三氧化二砷对肺腺癌化学治疗敏感性的影响及其机制

目的　研究三氧化二砷 (As2 O3)对肺腺癌细胞生长过程及化学治疗 (简称化疗 )敏感性的影响。方法　应用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色、免疫组织化学、流式细胞仪、逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)等方法 ,观察不同浓度As2 O3 对人肺腺癌A549细胞株生长、化疗敏感性、细胞周期 ,及凋亡基因Fas/FasL、抗凋亡基因B淋巴细胞白血病 2 (bcl 2 )和多药耐药相关蛋白 (MRP)、肺耐药蛋白 (LRP)表达水平的影响。结果　 1、2 μmol/L的As2 O3 对人肺腺癌A549细胞株的生长抑制作用较弱 ,但能显著提高A549细胞对顺铂的敏感性 (P <0 .0 5)、提高A549在G1期细胞的比率 ,上调Fas、下调bcl 2及MRP、LRP的表达水平。 5μmol/L的As2 O3 对人肺腺癌A549细胞有一定的抑制作用 ,并可上调bcl 2、MRP、LRP的表达水平 ,但不能提高A549细胞对顺铂的敏感性。结论　低浓度的As2 O3 可能通过提高A549细胞在G1期的比率 ,上调Fas基因和下调bcl 2、MRP、LRP基因的表达水平 ,提高肺腺瘤细胞对化疗的敏感性     

三氧化二砷体外对人卵巢上皮癌细胞3AO增殖及凋亡的影响

目的　探讨三氧化二砷 (As2 O3 )体外对人卵巢上皮癌细胞株 3AO增殖和凋亡的影响及其作用机制。方法　将人卵巢上皮癌细胞株 3AO与不同浓度的As2 O3 进行体外培养 ,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)测定不同浓度As2 O3 对 3AO细胞的生长抑制率 ,采用流式细胞技术检测细胞凋亡率、细胞周期时相及其Fas、FasL、P53 和bcl 2蛋白的表达。结果　 0 2 5～ 8 0 μmol /L浓度的As2 O3 均显著抑制3AO细胞的增殖 ,且随浓度升高及作用时间的延长 ,抑制率上升 ,As2 O3 与 3AO细胞联合培养 4 8小时的半数致死量 (IC50 )为 (3 90± 0 2 0 ) μmol /L。 0 2 5～ 4 0 μmol /L浓度的As2 O3 均诱导 3AO细胞凋亡 ,随浓度升高 ,凋亡率上升。As2 O3 阻滞 3AO细胞停滞于S期 ,并诱导细胞凋亡。As2 O3 (2 μmol/L )培养3AO细胞 4 8小时 ,Fas蛋白表达率为 (4 6 76± 4 5 0 ) % ,明显高于对照组的 (6 36± 0 82 ) % ,差异有显著性(P <0 0 5 ) ,FasL、P53 和bcl 2蛋白表达无明显变化 (P >0 0 5 )。结论　As2 O3 以剂量 时间依赖性方式抑制人卵巢上皮癌细胞 3AO增殖并诱导其凋亡 ,其作用机制与上调Fas基因表达有关。     

LY294002对人肺腺癌A549细胞p-Akt、VEGF表达的影响

目的 探讨PI3K抑制剂LY294002对肺腺癌A549细胞p-Akt及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 不同浓度LY294002(5μmol/L、10 μmol/L、20μmol/L、40 μnol/L)处理肺腺癌A549细胞24h后,分别用免疫细胞化学法和Western印迹法检测p-Akt、VEGF蛋白表达.结果 P13K抑制剂LY294002可抑制肺腺癌A549细胞株细胞中p-Akt蛋白的表达,而且其表达呈浓度依赖型降低(r=-0.913,P＜0.05).LY294002也可抑制该细胞株中VEGF蛋白的表达,其表达也呈浓度依赖型降低(r=-0.969,P＜0.01).结论 LY294002可抑制p-Akt活性及下调VEGF蛋白的表达,该作用可能是PI3K抑制剂LY294002发挥抗癌作用及抗血管生成的机制之一.     

