凝胶色谱法测定麦冬多糖MDG-1在大鼠胃肠道含量变化

目的:探讨口服麦冬多糖MDG-1后在胃肠道内的变化.方法:采用异硫氰酸荧光素(FITC)对麦冬多糖MDG-1进行标记,测定取代度.采用荧光凝胶色谱法( HPGPC)对消化道内含量进行测定.胃内含量变化测定:SD雄性大鼠随机分成6组,其中5组分别口服给予不同剂量F-MDG-1,空白组给予水,在1h时测定含量;另取SD雄性大鼠随机分成6组,其中5组分别经口给予相同剂量F-MDG-1,空白组给予水,分别在0,1,2,4h时测定含量.小肠道内含量测定:SD-雄性大鼠分成4组,空白组1组及给药组3组,经胃幽门部注射给药后立即分别结扎胃幽门部及小肠末端,空白组给予水适量,给药组给予F-MDG-1溶液适量,分别在1,2,4h测定内容物内F-MDG-1含量.大肠内含量测定:SD-雄性大鼠分成4组,空白组1组及给药组3组,每组6只,给药方法:经小肠末端部注射给药后立即分别结扎小肠末端及大肠末端近肛门部.空白组给予水适量,给药组给予F-MDG-1溶液适量,分别在1,2,4h测定大肠内容物内F-MDG-1含量.结果:给予相同剂量的F-MDG-1,随着药物在胃内驻留时间的延长,其浓度下降.而在给予不同浓度F-MDG-1后,在1h时测得浓度占给药量的百分比随着给药剂量的增加而增加;但将pH调7.2后,其含量未变化.分别单次给予小肠、大肠F-MDG-1后,随着药物在肠道内驻留时间的延长,其含量逐渐降低.结论:采用FITC对MDG-1进行标记,并采用荧光色谱法对MDG-1在胃肠道内含量变化进行研究是可行的.MDG-1在胃内不分解,其主要代谢部位在肠道,其原因可能是肠道内环境及细菌共同作用的结果.     

麦冬多糖MDG-1对膳食诱导肥胖模型小鼠肠道益生菌群多样性影响的研究

目的:研究麦冬多糖MDG-1对膳食诱导肥胖小鼠肠道益生菌群多样性的影响,特别关注肠道益生乳酸菌多样性的变化。方法:选取8周龄雄性C57BL/6J小鼠60只,给予高脂饲料(research diets,D12492)喂养6周及适应性灌胃2周,剔除体重低于30 g和灌胃体重降幅超过10%的动物,将诱导成功的肥胖模型小鼠按体重和血糖随机分为DIO模型组(diet-induced obesity,DIO)以及MDG-1高(300 mg·kg-1)、中(150 mg·kg-1)、低(75 mg·kg-1)剂量给药组;模型组及MDG-1不同浓度治疗组用高脂饲料喂养,对照组小鼠始终给予低脂饲料(research diets,D12450B)喂养,每组各12只。治疗组小鼠分别以不同浓度的MDG-1溶液灌胃,模型组和对照组小鼠以对照溶剂(生理盐水)灌胃,持续16周,于治疗终点收集各组小鼠直肠内容物。通过传统培养方法结合变性梯度凝胶电泳(DGGE)法对小鼠的肠道益生菌进行培养,统计菌落数量,分析模型动物口服不同浓度的MDG-1前后肠道益生菌群的变化,通过16S r DNA测序,建立系统发育树以及利用PCR-DGGE技术等分子鉴定手段确定小鼠肠道菌群变化的优势菌群。结果:不同浓度的MDG-1均可增加小鼠肠道益生菌群数量,尤其是鼠乳杆菌和台湾乳杆菌,且随浓度增加作用逐渐增强。结论:不同给药剂量的MDG-1可在一定程度上增加小鼠肠道益生菌的数量,尤其是台湾乳杆菌和鼠乳杆菌,同时改善肠道菌群多样性,促进肠道益生菌的增殖。     

