氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体复合物促进人脐静脉内皮细胞活性氧生成并诱导其凋亡

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/aβ2GPI)复合物对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡的影响以及ROS活性氧(ROS)在其中的作用。方法分别用β2GPI、 aβ2GPI、β2GPI/aβ2GPI复合物、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/兔IgG(R-IgG)复合物、 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物刺激HUVEC,利用Western blot法检测凋亡相关蛋白BAX、 Bcl2和裂解型胱天蛋白酶3(c-caspase-3)的蛋白水平;异硫氰酸荧光素标记的膜联素Ⅴ/碘化丙啶(annexinⅤ-FITC/PI)双标记结合流式细胞术检测细胞凋亡率、二氯荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)标记结合流式细胞术检测细胞ROS水平; CCK-8法检测各处理组对HUVEC活力的影响;采用抗氧化剂罗布麻宁(apocynin)或二苯基碘氯化物(DPI)预处理后观察ROS水平的改变以及对oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物诱导的HUVEC凋亡的影响。结果 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物能显著降低HUVEC的活力,增加细胞BAX、 c-caspase-3蛋白水平,降低Bcl2蛋白水平,促进HUVEC凋亡; oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物引起细胞ROS水平升高,抗氧化剂处理后,细胞内ROS水平降低,细胞凋亡减少。结论 oxLDL/β2GPI/aβ2GPI复合物可以通过提高ROS来诱导HUVEC凋亡。     

TLR4在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-timePCR)检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ诱导THP-1细胞TFmRNA表达,采用试剂盒检测细胞TF活性;利用自制的β2GPⅠ胶联亲和层析柱(β2GPⅠ-Affi-Gel)分析β2GPⅠ与THP-1细胞表面相应受体结合情况;Real-timePCR及Western蛋白印迹检测anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88、MD-2情况;观察TLR4途径抑制物——紫杉醇是否干预anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的作用。结果:Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞TF表达显著增加(P0.05);THP-1细胞表面的TLR4能够结合于β2GPⅠ-Affi-Gel柱;Anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达TLR4、MyD88、MD-2显著升高(P0.05);紫杉醇(1μmol/L)能够抑制anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物对细胞的刺激效应。结论:TLR4及相关信号分子在anti-β2GPⅠ/β2GPⅠ复合物诱导THP-1细胞表达TF中具有重要作用。     

信号分子IRAK1/4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

目的:探讨IRAK1和IRAK4在antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性;Western blot检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达IRAK1、磷酸化-IRAK1(p-IRAK1)、IRAK4情况;观察IRAK1/4抑制物是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1表达TF。结果:Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1细胞表达TF显著增加(P<0.05 vs control);Antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)刺激THP-1细胞表达IRAK1、p-IRAK1、IRAK4(蛋白)显著升高(P<0.05 vscontrol);IRAK1/4抑制物(50μmol/L)能够阻断antiβ-2GPI/β2GPI复合物(100μg/ml)诱导THP-1表达TF及IRAK1磷酸化的效应。结论:antiβ-2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,信号分子IRAK1/4被激活进而发挥重要作用。     

联合检测β_2-MG和CysC与AIDS并发早期肾损伤的相关性研究

目的探讨β2-微球蛋白(β2-MG)和胱抑素C(Cys C)联合检测与艾滋病(AIDS)并发早期肾损伤的诊断价值。方法选取191例艾滋病患者和191例健康体检者,检测其β2-MG、Cys C、肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平并行统计学分析。结果 HIV组和对照组比较,β2-MG、Cys C、Cr、BUN差异有统计学意义(P0.05)。HIV组β2-MG、Cys C和β2-MG加Cys C联合阳性率明显高于对照组(P0.05)。艾滋病期、感染中期、原发感染期β2-MG与Cys C呈正相关(r=0.763、0.565、0.568,P0.05)。结论β2-MG、Cys C水平升高与肾脏早期损伤关系密切,联合检测对辅助诊断AIDS患者早期肾损伤及监测其病情发展具有重要的临床参考价值。     

肾炎患者尿β2-m,Ald,NAG联检的临床意义

我们对98例急慢性肾炎患者尿β2-微球蛋白(U-β2-m)、白蛋白(U-Ald)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)进行联测.     

