1400W对缺氧培养人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS和MMP-9表达变化的影响及意义

目的 探讨缺氧条件下培养诱导型一氧化氮合酶(iNOS)抑制剂1400W对人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA表达的影响.方法 常规培养人舌鳞癌CAL-27细胞株,实验组分别加入50、100、200、400 μmol/L的1400W培养液培养;对照组不加1400W培养液,缺氧条件下培养24、48、72、96 h后,采用RT-PCR方法检测iNOS、MMP-9 mRNA表达的变化.结果 1400W作用于人舌鳞癌CAL-27细胞后,可呈时间、剂量性依赖抑制人舌鳞癌iNOS、MMP-9基因表达(P＜0.05).结论 1400W可显著抑制缺氧条件下培养的人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS和MMP-9表达,表明1400W对舌鳞癌新生血管的形成具有预防和潜在的治疗价值.     

1400 W对缺氧培养人舌鳞癌CAL-27 细胞株iNOS 的影响

目的 探讨缺氧条件培养下诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)抑制剂1400 W对人舌鳞癌CAL-27细胞株iNOS的影响.方法 常规培养人舌鳞癌细胞系CAL-27后,实验组分别加入iNOS抑制剂1400 W 50 (50 μmol·L-1组)、100(100 μmol·L-1组)、200(200 μmol·L-1组)、400(400 μmol·L-1组)μmol·L-1的培养液缺氧条件下培养;对照组不加iNOS抑制剂1400 W培养液缺氧条件下培养 .在缺氧条件下培养24、48、72、96 h后 ,采用硝酸还原酶法检测细胞培养上清液NO含量.结果 1400 W作用于人舌鳞癌 CAL-27 细胞后,实验各组细胞培养上清液NO含量与对照组比较明显下降(P<0.05),并且随作用时间和剂量的增加而相应递减.结论 选择性iNOS抑制剂1400 W可显著抑制缺氧条件下培养的人舌鳞癌CAL-27 细胞株iNOS的表达.     

人舌鳞状细胞癌顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP的建立及其生物学评价

目的: 建立人舌鳞状细胞癌(舌鳞癌)顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP,探讨其顺铂耐药机制。方法: 采用顺铂浓度梯度法对人舌鳞癌CAL-27细胞株进行诱导,将细胞分为CAL-27组和CAL-27/DDP组。CAL-27组细胞株用普通培养液培养,CAL-27/DDP组细胞株用含有不同浓度顺铂的培养液培养,经过12个月的诱导形成生长良好的耐药细胞系株CAL-27/DDP。采用倒置显微镜观察细胞株形态表现;MTT法检测细胞株的半数抑制浓度(IC₅₀)和耐药指数(RI);流式细胞术检测细胞株的细胞周期;RT-PCR法检测细胞株中多药耐药基因(MDR1)mRNA的相对表达水平;Western blotting法检测细胞株P糖蛋白(P-gp)的相对表达水平。结果: CAL-27/DDP组细胞株在一段时间内能在普通培养液中稳定生长,并维持其形态和耐药性状。与CAL-27组细胞株比较,CAL-27/DDP细胞略增大,细胞中出现颗粒和"空泡"样变,胞浆丰富,倍增时间延长(P<0.01),RI为18.09±0.30。与CAL-27组比较,CAL-27/DDP组G₁期和G₂期细胞比例减少,S期细胞比例升高,CAL-27/DDP组细胞株中MDR1mRNA和P-gp相对表达水平升高(P<0.01)。结论: 本研究建立了人舌鳞癌顺铂耐药细胞株CAL-27/DDP,其耐药机制与CAL-27/DDP细胞株中MDR1和P-gp的表达水平上调有关联。     

