功能分为失代偿亚组40例、代偿亚组68例,根据患者1年内生存情况分为存活亚组85例、死亡亚组23例。以同期健康体检者108例为健康对照组。收集CPHD患者的基本资料,荧光定量PCR法检测受试者血清GSK-3β、β-catenin mRNA表达水平;比较各组血清GSK-3β、β-catenin mRNA表达水平差异;Pearson法分析CPHD患者血清GSK-3β、β-catenin mRNA表达水平的相关性,多因素Cox回归分析影响CPHD患者死亡的危险因素,受试者工作特征曲线(ROC)分析血清GSK-3β、β-catenin mRNA表达水平对CPHD患者死亡的预测价值。结果 与健康对照组比较,CPHD组血清GSK-3β mRNA表达水平显著降低,β-catenin mRNA表达水平显著升高(t/P=...     

GSK-3β、PTEN 、PLK1在儿童急性髓系白血病中的表达及意义

目的探讨糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)、与张力蛋白同源的位于第10号染色体磷酸酶基因(PTEN)、Polo样激酶1(PLK1)在儿童急性髓系白血病(AML)中的表达及意义。方法 RT-PCR方法检测实验组(33例初诊AML患儿的骨髓)和对照组(10例正常骨髓)骨髓单个核细胞(BMMNC)中GSK-3βmRNA、PTEN mRNA、PLK1mRNA的表达,ELISA方法检测GSK-3β蛋白及P-GSK-3β的表达。结果实验组中GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白、PLK1mRNA的表达量高于对照组(P=0.012;P=0.014;P=0.040);PTEN mRNA、P-GSK-3β的表达量低于对照组(P=0.012;P=0.002)。GSK3β蛋白与PTEN mRNA的表达呈负相关(r=-0.415,P=0.016);GSK-3βmRNA、GSK3β蛋白与PLK1mRNA的表达成呈正相关(r=0.388,P=0.026;r=0.427,P=0.013)。外周血白细胞计数增高者GSK-3β蛋白表达增高;临床危险度高者GSK-3βmRNA、GSK-3β蛋白的表达增高,P-GSK-3β的表达降低。结论在儿童AML中,GSK-3β和PLK1可能起癌基因的作用,PTEN可能起抑癌基因的作用。     

TGF-β1对皮肤成纤维细胞的p-ERK表达的影响

目的探讨TGF-β1刺激后对皮肤成纤维细胞中磷酸化ERK表达的影响及相互关系。方法以原代培养人正常皮肤成纤维细胞为研究对象。细胞分2组:浓度组:10 ng/ml、5 ng/ml、1.0 ng/ml、0 ng/ml。时间组:给予10 ng/ml的TGF-β1刺激不同时间,分别在0、15、30、60、120 min的时间点提取蛋白。采用Western blotting法检测成纤维细胞中磷酸化ERK蛋白的表达变化。结果浓度组及时间组p-ERK蛋白表达与对照组相比均有差异(P0.05),随着TGF-β1剂量增加和作用时间延长,其磷酸化ERK蛋白表达水平逐渐增强,在TGF-β1 5 ng/ml时p-ERK水平达作用最强,在作用60 min时p-ERK达高峰。结论随着TGF-β1浓度增加及作用时间延长,大剂量TGF-β1时可上调体外培养成纤维细胞内的ERK信号蛋白活性。TGF-β1诱导的成纤维细胞的p-ERK水平增高可能是依赖ERK通路激活的,但ERK通路与TGF-β/Smad通路存在交互作用的机制,目前还无定论。     

褐藻多糖硫酸酯对TGF-β1孵育的人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的影响

目的观察褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan FPS)对TGF-β1下刺激人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2分泌的影响,探讨其在慢性肾衰竭(Chronic Renal Failure CRF)防治中的意义。方法用TGF-β1作为刺激因子,孵育体外培养的人肾小球系膜细胞(Human Mesangial cell HMC),并分别用不同浓度的FPS干预,具体分组如下:模型组(TGF-β14 ng/ml)、FPS高剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 100 ug/ml)、FPS中剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS 50 ug/ml)、FPS低剂量组(TGF-β14 ng/ml+FPS25 ug/ml)、FPS对照组(FPS 100ug/ml)、正常对照组。ELISA技术检测HMC培养上清液中MMP-2、TIMP-2蛋白表达水平,Re-altime PCR技术检测HMC的MMP-2、TIMP-2 mRNA表达水平。结果与正常对照组相比,TGF-β1能减少HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01),增加HMC的TIMP-2蛋白及mRNA表达(P0.01);FPS能阻断TGF-β1刺激下HMC的MMP-2蛋白及mRNA表达减少、TIMP-2蛋白及mRNA表达增加(P0.01,P0.05);FPS对照组与正常对照相比MMP-2、TIMP-2蛋白及mRNA表达差异无统计学意义(P0.05)。结论褐藻多糖硫酸酯能阻断TGF-β1刺激下人肾小球系膜细胞MMP-2、TIMP-2表达的比例失衡,阻断了由MMP-2、TIMP-2比例失衡导致的ECM积聚,从而延缓了慢性肾衰竭的进展。     

