Foxp3转染对大鼠CD4~+T淋巴细胞体外增殖能力的影响

目的 探讨Foxp3基凶转染对大鼠CD4+CD25-T淋巴细胞体外增殖能力的影响.方法 以逆转录病毒载体介导roxp3基凶进入大鼠CD4+CD25-T淋巴细胞,以TGFβ诱导Foxp3基因表达.通过观察报告基因的表达水平及流式细胞仪检测评价转染效率,将转染Foxp3基因的大鼠CD4+CD25-T淋巴细胞、CD4+CD25+T淋巴细胞、大鼠脾脏单个核细胞分别与同系大鼠单个核细胞混合培养,液体闪烁法测定各组细胞增殖水平.结果 Foxp3组增殖水平(3 354.18±203.73)略高于调节性T细胞组(2 919.25 ±137.91),但明显低于空白对照组(12 706.06±967.47).结论 经逆转录病毒介导Foxp3基因可在CD4+CD25-T淋巴细胞高表达,并使该细胞获得与CD4+CD25+T淋巴细胞相似的免疫无能及免疫抑制特性.     

褪黑素对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4+CD25+调节性T细胞的影响

目的:研究褪黑素在抑制肿瘤过程中对荷胃癌小鼠胸腺及脾CD4+CD25+调节性T(Treg)细胞表达变化的影响.方法:培养小鼠前胃癌细胞株(MFC),采用小鼠荷胃癌模型.用褪黑素干预1周后,测量小鼠胸腺、脾质量;并用流式细胞仪检测胸腺、脾Treg细胞;用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测胸腺、脾叉头型转录因子3 (Foxp3)的表达.结果:与正常对照组相比,小鼠胸腺、脾质量各组之间差异无统计学意义.在褪黑素抗肿瘤过程中,与正常对照组相比,荷瘤空白对照组小鼠胸腺与脾的Treg细胞均上升,褪黑素干预后降至正常水平;褪黑素还能使小鼠胸腺Foxp3 mRNA表达下降,脾Foxp3 mRNA反而上调;而小鼠胸腺、脾scurfin蛋白均明显下降.结论:褪黑素能下调荷胃癌小鼠胸腺、脾的CD4+CD25+Treg细胞及特异性转录蛋白scurfin及胸腺Foxp3 mRNA,使脾Foxp3 mRNA反而上调.褪黑素抗胃癌作用与免疫器官中CD4+CD25+Treg细胞免疫调节有关.     

罗格列酮上调成人隐匿性自身免疫糖尿病患者CD4+T细胞Foxp3 mRNA的表达

目的 观察罗格列酮对成人隐匿性自身免疫糖尿病(LADA)患者CD4+调节性T细胞的影响,旨在探讨罗格列酮的免疫调节机制.方法 采用磁珠分离LADA患者CD4+T细胞,1、10和100 μmol/L罗格列酮干预CIM+T细胞.MTT法检测细胞活性,3H-TdR掺人法检测增殖抑制率.流式细胞术检测CD4+CD25+T细胞比值.RT-PCR检测过氧化物酶体增殖激活受体-γ(PPARγ)mRNA、TGF-β1 mRNA表达,实时荧光定量PCR检测Foxp3 mRNA表达.结果 CD4+T细胞表达PPARγmRNA.罗格列酮抑制植物凝集素(PHA)刺激的CD4+T细胞增殖.1μmol/L和10μmol/L组罗格列酮作用的CD4+CD25+T细胞比例无明显变化,100 μmol/L组CD4+CD25+T细胞比例降低.10μmol/L罗格列酮上调CD4+T细胞的Foxp3 mRNA表达,但TGF-β1 mRNA表达无显著变化.小剂量IL-2参与下,1μmol/L罗格列酮(药理浓度范围内)升高CD4+T细胞Foxp3mRNA表达.结论 罗格列酮上调LADA患者CD4+T细胞Foxp3 mRNA表达,改善自身免疫耐受缺陷.     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂罗米地辛对小鼠T细胞表型及功能的影响