TGF-β1促进人舌鳞状细胞癌侵袭迁移的研究

目的：研究转化生长因子β1(TGF-β1)能否促进人舌鳞状细胞癌的侵袭转移。方法细胞增殖与活性实验试剂盒(CCK8)检测比较不同浓度TGF-β1刺激或不刺激舌鳞状细胞癌细胞株SCC9、CAL27之间生长速度的差异;划痕实验检测比较TGF-β1刺激或不刺激舌鳞状细胞癌SCC9、CAL27之间的迁移差异;Transwell实验进一步比较TGF-β1刺激或不刺激舌鳞状细胞癌SCC9、CAL27侵袭迁移能力的差异。结果 CCK8实验表明低浓度TGF-β1刺激后SCC9、CAL27细胞与空白对照组相比活细胞数量降低,但高浓度组未明显影响舌鳞癌细胞增殖,差异具有统计学意义(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验均显示,TGF-β1刺激后SCC9、CAL27细胞与空白对照组相比较具有更强的侵袭能力,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论低浓度TGF-β1可以抑制舌鳞癌细胞的增殖,但可以显著促进舌鳞状细胞癌侵袭转移。     

山慈菇提取物调控circ＿0003998/miR-330-5p表达对口腔鳞状细胞癌细胞生物学行为的影响

目的 研究山慈菇提取物对口腔鳞状细胞癌(鳞癌)细胞生物学行为的影响,分析其作用机制是否与调控circ＿0003998和miR-330-5p表达有关。方法 采用集落形成实验、划痕愈合实验、Transwell小室法分析不同剂量山慈菇提取物对口腔鳞癌细胞CAL-27增殖、迁移和侵袭的影响。实时定量PCR分析CAL-27细胞中circ＿0003998和miR-330-5p表达情况。双荧光素酶报告基因实验用于确定circ＿0003998和miR-330-5p之间靶向关系。分别转染circ＿0003998小干扰RNA、miR-330-5p模拟物至CAL-27细胞,分析干扰circ＿0003998或过表达miR-330-5p对CAL-27细胞生物学行为的影响。结果 山慈菇提取物作用后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量和circ＿0003998表达量显著降低(P<0.05),而miR-330-5p表达量显著升高(P<0.05)。circ＿0003998与miR-330-5p直接结合,干扰circ＿0003998可上调miR-330-5p表达(P<0.05)。干扰circ＿0003998或过表达miR-330-5p后CAL-27细胞集落形成数、迁移距离、侵袭数量显著降低(P<0.05)。过表达circ＿0003998或抑制miR-330-5p均可减弱山慈菇提取物对CAL-27细胞增殖、迁移和侵袭的影响(P<0.05)。结论 山慈菇提取物能够降低口腔鳞癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,其机制与下调circ＿0003998/miR-330-5p分子轴有关。     

口腔鳞状细胞癌细胞TLR3表达及其配体poly(I:C)的诱导凋亡作用

目的研究口腔鳞状细胞癌细胞中Toll样受体3(TLR3)的表达及其配体poly(I:C)的生物学作用。方法 RT-PCR和流式细胞术检测口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27和HB中TLR3mRNA和蛋白表达。以100μg/mLpoly(I:C)处理CAL-27,分别于刺激后24、48和72h时点采用MTT比色法测定细胞活力,24h时点采用流式细胞术检测细胞凋亡;并设立空白对照。结果 CAL-27和HB中TLR3mRNA和蛋白均呈高表达。CAL-27经poly(I:C)处理后,各检测时点的细胞活力均显著低于空白对照细胞(P<0.05);细胞凋亡率明显高于空白对照细胞[(16.67±1.202)%vs(7.00±1.155)%](P<0.05)。结论口腔鳞状细胞癌细胞内高表达TLR3,其配体poly(I:C)能诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡。     

