人膀胱癌阿霉素耐药株BIU－87／ADM的建立及其耐药机理的研究

以人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７为亲本，经递增阿霉素（ＡＤＭ）剂量的方法，历时８个月，建立了一株耐药亚株ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ．此细胞株对ＡＤＭ的耐受程度较亲本细胞提高了６．３倍，对柔红霉素（ＤＮＲ）、表阿霉素、长春新碱和鬼臼乙叉甙有明显的交叉耐药性，但对顺铂、丝裂霉素无交叉耐药性。与亲本细胞相比，耐药亚株生长慢，倍增期延长，汇合密度低，异形性明显，有巨细胞形成。进一步研究表明，耐药亚株对ＤＮＲ蓄积减少；免疫化学显示，７５％的耐药细胞Ｐ－ｇｐ过表达。因而耐药细胞内ＤＮＲ低聚集主要是Ｐ－ｇｐ膜泵功能增强介导产生细胞内药物外溢增多所致，是其产生耐药性的主要原因。但并非所有ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ均表达Ｐ－ｇｐ，其他耐药机理的共存是有可能的。ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ及其亲本细胞为寻求逆转人膀胱癌耐药的新型化疗增敏剂或综合化疗方案提供了良好的实验模型。     

人膀胱癌耐药细胞亚株BIU—87／ADM抗药性逆转的研究

目的:建立能克服膀胱肿瘤多药抗性的有效治疗方案.方法:用递增阿霉素剂量的方法建立膀胱癌耐药细胞亚株BIU-87/ADM,BIU-87亲代细胞和BIU-87/ADM耐药细胞用环孢素(CsA)、奎宁(Quin)、潘生丁(PST)和二性霉素B(AmpB)联合柔红霉素(DNR)或鬼臼乙叉甙(EPEG)处理后,采用MTT法评价细胞毒作用.结果:上述四种逆转剂均能显著性增加DNR或EPEG对BIU-87/ADM的细胞毒作用,逆转倍数为1.5～15倍,逆转率为18.2%～89.5%,而对BIU-87的细胞毒作用增加不明显.结论:抑制化疗药物与P-糖蛋白(P-gp)结合是克服肿瘤抗药性的重要途径:CsA、Quin、PST和AmpB是有效的P-gp调节剂并可试用于临床研究.     

人膀胱癌BIU—87细胞系多重抗药性的形成

应用阿霉素，大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，逐步诱导人膀胱癌移行上皮细胞系ＢＩＵ－８７，在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞。该细胞能在浓度为２．０ｇ／Ｌ的ＡＤＭ中持续增殖。通过测定抗癌药物５０％抑制浓度发现，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞对阿霉素的敏感性下降了２１倍同时对表阿霉素，长春新碱，足叶乙甙，也具有显著的交叉抗药性，对顺铂，丝裂霉素，５氟尿嘧啶和氨甲喋呤无抗     

膀胱癌多向耐药基因P—GP170表达的研究

应用ＭＤＲ（Ａｂ－１）和Ｃ２１９单克隆抗体，免疫组化法对４２例膀胱癌ＭＤＲ１和ＭＤＲ３基因编码的Ｐ－ＧＰ１７０的表达进行了研究，结果发现，３０例膀胱初发瘤Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为７０％（２１／３０），其中８例（２７％）为强性染色，１２例（４３％）为阳性或部分阳性染色。１２例化疗后复发的肿瘤切片，Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为８３．３％，２４例Ｇ１～２肿瘤Ｐ－ＧＰ１７０阳性表达率为７９％（１９／２     

膀胱癌耐药细胞株MDR1基因表达水平的检测

为探讨膀胱癌耐药细胞亚系ＢＩＵ－８７ＰＲ的耐药机理，我们应用ＭＤＲ_１ｃＤＮＡ探针检测了该细胞株ＭＤＲ_１基因的表达情况，ＲＮＡ斑点杂交结果表明：膀胱癌亲代细胞株ＢＩＵ－８７为阴性，而ＢＩＵ－８７ＰＲ耐药细胞株呈阳性。提示该低度耐药细胞株的耐药机理可能与ＭＤＲ_１基因的表达有关。     

