Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖中的作用

目的研究Cyclin D1／CDK4在ω-3脂肪酸和视黄酸抑制HL-60细胞增殖过程中的作用。方法HL-60细胞经全反式视黄酸(ATRA)和二十二碳五烯酸(EPA)处理一定时间后，MTr比色法测定细胞增殖功能；RT—PCR分析ATRA和EPA对HL-60细胞Cyclin D1、CDK4、CDK2mRNA表达的影响；Western blot分析CDK4和P15蛋白质表达水平。结果ATRA或EPA单独处理均能抑制HL-60细胞生长，下调节HL-60细胞Cyclin D1、CDK4mRNA和CDK4蛋白的表达，上调P16蛋白的表达，二者联合处理时上述变化更明显，而ATRA和／或EPA对CDK2 mRNA表达无明显影响。结论ATRA和EPA可能通过下调节Cychn D1、CDK4的表达，上调节P16的表达，导致Cyclin D1／CDK4复合物的活性下降，细胞生长被阻断在G1／G0期，从而发挥它们对HL-60细胞增殖抑制作用。     

长期传代后HL-60细胞内5’-核苷酸酶-n基因表达与阿糖胞苷耐药性的关系

目的观察白血病细胞株(HL-60)及其耐药细胞株(HL-60/R)胞浆5’-核苷酸酶-Ⅱ(CN-Ⅱ)基因表达,以及长期传代后的变化规律,探索CN-Ⅱ与Ara-C疗效及耐药机制的相关性。方法采用RT-PCR方法测定HL-60和HL-60/R的细胞内CN-ⅡmRNA表达,并通过体外培养传代,检测长期传代(5、10、20、30、40、50代)后CN-ⅡmRNA表达变化。结果培养初期结果显示,HL-60和HL-60/R的CN-ⅡmRNA表达水平分别为0.23±0.04和0.47±0.05,HL-60/R的CN-ⅡmRNA表达水平明显高于HL-60(P<0.05)。经长期培养传代至10、20、30、40和50代,各传代检测节点的HL-60和HL-60/R细胞内CN-ⅡmRNA表达水平均无明显变化(P均>0.05)。上述各传代检测节点,HL-60/R的CN-ⅡmRNA表达水平均明显高于HL-60(P均<0.05)。结论 HL-60、HL-60/R细胞中CN-ⅡmRNA表达差异有统计学意义。经长期传代后,上述差异持续存在,提示CN-Ⅱ表达与Ara-C的疗效相关,但在长期传代后,变化并不明显,可能与Ara-C耐药现象的发生无关。     

重组腺病毒介导的反义c-myc基因对HL-60细胞增殖及细胞周期的影响

目的:观察重组反义c-myc腺病毒(Ad-Asc-myc)对急性早幼粒白血病HL-60细胞周期及增殖的影响,探讨其作用的分子机制.方法:将Ad-Asc-myc与鱼精蛋白硫酸盐(Protamine sulfate)混合后转染HL-60细胞,MTF法观察细胞生长曲线,流式细胞仪检测细胞增殖周期,RT-PCR检测c-myc转录变化,免疫细胞化学检测c-myc及增殖细胞核抗原(PCNA)表达变化.结果:Ad-Asc-myc转染HL-60细胞后,细胞生长受抑,细胞周期呈现G1期延长、S期缩短,增殖指数逐渐下降,出现大量凋亡细胞.c-myc基因转录及表达下降,PCNA表达降低.结论:Ad-Asc-myc可使HL-60细胞的生长减缓,增殖能力降低,凋亡细胞增加.其生物学活性与HL-60细胞c-myc和PCNA表达受抑有关.     

4-1BBL介导逆向信号在HL-60细胞对淋巴细胞活性影响中的作用

目的:观察4-1BBL介导逆向信号对HL-60细胞表达肿瘤生长因子-β(TGF-β)的影响,以及阻断4-1BB/4-1BBL信号前后的HL-60细胞培养上清液对淋巴细胞活化、增殖和凋亡诱导作用的影响,探讨肿瘤的免疫逃逸机制。方法:流式细胞术检测HL-60细胞4-1BBL表达水平和阻断4-1BBL信号前后HL-60细胞TGF-β表达水平;将阻断4-1BBL前后的HL-60细胞培养上清液加入淋巴细胞培养液中,流式细胞术检测淋巴细胞活化、凋亡水平,MTT法检测淋巴细胞增殖水平。结果:HL-60细胞表面4-1BBL表达率为92.6%;阻断4-1BBL后的HL-60细胞表达TGF-β水平下降(P<0.05),其细胞培养上清液对淋巴细胞活化没有明显影响(P>0.05),但对淋巴细胞增殖抑制作用和诱导凋亡作用下降(P<0.05和P<0.01)。结论:表达在HL-60细胞表面的4-1BBL可介导逆向信号,通过调节TGF-β分泌抑制机体淋巴细胞活性,为肿瘤细胞的生存创造条件。     