沙利霉素对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沙利霉素(salinomycin)对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨沙利霉素对信号通路的影响。方法:培养口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27,将1、2、4、8、16、32 μmol/L沙利霉素和1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L顺铂与CAL-27细胞共同培养,24 h和48 h后用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测沙利霉素和顺铂对CAL-27细胞增殖的影响;0、2、4、8 μmol/L沙利霉素和0、5、10、20 μmol/L顺铂与CAL-27细胞共培养48 h后,通过流式细胞术检测沙利霉素和顺铂对CAL-27细胞周期的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CAL-27细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases-3,Caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(cysteine-containing aspartate-specific proteases-9,Caspase-9)、脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)修复酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)和磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B,p-Akt)的表达。结果:CCK-8实验表明沙利霉素和顺铂均能显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖,且抑制作用呈时间依赖性和药物浓度依赖性,但是相对于临床一线化疗药物顺铂而言,沙利霉素对CAL-27细胞增殖的抑制效果更加显著(P<0.001)。细胞周期检测表明,与加入二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的对照组相比,8 μmol/L沙利霉素与CAL-27细胞共同培养48 h后,细胞休眠期/DNA合成前期的CAL-27细胞比例明显升高(40.40%±1.99% vs.64.46%±0.90%,P<0.05), DNA合成期和DNA合成后期/有丝分裂期的CAL-27细胞比例出现降低(24.32%±2.30% vs.18.73%±0.61%,P<0.05,35.01%±1.24% vs.16.54%±1.31%,P<0.05);顺铂对CAL-27细胞周期没有特异性改变。蛋白免疫印迹法结果显示,沙利霉素在上调CAL-27细胞中Caspase-3和 Caspase-9蛋白表达(P<0.05)的同时下调PARP、Akt和p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。结论:相对于顺铂而言,沙利霉素对CAL-27细胞增殖有更强的抑制作用,并且能将口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞周期阻滞在细胞休眠期/DNA合成前期,同时能够诱导CAL-27细胞发生凋亡,这一机制可能和Akt/p-Akt 信号通路相关。     

沙利霉素对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沙利霉素(salinomycin)对口腔鳞癌细胞增殖和凋亡的影响,并初步探讨沙利霉素对信号通路的影响。方法:培养口腔鳞状细胞癌细胞系CAL-27,将1、2、4、8、16、32 μmol/L沙利霉素和1.25、2.5、5、10、20、40、80 μmol/L顺铂与CAL-27细胞共同培养,24 h和48 h后用细胞计数试剂盒-8(cell counting kit-8,CCK-8)法检测沙利霉素和顺铂对CAL-27细胞增殖的影响;0、2、4、8 μmol/L沙利霉素和0、5、10、20 μmol/L顺铂与CAL-27细胞共培养48 h后,通过流式细胞术检测沙利霉素和顺铂对CAL-27细胞周期的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测CAL-27细胞中天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(cysteine-containing aspartate-specific proteases-3,Caspase-3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-9(cysteine-containing aspartate-specific proteases-9,Caspase-9)、脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid,DNA)修复酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)、蛋白激酶B(protein kinase B, Akt)和磷酸化蛋白激酶B (phosphorylated protein kinase B,p-Akt)的表达。结果:CCK-8实验表明沙利霉素和顺铂均能显著抑制口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞增殖,且抑制作用呈时间依赖性和药物浓度依赖性,但是相对于临床一线化疗药物顺铂而言,沙利霉素对CAL-27细胞增殖的抑制效果更加显著(P<0.001)。细胞周期检测表明,与加入二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)的对照组相比,8 μmol/L沙利霉素与CAL-27细胞共同培养48 h后,细胞休眠期/DNA合成前期的CAL-27细胞比例明显升高(40.40%±1.99% vs.64.46%±0.90%,P<0.05), DNA合成期和DNA合成后期/有丝分裂期的CAL-27细胞比例出现降低(24.32%±2.30% vs.18.73%±0.61%,P<0.05,35.01%±1.24% vs.16.54%±1.31%,P<0.05);顺铂对CAL-27细胞周期没有特异性改变。蛋白免疫印迹法结果显示,沙利霉素在上调CAL-27细胞中Caspase-3和 Caspase-9蛋白表达(P<0.05)的同时下调PARP、Akt和p-Akt蛋白的表达(P<0.05)。结论:相对于顺铂而言,沙利霉素对CAL-27细胞增殖有更强的抑制作用,并且能将口腔鳞状细胞癌CAL-27细胞周期阻滞在细胞休眠期/DNA合成前期,同时能够诱导CAL-27细胞发生凋亡,这一机制可能和Akt/p-Akt 信号通路相关。     