As2O3对肾癌细胞增殖、凋亡的影响及意义

目的观察As2O3对肾癌细胞株786-0增殖、凋亡及细胞内X染色体连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响,探讨其意义。方法取对数生长期786-0,分别经0．5、1．0、2．0μmol／L的As2O3处理后,采用MTT比色法检测细胞生长情况,流式细胞仪测算细胞凋亡率,蛋白质印迹法及RT—PCR法检测细胞中的XIAP及其mRNA。结果0．5、1．0、2．0μmol／LAs2O3均可抑制786-0增殖。随着作用时间的延长,细胞生长抑制率升高（P均〈0．01）;随着As2O3浓度的增加,细胞凋亡率升高（P均〈0．01）、细胞内XIAP及其mRNA表达明显下调（P均〈0．05）。结论As2O3可抑制786-0增殖,并诱导其凋亡。这一作用与As2O3抑制786-0中XIAP及其mRNA表达有关。     

三氧化二砷对肝癌细胞表达PTTG1和VEGF的影响及其意义

目的 观察三氧化二砷(As2O3)对人肝癌细胞株BEL-7402和SMMC-7721的作用及其可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测As2O3对两种细胞的生长活性;用流式细胞仪测定经不同浓度As2O3溶液处理后的两种细胞的周期变化,并用Annexin V-FITC与PI双染法检测细胞凋亡;用实时逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测As2O3对两种细胞垂体肿瘤转化基因1(PTTG1)和血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响;用蛋白免疫印迹法(western-blotting)检测As2O3对两种细胞PTTG1和VEGF蛋白表达的影响.结果 As2O3可显著抑制BEL-7402和SMMC-7721细胞的生长,并呈量效关系(r=0.973,P<0.01;r=0.985,P<0.01),半数抑制浓度(IC50)分别为4.38 μmol/L和5.16 μmol/L.BEL-7402和SMMC-7721经As2O3处理后均发生显著凋亡(P<0.01).As2O3能显著下调两种细胞PTTG1和VEGF mRNA及蛋白的表达(P<0.01),并使细胞周期阻滞在G2/M期.结论 As2O3可有效抑制人肝癌细胞的生长增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡、阻滞细胞周期及下调PTTG1和VEGF的表达有关.     

亚硒酸钠、砒霜对肺腺癌细胞周期、凋亡、耐药的影响

目的通过比较低浓度亚硒酸钠、砒霜对肺腺癌细胞A549的周期、凋亡、耐药及线粒体的影响,探讨肺腺癌药物治疗的新方法。方法体外培养肺癌A549细胞,分为对照组及5.0μmol/L亚硒酸钠（A组）、5.0μmol/L砒霜（B组）处理组,药物处理24 h后以流式细胞仪检测细胞周期;Western blot检测三组促凋亡因子Caspase-3、抗耐药基因RARα的表达,RT-PCR检测三组凋亡抑制基因Bcl-2、细胞周期素CyclinD3表达;电子显微镜观察细胞线粒体结构与凋亡小体。结果与对照组相比,A、B组G0/G1期增加、S和G2/M期减少,出现细胞周期阻滞,凋亡细胞比例增加。Caspase-3、RARα表达上调,Bcl-2、cyclinD3表达下调。线粒体肿胀、线粒体嵴模糊不清,出现凋亡小体。结论亚硒酸钠、砒霜治疗肺腺癌均有良好的效果,因为氧化还原能力不同,作用各有侧重。     

三氧化二砷诱导小细胞肺癌细胞凋亡及p53、bcl-2基因表达的研究

目的：研究三氧化二砷（As2O3）诱导小细胞肺癌细胞凋亡及其机制。方法：采用末端脱氧核苷酰转移（TUNEL）法检测细胞凋亡，免疫组织化学（SABC）法分析As2O3对小细胞肺癌细胞（NeI-H细胞）p53、bcl-2基因蛋白表达的影响。结果：As2O30.5μmol/L、1.0μmol/L、2.0μmol/L作用72h，NeI-H细胞均可呈现凋亡所特有的亚G1峰，凋亡比率随药物作用浓度增加和作用时间延长而增高。实验组p53基因蛋白表达较对照组明显增多，药物浓度越高表达越多（P=0.001）；bcl-2基因蛋白表达较对照组明显减少，药物作用浓度越高表达越少（P=0.001）。结论：As2O3抗肿瘤作用主要是通过诱导细胞凋亡实现的，其机制与上调p53基因表达及下调bcl-2基因表达有密切关系。     