异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的:探讨异丙酚(Propofol)抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心肌成纤维细胞(CFb)增殖的机制。方法:用AngⅡ建立诱导新生大鼠CFb纤维化模型。将心肌细胞分为对照组、AngⅡ组和异丙酚组。用流式细胞仪测定各组细胞的周期分布;用ELISA法测定各组细胞中Ⅰ、Ⅲ型胶原含量;用Western Blot法测定各组细胞中转化生长因子β1(TGF-β1)的蛋白表达量;用免疫细胞化学化法测定各组细胞中细胞外信号调节蛋白激酶(ERK1/2)和经典型蛋白激酶Cα亚型(cPKCα)的表达。结果:100μmol/L的异丙酚对AngⅡ诱导的大鼠CFb的增殖抑制效果最显著(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组细胞G_0/G_1期细胞百分率降低(P<0.01),S期和G_2/M期细胞百分率升高(P<0.01);异丙酚组细胞的G_0/G_1期细胞百分率高于AngⅡ组(P<0.01),S期和G_2/M期细胞百分率低于AngⅡ组(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组大鼠的CFbⅠ、Ⅲ型胶原含量增加(P<0.01);异丙酚组大鼠的CFbⅠ、Ⅲ型胶原含量低于AngⅡ组(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组大鼠CFb中TGF-β1的蛋表达升高(P<0.01),异丙酚组大鼠CFb中TGF-β1的表达低于AngⅡ组(P<0.01)。与对照组相比,AngⅡ组大鼠CFb中ERK1/2和cPKCα的表达增加(P<0.01);异丙酚组大鼠CFb中ERK1/2和cPKCα的表达低于AngⅡ组。结论:异丙酚能够抑制AngⅡ诱导的大鼠CFb的增殖和Ⅰ、Ⅲ型胶原含量的增加,其机制与降低细胞中TGF-β1的蛋白表达和抑制ERK1/2、cPKCα通路有关。     

5-杂氮-2′-脱氧胞苷抗白

目的:研究甲基转移酶抑制荆5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-2dC)对人急性髓系白血病细胞株HL-60生长、分化、凋亡的影响,初步探讨其抗白血病作用的可能机制.方法:不同浓度和时间的5-aza-2dC处理HL-60细胞后,采用MTT比色试验检测5-aza-2dC对HL-60细胞生长的影响;采用流式细胞术检测5-aza-2dC对HL-60细胞周期及分化的影响;采用Hochest33342染色和流式细胞术检测5-aza-2dC时HL-60细胞凋亡的影响;采用RT-PCR法检测药物处理对S100A8和S100A9基因mRNA表达水平的影响.结果:(1)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地抑制HL-60细胞的生长,并使HL-60细胞周期阻滞于G2/M期;(2)5-aza-2dC处理使HL-60细胞的髓系分化抗原CD11b的表达增强,在低浓度(0.5 μmol/L)时其促分化作用最明显;(3)5-aza-2dC呈剂量和时间依赖性地诱导HL-60细胞凋亡,在高浓度(5.0μmol/L)时诱导凋亡的作用最明显;(4)5-aza-2dC能明显上调S100A8和S100A9基因mRNA的表达.结论:5-aza-2dC能抑制HL-60细胞生长,阻滞HL-60细胞于G2/M期,促进HL-60细胞分化和诱导其凋亡,并能上调S100A8和S100A9基因的表达,这些作用可能是5-aza-2dC抗急性髓系白血病的重要机制.     