口腔鳞癌来源的游离DNA通过诱导巨噬细胞极化调控口腔癌细胞系干性和迁移能力

目的 研究口腔鳞状细胞癌细胞来源的游离DNA对巨噬细胞极化作用,以及极化的巨噬细胞对口腔鳞癌细胞系的干性和迁移能力调控作用。方法 取病理确诊为口腔鳞状细胞癌的组织标本30例,异常增生的组织标本10例,正常口腔上皮组织标本10例。通过免疫组化染色、免疫荧光染色检测M2型巨噬细胞在不同口腔组织中数量及位置。收集人舌鳞状细胞癌细胞系Cal-27细胞的条件培养基,纯化并提取游离DNA(cell free DNA, cfDNA)并进行鉴定。用cfDNA处理巨噬细胞,观察细胞形态学变化,RT-qPCR检测极化相关指标表达水平。用cfDNA诱导后的巨噬细胞条件培养基处理CAL-27细胞,RT-q PCR检测其干性基因变化水平;并且通过划痕实验验证cf DNA诱导的巨噬细胞调控肿瘤细胞迁移的能力。结果 与正常口腔上皮组织相比,异常增生的口腔上皮深层结缔组织和口腔鳞癌间质中M2型巨噬细胞数量较多（P<0.05）。CAL-27细胞分泌长度在10 000～15 000 bp的cfDNA。CAL-27细胞分泌的cfDNA可诱导巨噬细胞高表达M2型巨噬细胞标记（P<0.05）。cfDNA处理的巨噬细...     

口腔鳞癌中CD24的表达、作用和治疗靶点价值

目的：明确口腔鳞癌组织和细胞中黏液素样细胞表面黏附分子CD24的表达模式、作用及其作为治疗靶点的潜在价值。方法：利用免疫组化、real-time RT-PCR和Western blot方法,明确CD24在78例人口腔组织标本和59例动物模型金地鼠（Hamster buccal）颊囊组织标本,以及口腔癌前病变上皮细胞DOK4、口腔鳞癌细胞CAL-27和WSU-HN6中的表达模式;以CAL-27和WSU-HN6细胞为模型,明确在常规和无血清成球培养条件下,全反式维甲酸（all-trans retinoic acid, ATRA）和CD24抗体对CAL-27和WSU-HN6细胞及肿瘤球生长的影响,并观察它们是否影响这两种细胞中CD24的表达。结果：人和金地鼠组织的免疫组织染色结果显示,在正常/单纯增生组织、轻度/中度异常增生组织、重度异常增生和鳞癌组织中均依次呈现CD24表达递增的现象(P＜0.05);与DOK细胞相比较,CAL-27和WSU-HN6口腔鳞癌细胞中CD24表达上调(P＜0.05)。相对于癌前病变细胞DOK,口腔鳞癌细胞CAL-27和WSU-HN6具有更强的增殖和肿瘤球成球的潜能(P＜0.05)。ATRA能够有效地抑制这两种口腔鳞癌细胞的CD24表达、体外增殖和肿瘤球形成的能力(P＜0.05),而CD24抗体虽然也一样能够抑制口腔鳞癌细胞的增殖和肿瘤球形成(P＜0.05),但却不影响其CD24的表达。结论：CD24在口腔鳞癌中表达上调,具有促进口腔鳞癌细胞增殖和肿瘤球形成的作用,维甲酸和CD24抗体皆能以CD24为靶点有效地抑制口腔鳞癌细胞的增殖和肿瘤球形成。     