自噬对三氧化二砷所致正常淋巴细胞损伤的保护效应

目的研究三氧化二砷(As2O3)致外周血淋巴细胞(PBL)损伤中自噬与凋亡的作用。方法应用密度梯度离心法从正常人外周血中分离淋巴细胞,MTT法检测细胞增殖活性;Annexin-V/PI双标记染色检测凋亡;电镜观察细胞形态学改变;单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察细胞自噬水平;流式细胞术(FCM)检测Bcl-2的表达水平。结果 1.0⁸.0μmol/L As2O3呈剂量、时间依赖性地抑制人PBL增殖和诱导凋亡,24 h和48 h的IC50分别为12.46μmol/L和3.76μmol/L,并可诱导细胞发生自噬活化。用3-甲基腺嘌呤(3-MA)抑制细胞自噬可增强As2O3对PBL的抑制效应,24 h和48 h的IC50分别为10.40μmol/L和2.31μmol/L,细胞出现显著凋亡形态学改变,凋亡率明显增高,Bcl-2的表达水平降低。结论自噬可作为一种保护机制来抵御As2O3对外周血淋巴细胞的损伤,3-MA可能通过下调Bcl-2的表达而增加As2O3对外周血淋巴细胞的损伤效应。     

人肺腺癌细胞A549耐药细胞系的建立及意义

目的 建立人肺腺癌细胞A549耐药细胞系,为药物逆转细胞耐药提供实验基础.方法 培养人肺腺癌细胞A549,用不同浓度顺铂(eDDP)反复冲击,建立稳定表达耐药基因的耐药细胞.结果 经过10次、12次反复冲击后,A549细胞对具有较强的耐受力,IC50分别达到65.65μmol/L和81.58μmol/L,而对照组分别为24.33 μmol/L和19.61 μmol/L,耐药细胞内有耐药基因(MDR)的表达.结论 用不同浓度cDDP反复冲击肺腺癌细胞A549,可以建立高表达耐药基因及高耐药指数的耐药细胞.     

三氧化二砷对K562细胞生长及Ki-67和Survivin表达的影响

目的：探讨三氧化二砷(As2O3)对K562细胞生长的影响及K562细胞对As2O3的抵抗机制。方法：以不同浓度As2O3作用于K562细胞后，用四唑盐(MTT)比色法分析细胞的生长增殖，用台盼蓝排斥试验观察细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡以及Ki-67抗原和Survivin的表达。结果：2μmol／L As2O3能明显抑制K562细胞生长，但细胞活力、增殖相关抗原Ki-67的降低和凋亡发生在5μmol／L As2O3作用48h后才较为明显；同时As2O3作用后抗凋亡蛋白Survivin的表达均有不同程度的增加。结论：As2O3能有效抑制K562细胞的生长，但对细胞增殖能力的抑制及凋亡的诱导作用不如前者明显；Survivin的表达增加可能是K562细胞对As2O3诱导凋亡的抵抗机制之一。     

MRP、LRP和MDR1基因在胃癌中的表达及其意义

目的:探讨MRP基因、LRP基因和MDR1基因在胃癌中的表达及其与疾病发生发展相关性的研究.方法:应用实时荧光定量PCR(real-time fluorescence quantitative PCR,FQ-PCR)分别检测47例胃癌标本和17例正常胃组织对照标本的MRP基因、LRP基因和MDR1基因表达,分析其与病情发生发展以及转归的关系.结果:MRP基因、LRP基因和MDR1基因在胃癌组织中的表达均高于正常标本,MRP在早期胃癌中显著高于进展期胃癌(P<0.05),高、中分化腺癌显著高于低、未分化腺癌(P<0.05);LRP基因表达无淋巴结转移组显著高于淋巴结转移组(P<0.05).MRP在病情恶化患者中上调30%.结论:MRP基因、LRP基因和MDR1在胃癌组织中均有较高的表达,三者可能具有协同作用,检测3种基因的表达有利于制定更合理的治疗方案.     

非小细胞肺癌组织中耐药相关基因的表达及意义

目的探讨耐药相关基因在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及意义。方法应用RT-PCR半定量法检测60例未行化放疗的NSCLC患者癌组织及癌旁组织中耐药相关基因[多药耐药相关蛋白1（MRP1）、肺耐药蛋白（LRP）、乳腺癌耐药蛋白（BCRP）、切除修复交叉互补基因1（ERCC1）]mRNA的表达。结果与癌旁组织比较,癌组织中MRP1、LRP、ERCC1 mRNA表达显著升高,BCRP mRNA显著降低（P〈0.05）;BCRP mRNA在癌组织和癌旁组织中的表达呈正相关（rs=0.339,P=0.008）,癌组织中MRP1 mRNA与LRP mRNA、BCRP mRNA与ER-CC1 mRNA呈正相关。COX多因素回归分析示,MRP1 mRNA高表达是影响预后的独立因素（RR=4.784,P=0.026）。结论检测MRP1 mRNA对预测NSCLC患者生存期、协助临床选择化疗方案可能具有一定意义。     