柳茶多糖对小鼠免疫功能的影响

目的:研究柳茶多糖对免疫低下小鼠免疫功能的影响.方法:取正常昆明种小鼠200只,雌雄各半,随机分为5组:空白对照组、模型组、柳茶多糖低剂量组(110 mg·kg-1)、中剂量组(220 mg·kg-1)和高剂量组(440 mg·kg-1).腹腔注射环磷酰胺制备免疫低下的小鼠模型,测定柳茶多糖对小鼠免疫器官质量、小鼠迟发型变态反应(DTH)的影响;血清溶血素法测定体液免疫功能;碳粒廓清法测定非特异性免疫功能;脾淋巴细胞增殖试验测定细胞免疫功能.结果:110～440 mg·kg-1的柳茶多糖能显著提高免疫器官质量,提高DTH和促进其血清溶血素lgG,lgM的含量,增强小鼠的碳粒廓清率,明显改善免疫低下小鼠的脾淋巴细胞增殖反应.结论:柳茶多糖能增加免疫低下小鼠的免疫器官质量,对非特异性免疫、迟发型变态反应、体液免疫以及细胞免疫功能均有明显的促进作用.     

蝉花与有关虫草活性成分检测比较

目的:测定蝉花的虫草活性成分,并与冬虫夏草和蛹虫草作比较。方法:分别采用高效液相色谱法、3,5-二硝基水杨酸比色法和高碘酸钠比色法测定3种虫草样品的腺苷和虫草素、虫草多糖以及虫草酸含量。结果:经测定,蝉花中含虫草素0.02mg·g-1,腺苷1.90mg·g-1,虫草多糖94.88mg·g-1,虫草酸78.57mg·g-1,其中虫草酸和腺苷含量高于冬虫夏草,多糖和虫草酸含量高于蛹虫草。结论:蝉花中的虫草活性成分不亚于冬虫夏草和蛹虫草,属于优质虫草,值得进一步研究和推广。     

麦冬多糖含量测定方法的研究

目的:建立麦冬多糖含量测定方法;方法:采用蒽酮-硫酸法,考察温度对葡萄糖、果糖、麦冬多糖吸收值的影响。结果:果糖与麦冬多糖的吸收值变化趋势一致,且含测结果稳定。结论:选用果糖作标准品,测定麦冬多糖含量。方法简便、准确。     

苯酚-硫酸法测定麦冬须根中多糖的含量

目的测定麦冬须根中多糖的含量,与块根中多糖的含量比较。方法采用苯酚-硫酸法。结果最大吸收波长为485nm,多糖含量在0.101～1.012mg/L范围内与吸光度有良好的线性关系,回归方程为:A=0.8267C 0.0163,r=0.9992。测得麦冬块根多糖含量约为0.3016mg/g,须根多糖含量约为0.3594g/g。平均回收率为100.30%,RSD=3.14%。结论麦冬须根含多糖,且含量不低于块根。麦冬须根亦有药用价值。     

麦冬多糖MDG-1聚乙二醇修饰物的合成与药动学研究

 目的 探索通过聚乙二醇修饰技术以改善麦冬多糖MDG-1的药动学性质。方法 以氨基聚乙二醇单甲醚作为修饰剂,研究聚乙二醇修饰MDG-1的合成反应条件,用高效凝胶色谱法测定修饰物的表观相对分子质量与接枝率,并考察其药动学性质。结果 确定了优化的合成条件,制得多种用不同相对分子质量聚乙二醇修饰的具有不同接枝率的MDG-1聚乙二醇修饰物,其生物半衰期较原药有明显的延长,延长程度与修饰剂的相对分子质量和修饰物的接枝率有关。结论 聚乙二醇修饰技术是一个具有进一步研究前景的改善MDG-1药动学性质的方法。     

芡实多糖对力竭小鼠运动能力及心肌抗氧化能力的影响

目的:研究芡实多糖对力竭小鼠运动能力和心肌抗氧化能力的影响.方法:将小鼠分成对照组、芡实多糖低、中、高剂量组.4组分别用蒸馏水,100,200,300 mg·kg-1 ·d-1的芡实多糖溶液连续ig 21 d后,小鼠进行力竭游泳实验,分别测定各组小鼠力竭游泳时间、心肌中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果:芡实多糖能显著延长小鼠的力竭游泳时间,降低心肌中MDA含量,提高SOD和GSH-Px含量.结论:芡实多糖能明显提高小鼠的运动能力和心肌的抗氧化能力.     