钾通道阻断剂抑制乳腺癌细胞增殖作用的实验研究

目的探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶(4-AP)对多西紫杉醇(DOC)抗人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖、凋亡、周期的影响。方法通过MTT比色法分析DOC、4-AP以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MDA-MB-435S增殖的影响;流式细胞术AnnexinV-FITC/PI双染法和PI单染法检测2种药物对MDA-MB-435S凋亡和周期的影响。结果0.04～50μmol/LDOC可剂量依赖性抑制人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S的增殖;4-AP(5mmol/L)本身具有抑制MDA-MB-435S细胞的增殖作用,并可使DOC(25μmol/L)对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S达最大抑制率的时间明显提前,DOC和4-AP对MDA-MB-435S细胞的增殖抑制有相加或协同作用,并呈剂量和时间依赖性。DOC(2μmol/L)单用24h时促进MDA-MB-435S细胞凋亡的作用并不明显,当与4-AP(5mmol/L)联合应用后能明显增加细胞早期凋亡的发生率;单用DOC可使MDA-MB-435S细胞阻断在G2/M期,单用4-AP可使MDA-MB-435S细胞阻断在G0/G1期,两药联合应用可使细胞阻断在G2/M期。结论DOC和4-AP分别在G2/M期和G0/G1期抑制MDA-MB-435S细胞增殖,4-AP通过促进DOC诱导MDA-MB-435S细胞凋亡从而抑制其增殖作用。     

竹节参总皂苷对人白血病细胞株HL-60的作用

目的:研究竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对人白血病细胞HL-60的作用,探讨其作用机制,为进一步开发竹节参提供理论依据。方法:体外培养人早幼粒白血病细胞HL-60,细胞计数法观察TSPJ对细胞活力的影响,四唑氮蓝(nitroblue tetrazolium,NBT)测定其对细胞还原能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化和膜表面分化抗原CD11b的表达情况。结果:和阴性对照组比较,不同浓度TSPJ处理的细胞活力显著下降,NBT阳性细胞增多,G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少,膜表面分化抗原CD11b的表达量增多。结论:TSPJ对体外培养的HL-60细胞生长育一定抑制作用,其作用机制与诱导细胞分化和周期阻滞有关。     

鼠尾草酸联合1,25-二羟基维生素D3诱导HL-60细胞分化作用的研究

目的 研究鼠尾草酸与1,25-二羟基维生素D3[1,25(OH)2D3]联合应用对HL-60细胞分化的影响.方法 通过四唑氮蓝(MTT)法观察细胞生长,光学显微镜观察细胞形态,应用流式细胞仪测定细胞周期及成熟单核细胞分化标记CD14的表达,观察联合应用鼠尾草酸与低浓度1,25(OH)2D3对HL-60细胞的影响.结果 低浓度1,25(OH)2D3(1nmol/L)抑制HL-60细胞增殖、诱导细胞分化的作用与对照组比较无统计学意义(P＞0.05).同浓度1,25(OH)2D3与10μmol/L鼠尾草酸联合处理HL-60细胞72h后,细胞形态具有成熟单核细胞特征、细胞增殖明显受抑制、细胞阻滞于G0/G1期、CD14的表达率为57.624%;其作用效应与对照组比较有显著性差异(P＜0.01),与单独应用高浓度1,25(OH)2D3(100nmol/L)组比较作用相似,无统计学意义(P＞0.05).结论 鼠尾草酸可增强1,25(OH)2D3对HL-60细胞的诱导分化、抑制增殖作用.     

定清片对人白血病HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的研究定清片对人白血病HL-60细胞增殖的影响及其作用机制。方法制备定清片含药血清,并以不同浓度含药血清体外干预培养HL-60细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞术检测细胞周期及凋亡率。结果不同浓度定清片(5%、10%、20%)作用于HL-60细胞,均能抑制细胞生长,其抑制作用随药物浓度增加呈递增趋势,相同浓度组24 h、48 h、72 h抑制率递增。流式细胞术检测细胞周期和凋亡率,与正常对照组比较,定清片组G_1期细胞停滞率及凋亡率明显升高,且药物浓度越高,G_1期细胞停滞率和凋亡率越高。结论定清片能抑制人白血病HL-60细胞增殖,其作用机制可能与影响细胞周期和诱导细胞凋亡相关。     