阿托伐他汀对人舌鳞癌CAL-27细胞增殖、凋亡和迁移的影响及其机制

目的：探讨阿托伐他汀（ATO）对人舌鳞癌CAL-27细胞体外增殖、凋亡和迁移的影响,阐明其作用机制。方法：CAL-27细胞分为对照组和1、5、10、20及40μmol·L-1 ATO组。ATO作用后,CCK-8法检测各组CAL-27细胞存活率,克隆形成实验检测各组CAL-27细胞克隆形成率,Hoechst33342荧光染色和流式细胞术检测各组CAL-27细胞凋亡率,细胞划痕实验检测各组CAL-27细胞迁移率,Western blotting法检测各组CAL-27细胞中P53、P21、B细胞淋巴瘤2 (Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）-3、Caspase-9和周期蛋白依赖性激酶6 (CDK6)蛋白表达水平。结果：培养24和48 h后,与对照组比较,不同浓度ATO组细胞存活率明显降低（P<0.05）。培养48 h后,与对照组比较,不同浓度ATO组细胞克隆形成率（P<0.01）和细胞迁移率（P<0.05）明显降低,40μmol·L-1 ATO组细胞基本丧失克隆和迁移能力;不同浓度ATO组细胞凋亡率明显升高（P&l...     

乙酰肝素酶在舌鳞状细胞癌组织中的表达及其与肿瘤转移的关系

目的:探讨乙酰肝素酶(Hpa)在舌鳞状细胞癌(舌鳞癌)组织中的表达及其与肿瘤颈淋巴结转移的关系。方法:采用免疫组织化学方法检测49例舌鳞癌患者手术标本和10例正常对照组标本的Hpa表达情况。结果:舌鳞癌组的Hpa表达水平明显高于正常对照组(P<0.05);恶性度高的舌鳞癌组明显高于低度恶性舌鳞癌组(P<0.05);有淋巴结转移的舌鳞癌组明显高于无转移舌鳞癌组(P<0.05)。结论:舌鳞癌Hpa表达高于正常组织,与肿瘤病理分级、临床分期及淋巴结转移呈明显相关关系。     

survivin mRNA及蛋白在舌鳞癌中的表达

目的:检测舌鳞癌组织中生存素(survivin)mRNA及其蛋白的表达,探讨舌鳞癌发生、发展过程中survivin的作用。方法:应用原位杂交及免疫组织化学方法检测10例正常舌黏膜,13例高分化舌鳞状细胞癌,20例中分化舌鳞状细胞癌,12例低分化舌鳞状细胞癌标本中survivinmRNA及其蛋白的表达情况。结果:舌鳞癌标本中survivin mRNA及蛋白阳性表达率显著高于正常舌黏膜标本(P<0.01),高、低分化的舌鳞癌标本之间survivin mRNA及蛋白阳性表达率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:survivinmRNA及其蛋白在舌鳞癌不同阶段中明显增加,与舌鳞癌的发生、发展密切相关。     

Nav1.6-RNAi通过AKT通路抑制口腔鳞癌细胞增殖作用研究

目的 探讨Nav1.6-RNAi对口腔鳞状细胞癌细胞增殖作用的影响,并分析其可能相关机制.方法 使用免疫组化、Western blot和qRT-PCR法检测电压门控钠通道Nav1.6在口腔鳞状细胞癌组织中的表达情况;将Nav1.6-RNAi转染到人舌鳞癌细胞株(CAL-27细胞)中,使用Western blot法检测Nav1.6、CyclinD1、C-myc、AKT及p-AKT的表达,并通过流式细胞仪检测细胞周期.结果 免疫组化、Western blot和qRT-PCR结果证实Nav1.6在口腔鳞状细胞癌组织中表达高于口腔正常组织(P＜0.05);Nay1.6-RNAi转染到CAL-27细胞中后,CyclinD1、C-myc、p-AKT蛋白表达降低(P＜0.05),且S期细胞明显减少.结论 电压门控钠通道Nav1.6可能通过AKT通路参与口腔鳞状细胞癌的增殖.     

miR-33-5p靶向调控JNK1/c-Jun通路降低口腔鳞状细胞癌多重耐药性

目的 探讨miR-33-5p调控c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)通路对人口腔鳞状细胞癌多重耐药性的影响.方法 CAL-27细胞分为CAL-27组、CAL-27/CBP组、CAL-27/CBP+scramble inhibitor组、CAL-27/CBP+miR-33-5 p inhibi-tor组,卡铂(CBP)诱...     