PI3K/Akt/GSK-3β/β-catenin信号通路对局灶性脑缺血再灌注大鼠神经元保护的实验研究

【目的】 探讨PI3K/Akt信号通路在大鼠脑缺血再灌注损伤中对Wnt/β-catenin信号通路的影响。 【方法】 健康雄性SD大鼠96只,采用longa法建立局灶性脑缺血再灌注模型,随机分为4组:假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I组)、脑缺血再灌注+bFGF后处理组(bFGF组)、脑缺血再灌注+bFGF后处理+LY294002(LY组),各组24只大鼠。各组依据缺血后再灌注时间点12、24、48、72 h再分4个亚组。应用H-E染色、TUNEL法检测皮质组织形态变化及细胞凋亡情况。采用免疫组织化学法、原位杂交法、蛋白质印迹法分别检测在各组皮质不同再灌注时间点P-Akt、GSK-3β mRNA、β-catenin的表达变化。 【结果】 免疫组织化学法检测P-Akt蛋白水平, I组和LY组每一灌注时间点都高于S组表达水平,24 h达高峰。bFGF组各亚组皮质P-Akt表达均较I组和LY组各亚组表达增多(P<0.05)。应用原位杂交和蛋白质印迹技术分别检测GSK-3β mRNA和β-catenin在缺血再灌注皮质的表达。I组和LY组各亚组缺血皮质GSK-3β mRNA和β-catenin表达高于S组,分别在48 h和72 h达高峰。与I组和LY组比较,bFGF组各亚组缺血皮质GSK-3β mRNA表达明显降低,而β-catenin蛋白表达却显著增高(P<0.05)。说明bFGF在缺血再灌注皮质通过激活Akt,抑制GSK-3β的活性,拮抗由GSK-3β、axin和结肠多发性息肉样蛋白(APC)组成的复合物,使β-catenin不能被磷酸化,游离的β-catenin在细胞浆内蓄积,继而进入胞核,促进Wnt靶基因转录,抑制细胞凋亡。从两条通路主要成员激活的时间上,Akt在皮质缺血再灌注后24 h达高峰,而β-catenin是缺血再灌注后持续增高,一直到72 h达高峰。提示β-catenin参与了脑缺血再灌注PI3K/Akt激活后的信号传导路径,Akt对β-catenin的调控作用同样在缺血性脑损伤中发挥作用,即Akt-GSK-3β-β-catenin。 【结论】 脑缺血再灌注损伤中PI3K/Akt信号通路通过GSK-3β可以调控Wnt信号通路主要成员β-catenin,这为深入研究β-catenin在缺血性脑损伤中的作用机制提供重要线索。     

转化生长因子-β1对新生大鼠星形胶质细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的:研究转化生长因子;GAAB2;β1;(TGF;GAAB2;β1)对新生大鼠大脑皮层星形胶质细胞表达结缔组织生长因子(CTGF) 的影响.方法:体外培养的新生SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞分为对照组:无血清培养基(FSM) 培养; 实验组:分别用含1 μg /L,2 μg /L,4 μg /L TGF-β1的FSM培养,24 h后,分别用RT-PCR和Western Blot检测2组细胞中CTGF mRNA和蛋白的表达.结果:对照组CTGF mRNA和蛋白表达均为阴性;实验组CTGF mRNA和蛋白表达皆呈阳性,且随着TGF-β1质量浓度的增加,2者的表达量有增高的趋势(F=80.889和200.300,P均＜0.01).结论:TGF-β1 能上调星形胶质细胞中CTGF的表达.     