目的:通过体外实验观察罗米地辛对效应T细胞和调节性T细胞的作用。方法:取CFSE标记的淋巴细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞作为反应细胞,实验组加入不同浓度梯度(1、3、5μmol/L)的罗米地辛及CD3/CD28单抗进行淋巴细胞培养,以仅加入CD3/CD28单抗作为阳性对照组,另设空白对照组。培养72 h后检测各组细胞的增殖情况。以淋巴细胞作为反应细胞,实验组、阳性对照组及空白对照组设定同上,72 h后检测各组中CD4+Foxp3+T细胞与CD4+T细胞的比例变化。同时采用ELISA检测培养液中相关细胞因子,如TNF-α、IL-10及TGF-β水平的变化。结果:罗米地辛剂量依赖性地抑制CD3/CD28单抗诱导的淋巴细胞、CD4+T细胞和CD8+T细胞的增殖(P0.05)。在CD3/CD28单抗存在的条件下,1μmol/L的罗米地辛不能诱导CD4+Foxp3+T细胞的比例上调(P0.05)。但提高罗米地辛的浓度至3μmol/L和5μmol/L后,CD4+Foxp3+T细胞的比例显著提高(P0.05)。随着罗米地辛浓度的增加,TNF-α和IL-10水平呈剂量依赖性降低,但各实验组明显高于空白对照组而低于阳性对照组(P0.05)。TGF-β在阳性对照组虽稍有升高,但与空白对照组相比无显著差异(P0.05)。而随着罗米地辛浓度的增加,TGF-β水平呈剂量依赖性升高,3实验组间及与空白对照组、阳性对照组间差异显著(P0.05)。结论:体外实验研究显示罗米地辛不仅能够有效抑制效应性T细胞的增殖,而且一定浓度的罗米地辛可上调调节性T细胞的比例,这可能与TGF-β升高有关,而与IL-10变化无关。     

Forskolin对佛波醇酯类刺激的小鼠体外T淋巴细胞行为的影响

目的 分析Forskolin对佛波醇酯多克隆刺激剂(phorbol 12,13-dibutyrate,PDB)联合离子霉素(ionomycin,Ion)刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞体外增殖和周期的影响,在此基础上进一步研究Forskolin对单纯PDB刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞早期活化标志CD69分子和中期活化标志CD25分子的影响,从而阐明其作用机制.方法 无菌分离小鼠淋巴结并制备单个淋巴细胞悬液,与不同浓度的Forskolin孵育48h后,运用羧基荧光素已酰已酸(CFDA-SE)染色技术和碘化丙锭(PI)染色技术结合流式细胞术、CRLLQuest 和ModFitLT软件,分别榆测Fomkolin对PDB+Ion刺激下小鼠CD3+T淋巴细胞增殖和周期的影响;与不同浓度的Forskolin孵育2 h、10 h,运用流式细胞术结合双色荧光抗体染色技术检测Fomkolin对PDB诱导下的小鼠CD3+T淋巴细胞CD69分子和CD25分子表达的影响.结果 Forskolin(10-7、10-6、10-5 mol·L-1)均能明显抑制PDB+Ion刺激的小鼠CD3+T淋巴细胞的增殖并将细胞阻滞在G0/G1期;同时也能明显抑制单纯PDB刺激下的CD3+T细胞早期和中期活化,且呈明显的量效关系.结论 提示Forskolin在CD3+T细胞活化过程中信号转导的某个环节上有抑制作用,从而通过抑制T淋巴细胞的活化,发挥免疫抑制作用,是一种潜在的免疫抑制剂.     