MAPKs在anti-β2GPI/β2GPI刺激THP-1细胞表达TF过程中的作用探讨

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)在anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导单核细胞株THP-1表达组织因子(TF)中的活化及其作用。方法:利用荧光定量PCR(Real-time PCR)、TF活性试剂盒等分别检测anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF mRNA及TF活性,Western blot检测细胞表达p38、磷酸化-p38(p-p38)、ERK1/2、磷酸化-ERK1/2(p-ERK1/2)、JNK、磷酸化-JNK(p-JNK)的情况。进一步采用p38、ERK1/2、JNK抑制剂(SB203580、U0126、SP600125)观察是否能阻断anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF。结果:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物(100μg/ml)能够显著增强THP-1细胞表达TF,并使p-p38、p-ERK1/2、p-JNK水平显著升高(P<0.05 vs control);其引发的MAPKs磷酸化具有时间效应性,均在刺激30分钟时达到高峰;对应的特异抑制剂SB203580(10μmol/L)、U0126(5μmol/L)、SP600125(90 nmol/L)单独或合并处理THP-1细胞后,anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导细胞TF mRNA表达及TF活性的效应明显被阻断(P<0.01 vs control)。结论:Anti-β2 GPI/β2 GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF过程中,MAPKs被激活进而发挥重要作用。     

血清光抑素C及β_2微球蛋白在妊娠期糖尿病患者肾功能评价中的临床意义

目的探讨血清胱抑素C(Cys C)、β_2微球蛋白(β_2-MG)对妊娠糖尿病(GDM)患者肾损害的早期诊断价值。方法分别检测妊娠期糖尿病孕妇及健康对照组孕妇血清Cys C、β2-MG、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿酸(UA)水平。结果 GDM组孕妇的Cys C、β_2-MG水平显著高于对照组(P0.01),两组BUN Scr、UA比较无统计学意义。结论 Cys C、β_2-MG对更好的早期诊断GDM肾病具有重要意义。     

沉默肝脏X受体β表达对BV2小胶质细胞极化的影响

目的探讨沉默肝脏X受体β(LXRβ)对BV2小胶质细胞M1/M2表型变化和炎症因子释放的影响。方法通过RNA干扰技术沉默小鼠小胶质细胞株(BV2)中LXRβ的表达。实验分为siRNA-NC组(siRNA无关序列对照组)、siRNA-LXRβ组(转染siRNA-LXRβ质粒)。转染siRNA-LXRβ后,免疫荧光方法检测LXRβ和Iba1的表达水平;实时荧光定量PCR技术检测LXRβ、炎症因子(TNF-α、IL-6、IL-1β)、小胶质细胞M1型标记物(COX-2、iNOS、CD68)和M2型标记物(Arg-1、CD206)的mRNA水平表达。流式细胞术(flow cytometry)检测小胶质细胞M1型标记物(MHCⅡ、CD36)和M2型标记物(Arg-1、CD206)的表达水平。结果对BV2细胞分别转染24 h、48 h后发现,48 h的siRNA-LXRβ组的LXRβ蛋白及mRNA水平均显著低于NC组(P<0.001)。沉默LXRβ的表达后BV2细胞表现为胞体变圆变大,呈阿米巴样活化状态,炎症因子相关基因TNF-α、IL-6的mRNA表达水平显著升高(P<0.01),同...     