龙眼多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的影响

目的探讨龙眼多糖对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 50只SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、高剂量龙眼多糖组(60 g.kg-1.d-1)、低剂量龙眼多糖组(30 g.kg-1.d-1)、尼莫地平阳性对照组(10 mg.kg-1.d-1)。给药组术前连续灌胃7 d,末次给药60 min后,采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,缺血2 h再灌注4 h后对大鼠神经功能进行评分,并测定脑梗塞面积、脑含水量、脑组织中NO的含量。结果与脑缺血再灌注模型组相比,龙眼多糖能够改善大鼠的神经功能障碍,降低脑梗塞面积和脑含水量,降低脑组织中的NO含量。结论龙眼多糖对大鼠急性脑缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能与降低脑组织中的NO含量有关。     

麦冬多糖的提取工艺考察

目的优选麦冬多糖的提取工艺。方法以麦冬多糖得率作为考察指标，采用正交设计法对麦冬多糖的提取工艺进行优选。苯酚-浓硫酸比色法测定麦冬多糖含量。结果提取工艺以8倍量水，加热30min，提取2次，醇沉溶度为80％时，麦冬多糖的含量较高。麦冬多糖在0．02032～0．10008mg范围内线性关系良好（r=0．9998），平均回收率为102．41％，RSD为1．78％（n=5）。结论此优选条件麦冬多糖得率较高。     

麦冬多糖MDG-1对鼠实验性心肌缺血的保护作用

目的研究麦冬多糖（MDG-1）对鼠离体心脏缺血再灌注损伤和皮下注射异丙肾上腺素致急性心肌缺血的保护作用。方法在离体实验中,采用Langendorff豚鼠离体心脏缺血再灌注模型,将豚鼠随机分为缺血再灌注损伤组（IRI）、阳性对照组（果糖二磷酸钠,FDP）和MDG-1给药组。阳性对照组和MDG-1给药组各设10^-6～10^-4g／mL3个剂量,分别测定缺血再灌注后不同时间的心脏收缩幅度、心率、冠脉流量。在整体动物实验中,采用大鼠皮下注射异丙肾上腺素致急性心肌缺血的模型,分别给予大鼠口服MDG-110、20、40mg／kg,以普奈洛尔为阳性对照,分别设置模型组和正常对照组,观察心电图ST段位移和血浆乳酸脱氢酶（LDH）的活性。结果在离体实验中,不同剂量的MDG-1可以增加离体心脏缺血再灌注后的冠脉流量（P〈0．01）,较快恢复心脏收缩幅度（P〈0．01）,抑制由缺血再灌注引起的心率加快（P〈0．01）。在整体实验中,给予大鼠口服40mg／kgMDG-1可以抑制异丙肾上腺素导致的心肌缺血大鼠血浆LDH活性的升高（P〈0．05）,而对心电图ST段位移无显著的影响（P〉0．05）。结论MDG-1具有拮抗豚鼠离体心脏缺血再灌注损伤的作用,口服MDG-1对异丙肾上腺素所致大鼠心肌缺血损伤具有一定的保护作用。     

白果中止咳化合物GK-A在大鼠尿液和胆汁中的排泄行为分析

目的:研究白果中有止咳作用的新化合物GK-A在大鼠尿液和胆汁中的排泄行为。方法:利用UPLC-MS/MS测定大鼠尿液和胆汁中GK-A的含量,色谱分离采用C18色谱柱,流动相0.1%甲酸水溶液(A)-乙腈(B)梯度洗脱(0~1 min,95%A;1~3 min,95%~85%A;3~7.5 min,85%~40%A;7.5~8 min,40%A),流速0.2 mL·min-1,柱温35℃,进样量0.5μL;质谱采用电喷雾离子源,在正离子模式下采用多重反应监测(MRM)方式测定,GK-A和GK-2(内标)的定量离子对分别为m/z 453.1~291.1,467.0~305.1。大鼠灌胃给予GK-A后,收集不同时间段尿液和胆汁,测定样品中GK-A的含量,计算其累积排泄量和累积排泄率。结果:给药72 h后GK-A在大鼠尿液中的累积排泄量(12.35±2.69)μg,累积排泄率(0.58±0.13)%;给药24 h后GK-A在大鼠胆汁中的累积排泄量(55.16±29.22)μg,累积排泄率(1.57±0.83)%。GK-A原型经大鼠尿液和胆汁排泄的量较少,且排泄速度慢。结论:灌胃给药后,GK-A原型经大鼠尿液和胆汁的排泄不是其主要的消除途径。     