脐带间充质干细胞体外对脐带血CD4+ T 淋巴细胞免疫调节作用的研究

目的:研究脐带间充质干细胞(UCMSCs)在体外对异源脐血CD4+ T 淋巴细胞增殖、凋亡及向CD4+ CD25+ 调节性T 细胞(Treg)分化的免疫调控作用。方法:建立不同比例UCMSCs 与植物血凝素(PHA)活化的脐血CD4+ T 淋巴细胞共培养,或与Transwell 共培养体系,检测CD4+ T 淋巴细胞增殖情况、CD4+ CD25+ / CD4+ 比率的变化及调节性T 淋巴细胞标志基因Foxp3 相对表达量的变化。同时,建立UCMSCs 与地塞米松(DXM)刺激的脐血CD4+ T 淋巴细胞共培养,或与Transwell 共培养体系,检测CD4+ T 淋巴细胞凋亡情况。结果:PHA 活化的脐血CD4+ T 淋巴细胞在与UCMSCs 共培养3 d 后,较无UCMSCs对照组相比,细胞数量明显减少(P<0. 05)且CD4+ CD25+ / CD4+ T 淋巴细胞的比率及Foxp3 的相对表达量显著增加(P<0. 01),并随UCMSCs 数量增加,作用增强(P<0. 05)。DXM 诱导的脐血CD4+ T 淋巴细胞与UCMSCs 共培养7 d 后,细胞凋亡比率较无UCMSCs 对照组显著降低(P<0. 01)。上述效应在Transwell 共培养中部分减弱但无法消除。结论:UCMSCs 对脐血CD4+ T细胞介导的免疫反应具有负调节作用,其作用主要表现在对细胞增殖能力和分化的调控而不是促进凋亡。     

妊娠浓度的雌激素对诱导CD4~+CD25~-naive T细胞转化为CD4~+CD25~+Treg细胞的影响

目的 体外观察妊娠浓度的雌激素能否诱导CD4+CD25-naiveT细胞转化为CD+CD25+Treg细胞,并探讨其相关性.方法 以CD4+CD25-T细胞作为反应细胞,实验组加入妊娠水平的雌激素(E2)及CD3/CD28单抗作为刺激原培养72 h,设阴性对照组(仅加入CD3/CD28单抗)和空白对照组.72 h后检测各组中CD4+CD25+T细胞和CD4+Foxp+T细胞比例变化及Foxp3 mRNA表达.结果 1)阴性对照组CD+CD25+T细胞比例较空白对照组显著增高(P＜0.001),而实验组CD4+CD25+T细胞比例进一步升高(P＜0.001).2)阴性对照组不能诱导CD4+Foxp+T细胞比例增高,但实验组CD4+Foxp3+T细胞的比例则较其它2组均显著升高(P＜0.001).3)RT-PCR提示阴性对照组Foxp3 mRNA的表达量较空白对照组无显著差异(P＞0.05);而实验组F0xp3 mRNA的表达昔较其它2组均显著升高(P＜0.001).结论 体外淋巴细胞刺激实验提示妊娠状态下雌激素的高水平与CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例的升高密切相关.     

香烟烟雾提取物抑制树突状细胞诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞

目的探讨香烟烟雾提取物(CSE)暴露及抑制CD40-CD40L路径对小鼠髓源性树突状细胞(BMDC)诱导CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞(Treg)的影响。方法使用40 ng/m L重组小鼠粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rm GM-CSF)和10 ng/m L重组小鼠白细胞介素4(rm IL-4)联合诱导无特定病原体级健康雄性BALB/c小鼠骨髓来源的单个核细胞分化为树突状细胞(DC),流式细胞术检测小鼠BMDC表面CD40分子的表达,再采用免疫磁珠分选的方法从BALB/c小鼠脾脏细胞分离出CD4~+T细胞。将所培养出的小鼠BMDC与正常对照组小鼠脾脏细胞分选的CD4~+T细胞共培养,加入CSE及拮抗性CD40抗体,作用24 h;流式细胞术观察各组细胞CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg的变化,液相芯片技术检测细胞上清液白细胞介素10(IL-10)、IL-6的水平。结果 BMDC与CD4~+T淋巴细胞共培养可以促进CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg分化,经CSE刺激后,流式细胞术检测显示小鼠BMDC与CD4~+T细胞共培养后分化的CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量降低,细胞上清液IL-10降低、IL-6的水平升高;而加入拮抗性CD40抗体细胞共培养组CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg增加,液相芯片检测细胞上清液IL-10上升、IL-6的水平下降。结论 CSE减少CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg数量,体外使用拮抗性抗CD40抗体阻断CD40-CD40L通路可以促进CD4~+T细胞分化为CD4~+CD25~+Foxp3~+Treg。     