甲状腺癌钠/碘转运蛋白与血清β2-MG变化的相关性

甲状腺癌钠/碘转运蛋白(sodium/iodide symporter,NIS)和血清β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG)的研究日益广泛,其测定结果已开始成为肿瘤诊断及预后的参考指标.本文对甲状腺癌组织NIS表达及血清β2-MG含量进行研究,探讨NIS表达与血清β2-MG变化的相关性及与预后的关系. 1 材料与方法 β2-MG标准抗原(Sigma公司)、β2-MG酶标定量试剂盒(甘肃省医学科学研究院医学生物技术中心制备)、NIS鼠抗人单克隆抗体MAB3562(Millipore公司)及S-P试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司)均按试剂盒说明书操作.     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进脐静脉内皮细胞迁移及炎症因子表达北大核心CSCD

目的探讨氧化型低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/β2GPI antibody)复合物促进人脐静脉内皮细胞(HUVEC)迁移和炎症因子的表达以及与Toll样受体4(TLR4)的关系。方法 oxLDL、oxLDL/β2GPI复合物、oxLDL/抗β2GPI抗体复合物、oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、脂多糖(LPS)等刺激物处理HUVEC,采用划痕实验观察HUVEC的迁移能力;根据实验分组,收集HUVEC的总蛋白和总RNA,实时荧光定量PCR和Western blot法检测TLR4的mRNA和蛋白表达。利用上述刺激物分别刺激经TLR4抑制剂TAK-242预处理和未经处理的HUVEC,实时定量PCR检测单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA水平,ELISA检测细胞上清液中MCP-1、IL-1β、IL-6的蛋白水平。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物加速HUVEC迁移和诱导TLR4表达,oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进MCP-1、IL-1β、IL-6三种因子的mRNA和蛋白表达,TAK-242能够显著抑制该现象。结论 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物促进HUVEC迁移和相关炎症因子的表达,该过程与TLR4密切相关。     

β2-m、α1-m、Alb联合测定评估肾功能的临床意义

β2-微球蛋白(β2-m)在肾脏疾患中的应用已有报道，而β2-m，α1-m(α2-微球蛋白)、尿Alb(白蛋白)联合测定评估肾功能构报道尚少。作者将286例肾脏疾患或伴有肾功能损伤的有关疾病进行β2-m测定与BUN(血尿素氮)，Scr(血肌酐)做了比较，并进一步探讨β2-m，α1-m、尿Alb联合测定在评估肾功能的临床意义，现报告如下。     

β2-m RIA在高血压病肾脏损害中的应用价值

本文通过观察高血压患者血清中肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)、β2-微球蛋白(β2-m)的变化,探讨高血压患者β2-m浓度改变对早期的肾脏损伤。现将结果报告如下。     

TGF-β1在糖尿病肾病早期诊断中的应用

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)在糖尿病早期肾病诊断中的临床应用价值。方法:采用放射免疫分析检测糖尿病患者血清及尿中β2-微球蛋白(β2-m),采用酶联免疫分析(ELISA)法检测糖尿病患者血清中TGF-β1。同时检测尿白蛋白(uAlb)及尿微量蛋白,按尿白蛋白的排泄率分为三组。结果:糖尿病患者TGF-β1、血β2-m、尿β2-m与尿Alb具有很好的正相关性。结论:检测血清TGF-β1、血β2-m、尿β2-m是诊断糖尿病早期肾损害的敏感指标,对糖尿病肾病的早期诊断具有一定的临床应用价值。     

