人膀胱癌BIU－87细胞系多重抗药性的形成

应用阿霉素（ＡＤＭ），大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，逐步诱导人膀胱癌移行上皮细胞系ＢＩＵ－８７，在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞。该细胞能在浓度为２．０ｇ／Ｌ的ＡＤＭ中持续增殖。通过测定抗癌药物５０％抑制浓度（ＩＣ_（５０））发现，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞对阿霉素的敏感性下降了２１倍，同时对表阿霉素（４－ｅｐｉ）、长春新碱（ＶＣＲ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著的交叉抗药性，对顺铂（ＤＤＰ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）和氨甲喋呤（ＭＴＸ）无抗药性；ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞在脱离阿霉素诱导第８周时，其抗药性仍保持在９０％以上，结果表明：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞具有多重抗药性（ＭＤＲ）表型，且抗药性较稳定，是研究人膀胱移行细胞癌ＭＤＲ机制和筛选抗药性逆转剂的理想模型。     

人膀胱癌多重抗药性逆转的实验研究

为探讨膀胱癌多重抗药性逆转机理，应用阿霉素（ＡＤＭ）大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞。通过测定细胞内ＡＤＭ聚积量和钙离子浓度，发现ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量显著低于ＢＩＵ８７细胞（Ｐ＜００５）；维拉帕米（ＶＰＬ）、奎宁能使ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞内ＡＤＭ聚积量增加（Ｐ＜００５），两者协同应用基本上可逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性。结果表明：（１）细胞内ＡＤＭ聚积量减少是抗药细胞的重要变化，在细胞抗药性发生机理中可能起主导作用，（２）ＶＰＬ、奎宁能逆转ＢＩＵ８７Ｒ／ＡＤＭ细胞的抗药性，可能与增加细胞内ＡＤＭ聚积量有关，与钙通道无关。     

免疫细胞化学技术检测P－糖蛋白在人膀胱癌MDR细胞亚株中的表达

为探讨肿瘤细胞耐药性，以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，以递增阿霉素剂量的方法，历时８个月，成功地诱导建立了一株耐药细胞亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。通过生物学鉴定发现此细胞对阿霉素的相对时受度较亲本细胞提高了６．３倍，对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类抗癌药长春新碱、鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，对顺铂、丝裂霉素则无交叉耐药性。为进一步阐明其耐药机理，应用链霉亲和素－生物素免疫细胞化学技术对其耐药性进行研究发现，约７５％的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞Ｐ－ｇｐ过表达，而亲本细胞均为阴性。由此结果表明，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ耐药性的产生主要是由于Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ的建立为进一步针对Ｐ－ｇｐ药泵功能逆转其抗药性的研究奠定了实验基础。     

α-干扰素对膀胱癌细胞多药耐药性逆转的研究

目的研究α干扰素（αＩＦＮ）对膀胱癌多药耐药性的逆转作用。方法应用ＭＴＴ法检测阿霉素（ＡＤＭ）的细胞杀伤作用。荧光法检测细胞内阿霉素浓度和斑点杂交法检测ｍｄｒ１ｍＲＮＡ相对含量。结果５００ＩＵ／ｍｌαＩＦＮ能明显增强阿霉素对耐药细胞ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的杀伤作用,但不能增强阿霉素对敏感细胞ＢＩＵ８７的杀伤作用;αＩＦＮ能增加阿霉素在ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞内的积聚,但不改变ｍｄｒ１ｍＲＮＡ在细胞内表达量。结论αＩＦＮ对膀胱癌细胞多药耐药性具有逆转作用,其机制与αＩＦＮ增加细胞内抗癌药物浓度有关,与增加ｍｄｒ１ｍＲＮＡ表达量无关。     

抗P—糖蛋白单克隆抗体JSB—1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MD…

为了证实抗Ｐ－糖蛋白单克隆抗体协同环孢素Ａ逆转入膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＰ的治疗方案对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系和ＢＩＵ－８７．ＡＤＭ耐药 株经柔红霉素与抗Ｐ－ｇｏ单克 抗 ＪＳＧＢ－１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ－１和单独或联合异搏定自理后，采用Ｍ ＴＴ法评价细胞毒作用荧光光光度计检测细胞民内ＤＮＲ的聚集量。结果ＪＳＢ－１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲＢＩＵ－８７／ＡＤ     

人膀胱癌细胞耐药株多基因蛋白表达的意义

为研究膀胱肿瘤细胞耐药机制，使用药物浓度递增的方法，分别采用阿霉素（ＡＤＭ）或足叶乙甙（ＶＰ１６）建立了人膀胱癌耐药细胞株ＢＩＵ８７／Ａ和ＢＩＵ８７／Ｖ，并进行了耐药倍数分析。ＢＩＵ８７／Ａ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为５７４、５９４；ＢＩＵ８７／Ｖ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为６５、５４。采用免疫组化的方法分析Ｐ５３、ｂｃｌ２蛋白和Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）在细胞中的表达，结果显示ＢＩＵ８７三种蛋白均阴性，而ＢＩＵ８７／Ａ、ＢＩＵ８７／Ｖ的三种蛋白均阳性，且ＢＩＵ８７／Ａ的表达量均多于ＢＩＵ８７／Ｖ。结果说明突变型Ｐ５３蛋白、ｂｃｌ２蛋白和Ｐｇｐ表达在细胞耐药机制中可能起重要作用     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