Lefty-2蛋白对转化生长因子β1诱导的大鼠肾成纤维细胞NRK-49F转分化的逆转作用及其机制

目的观察Lefty-2蛋白对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的肾成纤维细胞(NRK-49F)转分化的逆转作用,并探讨其机制。方法对照组:NRK-49F不做处理;刺激组:加入TGF-β1(10ng/ml);低剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(10ng/ml);中剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(20ng/ml);高剂量治疗组:TGF-β1(10ng/ml)+Lefty-2(50ng/ml)。通过细胞免疫荧光法观察各组α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和波形蛋白(Vimentin)的表达水平,通过Western blot法检测各组α-SMA、FN、Vimentin、p-Smad3蛋白、Smad7蛋白的表达水平。结果细胞免疫荧光结果显示,刺激组α-SMA、FN、Vimentin表达量均显著增加,治疗组较刺激组表达量均明显减少。Western blot法结果显示,治疗组α-SMA、FN、Vimentin的表达量较刺激组均下降(P<0.01),而且呈现剂量效应。刺激组p-Smad3蛋白表达上调,治疗组p-Smad3蛋白的表达量较刺激组明显下调(P<0.01);刺激组Smad7蛋白表达下调,治疗组Smad7蛋白的表达量较刺激组明显上调(P<0.01)。结论 Lefty-2蛋白可逆转TGF-β1诱导的NRK-49F的转分化,可降低α-SMA、FN、Vimentin的表达,可能是通过活化Smad7信号通路,抑制Smad3的磷酸化,从而抑制Smad3信号通路来实现的。     

Aβ25-35单侧杏仁核注射对大鼠异常磷酸化tau蛋白激酶mRNA表达的影响

背景：β淀粉样蛋白酶是阿尔茨海默痴呆的主要致病因素,然而对于其神经毒性的具体作用机制目前尚不清楚,本研究的主要目的在于研究是否它能通过增加tau蛋白异常磷酸化从而促进痴呆的发生发展。 研究方法：采用Aβ25-35片段单侧杏仁核注射,建立SD大鼠痴呆及记忆障碍动物模型。免疫组化法检测AT8、PHF-1蛋白的表达,原位杂交法检测GSK-3、P38MAPK mRNA的表达。 结果：相比于对照组和假手术组,模型组大鼠额叶皮层tau蛋白异常磷酸化蛋白激酶GSK-3 mRNA、P38MAPK mRNA表达明显增强(GSK-3-mRNA: in CA2: 0.384±0.012 vs 0.190±0.015, 0.258±0.064; in frontal cortex: 0.398±0.018 vs 0.184±0.031, 0.218±0.049. P38MAPK mRNA: in CA2: 0.409±0.038 vs 0.161±0.041, 0.189±0.035; in frontal cortex: 0.423±0.070 vs 0.160±0.032, 0.203±0.053）;同时伴有异常磷酸化tau蛋白AT8、PHF-1表达 (AT8: in CA2: 0.318±0.037 vs 0.135±0.028, 0.136±0.031; in frontal cortex: 0.278±0.040 vs 0.130±0.028, 0.190±0.037. PHF-1:0.386±0.034 vs 0.139±0.010, 0.193±0.041; 0.395±0.050 vs 0.159±0.030, 0.190±0.044)显著增高。 结论：Aβ杏仁核单侧注射可通过增加GSK-3β和P38MAPK的表达从而促进阿尔茨海默痴呆的发生、发展。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对大鼠肾成纤维细胞转化生长因子β1/Smad信号途径的作用研究

目的研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂阻断转化生长因子（TGF）β1致肾间质纤维化作用的机制，探讨其抗肾间质纤维化的潜在作用。方法体外培养大鼠肾成纤维细胞株（NRK／49F），观察PPARγ配体15d-PGJ2及其激动剂曲格列酮和齐格列酮对TGFβ1诱导的纤维连接蛋白（FN）mRNA表达的影响。利用Western印迹技术观察PPARγ激动剂对TGFβ1诱导的FN和Smad蛋白表达的影响。结果（1）与1ng／ml TGFβ1组比较，5ng／ml TGFβ1组FN mRNA表达量增加了3．6倍（P〈0．01），5ng／ml TGFβ1刺激24h时较刺激前增加了2．4倍（P〈0．01），TGFβ1诱导FN mRNA表达呈一定范围内的剂量（0—5ne／ml）和时间（0—24h）依赖效应。（2）与5ng／ml TGFβ1组比较，10μmol 15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组FN mRNA表达量分别降低37．3％、41．5％和22．7％，FN蛋白表达量分别降低20．6％、38．1％和28．6％。（3）5ng／ml TGFβ1以时间（0．2h）依赖方式诱导p-Smad2／3蛋白表达量增加，作用1h时达到高峰；5ng／ml TGFβ1组p-Smad2／3蛋白表达量较对照组和2ng／ml TGFβ1组分别增加3．42倍和0．97倍。（4）15d-PGJ2、曲格列酮和齐格列酮预处理组p-Smad2／3蛋白表达量与5ng／ml TGFβ1组比较分别降低61．2％、53．0％和59．S％。3种药物干预组之间p-Smad2／3蛋白表达量比较差异无统计学意义，各组Smad2和Smad3蛋白表达量无显著变化。结论PPART激动剂可以抑制TGFβ1诱导的肾间质成纤维细胞细胞外基质合成，其机制可能与阻断TGF-β1／Smad信号途径有关，提示PPARγ激动剂具有抗肾间质纤维化的潜在作用，可能成为延缓终末期肾功能衰竭的治疗新手段之一。     