小鼠CD4~+ CD25~+ Foxp3~+调节性T细胞体外扩增

目的:本研究旨在探讨CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞体外扩增的方法。方法:采用磁珠分选小鼠CD4+T细胞,αCD3单克隆抗体包被24孔板,加入αCD28单克隆抗体、雷帕霉素、rhIL-2,培养3周后,流式细胞仪测定培养细胞中CD4+CD25+T细胞的含量,实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达;单向混合淋巴细胞反应和增殖抑制试验测定扩增的CD4+CD25+T细胞的增殖及其抑制功能;ELISA检测培养上清中IL-10和TGF-β1的含量。结果:小鼠CD4+T细胞培养3周后,CD4+CD25+T细胞达(76.05±2.73)%,高于未加雷帕霉素组(52.17±1.36)%(P<0.001),磁珠分选的CD4+CD25+T细胞Foxp3 mRNA的表达是未加雷帕霉素组的5倍(P<0.001),增殖能力是未加雷帕霉素组的0.29倍(P<0.001),对CD4+T细胞增殖抑制能力是未加雷帕霉素组的3.6倍(P<0.001),培养上清中IL-10和TGF-β1分别是对照组的1.8倍和1.6倍(P<0.001)。结论:小鼠CD4+T细胞在含有1μg/ml的αCD28、rhIL-2 100 U/ml和终浓度为10 nmol/L雷帕霉素的培养体系中培养3周后能有效扩增CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞。     

高表达Foxp3的肺癌细胞抑制人CD4~+T细胞免疫活性

目的:研究高表达转录因子Foxp3的肺癌细胞对CD4~+T淋巴细胞的作用。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株,荧光定量PCR和Western blot检测细胞Foxp3的表达;ELISA法检测NCIHh Foxp3培养上清中IL-8、IL-10表达量的变化;分离并活化CD4~+T淋巴细胞,用含20%NCIH-h Foxp3肿瘤上清的培养基培养,检测CD4~+T淋巴细胞IL-2表达量的变化;将NCIH-h Foxp3与活化的CD4~+T淋巴细胞共培养,MTT评价免疫效应细胞增殖情况;免疫细胞化学法观察NCIH-h Foxp3细胞对活化CD4~+T淋巴细胞黏附作用的抑制。结果:建立高表达Foxp3的NCIHh Foxp3肺癌细胞株,与阴性对照相比,NCIH-h Foxp3细胞培养上清IL-8表达量降低,IL-10表达量升高,NCIH-h Foxp3肿瘤细胞能抑制活化的CD4~+T淋巴细胞IL-2的表达、增殖及浸润。结论:肺癌细胞Foxp3的表达对活化的CD4~+T淋巴细胞有免疫抑制作用,这可能与NCIH-h Foxp3分泌细胞因子IL-8表达量降低,IL-10表达量升高有关。     

松果体褪黑素对大鼠胸腺CD4~+ CD25~+调节性T细胞发育及其相关基因Foxp3的影响

目的研究松果体摘除及补充褪黑素对大鼠胸腺CD4+ CD25+调节性T细胞(Treg细胞)产生、输出及其相关基因叉状头/翅膀状螺旋转录子(Foxp3)表达的影响。方法选用雄性清洁级SD大鼠120只,分为正常组、假手术组、松果体摘除组、松果体摘除+褪黑素低剂量组[腹腔注射7.5mg/(kg·d)]和松果体摘除+褪黑素高剂量组[腹腔注射15mg/(kg·d)],术后4、8周取材。应用流式细胞检测技术、RT-PCR法及免疫组织化学染色法观察并分析松果体摘除及补充外源性褪黑素后胸腺及外周血CD4、CD25双阳性细胞数量及胸腺Foxp3表达的变化。结果松果体摘除术后无论4周或者8周胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞数量均无明显变化,补充褪黑素后双阳性细胞数量呈时间、剂量依赖性明显增加;松果体摘除术后4周外周血CD4+ CD25+ Treg细胞数量明显增加,但补充褪黑素后恢复正常,而术后8周各组之间无显著性差异;半定量RT-PCR及免疫组织化学结果显示,松果体摘除后4周大鼠胸腺Foxp3表达水平明显升高,补充高低两种剂量褪黑素后均有所下降并达到正常水平,而松果体摘除后8周各组之间Foxp3的表达无明显差异。结论松果体摘除对胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的产生无明显影响,但导致大鼠胸腺Foxp3的转录和翻译明显增加,胸腺CD4+ CD25+ Treg细胞的输出增加,而补充外源性褪黑素后能逆转上述异常,长时间作用则其影响逐渐消失。     