人膀胱癌BIU－87细胞系多重抗药性的形成

应用阿霉素（ＡＤＭ），大剂量短暂冲击结合低浓度持续递增法，逐步诱导人膀胱癌移行上皮细胞系ＢＩＵ－８７，在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药性的ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞。该细胞能在浓度为２．０ｇ／Ｌ的ＡＤＭ中持续增殖。通过测定抗癌药物５０％抑制浓度（ＩＣ_（５０））发现，ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞对阿霉素的敏感性下降了２１倍，同时对表阿霉素（４－ｅｐｉ）、长春新碱（ＶＣＲ）、足叶乙甙（ＶＰ－１６）也具有显著的交叉抗药性，对顺铂（ＤＤＰ）、丝裂霉素（ＭＭＣ）、５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）和氨甲喋呤（ＭＴＸ）无抗药性；ＢＩＵ８７／ＡＤＭ细胞在脱离阿霉素诱导第８周时，其抗药性仍保持在９０％以上，结果表明：ＢＩＵ－８７／ＡＤＭ细胞具有多重抗药性（ＭＤＲ）表型，且抗药性较稳定，是研究人膀胱移行细胞癌ＭＤＲ机制和筛选抗药性逆转剂的理想模型。     

人膀胱癌多药耐受性细胞亚系BIU—87PR的建立及生物学特征

多药耐受肿瘤细胞系是研究肿瘤多药耐受性的良好实验模型。本研究通过使用单一浓度阿霉素短时冲击诱导的方法,历时5月,成功地诱导建立了人膀胱移行上皮癌多药耐受细胞亚系BIU-87PR。生物学鉴定表明,BIU-87PR对阿霉素的耐药性较敏感细胞BIU-87提高了2.1倍。对足叶乙■的耐药性提高了4倍.对长春新碱的敏感性提高了2.4倍.BIU-87PR的生物学特性与BIU-87相似,生长速率较慢,融合密度略降低,细胞轻度异形性,染色体分析显示双微体略增多.     

胰腺癌阿霉素耐药细胞株SW1990/ADM的建立及其耐药机理研究

目的　建立人胰腺癌阿霉素 (ADM )耐药细胞株SW 1990 /ADM ,探讨其耐药机理。方法　采用ADM体外浓度梯度倍增法诱导培养人胰腺癌细胞株SW 1990 10个月 ,获得耐药细胞株SW 1990 /ADM ,脱药培养 2个月后检测其生物学性状、药物敏感性及多药耐药基因mdr1的功能及表达情况。结果　与亲本细胞株SW 1990相比 ,SW1990 /ADM在形态学上发生了一系列变化 ;对包括ADM在内的多种化疗药物均表现出一定的耐药性 ,其对ADM、丝裂霉素、氟尿嘧啶和健择的耐药指数分别达到 4 9.6 0、7.2 5、3.80和 1.2 5 ;其mdr1mRNA的表达亦明显高于亲本细胞株SW 1990 (P<0 .0 1)。结论　体外浓度梯度倍增法可建立稳定传代的人胰腺癌耐药细胞株SW1990 /ADM。其耐药性与mdr1的表达呈正相关。     

阿霉素加环孢素膀胱灌注预防膀胱癌术后复发

目的 探讨膀胱癌术后复发率。方法 应用阿霉素加环孢素化疗方案行膀胱腔内灌注化疗预防复发;同时采用免疫组织化学方法检测初发膀胱癌组织４２例标本Ｐ－糖蛋白（Ｐ－ｇｐ）和多药耐受相关蛋白（ＭＲＰ）的表达。结果 ４２例患者应阿霉素和环孢素联合腔内灌注化疗,平均观察２０．４个月。随访期间未复发３８例;４例复发,复发率为９．５２％,病理分级与前次相同。初发膀胱癌中,ＭＲＰ总阳性率为３８．１％,Ｐ－ｇｐ总阳性率为４０．４％。结论 环孢素与细胞毒制剂联合化疗,能不增加毒副作用的同时,增加化疗效果,抑制耐药性的形成,降低复发率,具有广泛的临床应用前景。     