斑蝥素抑制舌癌细胞生长及转移能力

摘 要:【目的】 观察斑蝥素(Cantharidin)对舌癌细胞株Tca8113?CAL-27生长及转移能力的抑制作用?【方法】 舌癌细胞株Tca8113?CAL-27处理组采用斑蝥素处理,通过噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞生长能力;通过流式细胞术检测细胞的细胞周期分布;通过实时定量PCR和Western-blot检测p21?细胞周期蛋白依赖激酶1(CDK1)?基质金属蛋白酶-2?9(MMP-2,9)基因表达的变化;通过Transwell小室及划痕实验检测斑蝥素对细胞侵袭和迁移能力的影响?【结果】 斑蝥素抑制舌癌细胞生长,呈剂量和时间依赖性(P﹤0.01)?斑蝥素处理后G2/M期细胞比例上升(P﹤0.01),呈G2/M期阻滞?斑蝥素处理后,抑制G2/M周期转换的p21表达上调(P﹤0.01),而促进G2/M周期转换的CDK1表达下调(P﹤0.01)?斑蝥素可显著抑制舌癌细胞的侵袭能力,处理24 h使Tca8113?CAL-27细胞侵袭力分别下降(93.50 ± 3.32)%(P﹤0.01),(61.33 ± 4.11)%(P﹤0.01)?斑蝥素处理后MMP-2?9 mRNA表达量显著降低?划痕实验显示斑蝥素可显著抑制舌癌细胞的迁移能力(P﹤0.01),处理12 h使Tca8113?CAL-27细胞迁移能力分别下降(57.60 ± 8.98)%(P﹤0.01),(49.94 ± 5.63)%(P﹤0.01)?【结论】 斑蝥素通过阻滞细胞周期抑制舌癌细胞的生长,并通过抑制舌癌细胞迁移和对基质的降解,抑制舌癌细胞转移?     

植物乳杆菌代谢产物和Ca^2＋诱导人舌鳞癌CAL-27细胞凋亡的研究

目的：探讨植物乳酸杆菌发酵乳清蛋白获得的代谢产物以及Ca^2＋对人舌鳞癌CAL-27细胞生长抑制作用和诱导细胞凋亡作用。方法：植物乳杆菌23201经复原乳清菊糖培养基培养，制备相应的代谢产物1（LPM1）。利用草酸钠溶液沉淀LPM1中的Ca^2＋获得不含Ca^2＋的代谢产物（LPM1-F）；采用MTT法检测不同浓度的LPM1和LPM1-F对CAL-27细胞体外增殖的抑制作用；通过吖啶橙染色法观察凋亡细胞的形态学变化；采用Annexinv—FITC／PI双染试剂盒检测早期凋亡率。结果：不同浓度LPM1和LPM1-F分别作用CAL-27细胞24h，最大抑制率分别达到（48．81±4．96）％和（56．70±2．33）％；荧光显微镜下观察，凋亡细胞皱缩，凝聚呈新月形或马蹄形，贴壁不良；流式细胞仪结果显示：经LPM1和LPM1-F处理的CAL-27细胞早期凋亡率均高于对照组。结论：植物乳酸杆菌代谢产物体外抑制CAL-27细胞生长，呈剂量的依赖性，并且诱导细胞凋亡，其中Ca^2＋对人舌鳞癌CAL-27细胞生长和凋亡无影响。     