Regulatory T cells induced by rAAV carrying the forkhead box P3 gene prevent autoimmune thyroiditis in mice

CD4+CD25+ regulatory T (Treg) cells are immunosuppressive and help maintain peripheral immune tolerance. The forkhead/winged helix family member, Foxp3, has been shown to be a critical regulator of CD4+CD25+ Treg cells. We demonstrate by quantitative real-time PCR that CD4+CD25+ T cells express higher levels of Foxp3 mRNA than other T cell populations. Recombinant adeno-associated virus vector carrying mouse Foxp3 gene under the control of the CMV promoter was generated and used to transduce CD4+CD25- T cells. These Foxp3-transduced T cells are similar to naturally occurring CD4+CD25+ regulatory T cells which show anergy and immunosuppressive activity in vitro. Furthermore, these Foxp3-transduced T cells prevent autoimmune thyroiditis transferred by pathogenic T cells in vivo. Our data indicates that Foxp3-transduced CD4+CD25- T cells may open new therapeutic strategies for immune disorders.     

大鼠CD4+CD25-T细胞的Foxp3基因转染及其表达***◆

背景：调节性T细胞在维持机体免疫应答稳态和免疫耐受方面具有非常重要的作用,但外周血中CD4+CD25+调节性T细胞含量极低,且增殖能力较差。 目的：以携带Foxp3基因的慢病毒EGFP+载体转染大鼠CD4+CD25- T细胞,观察其在大鼠CD4+CD25- T细胞中的表达。 方法：以免疫磁珠两步法分选大鼠CD4+CD25- T细胞,用携带大鼠Foxp3基因的慢病毒载体体外转染分选的细胞,以转染Foxp3基因的CD4+CD25- T细胞为实验组,EGFP空白质粒组及CD4+CD25- T细胞为阴性对照组,CD4+CD25+ T细胞为阳性对照组。荧光显微镜和RT-PCR分别从蛋白和mRNA水平检测Foxp3基因的表达。 结果与结论：成功完成了免疫磁珠的分选,获得了纯度较高的CD4+CD25-T细胞和CD4+CD25+ T细胞,细胞存活率为(94±2)%,慢病毒转染的CD4+CD25- T细胞高表达Foxp3基因。表明以携带Foxp3基因的慢病毒载体系统可有效介导Foxp3基因在大鼠CD4+CD25- T细胞中高表达。     

转录因子Foxp3在肺癌细胞的表达及其意义

目的研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的表达及其对肿瘤免疫的影响。方法用常规RT-PCR检测Foxp3在肺癌细胞系中的表达,进一步用Western blot验证其蛋白水平的表达;将表达Foxp3的肿瘤细胞及用Foxp3 siRNA沉默后的肿瘤细胞分别与CD4+CD25-T细胞共培养,CFSE评价免疫效应细胞增殖情况。结果 Foxp3在肺癌细胞系中出现表达;肺癌细胞与CD4+T细胞进行共培养,可显著抑制共培养体系中CD4+T细胞增殖;肺癌细胞Foxp3表达沉默后,可显著改善共培养体系中肺癌细胞对CD4+T细胞增殖的抑制作用。结论在肺细胞癌细胞系发现Foxp3的表达,肺癌细胞Foxp3的表达参与对肿瘤特异性T细胞增殖的抑制。     