急性髓系白血病患者血清β2-MG、HGF、TGFβ1表达及临床意义

目的探讨急性髓系白血病(AML)患者血清β2微球蛋白(β2-MG)、肝细胞生长因子(HGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达及临床意义。方法以2010年1月至2018年1月我院诊治的96例AML患者作为疾病组、同期健康体检的35名志愿者作为健康组,比较两组血清β2-MG、HGF、TGFβ1表达水平,分析不同病理特征、不同疗效AML患者血清β2-MG、HGF、TGFβ1表达水平,并进行相关性分析。结果与健康组比较,疾病组血清β2-MG、HGF水平明显升高,而TGFβ1水平明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);复发、异常染色体核型AML患者血清β2-MG、HGF明显高于无复发、正常染色体核型者,而TGFβ1水平明显低于无复发、正常染色体核型者(P<0.05),AML完全缓解者血清β2-MG、HGF明显低于未缓解者,TGFβ1水平则明显高于未缓解者(P<0.05),Pearson相关分析提示AML患者疗效与血清β2-MG、HGF呈明显负相关(r=-0.456、-0.462),与TGFβ1水平呈明显正相关(r=0.498),而复发率与血清β2-MG、HGF呈明显正相关(r=0.468、0.511),与TGFβ1呈明显负相关(r=-0.568)(均P<0.05)。结论AML患者血清β2-MG、HGF呈高表达而TGFβ1呈低表达,三者与AML患者化疗疗效、预后密切相关,或可作为AML早期诊治的有效标志物。     

阿魏酸钠治疗围手术期高血压肾病的临床疗效

目的:观察阿魏酸钠氯化钠注射液对围手术期高血压肾病治疗前后患者肾功能指标和血脂水平变化。方法:30例围手术期高血压肾病患者给予阿魏酸钠氯化钠注射液300ml静脉滴注,1次/天,治疗2周;比较治疗前后患者尿微量白蛋白(MAU)、24h尿白蛋白排泄率(UAER)、血β2微球蛋白(血β2-MG)、尿β2微球蛋白(尿β2-MG)、甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、平均动脉压(MAP)水平的差异。结果:治疗后MAU、UAER、血β2-MG、尿β2-MG等指标较治疗前显著下降(P0.01),TG、TC、HDL-C、MAP也较治疗前明显下降(P0.05)。且无严重不良反应发生。结论:阿魏酸钠氯化钠注射液治疗围手术期高血压肾病安全、有效。     

抗β2-mG杂交瘤细胞系的制备及其单克隆抗体应用研究

本文应用纯化的β2-mG免疫BALB/c小鼠,制备了11株抗β2-mG单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞系。首次应用β2-mG McAb建立了竞争性、宽范围(0.31～10μg/ml)的β2-mG放射免疫测定法(RIA),并将此法与市售商品药盒多克隆抗体(PcAb)RIA(检测范围0.005～0.08μg/ml)进行了比较,两者之间有极显著正相关(P<0.001)。实验结果表明:β2-mG McAb完全可以替代PcAb。作者又采用β2-mG McAb,将生物素-亲合素系统(BAS)引入时间分辨免疫荧光测量法(TRIFMA),成功地在国内首次建立人血清β2-mG的BAS-TR-IFMA,其可测范围达1.25-40μg/ml。     

Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎性反应对神经元细胞Mecp2蛋白表达的影响

目的:体外研究Aβ_(1-42)诱导的小胶质细胞炎症反应对海马神经元细胞甲基化Cp G结合蛋白(Mecp2)表达的影响。方法:(1)用不同浓度的Aβ_(1-42)(终浓度分别为0,5,10,20,30μmol/L)处理小胶质细胞系(N9),24h后取上清液,ELISA检测每组N9细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量,选择合适的Aβ_(1-42)的终浓度。(2)用Aβ_(1-42)(终浓度为20μmol/L)及TLR4拮抗剂TAK-242(终浓度为1μg/ml)处理小胶质细胞系(N9),分为3组:正常对照组(con组)、单纯Aβ_(1-42)处理组(Aβ_(1-42)组)、Aβ_(1-42)处理后TAK-242干预组(TAK-242组)。24 h后取上清液,ELISA检测每组N9细胞培养上清中炎症因子TNF-α、IL-1β的含量。(3)实验分组同(2),24 h后收集培养液,分别干预生长良好的海马神经元细胞系(HT-22)。24 h后,通过Western Blot、免疫荧光染色方法检测每组HT-22细胞中Mecp2蛋白的表达。结果:(1)ELISA结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)处理后,N9细胞分泌的TNF-α、IL-1β的表达量随Aβ_(1-42)浓度的增加而增加(P0.05)。(2)ELISA结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)组的TNF-α、IL-1β的表达水平明显提高(P0.05);TAK-242组的细胞分泌TNF-α、IL-1β水平较Aβ_(1-42)组显著降低(P0.05)。(3)Western Blot结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显增加(P0.05);与Aβ_(1-42)组相比,TAK-242组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显减少(P0.05)。(4)免疫荧光染色结果显示:与con组相比,Aβ_(1-42)组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达明显增强;而与Aβ_(1-42)组相比,TAK-242组HT-22细胞中Mecp2蛋白表达减弱。结论:Aβ诱导的小胶质细胞发生炎性反应,导致神经元的损伤,可能是由于这种炎性反应使得神经元细胞中Mecp2蛋白的表达量增加,从而损伤神经元。     