抗癌药物诱导人膀胱癌BIU—87和E—J细胞凋亡的作用

应用分子生物学方法，观察了丝裂霉素、喜树碱、顺铂和阿霉素对膀胱癌细胞系ＢＩＵ８７和ＥＪ体外生长和生存的影响，对抗癌药物诱导膀胱癌细胞凋亡作用进行了研究。结果：四种抗癌药均能在不同程度上抑制膀胱癌细胞生长，诱导膀胱癌细胞凋亡的能力与其生长抑制效应成正比。细胞形态学和ＤＮＡ分析显示喜树碱、顺铂处理的ＢＩＵ８７和丝裂霉素、阿霉素处理的ＥＪ细胞呈现典型的凋亡现象。揭示药物的抑癌作用是通过诱导肿瘤细胞凋亡实现的，它可能是抑制肿瘤生长的机理之一。不同膀胱癌细胞系对药物诱导凋亡的敏感性存在着差异。细胞凋亡现象为肿瘤化疗提供了新的领域。     

反义N—rasl DNA片段对人膀胱癌BIU—87细胞系作用的研究

将载有反义人Ｎ－ｒａｓｌ（ｅｘｏｎｌ）ＤＮＡ片段的重组表达质粒ｆＰＧＶ１－ＭＴ－Ｎｒａｓｌ（Ａ）导入人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系，可以导致ＢＩＵ－８７细胞恶性行为的部分改变，表现在生长速度减慢２１．７％～６５．６％，＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入降低４５．８％，软琼脂克隆形成能力下降４８．３％，同时，Ｎ－ｒａｓ－ｍＲＮＡ３及Ｐ２１ｒａｓ表达减少。     

抗P—糖蛋白单克隆抗体JSB—1和环孢素A协同逆转人膀胱癌MD…

为了证实抗Ｐ－糖蛋白单克隆抗体协同环孢素Ａ逆转入膀胱癌耐药细胞亚株的抗药性以及建立能有效地克服ＭＤＰ的治疗方案对人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系和ＢＩＵ－８７．ＡＤＭ耐药 株经柔红霉素与抗Ｐ－ｇｏ单克 抗 ＪＳＧＢ－１和单独或联合ＣｓＡ；ＪＳＢ－１和单独或联合异搏定自理后，采用Ｍ ＴＴ法评价细胞毒作用荧光光光度计检测细胞民内ＤＮＲ的聚集量。结果ＪＳＢ－１和ＣｓＡ能协同增加ＤＮＲＢＩＵ－８７／ＡＤ     

单克隆抗体阿霉素介联物导向治疗膀胱癌的临床研究

抗人膀胱癌单克隆抗体ＨＢＴＡ通过葡聚糖与阿霉素联交成化学免疫偶联物对７例膀胱癌病人进行免疫导向治疗。病人接受ＨＢＴＡ抗体蛋白量为１５ｍｇ－５０ｍｇ，平均４０ｍｇ。治疗后７例病人的肿瘤组织经济免疫组化检测均呈阳性的抗体定位，血清膀胱肿瘤相关抗原显著降低（Ｐ＜０．０１），电镜观察到治疗后肿瘤细胞超微结构坏死变。结果表明以鼠抗人膀胱癌单克隆抗体与化疗药物偶联制各的生物导弹能安全地用于临床，并能特异性地在     

膀胱癌多向耐药基因P－GP_（170）表达的研究

应用ＭＤＲ（Ａｂ－１）和Ｃ２１９单克隆抗体，免疫组化法对４２例膀胱癌ＭＤＲ１和ＭＤＲ３基因编码的Ｐ－ＧＰ１７０的表达进行了研究。结果发现，３０例膀胱初发瘤Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为７０％（２１／３０），其中８例（２７％）为强阳性染色，１２例（４３％）为阳性或部分阳性染色。１２例化疗后复发的肿瘤切片，Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率为８３．３％，２４例Ｇ（１～２）肿瘤Ｐ－ＧＰ１７０阳性表达率为７９％（１９／２４）。而１８例Ｇ３肿瘤Ｐ－ＧＰ１７０的阳性表达率仅占４４％（８／１８）。４２例膀胱肿瘤总的Ｐ－ＧＰ１７０阳性表达率为７３．８％（３１／４２）。实验结果提示，Ｐ－ＧＰ１７０的表达水平与肿瘤的恶性度或病理组织学分级不相关。复发性肿瘤Ｐ－ＧＰ１７０的表达率高于初发肿瘤，可能是腔内灌注化疗失败的重要因素。     