Regulatory T cell-like activity of Foxp3+ adult T cell leukemia cells

Adult T cell leukemia (ATL) is an aggressive neoplastic disease, in which a quarter of the patients develop opportunistic infections due to cellular immunodeficiency. However, the underlying mechanism responsible for the immunosuppression has remained unclear. Recent studies have demonstrated that the leukemia cells from a subset of patients with ATL express Foxp3, a specific marker for CD25+CD4+ regulatory T (Treg) cells, which regulate the immune response by suppressing CD4+ T cell functions. However, whether there is a functional resemblance between ATL cells that have Foxp3 expression and Treg cells is still unknown. In this report, we confirmed the high expression of Foxp3 in leukemia cells from 5 of 12 ATL patients and demonstrated that ATL cells from 3 patients suppressed the proliferation of CD4+ T cells. Similarly, one of six HTLV-I-infected cell lines showed both high Foxp3 expression and suppressive activity. Like Treg cells, the suppression induced by the ATL cells from two patients and the HTLV-infected cell line appeared to be mediated by a cell-cell contact-dependent mechanism. Nevertheless, among the ATL cells that strongly expressed Foxp3, those from two of the five patients showed no apparent suppressive activity. Furthermore, retroviral transfection of Foxp3 did not confer any suppressive function on low Foxp3-expressing HTLV-I-infected cell lines. These results indicate that Foxp3 may be essential but is not sufficient for the Treg-cell-like suppressive activity of ATL cells and HTLV-I-infected cell lines.     

Foxp3逆转录病毒载体的构建及其诱导的CD4~+CD25~+Foxp3~+ T细胞免疫抑制功能研究

Foxp3基因的表达与CD4+CD25+免疫调节细胞的功能密切相关。为在体外诱导具有免疫调节功能的CD4+CD25+免疫调节细胞,本文构建了带有绿色荧光蛋白(eGFP)的pMSCV-MIGR-Foxp3逆转录病毒载体及研究体外转染获得的人CD4+CD25+Foxp3+T细胞的免疫抑制功能。扩增人Foxp3编码基因,插入pMSCV-MIGR逆转录病毒载体,构建Foxp3逆转录病毒真核表达载体。磷酸钙沉淀法转染Pheonix E包装细胞。包装病毒再感染PT67细胞,获得永久产毒的PT67细胞。病毒上清感染免疫磁珠分离健康体检者PBMC中CD4+CD25-细胞,诱导CD4+CD25+Foxp3+T细胞,3H-thymidine掺入法测定其对CD4+CD25-细胞增殖的免疫抑制作用。结果显示,带有绿色荧光蛋白的pMSCV-MIGR-Foxp3逆转录病毒可以感染CD4+CD25-T细胞,使其表达Foxp3。CD4+CD25-细胞体外增殖可以被转染诱导的CD4+CD25+Foxp3+T细胞所抑制,提示转染诱导的CD4+CD25+Foxp3+T细胞具有免疫抑制功能,为进一步研究体外诱导CD4+CD25-Foxp3+调节性T细胞功能奠定基础。     

卵巢癌细胞培养上清诱导CD4+CD25-T细胞分化为CD4+CD25+调节性T细胞

目的研究卵巢癌细胞培养上清液是否能诱导外周血CD4^＋CD25^- T细胞转变为CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。方法将外周血CD4^＋CD25^- T细胞分离后，对照组用CD3和CD28单抗活化，实验组在对照基础上加用卵巢癌细胞株SKOV3培养上清，72h后分离各组的CD25^＋和CD25^-T细胞，溴化脱氧尿嘧啶掺入标记法测定增殖能力及对静息的自体同源CD4^＋CD25^- T细胞的增殖抑制能力，流式细胞仪测定细胞糖皮质激素诱发型TNF受体（glucocorticoid-induced TNFR,GITR）与CTLA-4分子的表达，RT-PCR检测细胞卿mRNA的表达。结果与对照组相反，实验组的CD4^＋CD25^＋T细胞具有免疫抑制功能，自身增殖能力下降，GITR和CTLA-4分子的表达和CD4^＋CD25^＋调节性T细胞相似，并被诱导表达转录因子Foxp3 mRNA。结论卵巢癌细胞分泌的可溶性物质能诱导外周血CD4^＋CD25^-T细胞转化为CD4^＋CD25^＋调节性T细胞。