全反式维甲酸联合维生素D3对肺癌原代细胞化疗敏感性的影响

目的探讨全反式维甲酸(ATRA)联用维生素D3(VD3)逆转肺癌细胞多药耐药、提高肺癌细胞化疗敏感性的机制。方法将ATRA、VD3联合作用于培养后的人肺癌原代细胞,观察肺癌原代细胞对顺铂化疗的敏感性及多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药蛋白(LRP)的表达水平。结果人肺癌原代细胞MRP、LRP呈高表达;ATRA及VD3作用后肺腺癌原代细胞MRP、LRP表达量明显降低,肺鳞癌MRP、LRP的表达量无明显变化;顺铂化疗的敏感性提高。结论MRP、LRP在肺癌尤其非小细胞肺癌中高表达,可反映肿瘤细胞多药耐药性;ATRA或VD3可下调肺腺癌MRP、LRP基因的表达水平,提高肺腺癌的化疗敏感性;但对肺鳞癌MRP、LRP基因表达水平无明显影响;ATRA和VD3联用有协同作用。     

Correlation of expression of multidrug resistance protein and messenger RNA with ^99mTc-nethoxyisobutyl isonitrile（MIBI） imaging in poatients with hepatocellular carcinoma

AIM: To explore whether P-glycoprotein (Pgp) and other pumps, multidrug resistance-associated protein (MRP) and lung resistance protein (LRP), could affect tumor accumulation and efflux of 99mTc-MIBI in liver cancer. METHODS: Surgically treated 78 liver cancer patients were included in this study. Before surgery, 99mTc-MIBI SPECT was performed 15 min and 120 min after injection of 20 mCi 99mTc-MIBI, respectively. Early uptake, delayed uptake (L/Nd), and washout rate (L/Nwr) of 99mTc-MIBI were obtained. Expressions of Pgp, MRP and LRP were investigated with Western blotting and immunohistochemistry. Messenger RNA (mRNA) level of Pgp, MRP and LRP was determined by RT-PCR. RESULTS: No 99mTc-MIBI uptakes in tumor lesions of 68 of 78 (87.2%) patients with hepatocellular carcinoma were found on 99mTc-MIBI SPECT. P-gp expression was observed in tumor tissues of the patients with no uptake of 99mTc-MIBI (P<0.017). No appreciable correlation was found between liver cancer 99mTc-MIBI images and expression of MRP or LRP on the level of protein or mRNA. CONCLUSION: 99mTc-MIBI SPECT is noninvasive, and useful in predicting the presence of MDR1 gene-encoded Pgp in patients with hepatocellular carcinoma.     

NNK对BEP2D细胞耐药基因表达的影响

目的探讨4-甲基亚硝胺-1-3-呲啶基-1-丁酮（NNK）对BEP2D细胞多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）表达的影响。方法应用NNK 500μg/m l干预BEP2D细胞生长,收集连续干预后第10、20、30代NNK-500细胞,行接种裸鼠成瘤试验检验其成瘤性;采用RT-PCR检测BEP2D细胞,以及第10、20、30代NNK-500细胞的MRP、LRP表达量。结果经NNK干预后的第20、30代NNK-500细胞接种裸鼠成瘤,病理切片显示为高分化鳞癌;RT-PCR显示,在BEP2D细胞中MRP、LRP呈低度表达,第10、20代NNK-500细胞的表达量略有增加,第30代NNK-500细胞的表达量明显增加（P〈0.01）。结论 NNK对BEP2D细胞有致癌性,可增加BEP2D细胞的MRP、LRP表达,降低化疗敏感性。     