人胃腺癌阿霉素耐药细胞系BGC—823／DOX建立

为研究消化道肿瘤耐药机理，作者采用药物递增的方法，建立了体外人胃腺癌阿霉素耐药细胞系ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ，并进行了染色体组型、倍增时间、细胞周期分布等细胞系基本特征的系列分析以及耐药倍数、交叉耐药和初步的逆转耐药的实验研究。结果表明，ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ染色体为亚三倍体组型，倍增时间、细胞周期分布与亲本细胞有显著差异，阿霉素耐药倍数６．３５倍，与ＶＰ－１６存在交叉耐药现象，异搏定有逆转耐药的作用。作者认为，ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ是比较符合临床消化道肿瘤特点的阿霉素耐药细胞系。     

人胃腺癌阿霉素耐药细胞系BGC—823／DOX耐药机理的研究

为了进一步阐明人胃腺癌阿霉素耐药细胞系ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ耐药机理和特点，作者应用ＤＮＡ分子杂交、ＲＴ－ＰＣＲ、免疫组化和流式细胞技术进行了ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ多药耐药（ＭＤＲ１）、拓扑异构酶Ⅱα（ＴｏｐｏⅡα）、多药耐药相关蛋白基因的基因扩增、转录、表达分子水平检测以及细胞内阿霉素含量分析。结果表明，ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ亲本细胞具有原发耐药的特性，与消化道肿瘤较为相似。多药耐药是ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ主要的耐药机理。亲本细胞具有原发耐药ＢＧＣ－８２３／ＤＯＸ与亲本无原发耐药的阿霉素耐药细胞系相比，在耐药性质上有显著的差异。     

人膀胱癌细胞耐药株多基因蛋白表达的意义

为研究膀胱肿瘤细胞耐药机制，使用药物浓度递增的方法，分别采用阿霉素（ＡＤＭ）或足叶乙甙（ＶＰ１６）建立了人膀胱癌耐药细胞株ＢＩＵ８７／Ａ和ＢＩＵ８７／Ｖ，并进行了耐药倍数分析。ＢＩＵ８７／Ａ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为５７４、５９４；ＢＩＵ８７／Ｖ对ＡＤＭ、ＶＰ１６的耐药倍数分别为６５、５４。采用免疫组化的方法分析Ｐ５３、ｂｃｌ２蛋白和Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）在细胞中的表达，结果显示ＢＩＵ８７三种蛋白均阴性，而ＢＩＵ８７／Ａ、ＢＩＵ８７／Ｖ的三种蛋白均阳性，且ＢＩＵ８７／Ａ的表达量均多于ＢＩＵ８７／Ｖ。结果说明突变型Ｐ５３蛋白、ｂｃｌ２蛋白和Ｐｇｐ表达在细胞耐药机制中可能起重要作用     

转基因法建立膀胱癌耐药细胞株

目的　用转基因法建立膀胱癌耐药细胞株 ,研究细胞耐药机制。　方法　利用脂质体(DOTAP)介导的基因转移方法 ,在浸润性膀胱癌细胞株T2 4中转入mdr1全长cDNA ,经阿霉素筛选 ,获得耐药的T2 4细胞株TADM ;免疫组化、MTT、流式细胞仪、基因组PCR、RT PCR等方法鉴定TADM的耐药表型。　结果　TADM细胞的相对耐药指数为 4 1.6 ,基因组中有mdr1cDNA插入 ,P 糖蛋白及mdr1mRNA表达增加。　结论　TADM细胞具有良好的耐药表型 ,其耐药性的产生是由mdr1全长cDNA稳定整合在T2 4细胞基因组中 ,大量表达P 糖蛋白引起。转基因法建立膀胱癌耐药细胞株具有耗时短、耐药强度高而稳定等特点。