吡格列酮对AD大鼠模型学习记忆及GSK-3β、p-tau蛋白的影响

目的观察吡格列酮对阿尔茨海默病（AD）大鼠模型学习记忆能力及海马糖原合成激酶3-β（GSK-3β）活性、tau蛋白异常磷酸化（p-tau）的影响,为临床防治AD提供一条新的思路。方法健康雄性Wistar大鼠32只,随机分为4组,除对照组外其余组大鼠海马CA1区注射冈田酸（OA）制备AD模型;低、高吡格列酮组给予吡格列酮灌胃4周,其余组给生理盐水灌胃;通过水迷宫检测各组大鼠学习记忆能力;免疫组化法观察各组大鼠海马GSK-3β活性、tau蛋白异常磷酸化。结果与对照组相比,模型组学习记忆能力明显下降（P〈0.05）,海马GSK-3β、tau蛋白磷酸化的表达明显增多（P〈0.05）;与模型组相比,低、高吡格列酮组学习记忆能力明显提高（P〈0.05）,海马GSK-3β、tau蛋白磷酸化的表达明显减少（P〈0.05）,而低、高吡格列酮组二者相比无明显差异（P〉0.05）。结论吡格列酮可改善AD大鼠模型学习记忆能力,可能与降低GSK-3β活性、减少tau蛋白过度磷酸化有关。     

红细胞生成素对白蛋白诱导HK-2细胞转分化中TGFβ1/ILK通路的调控作用

目的 研究TGFβ1/ILK(转化生长因子-β1/整合素连接激酶)通路在人白蛋白诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2细胞)转分化过程中的作用,探讨红细胞生成素(EPO)是否通过抑制TGFβ1/ILK通路而产生保护效应.方法 体外培养HK-2细胞,RT-PCR法检测TGF β1、ILK mRNA的表达;细胞免疫荧光法检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(0-SMA)的蛋白表达;ELISA法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 白蛋白诱导组TGFβ 1、ILK mRNA较空白对照组显著升高,EPO干预组TGFβ1、ILKmRNA显著下调;白蛋白诱导组E-cadherin的蛋白表达较空白对照组下降,α-SMA、FN的蛋白表达上升,而在EPO干预组及TGFβ1拮抗剂组E-cadherin的蛋白表达较白蛋白诱导组显著上调,α-SMA、FN的蛋白表达显著下调,且与EPO的浓度有关;Person直线相关分析显示白蛋白诱导组及EPO干预组TGFβ1mRNA与ILK mRNA呈正相关.结论 TGFβ1/ILK通路参与了白蛋白诱导的HK 2细胞转分化过程,EPO通过抑制TGFβ1/ILK通路而抑制转分化过程,产生肾保护效应.     

TGF-β1及其受体mRNA在哮喘大鼠肺组织中的表达

目的研究哮喘大鼠肺组织中TGF-β1及受体TGF-βRⅠ、TGF-β RⅡmRNA的表达水平,以了解TGF-β1在哮喘中的作用及其受体对其作用的调节机制.方法将30只成年雌性SD大鼠分为正常对照组,单纯致敏组和哮喘模型组,采用卵清蛋白(OVA)腹腔注射法复制大鼠哮喘模型,利用RT-PCR法检测肺组织中TGF-β1、TGF-βRⅠ及TGF-βRⅡmRNA的表达水平.结果TGF-β1mRNA的表达水平致敏组与正常组相比增加(70.21±11.68 vs 53.07±10.27,P＜0.05),哮喘组与正常组相比显著增加(114.14±16.57 vs 53.07±10.27,P＜0.01),TGF-β R Ⅰ mRNA的表达水平在致敏组和哮喘组相当,均较正常组下调(83.21±11.52 vs 100.14±16.13,85.76±12.95 vs 100.14±16.13,P＜0.05).TGF-βRⅡmRNA的表达水平致敏组与正常组相比有下降(89.04±9.23 vs 103.05±11.46,P＜0.05),哮喘组与正常组相比则显著下降(56.53±7.34 vs 103.05±11.46,P＜0.01).结论TGF-β1可能作为一个抗炎因子在哮喘的变应性炎症前阶段及炎症过程中起着重要作用,TGF-β RⅠ、TGF-β RⅡ的表达水平在哮喘组和致敏组的下降说明TGF-β1信号通路在哮喘的变应性炎症中和炎症前阶段的活化程度,TGF-βRⅡ表达水平在哮喘组的显著下降则显示TGF-β1信号通路可能被下调从而抑制其抗炎作用的发挥.