大鼠灌胃灯盏花素后血浆、胆汁、尿液以及粪便中代谢产物的鉴定

目的 对大鼠灌胃灯盏花素后收集的血浆、胆汁、尿液以及粪便中存在的灯盏乙素的代谢产物进行鉴定.方法 通过使用HPLC结合光电二极管阵列检测器(DAD),采用梯度洗脱的方法 ,对比分析给药组大鼠和空白组大鼠的血浆、胆汁、尿液以及粪便样品,并且在相同的液相色谱条件下与对照品的保留时间和紫外吸收特征进行对照来鉴定主要代谢产物.结果 从大鼠ig 20、200 mg/kg灯盏花素的血浆中鉴定了代谢产物野黄芩素-6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6-O-β-D-glucuronide,M5);从大鼠ig 20、200 mg/kg灯盏花素的胆汁中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1)、6-O-甲基-灯盏乙素(6-O-methylscutellarin,M3)、、野黄芩素-6-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6-O-β-D-glucuronide,M5)和灯盏乙素(黄芩素苷,scutellarin,M7),从大鼠ig 20 mg/kg灯盏花素的尿液中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1),从大鼠ig 200 mg/kg灯盏花素的尿液中鉴定了代谢产物野黄芩素-6,7-O-β-D-二葡萄糖醛酸苷(scutellarein-6,7-di-O-β-D-glucuronide,M1)、野黄芩素(scutellarein,M2)和灯盏乙素(scutellarin,M7);从大鼠ig 200 mg/kg灯盏花素的粪便中鉴定了代谢产物野黄芩素(scutellarein,M2).结论 灯盏乙素在大鼠体内发生了广泛的代谢,并且主要以其代谢产物的形式存在;灯盏乙素在大鼠体内产生的代谢产物主要通过尿液和胆汁排泄.     

MDG-1, a polysaccharide from Ophiopogon japonicus exerts hypoglycemic effects through the PI3K/Akt pathway in a diabetic KKAy mouse model

Ethnopharmacological relevance

Ophiopogon japonicus is a traditional Chinese medicine that might be helpful for the treatment of type 2 diabetes. Recent studies have confirmed its beneficial properties, but not the mechanism of action.

Aim of study

In this study, we examined the effects of a water-soluble β-d-fructan (MDG-1) from O. japonicus on type 2 diabetes through the PI3K/Akt pathway in a diabetic KKAy mouse model.

Materials and methods

MDG-1 was extracted from the tube root of O. japonicus and purified as described previously ( Xu et al., 2005). The KKAy mice were gavaged once daily with either distilled water, MDG-1or rosiglitazonefor 8 weeks. Blood glucose levels were tested regularly for the fed and fasted mice. In order to evaluate the effect of MDG-1 on disease progression, the proteins of InsR/IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3/Glut-4 were detected by Western blotting and serum TG, TC, HDL-C, LDL-C were also dertermined.

Results

MDG-1 reduced the hyperglycemia, hyperinsulinemia and hyperlipidemia in the KKAy mice. The oral glucose tolerance test (OGTT) and the level of insulin in the serun showed that insulin resistance in KKAy mice was ameliorated after MDG-1 treated. After 8 weeks treatment with 300 mg/kg MDG-1, the content of triglycerides (TG) and low density lipoprotein cholesterol (LDL-C) the serum decreased significantly. Meanwhile high density lipoprotein cholesterol (HDL-C) content increased notably. MDG-1 did not have any effect on total cholesterol (TC) content in the serum, whereas rosiglitazone significantly decreased the TC content. In addition, MDG-1 upregulates the phosphoinositide 3-kinase p85 subunit, Akt, insulin receptor (InsR), insulin receptor substrate-1 (IRS-1) and Glut-4 expression, but downregulates glycogen synthase kinase 3β expression.

Conclusions

These data indicate that MDG-1 has remarkable anti-diabetic activity through the InsR/IRS-1/PI3K/Akt/GSK-3/Glut-4 signaling pathway. We believe that MDG-1 is a promising anti-diabetic compound that will be helpful for the treatment of T2DM.     

