中国着色性干皮病的发病概况及遗传学分析

对６个着色性干皮病家系中１３例患者进行了临床遗传学研究。结合复习国内有ＸＰ病的文献资料，共计对国内１１８个ＸＰ家系中２０３例患者的临床遗传学资料进行了分析，分别对我国ＸＰ的发病概况，临床遗传学特征及分型，ＤＮＡ修复能力及互补群分析等进行了讨论，提出我国ＸＰ基因频率和发病率。     

脱细胞异种（猪）皮与自体微粒皮混合移植术修复大面积深度烧伤的治疗体会

目的探讨采用脱细胞异种（猪）皮作为微粒皮移植术覆盖物的临床疗效,并对操作要领进行总结,用以指导临床。方法采用脱细胞异种（猪）皮作为覆盖物,对15例大面积深度烧伤患者进行微粒皮移植术,分别就其手术方法、操作要领以及术后注意事项等进行总结,观察修复效果,总结治疗体会。结果本组15例患者38个移植部位,其中Ⅰ类愈合部位29个,占全部移植部位的76．32％;Ⅱ类愈合部位7个,占18．42％;Ⅲ类愈合部位2个,占5．26％。未完全愈合者经术后换药或残余创面再次手术修复,最终15例患者均痊愈。结论应用脱细胞异种（猪）皮作为自体微粒皮移植术的覆盖物,可起到较好的保护作用,微粒皮扩展、融合效果较好,能够有效封闭创面,从而起到稳定病情的作用。     

阳离子脂质体Lipofectamine 3000对贴壁细胞、悬浮细胞和原代细胞转染效率比较的研究

为了比较阳离子脂质体Lipofectamine 3000(Lipo3000)在不同细胞类型中的转染效率,课题组分别在贴壁细胞NIH3T3、悬浮细胞EL4和原代细胞CD4+T细胞中,利用Lipo3000将不同浓度的miRNA mimics转染至细胞内,通过流式细胞术检测的方法,比较不同细胞之间以及同一细胞、不同浓度的miRNA mimics组之间转染效率的差异。结果显示,在NIH3T3细胞中,miRNA mimics为100nmol/L时,转染效率最高,可达(41.47±8.10)%;而在EL4和CD4+T细胞中,随着miRNA mimics浓度的增加,转染效率呈上升的趋势,最高分别可达(12.13±1.16)%和(3.80±0.60)%。可见,Lipo3000在贴壁细胞和悬浮细胞的转染效率明显高于原代细胞。     

灌注速度对悬浮细胞在微流道中运动的影响

目的 建立细胞灌注培养有限元模型,研究不同灌注速度对悬浮细胞运动的影响.方法 利用COMSOL Multiphysics建立细胞和微流道二维模型并进行网格划分,根据灌注速度不同分为3组,分别为u0=0.196 mm/s、u1=0.117mm/s、u2=0.04mm/s,利用流固耦合模块进行计算.结果 微流道中流场分布比...     

黄酮类化合物柚皮苷抑制HaCaT细胞RANTES产生的研究

目的：分析肿瘤坏死因子口（TNF-α）和γ干扰素（IFN-γ）是否诱导体外培养角质形成细胞株HaCaT产生趋化因子RANTES,了解柚皮苷是否影响TNF-α和IFN-γ／对合成RANTES的诱导作用。方法：TNF-α和IFN-γ刺激培养的HaCaT细胞,应用定量RT-PCR方法测定RANTES的mRNA表达,应用ELISA方法测定上清液中RANTES。结果：正常培养HaCaT细胞RANTES微弱表达,TNF-α和TFN-γ刺激使HaCaT细胞RANTES的mRNA表达与分泌量显著增加。柚皮苷0．5,0．25mmol·L^-1能抑制TNF-α和TFN-γ诱导的RANTES分泌。结论：柚皮苷可抑制TNF-α和TFN-γ引起的HaCaT细胞分泌RANTES。     

人着色性干皮病基因D对HepG2细胞Mdm2和Mdm4表达的影响

 目的：探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D（xeroderma pigmentosum D, XPD）对肝癌细胞鼠双微体2（murine double minute 2,Mdm2）和鼠双微体4（murine double minute 4,Mdm4）表达的影响。方法：用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2,实验分为3组：（1）空白对照组;（2）pEGFP-N2组;（3）pEGFP-N2/XPD组。用MTT法观察细胞的增殖活力;用流式细胞术检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Mdm2、Mdm4和P53表达量的变化。结果：MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了肝癌细胞的增殖活力;流式细胞术结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了G 1期细胞增加,S期减少,凋亡率增加。RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高,同时使得Mdm2和Mdm4表达降低,P53表达增高。结论：XPD能下调肝癌细胞中Mdm2和Mdm4的表达,上调P53表达,并能抑制肝癌细胞增殖及诱导其凋亡。     