小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及增殖抑制作用

目的 研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖与分化的影响。方法 应用锥虫蓝排染法、生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL-60细胞生长的影响；细胞分化根据细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来判断；细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果 HL-60细胞经小檗碱处理后生长明显受抑，IC50为5．29(24h)，2．65(48h)，0．74(72h)mg／L。选择1，2，4，8mg／L小檗碱作用于HL-60细胞，动态观察发现HL-60细胞向成熟细胞分化：细胞核变小，核浆比减少；NBT还原能力显著增强；CD11b表达升高，4mg／L组CD11b阳性率高达85．1％。细胞周期分析发现，小檗碱处理后细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞明显减少。结论 盐酸小檗碱可抑制HL-60细胞的增殖，并诱导HL-60细胞向成熟细胞分化。     

几种抗癌药对HL—60细胞在小鼠肾囊膜下生长的抑制作用

以纤维蛋白凝块为HL-60细胞支持物,将其接种于正常和免疫抑制小鼠肾囊膜下,观察其增殖特性和生长特点。结果HL-60细胞纤维蛋白凝块在免疫排斥反应出现前的正常小鼠肾囊膜下,体积增殖5倍左右;在免疫抑制小鼠肾囊膜下,增殖15倍左右。组织切片发现,在肾囊膜下生长6d细胞密度明显增加,生长细胞沿肾囊膜向四周侵润,肿瘤细胞切面面积明显扩大,且生长细胞仍保持HL-60细胞的形态特点。维甲酸(RA)、维胺酸(RⅡ)及三尖杉酯碱等药物可明显抑制HL-60细胞的生长。     

Potentiation of arsenic trioxide-induced apoptosis by retinoic acid in retinoic acid sensitive and resistant HL-60 myeloid leukemia cells

Objective To study the effect of arsenic trioxide (As(2)O(3)) on non-APL acute myeloid leukemia (AML) cells and the interreactive effect between retinoic acid (RA) and As(2)O(3).Methods RA-sensitive (S) and RA-resistant (R) HL-60 non-APL AML cells were used as an in vitro model. Cell number and trypan blue were used to observe cell growth and survival. Apoptosis was determined by morphological changes, using a DNA laddering assay, terminal deoxynucleotidyl transferase (TdT) fragment end labeling assay and a flow cytometry assay. Results As(2)O(3) induced apoptosis in both HL-60S and HL-60R cells, As(2)O(3)-induced apoptosis was both time- and concentration-dependent in a therapeutically-achievable As(2)O(3) range (0.25-4.0 μmol/L). Both all-trans retinoic acid (ATRA) and 9-cis retinoic acid (9cRA) potentiated As(2)O(3)-induced apoptosis, as measured by quantitative TdT fragment end labeling and flow cytometry assays in both HL-60S and HL-60R cells (P&lt;0 .05, for all RA+As(2)O(3) combinations vs As(2)O(3) alone in both sublines). Conclusions As(2)O(3) may inhibit the growth of non-APL AML cells by promoting programmed cell death. RA can potentiate As(2)O(3)-induced apoptosis even in RA-resistant HL-60 cells in which the classical ATRA response pathway is repressed owing to a homozygous inactivating mutation in the retinoic acid receptor α. As[2]O[3] can have clinical activity in non-APL cases of AML and the enhanced activity might result from the combined As(2)O(3)-RA therapy.     

Effects of retinoic acid and arotinoidethylester on expression of cyclins and cyclin-dependent kinase in HL-60 cells

Intherecentyears,manyfeaturesofthecon-trolofcellcyclehavebeenclarified.Theprogres-sionofthecellcycleinmammaliancellsisregulat-edbythefamilyofcyclin-dependentserine-threo-nineproteinkinase(cdks).Differentcdksactindistinctphaseofthecellcycle.Theprecisetimingoftheiractionisdeterminedbymeansoftheircellcycle-specificexpression,phase-specificphospho-rylationandinteractionwithcdkinhibitors,buttheitinteractionwithspecificcyclinsismoreim-portant.Cellcycleprogressionisgovernedbythesequentialformation,ac…     