非小细胞肺癌多药耐药及其与神经内分泌分化的相关性研究

目的　检测非小细胞肺癌 (NSCLC)多药耐药 (MDR)有关蛋白的表达 ,探讨其与神经内分泌 (NE)分化的关系。方法　采用链霉亲和素 过氧化酶连接 (SP)免疫组化法检测 113例NSCLC中谷胱甘肽S转移酶π(GST π)、多药耐药相关蛋白 (MRP)、肺耐药相关蛋白 (LRP)、神经元特异性烯醇化酶 (NSE)、突触素 (SYN)和嗜铬素A(CgA)的表达。结果　 (1)NSCLC中MRP和LRP的表达与组织学类型有关 (P <0 0 5 )。GST π与MRP、MRP与LRP表达之间呈显著相关 (P <0 0 5 )。 (2 )NSCLC中NSE、SYN、CgA的阳性率分别为 5 3 1%、2 6 6%、6 2 %。至少有 2种NE标记物表达者有 2 4例 (2 1 2 % ) ,其表达与肿瘤的分化程度有关 (P <0 0 5 )。 (3 ) 3种MDR有关蛋白在至少有 2种NE标记物阳性组的表达均较阴性组为低 (P <0 0 5 )。结论　GST π、MRP和LRP的过表达是NSCLC产生原发性多药耐药的重要原因。NE分化可能是影响多药耐药有关蛋白表达的因素之一     

Expression of the multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) and the lung resistance-related protein (LRP) in human lung cancer

Fifty lung cancer samples (41 non-small cell lung cancer-NSCLC and 9 small cell lung cancer-SCLC) were immunohistochemically analyzed for lung resistance-related protein (LRP) and multidrug resistance-associated protein 1 (MRP1) expressions which were then correlated with histopathological subtype of the tumor. To detect these proteins, monoclonal antibodies LRP-56 and MRPm6 were used. NSCLC samples were divided into two groups, adenocarcinomas (17 samples) and squamous cell carcinomas (24 samples). Four categories of LRP and MRP1 quantity were distinguished: +++ = high level--90--100% of positive cells, ++ = lower level--10--90% of positive cells, + = low level--up to 10% of positive cells, - = negative cells--0% of positive cells. Within the NSCLC group the most samples (36/41) had the similar level of LRP and MRP1. Significantly higher expression of both proteins was observed in the adenocarcinomas in comparison with squamous cell carcinomas. The lowest positive staining for LRP and MRP1 proteins has been found in SCLC. It is suggested that our finding can confirm the overall empirical clinical knowledge about much higher chemosensitivity of untreated SCLC comparing to NSCLC.     

非小细胞肺癌患者耐多药相关蛋白基因的表达

目的探讨耐多药相关蛋白（ＭＲＰ）基因表达与非小细胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）耐多药（ＭＤＲ）发生的关系。方法采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）和免疫组织化学染色方法,结合体外化疗药敏试验,检测３２例ＮＳＣＬＣ患者ＭＲＰ基因表达水平和对９种化疗药物敏感性。结果ＮＳＣＬＣ癌组织中ＭＲＰｍＲＮＡ表达阳性率为７２％,癌旁肺组织中为１０％;癌组织中ＭＲＰ蛋白表达阳性率为６６％,在肿瘤细胞胞膜和胞浆内均有表达,癌旁肺组织中未见表达;中、高分化癌组织中ＭＲＰｍＲＮＡ和蛋白表达明显高于低分化癌（Ｐ＜０．０５）;ＮＳＣＬＣ患者ＭＲＰｍＲＮＡ表达和ＭＲＰ蛋白表达呈正相关;ＮＳＣＬＣ患者对长春新碱、足叶乙甙和阿霉素耐药者,其ＭＲＰ蛋白表达率高于敏感者（Ｐ＜０．０５）。结论ＭＲＰ基因表达是引起ＮＳＣＬＣ原发性耐药的重要机制,它的过度表达通过转录水平和翻译水平调节实现,ＮＳＣＬＣ对长春新碱、足叶乙甙和阿霉素耐药的重要原因是ＭＲＰ蛋白表达。     

Comparison of Chemotherapy Response with P-Glycoprotein,Multidrug Resistance-Related Protein-1, and Lung Resistance-Related Protein Expression in Untreated Small Cell Lung Cancer

The aim of this study was to investigate the expression of P-glycoprotein (Pgp), multidrug resistance-related protein-1 (MRP1), and lung resistance-related protein (LRP) in response to chemotherapy in untreated small cell lung cancer (SCLC). Immunohistochemical analyses were performed on multiple nonconsecutive sections of biopsy specimens to detect Pgp, MRP1, and LRP expression in 40 patients with SCLC before chemotherapeutic induction. Response to chemotherapy was evaluated by clinical and radiological methods. The patients were divided into a good response group (n = 20) and a poor response group (n = 20). No significant differences in prognostic factors (Karnofsky performance status, tumor size, or tumor stage) were found between the two groups of patients. The difference in positive Pgp and MRP1 expressions between the good and poor response groups was significant. However, the difference in LRP expression was not significant. We conclude that chemotherapy response of patients with SCLC was related to either Pgp or MRP1 but not LPR expression.