人膀胱癌阿霉素耐药株BIU—87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞抗株ＢＩＵ－８７主亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较产本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ），表阿霉素，长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的叉耐药性，但对顺铂，丝裂霉素无交叉耐药性，与亲本细胞相比耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＩＲ蓄积减少，     

免疫细胞化学技术检测P—糖蛋白在人膀胱癌MDR细胞亚株中…

为探讨肿瘤的细胞耐药性，以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，以递增阿霉素剂量的方法，历时８个月，成功地诱导建立了一株耐药细胞亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ。通过生物学鉴定发现此细胞对阿霉素的相对耐受度较亲本细胞提高了６．３倍，对阿霉素类似物柔红霉素、表阿霉素及天然生物碱类抗癌药长春新碱、鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，对顺铂、丝裂毒素则无交叉耐药性。为进一步阐明其耐药机理，应用链霉亲和素－生物素免疫细胞化     

膀胱癌化疗药物敏感性的实验研究

以膀胱癌细胞株（ＢＩＵ－８７）为靶细胞，采用噻唑蓝（ＭＴＴ）比色法进行了膀胱癌腔内化疗药物敏感试验及条件选择的实验研究。结果发现丝裂霉素Ｃ（ＭＭＣ）、噻替哌（ＴＨＴ）、顺铂（ＤＤＰ）对ＢＩＵ－８７细胞杀伤作用较明显，但在１ｍｇ／ｍｌ、２ｈ作用条件下均未达到５０％抑制率、需增加药物浓度和延长作用时间。认为ＭＭＴ、ＴＨＴ、ＤＤＰ对ＢＩＵ－８７细胞的毒性作用与药物浓度和作用时间有关；为达到最大疗效，药物     

抗P-糖蛋白单克隆抗体JSB-1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MDR的研究

为了证实抗Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）单克隆抗体协同环孢素Ａ（ＣｓＡ）逆转人膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＲ的治疗方案，对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ８７细胞系和ＢＩＵ８７／ＡＤＭ耐药细胞亚株经柔红霉素（ＤＮＲ）与抗Ｐｇｐ单克隆抗体ＪＳＢ１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ１和单独或联合异搏定（Ｖｅｒ）处理后，采用ＭＴＴ法评价细胞毒作用，荧光分光光度计检测细胞内ＤＮＲ的聚集量。结果：ＪＳＢ１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲ对ＢＩＵ８７／ＡＤＭ的抗肿瘤作用，但ＪＳＢ１和Ｖｅｒ联合应用却不存在这种协同效应。结果显示：ＪＳＢ１和ＣｓＡ联合应用能增加细胞毒剂对具有Ｐｇｐ表达的ＭＤＲ肿瘤的抗肿瘤效应，是适合于临床应用的多药抗性逆转方案。     

肿瘤坏死因子α对膀胱肿瘤细胞作用的影响因素探讨

目的 探讨肿瘤坏死因子抗膀胱癌细胞作用的影响因素。方法 将肿瘤坏死因子α（ＴＮＦ－α）和不同浓度的丝裂霉素（ＭＣ），顺铂（ＣＤＤＰ）以及干扰素α（ＩＦＮ－α）作用于体外培养的膀胱癌细胞系ＢＩＵ－８７，用噻唑蓝（ＭＴＴ）法测定细胞毒效果。结果 ＴＮＦ－α对ＢＩＵ－８７细胞有明显的浓度依赖性抑制作用，ＭＣ（２．５～５．０ｍｇ／Ｌ）或ＩＦＮ－α（２５００Ｕ－５０００Ｕ／ｍｌ）与ＴＮＦ－α（１００００Ｕ／     

膀胱癌耐药细胞株MDR1基因表达水平的检测

为探讨膀胱癌耐药细胞亚系ＢＩＵ－８７ＰＲ的耐药机理，我们应用ＭＤＲ_１ｃＤＮＡ探针检测了该细胞株ＭＤＲ_１基因的表达情况，ＲＮＡ斑点杂交结果表明：膀胱癌亲代细胞株ＢＩＵ－８７为阴性，而ＢＩＵ－８７ＰＲ耐药细胞株呈阳性。提示该低度耐药细胞株的耐药机理可能与ＭＤＲ_１基因的表达有关。     

三氧化二砷抑制人膀胱癌细胞BIU-87体外生长的实验研究

目的：观察三氧化二砷对人膀胱癌细胞的生长抑制作用,并探讨其机制。方法：采用ＭＴＴ法检测不同浓度的Ａｓ２Ｏ３对人膀胱细胞株ＢＩＵ＿８７的生长抑制率,原位末端转移酶标记技术检测细胞凋亡,ＳＡＢＣ免疫组织化分析ＢＩＵ－８７中ｂｃｌ－２的表达。结果：Ａｓ２Ｏ３可有铲地抑制ＢＩＵ＿８７细胞生长,具有时间、浓度依赖性特点;经药物作用后,膀胱癌凋亡细胞明显增多,凋亡率随作用时间的延长而增高,ＢＩＵ－８７细胞中的     