巨噬细胞炎症蛋白-1β对人舌鳞癌细胞CAL-27增殖和凋亡的影响

目的 探讨β亚族趋化因子受体5(CCR5)在不同人舌鳞癌细胞株的表达情况以及其配体巨噬细胞炎症蛋白-1β(MIP-1β)对人舌鳞癌细胞株CAL-27增殖和凋亡的影响.方法 采用蛋白印迹法和免疫荧光染色对3种人舌鳞癌细胞株(CAL-27、UM-1、Tca-8113)MIP-1β的相应受体CCR5的表达进行检测;根据MIP-1β刺激浓度的不同,细胞被随机分为4组:0 ng/mL组(对照组)、10 ng/mL组、20 ng/mL组、40 ng/mL组.用CCK-8试剂盒(Cell Counting Kit-8)检测MIP-1β在刺激12、24、48 h时,对CAL-27细胞增殖的影响;实验分组同前,分别用0、10、20、40 ng/mL IP-10处理24 h后收集细胞,用Annexin V/PI双染流式细胞仪检测CAL-27细胞的凋亡情况.结果 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株均有表达,并且CCR5在3株细胞的胞膜及胞质内均有染色;和对照组相比,MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用.在12 h、24 h时,3种浓度的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05);48 h时,10 ng/mL、20 ng/mL的MIP-1β均能够促进CAL-27细胞增殖(P<0.05),但40 ng/mL的MIP-1β对CAL-27细胞的增殖无影响(P>0.05);在24 h时,40 ng/mL MIP-1β组的细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.05),而10 ng/mL、20 ng/mL MIP-1β组细胞凋亡率和对照组之间均无显著差异(P>0.05).结论 CCR5在3种人舌鳞癌细胞株的胞膜及胞质内均有表达;MIP-1β对CAL-27细胞有促进增殖的作用,但相对较高浓度的MIP-1β对CAL-27细胞的凋亡也有促进作用.随着较高浓度MIP-1β作用时间的延长,促增殖作用减弱,而这种减弱可能是由MIP-1β的促凋亡作用的逐步发挥所引起的.     

醋酸棉酚对人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭性作用的实验研究

  目的  研究醋酸棉酚（gossypol acetic acid，GAA）对体外培养的人舌鳞癌Cal-27细胞侵袭影响及其作用机制。  方法  制备0 μmol/L、2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L的GAA作用于人舌鳞癌Cal-27 细胞，通过Transwell实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27 细胞侵袭能力的影响；通过qRT-PCR及Western blot实验检测GAA对人舌鳞癌Cal-27 细胞基质金属蛋白酶-2（Matrix Metalloproteinase-2，MMP-2）、基质金属蛋白酶-9（Matrix Metalloproteinase-9，MMP-9）mRNA及蛋白的表达变化。  结果  Transwell实验显示:GAA对人舌鳞癌Cal-27细胞细胞侵袭产生抑制作用，实验组和对照组比较差异有统计学意义（P < 0.05）；qRT-PCR实验及Western blot显示，实验组人舌鳞癌Cal-27细胞中MMP-2、MMP-9 mRNA及蛋白的表达降低，与对照组相比差异有统计学意义（P < 0.05）。  结论  GAA能抑制人舌鳞癌Cal-27细胞的侵袭性，并降低人舌鳞癌Cal-27细胞MMP-2、MMP-9的mRNA及蛋白表达水平，这可能是GAA抑制肿瘤侵袭作用的机制之一。     

RNAi沉默FAK基因表达对人舌鳞癌细胞CAL-27凋亡和侵袭的影响

目的 应用RNA干扰技术将FAK基因表达沉默后,观察人舌鳞癌细胞株CAL-27凋亡和侵袭能力的变化.方法 使用RNAi技术构建3对FAK siRNA后,瞬时转染细胞.运用实时定量聚合酶链反应(qPCR)法检测FAK mRNA的表达情况,筛选出沉默效率最佳的siRNA用于后续实验.运用蛋白免疫印迹法(Western blot)法检测细胞FAK蛋白的表达情况,流式细胞仪观察细胞的凋亡情况,Transwell侵袭实验观察细胞体外侵袭能力的变化.结果 qPCR实验结果显示转染siRNA-1组、siRNA-2组、siRNA-3组FAK mR-NA表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01),其中以siRNA-3沉默效率最高;Western blot结果显示转染组细胞FAK蛋白表达水平明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示转染组细胞凋亡率明显高于阴性对照组和空白对照组(P＜0.01);Transwell法实验结果显示转染组细胞穿膜的数量明显低于阴性对照组和空白对照组(P＜0.05).结论 沉默FAK基因表达可诱导舌鳞癌细胞CAL-27的凋亡,有效抑制其侵袭能力.