头针对急性脑缺血再灌注大鼠促炎性反应因子TNF-α、IL-1β含量的影响

目的:探讨头针治疗脑缺血的免疫学机制。方法:将140只健康雌性SD大鼠随机分为假手术组(n=20)、模型组(n=60)和头针组(n=60),后2组又各分为24、48、72h共6个亚组,每个亚组各20只。采用大脑中动脉线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)再灌注模型。头针组选取"顶颞后斜线"顶颞前斜线",取双侧头穴,采用疏密波,频率2/100Hz,强度2mA,每次20min,每日1次。应用神经功能缺损评分(neurological severity score,NSS)、HE染色及酶联免疫吸附反应(ELISA)观察各时间点头针对模型大鼠神经功能缺损、缺血脑组织及血浆肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量的影响。结果:头针组与模型组各时段的组间比较,第72h头针组的NSS显著低于模型组(P<0.01),头针组白细胞浸润在48h和72h降低最为明显(P<0.01),大鼠血浆和脑组织TNF-α、IL-1β含量在72h两组间差异显著,头针组显著低于模型组(P<0.01)。结论:头针有利于大鼠脑神经功能的恢复,可减轻急性脑缺血再灌注后白细胞的浸润,下调TNF-α、IL-1β的表达,从而减缓由其介导的炎性免疫反应,减轻脑缺血再灌注损伤,实现对脑组织的保护作用。     

超高效液相色谱法研究新人参二醇在大鼠尿液中的排泄

 目的 建立测定大鼠尿液中新人参二醇含量的UPLC-MS/MS分析方法,研究新人参二醇在大鼠尿液中的排泄情况。方法 尿液样品采用液-液萃取法进行提取,通过UPLC-MS/MS分析测定单剂量灌胃给予新人参二醇后大鼠尿液中原药的含量,计算尿液中原药的累积排泄量和平均排泄率。结果 新人参二醇在80~1 280 ng·mL^-1呈现良好的线性关系,质控样品的日内和日间精密度（RSD）均小于15%,方法回收率均高于80%;大鼠灌胃新人参二醇(100 mg·kg^-1)后,96 h内原药在尿中的累积排泄量占给药剂量百分比为0.023 3%。结论 新人参二醇几乎不以原型的形式从尿中排泄。     

人参皂苷Rg1 PEG修饰及其稳定性实验研究

目的:探讨人参皂苷Rg1经PEG修饰前后在大鼠离体胃中的稳定性。方法:取SD大鼠,禁食18 h后,随机分为Rg1组和PEG-Rg1组,准确吸取Rg1胃灌注液和PEG-Rg1胃灌注液注射到离体胃内,37℃恒温振荡,不同时间点取样,采用UPLC对样品中指标成分人参皂苷Rg1进行含量测定,观察比较人参皂苷Rg1与PEG-Rg1在离体胃中的稳定性差异。结果:Rg1在大鼠离体胃中的稳定性差,2 h时测得Rg1为26.8%,降解73.2%,PEG-Rg1在大鼠离体胃中的稳定性提高,2 h时测得Rg1仍有81.8%,仅降解18.2%。结论:PEG修饰之后可以提高人参皂苷Rg1在胃中的稳定性,可以改善修饰之前游离的人参皂苷Rg1在胃中容易降解,稳定性差等问题。     

参附注射液对严重烧伤早期大鼠心脏功能保护作用的研究

目的观察严重烧伤大鼠早期应用参附注射液后心脏功能的改变。方法健康雄性SD大鼠80只,随机分为正常组、假伤组、模型组和参附组,其中模型组和参附组处理致成30%TBSAⅢ°烧伤,于伤后6h检测血流动力学和心肌力学指标(SAP、DBP、LVSP、LVEDP、+LVdp/dtmax、-LVdp/dtmax),并分别在伤后12、24、48h 3个时相点检测其心肌酶谱(AST、LDH)的改变。结果烧伤后6h,模型组LVSP、+LVdp/dtmax、-LVdp/dtmax较对照组均明显降低,LVEDP明显增高,而给予参附组均较模型组明显减轻。同时参附组血清LDH、AST检测值也明显低于模型组。结论在严重烧伤早期应用参附注射液可以明显减轻心肌损害程度,改善心脏功能。