抗膀胱癌单克隆抗体导向的粘附性LAK细胞体外抗膀胱癌作用的研究

为了进一步探索治疗膀胱癌的新途径，用人体脾脏组织制备粘附性淋巴因子激活的杀伤细胞（Ａ－ＬＡＫ细胞），通过生物素－亲和素系统将抗人膀胱癌单克隆抗体（ＢＤＩ－１）与Ａ－ＬＡＫ细胞偶联构建出ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物。采用４小时５１Ｃｒ释放法测定ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物体外对人膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞的杀伤率，结果显示，扩增５天从每克人脾脏组织可制备得５．５×１０８个Ａ－ＬＡＫ细胞，ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物对ＢＩＵ－８７细胞具有较强的特异性杀伤作用。提示ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物可望用于膀胱癌导向治疗     

明胶-阿霉素抗癌缓释剂治疗膀胱肿瘤的体外研究

探讨明胶－阿霉素抗癌缓释剂治疗膀胱肿瘤的临床可行性。方法应用含２０％小牛血清的完全培养基浸泡明胶－阿霉素抗癌缓释剂，将不同时间所得的培养基分别行阿霉素药物浓度测定及与膀胱肿瘤细胞株ＢＩＵ－８７混合培养。结果明胶－阿霉素抗癌缓释剂可于体外释放２１天，第１至第１９天释出药物对ＢＩＵ－８７细胞具有生长抑制作用，其释出药物浓度与ＢＩＵ－８７细胞生长率呈明显负相关（ｒ＝－０．６７１８，Ｐ＜０．０１）。结论明胶－阿霉素抗癌缓释剂应用于临床治疗膀胱肿瘤具有可行性。     

^99mTc—抗BIU—87McAb的标记与荷瘤裸鼠放射免疫显像初步研究

采用２－巯基乙醇直接还原法制备＾９９ｍＴｃ－抗ＢＩＵ－８７ＭｃＡｂ。研究了ＭＤＰ用量及ｐＨ值对标记率的影响，通过优化实验条件，标记率达６５．９％，分离纯化后标记抗体放化纯度大于９０％；同时进行了＾９９ｍＴｃ－抗ＢＩＵ－８７ＭｃＡｂ对荷瘤裸鼠的放射免疫显像研究，结果表明静脉注射标记抗体１６ｈ后肿瘤可清晰显示，肿瘤对标记抗体的吸收率为４．８２Ｄｏｓｅ％／ｇ，除甲状腺、肝、胃、肾外，肿瘤与其它组织Ｔ／Ｎ     

抗膀胱癌单克隆抗体导向的粘附性LAK细胞体外抗膀胱癌作…

为了进一步探索治疗膀胱癌的新途径，用人体脾脏组织制备粘附性淋巴因子激活的杀伤细胞，通过生物素－亲和素系统将抗人膀胱癌单克隆抗体与Ａ－ＬＡＫ细胞偶联构建出ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物。采用４小时＾５１Ｃｒ释放法测定ＢＤＩ－１－Ａ－ＬＡＫ细胞偶联物体对外人膀胱癌ＢＩＵ－８７细胞的杀伤率。     

逆转录病毒载体介导HSV—TK基因在膀胱癌细胞的表达和作用

应用基因工程技术构建了带ＨＳＶＴＫ基因的逆转录病毒重组体ｐＬＮＳＸＴＫ，磷酸钙沉淀法转染ＰＡ３１７细胞，建立了重组病毒的载体产生细胞系ＰＡ３１７／ＴＫ细胞。用病毒上清感染人的膀胱癌细胞株ＢＩＵ８７，Ｇ４１８筛选抗性克隆ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞。提取ＰＡ３１７／ＴＫ和ＢＩＵ８７／ＴＫ细胞的ＤＮＡ，用ＤＩＧ标记检测证实整合了ＨＳＶＴＫ基因，在病毒上清用ＲＴＰＣＲ检测到目的基因的转录。转导ＨＳＶＴＫ基因的膀胱癌细胞获得对ＡＣＶ的化学敏感性，给予ＡＣＶ可有效地杀伤肿瘤细胞。     

转基因方法建立多药耐药细胞系

目的建立多药耐药细胞系。方法将带有ｍｄｒ１ｃＤＮＡ全序列的逆转录病毒载体ｐＨａＭＤＲ通过脂质体直接导入到敏感的人膀胱癌细胞系ＢＩＵ８７细胞中。结果经６０～１００ｎｇ／ｍｌ秋水仙素筛选２１天后,克隆出高强度ＭＤＲ表型的耐药细胞系,基因组ＤＮＡＰＣＲ扩增表明ｍｄｒ１ｃＤＮＡ已掺入到ＢＩＵ８７细胞基因组中。结论应用转基因方法可建立多药耐药细胞系,该细胞系具有耐药强度高,耐药性稳定等特点。