T细胞接种预防实验性自身免疫病的研究

本研究利用Wistar大鼠成功地建立了实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的动物模型,17只大鼠有12只出现了典型的临床症状及病理改变,且对致病抗原——豚鼠脊髓加福氏完全佐剂可产生迟发型超敏反应,用细胞毒试验证明其T细胞可特异性杀伤正常大鼠脑组织,杀伤率为15.11±2.97%,且与病情呈正相关性。将病鼠淋巴结T细胞用ConA激活、戊二醛处理后制成疫苗,接种健康大鼠,一周后用致病抗原进行攻击,7只大鼠无一发病,全部产生了对EAE的抵抗力,接种鼠T细胞可特异性杀伤病鼠T细胞,杀伤率为9.38±1.68%。本文结果表明:EAE发病与动物体内存在自身反应性T细胞有关,接种该T细胞制成的疫苗可预防EAE的发生,且这种保护作用也是由T细胞所介导。     

着色性干皮病基因D和p53对HBV复制的影响

 目的:探讨人着色性干皮病基因D(XPD) 和p53对乙型肝炎病毒（HBV）复制的影响。方法:使用脂质体转染法把重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2转染进入人肝癌细胞株HepG2.2.15细胞,转染后的第2天用20 μmol/L pifithrin-α（p53抑制剂）孵育细胞24 h。实验共分为空白对照组、pEGFP-N2组、pEGFP-N2/XPD组、pEGFP-N2/XPD+pifithrin-α组和pifithrin-α组。使用RT-PCR法检测XPD、乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）及乙型肝炎病毒X蛋白（HBx） mRNA表达的变化;使用ELISA法检测培养上清液中HBsAg和HBeAg含量的变化;用荧光定量PCR法检测培养上清液中HBV-DNA含量的变化;用bDNA法检测细胞内核心颗粒中HBV-DNA含量的变化。结果:RT-PCR结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染可使得XPD mRNA表达增高,XPD表达增高能使得HBsAg、HBeAg和HBx mRNA表达明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用（均P<0.01）。ELISA结果显示,XPD表达增高能使得培养上清液中HBsAg和HBeAg含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用（均P<0.01）。荧光定量PCR结果显示,XPD表达增高能使得培养上清液中HBV-DNA含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用（均P<0.01）。bDNA结果显示,XPD表达增高使得细胞内核心颗粒中HBV-DNA含量明显减少,而pifithrin-α能抑制XPD的这一作用（均P<0.01）。结论: XPD能通过p53通路抑制HBV复制,所以XPD和p53可能成为乙型肝炎抗病毒治疗的作用靶点。     

Ⅰ、Ⅱ型人T细胞白细胞病病毒的感染和致病性（一）

Ⅰ、Ⅱ型人Ｔ细胞白细胞病病毒的感染和致病性（一）张兴权（中国医学科学院医药生物技术研究所，北京１０００５０）近年来，人逆转录病毒（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｕｓｅｓ）的致病能力引起了医学界极大的兴趣，其例莫过于人免疫缺陷病毒（ＨＩＶ）感染引起的人免疫缺陷综合征...     

脸裂狭小，倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征Ⅰ型相关基因的定位

目的 对一个常染色体显性遗传的脸裂狭小,倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征（blepharophimosis epicanthus inversus and ptosis.BPES)家系的致病基因进行定位研究。方法 对染色体3q区域4个微卫星位点D3S3045,D3S1764,D3S3053和D3S2436进行连锁分析。结果 未见患者在这4个位点有缺失,各多态性位点Lod最大值D3S3045为0．77,D3S1764为3．61;D3S3053为0．11,D3S2436为－0．03。结论 在该家系中,BPES 1与3q22-q24区域的D3S1764位点紧密连锁。     

滤泡辅助性T细胞的特征及其在自身免疫病和免疫缺陷病中的意义

淋巴滤泡是T细胞辅助B细胞体液免疫的重要场所,趋化至该部位的滤泡辅助性T细胞具独特的表型、基因型和功能,是一特殊的CD4+T细胞群体。该类细胞的异常可能与某些自身免疫病和免疫缺陷病相关。     

Th1细胞是诱导器官特异性自身免疫病的主要原因

ＣＤ４＋Ｔ辅助细胞（Ｔｈ）根据其分泌细胞因子的种类,而分为不同的细胞亚群。虽然这些细胞亚群最初是在体外从小鼠Ｔ细胞克隆分离的［１］,目前已有许多证据表明,在小鼠、大鼠和人体内同样存在有类似的Ｔ细胞亚群。Ｔｈ细胞可分为三个亚群,Ｔｈ１,Ｔｈ２和Ｔｈ０。Ｔｈ１细胞主要分泌ＩＬ２,ＩＦＮγ和ＴＮＦα。它的功能主要是激活巨噬细胞,介导迟发型超敏反应（ＤＴＨ）和促使合成ＩｇＧ２ａ抗体。Ｔｈ１细胞所介导的免疫反应,在抗感染免疫、器官移植排斥反应和自身免疫病的诱发过程中有重要的调节作用。Ｔｈ２细胞分泌Ｉ…     

睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征Ⅰ型相关基因的定位

目的　对一个常染色体显性遗传的睑裂狭小、倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征(blepharophimosis epicanthus inversus and ptosis, BPES)家系的致病基因进行定位研究。方法　对染色体3q区域4个微卫星位点D3S3045、D3S1764、D3S3053和D3S2436进行连锁分析。结果　未见患者在这4个位点有缺失,各多态性位点Lod最大值D3S3045为0.77(θ＝0.00);D3S1764为3.61(θ＝0.00);D3S3053为0.11(θ＝0.3);D3S2436为-0.03(θ＝0.4)。结论　在该家系中,BPES Ⅰ与3q22-q24区域的D3S1764位点紧密连锁。     

氟氢松醋酸酯对人体皮片郎格罕氏细胞的影响

已证明郎格罕氏细胞(LC)在皮肤移植排斥反应中起重要作用,若能在皮片移植前选择性减少LC,就可延长皮片存活期。本文选免疫抑制剂氟氢松醋酸醇(FA)体外处理人体皮片,用酶组化,免疫组化及电镜观察FA对皮片中LC的影响。结果显示,经FA处理后的皮片中LC密度减小,细胞形态发生退行变化。我们推论,用FA体外处理皮片,有可能成为临床同种异体植皮中延长皮片存活期的有效方法之一     

利用腺病毒载体介导的RNA干扰技术在悬浮细胞中获得基因沉默效应

 摘要： 目的 利用重组腺病毒载体携带短发夹RNA （short hairpin RNA,shRNA）,使难于转染的悬浮细胞达到较高的目的基因沉默效率。方法 将含有人胎盘生长因子（placental growth factor,PLGF）干扰序列的76 nt的寡核苷酸序列连入含有绿色荧光蛋白基因（GFP）的腺病毒穿梭质粒pRNAT-H1.1/Adeno中,获得重组穿梭质粒。重组穿梭质粒经限制性内切酶PmeⅠ线性化、去磷酸化回收后与腺病毒骨架pAdeasy-1共电转入BJ5183感受态细胞。同源重组后经限制性内切酶PacⅠ酶切鉴定,挑选阳性克隆并大量获得重组质粒。PacⅠ酶切质粒后转染HEK 293细胞,经过三轮病毒包装,收获病毒颗粒,经OD260方法和TCID50方法测定病毒滴度。病毒颗粒感染悬浮细胞——人小细胞肺癌细胞（NCI-H 250和NCI-H 209）,通过实时定量PCR方法鉴定靶基因沉默效应,并利用肿瘤细胞重建基质膜侵袭实验进行功能鉴定。结果 NCI-H 250和NCI-H 209细胞在感染腺病毒颗粒48 h后,大部分细胞表达GFP,感染率接近100%;两株细胞感染腺病毒48 h后,PLGF mRNA表达水平明显下降,且靶基因沉默的肿瘤细胞侵袭能力明显下降。结论 携带shRNA的腺病毒表达载体,可以代替电转、脂质体介导等方法,使难于转染细胞的目的基因达到有效沉默。     

睑裂狭小倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征基因的定位与克隆研究进展

睑裂狭小，倒转型内眦赘皮和上睑下垂综合征（BPES）是一种少见的常染色体显性遗传病，细胞遗传学及家系连锁分析均将BPES基因定位于3q23，最后BPES候选基因（FOXL2）已被定位克隆，BPESⅠ型和Ⅱ型患者均有FOXL2突变。     

人着色性干皮病D组基因对白细胞介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的: 探讨人着色性干皮病D组基因(XPD)对白细胞介素-6(IL-6)促进人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用的影响。方法: 用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空质粒pEGFP-N2稳定转染VSMCs,然后给予1×10⁵ U/L IL-6孵育48 h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6 + pEGFP-N2组;(6)IL-6 + pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wt-P53)表达量的变化。结果: 在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.05),并能抑制IL-6促进VSMCs增殖的作用(P<0.05);流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了细胞G₀/G₁期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs G₀/G₁期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P<0.01);RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P<0.05或P<0.01),同时Bcl-2表达降低,Bax和wt-P53表达增高(P<0.05或P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs的Bcl-2表达增高、Bax和wt-P53表达降低的作用(P<0.05或P<0.01)。结论: XPD能抑制VSMCs增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMCs增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。