β2-m在肾脏疾病亚临床应用的探讨

β2微球蛋白(β2-m)是一种单链多肽类,分子量较小,是由人体组织细胞合成,广泛存在于血液、尿液、脑脊液等体液中,正常人β2-m合成和释放相当恒定.近年来,β2-m被认为是对各类肾脏疾病程度及预后的敏感指标.我们检测了各类肾脏疾病患者的血、尿β2-m、微量白蛋白(mAlb)、尿素氮(BUN)及尿常规,对其结果进行系统分析,探讨β2-m对肾脏疾病亚临床应用的意义.结果报告如下.     

sTβRⅡ拮抗新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad信号和肌成纤维细胞分化

目的研究可溶性转化生长因子-β1Ⅱ型受体(sTβRⅡ)对新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad信号和肌成纤维细胞分化的抑制效应。方法培养新生大鼠的心肌成纤维细胞,随机分为4组:PBS对照组、TGF-β1(5ng/ml)组、sTβRⅡ(50ng/ml)组和TGF-β1+sTβRⅡ组。30min、1h和2h后,免疫细胞化学染色检测P-Smad2和Smad3的表达;24h后,免疫细胞化学染色检测α-SMA的表达。结果与PBS对照组相比,TGF-β1组P-Smad2、Smad3(核阳性率)和α-SMA的表达显著性升高(P0.05);与TGF-β1组相比,TGF-β1+sTβRⅡ组P-Smad2、Smad3(核阳性率)和α-SMA的表达明显降低(P0.05)。结论sTβRⅡ可拮抗新生大鼠心肌成纤维细胞内TGF-β1诱导的Smad2/Smad3蛋白的磷酸化与核转位,阻断Smad信号转导通路,抑制肌成纤维细胞分化。     

oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物通过激活AKT通路抑制小鼠RAW264.7细胞自噬

目的探讨氧化低密度脂蛋白/β2糖蛋白I/抗β2糖蛋白I抗体(oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体)复合物对RAW264.7小鼠巨噬细胞自噬的影响及机制。方法分别用培养基、 oxLDL、 oxLDL/β2GPI复合物、 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物、 oxLDL/抗β2GPI抗体复合物和β2GPI/抗β2GPI抗体复合物处理RAW264.7细胞。采用Western blot法检测自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3(LC3)、 P62的蛋白水平,采用携带双荧光蛋白和LC3基因的腺病毒(mRFP-GFP-LC3)感染巨噬细胞检测自噬体形成以及自噬流情况,采用蛋白激酶B(AKT)通路抑制剂LY294002 (50μmol/L)预处理,观察AKT通路在oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物介导的RAW264.7细胞自噬中的作用。结果 oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物能够降低LC3Ⅱ蛋白水平,减少自噬体数量,增加P62蛋白水平,阻断自噬流; LY294002预处理可部分恢复细胞自噬水平,改善自噬流阻断情况。结论oxLDL/β2GPI/抗β2GPI抗体复合物可以通过激活AKT通路抑制RAW264.7细胞的自噬。