海兔中新环氧甾醇的体外抗肿瘤活性研究

目的:研究一种海兔中新环氧甾醇(HEO)的体外抗肿瘤活性.方法:以体外培养的人早幼粒细胞白血病细胞株HL-60作为研究对象,采用3H-TdR掺入实验、Annexin Ⅴ荧光染色检测、流式细胞术、透射电镜等观察HEO对细胞周期和诱导凋亡的作用,以考察HEO的抑瘤活性.结果:HEO对HL-60作用24 h的半数抑制浓度IC 50为1.4 mg/L,在0.8 mg/L时已明显抑制HL-60细胞的对数生长;3H-TdR掺入实验表明,随着HEO作用时间的延长,对HL-60细胞的增殖抑制作用明显增强.Annexin Ⅴ荧光染色表明HEO在作用24 h后,大量HL-60细胞开始出现凋亡.透射电镜显示肿瘤细胞染色质呈现凋亡表现.细胞周期分析显示G2 M期细胞增多.结论:HEO明显抑制HL-60生长,并通过诱导凋亡杀伤肿瘤细胞,抗肿瘤活性强;对细胞周期的影响提示其抑瘤机制可能为M期阻滞.     

A new 2-aminosteroid induces cellular differentiation and upregulates the expression of MafB and Egr-1 genes respectively in HL-60 and K562 leukemia cells

Background In previous work, we suggested that some 2-aminosteroids inhibited proliferation and induced differentiation of both human and murine leukemia cells. Here, we reported the actions of another new 2-aminosteroid designated as H89712 on human leukemia cells. Methods Cell colony counting and MTT assay were used to determine proliferation. Cell morphology, histochemical staining, UV detection and cytometry were used to determine differentiation. RT-PCR was used to detect gene expression. Standard statistical method was used to analyze data. Results H89712 inhibited proliferation of HL-60 leukemia ceils and the inhibition percentage in MTT assay was 18% at the dose of 10^-8 mol/L and 65% at the dose of 10^-5 mol/L, respectively. The inhibition for HL-60 in colony assay was 23% at the dose of 10^-8 mol/L and 96% at the dose of 10^-5 tool/L, respectively. H89712 also induced HL-60 cells toward macrophage-like differentiation. It was verified by flow cytometry that the percentage of positive CD14 expression in differentiated HL-60 cells was about 9 times higher than that of the control at thedose of 10^-8 mol/L and 20 times higher than that of the control at the dose of 10^-5 mol/L respectively, and this action involved upregulation of MafB gene in HL-60 leukemia cells. On the other hand, H89712 inhibited proliferation of K562 leukemia cells and the inhibition of K562 leukemia cells in MTT assay was shown by 34% at the dose of 10^-8 mol/L and 88% at the dose of 10^-5 mol/L respectively. The inhibition of K562 leukemia cells in colony assay was 53% at the dose of 10^-8 mol/L and 100% at the dose of 10^-5 mol/L respectively. H89712 also induced K562 cells toward erythroid-like differentiation and it was verified by flow cytometry that the percentage of positive CD71 expression in differentiated K562 cells was about 9 times higher than that of thecontrol at the dose of 10^-8 mol/L and 16 times higher than that of the control at the dose of 10^-5 mol/L respectively. This action was related to upregulation of Egr-1 gene in K562 leukemia cells. Conclusions Our results showed the important roles played by MafB in macrophage differentiation and Egr-1 in erythroid differentiation of human myeloid leukemia cells.     

The influence of curcumin on the cell cycle of Hl-60 cells- and contrast study

Over the past years, the new research findingshave shown that cancer development depends onwhether normal cell cycle is permanently disturbed.Abnormal cell cycle may contribute to uncontrolledcell growth, ace urn "lating. mutat ion and fin al c arc ino-genesis instead of progammed cell death (PCD)[1]. Itis now widely accepted that curcumin possesses definite anticancer effects by inhibition of the cancer cellproliferation. In order 'to understand further themechanism of curcumin against acute…     

硼替佐米或联合三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡实验研究

目的 探讨硼替佐米单独或联合三氧化二砷对HL-60细胞凋亡的影响.方法 不同浓度硼替佐米、三氧化二砷处理细胞12～48 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性;DNA凝胶电泳、细胞形态学观察、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果 10～50 nmol/L硼替佐米可有效抑制HL-60细胞增殖,并诱导其发生凋亡.其中10nmol/L剂量处理12 h,即有细胞凋亡发生,延长作用时间或增加药物剂量,细胞凋亡率明显增加.选择15 μmol/L三氧化二砷与10nmol/L硼替佐米联合应用,可见HL-60细胞凋亡率比两种药物单独使用时显著增加.结论 硼替佐米对HL-60细胞存在时间和剂量依赖性的细胞凋亡效应,与三氧化二砷联合具有明显的协同作用.